專利名稱：一種核糖核苷酸還原酶1基因表達檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型涉及ー種檢測試劑盒，尤其是涉及一種核糖核苷酸還原酶I基因表達檢測試劑盒。
背景技術：
近年來，隨著分子生物學的發展，國內外對細胞癌變的研究已進入到分子水平，人們發現DNA修復和復制的缺陷是細胞發生癌變的重要機制。核糖核苷酸還原酶(RR)在癌組織表達異常增高，同時其催化產物脫氧核糖核苷酸(dNTP)是DNA損傷修復及復制過程中必不可少的原料，因此RR的功能完善與否對腫瘤的發生、發展和防治均有重要影響。RRMl是RR的一個亞單位，它是DNA合成通路中的限速酶，它能逆轉ニ磷酸核苷酸 成為ニ磷酸脫氧核苷酸屬于腫瘤抑制基因，定位于染色體11P15. 5區域，含19個外顯子。該區域是ー個可出現于多種惡性腫瘤的雜合子丟失(loss of heterozygosity,L0H)區域，稱為L0H11A。人們很早就發現在胃癌、食管癌和乳腺癌等存在11ρ15. 5的雜合性丟失，因此認為該區域的丟失與惡性腫瘤的轉移有關系。另外，也有研究表明，這種雜合性缺失與預后有一定的相關性，具有LOH丟失的非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者預后較差，生存期較沒有LOH的患者短；但是，也有臨床研究的結果顯示，高水平表達RRMl的患者其預后較差；這樣的結果與之前的RRMl作為抑癌基因高表達時抑制腫瘤侵襲的結論有所不同。通過對比出現不同結果的臨床研究所選擇的病例發現，早期的NSCLC患者単獨接受手術治療吋，高表達RRMl則預后較好，而晚期僅接受含吉西他濱方案化療的患者RRMl高表達卻預后較差，說明RRMl的預測意義因患者的分期和治療方案的不同有所改變。眾多研究證實DNA修復基因的修復能力與癌癥的發病和耐藥有夫。一般認為，DNA修復基因修復カ低者癌癥發生的風險較正常人明顯增加，而修復力高者則易對化療藥物耐藥使化療失敗。RRMl是細胞內在DNA損傷修復能力的代表，因而也是顯示病變組織內累積性DNA損傷程度的生物標志。RRMl高表達可相對消弱藥物對RRMl的抑制作用，進而導致腫瘤細胞對藥物的敏感性降低。RRMl在所有的腫瘤細胞中都存在表達，而且表達水平差異很大。臨床研究已證實RRMl與吉西他濱耐藥相關。因此，檢測RRMl的表達對于腫瘤患者的治療和預后有著重要意義。

實用新型內容為了解決上述技術問題，本實用新型提供一種核糖核苷酸還原酶I基因表達檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、在固定座3上設有容器孔，其容器孔中分別放置去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBRpremix Ex Taq(含R0X)管7。上述各種液體分別裝在容器內，插入容器孔內。所訴容器孔的大小根據去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7的大小而變化。所述擴增引物為特異性擴增ERCCl的引物，上游引物序列為5 ' -CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3 ';下游引物序列為 5 ' -GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3 ';所述白蛋白內參引物上游引物序列為5 ' -TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 '，下游引物序列為5 ' -CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3 '。引物包括擴增引物和白蛋白內參引物，引物濃度為lOumol/し所述SYBR premix Ex Taq(含 ROX) (2*Conc.)含有 O. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L的Mg2+，2xBuffer，lU/20y I 的 Ex Taq HS, 1U/20 μ I Tli RnaseH, lmmol/L SYBR Green 1，O. lmmol/L ROX Reference Dye。本實用新型與現有產品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測ー種核糖核苷酸還原酶I基因表達時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。

圖I為本實用新型的整體結構示意圖。
具體實施方式
以下結合附圖和實施例對本實用新型進行進ー步說明。表I為本實用新型PCR反應體系。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為ー種核糖核苷酸還原酶I基因表達檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、在固定座3上設有容器孔，其容器孔中分別放置去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7。容器孔的大小根據去離子水試劑瓶4、擴增引物管5、白蛋白內參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7的大小而變化。所述擴增引物為特異性擴增ERCCl的引物，上游引物序列為5 ' -CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3 ';下游引物序列為 5 ' -GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3 ';所述白蛋白內參引物上游引物序列為5 ' -TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 '，下游引物序列為5 ' -CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3 '。引物包括擴增引物和白蛋白內參引物，引物濃度為lOumol/し所述SYBR premix Ex Taq(含 ROX) (2*Conc.)含有 0. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L的Mg2+，2xBuffer，lU/20y I 的 Ex Taq HS, 1U/20 μ I Tli RnaseH, lmmol/L SYBR Green 1，0. lmmol/L ROX Reference Dye。操作方法I)制備模板新鮮組織或石蠟組織，常規提取RNA，并及時反轉錄成cDNA。2)反應體系將各反應物質按照如下表I中反應體系進行配比表I
權利要求1. 一種核糖核苷酸還原酶I基因表達檢測試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、在固定座(3)上設有容器孔，其特征在于，容器孔中分別放置去離子水試劑瓶(4)、擴增引物管(5)、白蛋白內參引物管(6)、SYBR premix Ex Taq (含ROX)管(7)。
專利摘要本實用新型公開一種核糖核苷酸還原酶1基因表達檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、去離子水試劑瓶4、擴增引物容器孔5、白蛋白內參引物容器孔6、SYBR premix Ex Taq(含ROX)容器孔7。本試劑盒結構簡單、設計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測核糖核苷酸還原酶1基因表達時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優點。
文檔編號C12Q1/68GK202519260SQ2012201628
公開日2012年11月7日 申請日期2012年4月17日 優先權日2012年4月17日
發明者井昶雯, 吳建中, 曹海霞, 王卓, 馬蓉 申請人:井昶雯, 吳建中, 曹海霞, 王卓, 馬蓉