一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法
【專利摘要】一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法，包括如下步驟：將預處理之后的風干魚鱗置入20倍體積的0.5mol/L檸檬酸中，加入魚鱗質量的2%微生物蛋白酶，攪拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最終濃度為0.9mol/L過夜，在4℃條件10000×g離心15min，棄去上清，加入10倍體積的0.5mol/L醋酸中溶解，重復鹽析和離心操作一次，在10倍體積的0.1mol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h換一次溶液，再用蒸餾水透析至中性，冷凍干燥備用，此時得到的是酶溶性膠原蛋白，冷凍干燥備用。
【專利說明】一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法。
【背景技術】
[0002] 膠原蛋白是結締組織中極其重要的一種結構蛋白，其提取制品已廣泛應用于醫 藥、保健、食品加工、化妝品等眾多領域。魚鱗含有豐富的蛋白質和鈣、磷等礦物質，主要由 蛋白質和羥基磷灰石組成，其中蛋白質占魚鱗總重的50%?70%，主要為膠原蛋白和角蛋 白，可見魚鱗是非常好的膠原蛋白生產原料。
[0003] 提取膠原蛋白，目前常用的方法有：堿法、酸法、酶法和熱處理。利用酶法提取膠原 蛋白，具有較高的回收率，水解反應速度快，時間短，無環境污染等優點。而且酶法提取的水 解膠原蛋白純度高，水溶性好，理化性質穩定。目前常用的蛋白酶主要來自于動植物，例如 胃蛋白酶，胰酶，木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶，利用微生物來源的蛋白酶進行膠原蛋白提取還 屬鮮見。微生物來源的蛋白酶產量高，價格低，若能達到目前動植物蛋白酶的提取效果，將 有利于工業化生產。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的設計一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法。
[0005] 本發明的目的是通過以下技術方案實現的：將預處理之后的風干魚鱗置入20倍 體積的〇. 5mol/L檸檬酸中，加入魚鱗質量的2%微生物蛋白酶，攪拌提取24h，所述微生物蛋 白酶采用自有微生物為主以酵素發酵的下腳料培養基進行發酵獲得，具有胰蛋白酶作用， 提取液加入一定量的NaCl溶液至最終濃度為0.9mol/L過夜，在4°C條件lOOOOXg離心 15min，棄去上清，加入10倍體積的0. 5mol/L醋酸中溶解，重復鹽析和離心操作一次，在10 倍體積的〇. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h換一次溶液，再用蒸餾水透析至中性，冷凍 干燥備用，此時得到的是酶溶性膠原蛋白，冷凍干燥備用。
[0006] 本發明采用自產微生物蛋白酶，提取酶溶性膠原蛋白，及降低了生產成本，同時最 大限度避免了酸提取法可能造成的環境污染。
【具體實施方式】
[0007] 為了使本發明專利保護的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下對本發明進 行進一步詳細說明。
[0008] 實施例1 將預處理之后的風干魚鱗置入20倍體積的0. 5mol/L醋酸中，加入魚鱗質量的2%微 生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物為主以酵素發酵的下腳料培養基進行發 酵獲得，具有胰蛋白酶作用，攪拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最終濃度為 0. 9mol/L過夜，在4°C條件lOOOOXg離心15min，棄去上清，加入10倍體積的0. 5mol/L醋 酸中溶解，重復鹽析和離心操作一次。在10倍體積的0. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每 4h換一次溶液，再用蒸餾水透析至中性，冷凍干燥備用。此時得到的是酶溶性膠原蛋白，冷 凍干燥備用。
[0009] 采用以上方法最終純化獲得膠原蛋白的水平達到0. 26g/10g魚鱗。
[0010] 實施例2 將預處理之后的風干魚鱗置入20倍體積的0. 5mol/L鹽酸中，加入魚鱗質量的2%微 生物蛋白酶，所述微生物蛋白酶采用自有微生物為主以酵素發酵的下腳料培養基進行發 酵獲得，具有胰蛋白酶作用，攪拌提取24h，提取液加入一定量的NaCl溶液至最終濃度為 0. 9mol/L過夜，在4°C條件lOOOOXg離心15min，棄去上清，加入10倍體積的0. 5mol/L醋 酸中溶解，重復鹽析和離心操作一次。在10倍體積的0. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每 4h換一次溶液，再用蒸餾水透析至中性，冷凍干燥備用。此時得到的是酶溶性膠原蛋白，冷 凍干燥備用。
[0011] 采用以上方法最終純化獲得膠原蛋白的水平達到〇. 25g/10g魚鱗。
[0012] 應當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換， 而所有這些改進和變換都應屬于本發明所附權利要求的保護范圍。
【權利要求】
1. 一種利用微生物酶提取魚鱗膠原蛋白的方法，包括如下步驟：將預處理之后的風干 魚鱗置入20倍體積的0. 5mol/L檸檬酸中，加入魚鱗質量的2%微生物蛋白酶，攪拌提取 24h，所述微生物蛋白酶采用自有微生物為主以酵素發酵的下腳料培養基進行發酵獲得，具 有胰蛋白酶作用，提取液加入一定量的NaCl溶液至最終濃度為0. 9mol/L過夜，在4°C條件 10000X g離心15min，棄去上清，加入10倍體積的0. 5mol/L醋酸中溶解，重復鹽析和離心 操作一次，在10倍體積的〇. lmol/L的醋酸溶液中透析12h，每4h換一次溶液，再用蒸餾水 透析至中性，冷凍干燥備用，此時得到的是酶溶性膠原蛋白，冷凍干燥備用。
【文檔編號】C12P21/06GK104140993SQ201410368834
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月30日 優先權日:2014年7月30日
【發明者】許安邦 申請人:晶葉（青島）生物科技有限公司