專利名稱：一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法
技術領域：
本發明涉及一種膠原蛋白短肽的制備方法，尤其涉及一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法。
背景技術：
膠原蛋白是一種功能性蛋白質，與細胞增生、分化、運動、免疫中、關節潤滑、傷口愈合等密切相關，目前已被廣泛應用于醫藥、食品、日用化工、生物合成等工業領域。膠原蛋白具有保護胃黏膜的抗潰瘍，抑制血壓上升，提高骨骼強度；膠原蛋白分子量小，更容易被人體吸收，在營養品和日用品方面有一定的市場，可將其開發成各種美容護膚品、美容飲料、或者降血壓預防骨質疏松等功能的保健品；膠原蛋白屬于高蛋白，低熱量食物，適合用作減肥食品；膠原蛋白由于其在胃腸道的吸收速度特別快，適合運動后補充能量，可以作為運動保健食品的原料。目前膠原蛋白制備主要以比較原始的水解、酸堿法、單一酶解法為主，其產品無論從顏色、味道，還是實質作用，都與國際標準的產品有較大差距。其中，以酸堿法生產的膠原蛋白因技術與成本限制，最后會使用雙氧水、過氯酸鈉等強氧化劑進行除色除味，其結果是導致生成大量自由基團，具有非常強的致癌作用，會嚴重地損害國人的健康，同時酸堿廢液的排放也嚴重污染了環境。以單一的酶解方法制備膠原蛋白，膠原蛋白的得率低，經濟效益低。

發明內容
為了解決現有技術中的問題，本發明的目的是提供一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法。為達到上述目的，本發明所采用的技術手段是一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，其步驟包括`
將新鮮畜類動物皮膚刮脂洗凈繳碎測定干基含量，取測定后的上述原料加入發酵罐，置于磁力攪拌器上，按照質量比5. 5%的濃度向發酵罐中補充自來水；
連接發酵罐和超級恒溫水浴，然后啟動磁力攪拌器和超級恒溫水浴，將料液加熱到96°〇-981保持41^11，降溫至55°C后在發酵罐上安裝pH計電極，然后在攪拌下依次加入中性蛋白酶、風味蛋白酶進行水解，中性蛋白酶加入量為30 μ Ι/g，風味蛋白酶加入量為總量的3%，保持pH在7-8之間；
水解9h后,水解液經過95°C下加熱5min高溫滅活，在6000r/min轉速下離心，取上清液分析，同時取出全部殘渣，經充分干燥后測定降解率。進一步的，所述測定干基含量是指105°C下干燥至恒重。本發明的有益效果在于通過本方法制備膠原蛋白，動物皮膚的降解率可達95. 6%,蛋白質的水解度可達18.5%，水解物中分子量小于1000 (10個氨基酸以下的肽)的短肽選擇性達到了 44. 7%。生產過程綠色環保無污染，且制備方法簡便，利于規模生產。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步說明，以助于理解本發明的內容。實施例1
一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，其步驟包括
將新鮮豬皮Ikg刮脂洗凈繳碎，在105°C下干燥至恒重，測定干基含量，取測定后的上述原料加入發酵罐，置于磁力攪拌器上，按照質量比5. 5%的濃度向發酵罐中補充自來水；連接發酵罐和超級恒溫水浴，然后啟動磁力攪拌器和超級恒溫水浴，將料液加熱到96 0C -98°C 保持 4min ；
降溫至55°C后在發酵罐上安裝pH計電極，然后在攪拌下依次加入中性蛋白酶、風味蛋白酶進行水解，中性蛋白酶加入量為30 μ 1/g，風味蛋白酶加入量為總量的3%，保持pH在7-8之間，水解9h后，水解液經過95°C下加熱5min高溫滅活，在6000r/min的條件下離心，取適量上清液供分析用，同時取出全部殘渣，經充分干燥后用于測定降解率。所述降解率為底物投料量剩余參渣量和底物投料量的比率。經過分析得到降解率95. 6%,蛋白質的水解度18. 5%,水解物中分子量小于1000(10個氨基酸以下的肽)的短肽選擇性達到了 44.7%。實施例2
一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，其步驟包括
將新鮮牛皮Ikg刮脂洗凈繳碎，在105°C下干燥至恒重，測定干基含量，取測定后的上述原料加入發酵罐，置于磁力攪拌器上，按照質量比5. 5%的濃度向發酵罐中補充自來水；連接發酵罐和超級恒溫水浴，然后啟動磁力攪拌器和超級恒溫水浴，將料液加熱到96 0C -98°C 保持 4min ；
降溫至55°C后在發酵罐上安裝pH計電極，然后在攪拌下依次加入中性蛋白酶、風味蛋白酶進行水解，中性蛋白酶加入量為30 μ 1/g,風味蛋白酶加入量為總量的3%，保持pH在7-8之間，水解9h后，水解液經過95°C下加熱5min高溫滅活，在6000r/min的條件下離心，取適量上清液供分析用，同時取出全部殘渣，經充分干燥后用于測定降解率。經過分析得到降解率95. 6%,蛋白質的水解度18. 5%,水解物中分子量小于1000(10個氨基酸以下的肽)的短肽選擇 性達到了 44.7%。本發明的實施例所表述的，并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
權利要求
1.一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，其特征在于，步驟包括將新鮮畜類動物皮膚刮脂洗凈繳碎測定干基含量，取測定后的上述原料加入發酵罐，置于磁力攪拌器上，按照質量比5. 5%的濃度向發酵罐中補充自來水；連接發酵罐和超級恒溫水浴，然后啟動磁力攪拌器和超級恒溫水浴，將料液加熱到96°C_98°C保持4min，降溫至55°C后在發酵罐上安裝PH計電極，然后在攪拌下依次加入中性蛋白酶、風味蛋白酶進行水解，中性蛋白酶加入量為30 μ Ι/g，風味蛋白酶加入量為總量的3%，保持pH在7-8之間；水解9h后，水解液經過95°C下加熱5min高溫滅活，在6000r/min轉速下離心，取上清液分析，同時取出全部殘渣，經充分干燥后測定降解率。
2.根據權利要求1所述的混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，其特征在于所述測定干基含量是指105°C下干燥至恒重。
全文摘要
本發明公開了一種混合酶解制備膠原蛋白短肽的方法，步驟包括將新鮮畜類動物皮膚刮脂洗凈繳碎測定干基含量,測定后加入發酵罐，置于磁力攪拌器上補充自來水；將料液加熱到96℃-98℃保持4min,降溫至55℃后在發酵罐上安裝pH計電極,攪拌并依次加入中性蛋白酶、風味蛋白酶進行水解，水解9h后水解液經過95℃下加熱5min高溫滅活,6000r/min離心,取上清液分析，取出全部殘渣,經充分干燥后測定降解率。通過本方法制備膠原蛋白，動物皮膚的降解率可達95.6%,蛋白質的水解度可達18.5%,水解物中分子量小于1000的短肽選擇性達到了44.7%，生產過程綠色環保無污染，且制備方法簡便，利于規模生產。
文檔編號C12P21/06GK103060413SQ201310012998
公開日2013年4月24日 申請日期2013年1月15日 優先權日2013年1月15日
發明者曹榮軍, 任憲君, 武鑫, 劉少芳, 張秋艷, 金海明, 姚秀芬, 臺文靜 申請人:青島貝爾特生物科技有限公司