專利名稱：一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法
技術領域：
本發明屬于食品加工技術領域，涉及一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法，具體涉及以海地瓜為原料，通過組織自溶及外源蛋白酶酶解制備具有抗氧化功能的小分子多肽的方法。
背景技術：
海地瓜是海參的一種，其體壁組織富含蛋白質，食用價值高。目前多肽產品開發已經成為海地瓜深加工產品研發的重要方向。海地瓜多肽一般以可供食用的鮮活海地瓜為原料，利用蛋白酶等進行水解制成，是具有多種功能活性的肽類，具有良好的穩定性、水溶性，因此與普通的制品相比，多肽產品具有易消化、生物效價高、無抗原性等優點。海地瓜多肽(特別是小分子多肽)具有明顯的抗氧化活性功能，是消除自由基，延緩機體衰老，預防疾病發生的功能性食品和藥品的重要來源。國內關于利用自溶及蛋白酶復合酶解制備海地瓜抗氧化多肽的研究尚未見報道。

發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法，
為解決上述技術問題，所采用的技術方案具體步驟是:
步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，低于4°C的溫度下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒徑小于等于0.5cm ；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至5.0 7.0，45 60°C自溶酶解8 14h ，得到海地瓜組織水解液； 步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌10 20min，冷卻至常溫后，調整pH值至
6.0 7.0，添加蛋白酶1000 5000U/g，然后置于40 60°C水浴中水解6 12h，水解過程中保持攪拌速度與PH恒定，得到海地瓜水解液；
所述的蛋白酶可為所有蛋白酶；
步驟(4).將海地瓜水解液置于80 100°C水浴中滅活蛋白酶10 20min，冷卻至常溫后，3000 8000r/min離心10 30分鐘，取上清液；
步驟(5).采用超濾膜技術對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經50 60°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。作為優選，一種海地瓜抗氧化多肽制備方法的具體操作步驟是:
步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，(TC下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒徑小于等于0.5cm ；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜組織水解液；
步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌lOmin，冷卻至常溫后，調整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55 °C水浴中水解8h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，制得海地瓜水解液；
步驟(4).將海地瓜水解液置于85°C水浴滅活木瓜蛋白酶20min,冷卻至常溫后，5000r/min離心15分鐘,取上清液；
步驟(5).采用截留分子量為3000Da的切向流超濾膜包對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經55°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。本發明具有的有益效果:
本發明制備的海地瓜抗氧化多肽具有很好的水溶性，多肽分子量低，易被人體吸收；抗氧化功能活性穩定，具有延緩衰老的功效，在功能性產品領域有著廣闊的市場前景。本發明制備方法工藝簡單、過程易控，以價格低廉的海地瓜作為原料，利用其自身組織自溶及外源添加蛋白酶，進行復合酶解，在豐富酶切位點多樣性的同時，降低蛋白酶使用量，進一步降低生產成本，方法制成的海地瓜抗氧化多肽具有安全性高、易吸收及無毒害作用，具有良好的清除自由基功能。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的分析(下面實施例中海地瓜肉糜粒徑小于等于 0.5cm)。實施例1 步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，低于4°C的溫度下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至5.0，45°C自溶酶解14h，得到海地瓜組織水解液；
步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌lOmin，冷卻至常溫后，調整pH值至6.0，添加胰蛋白酶1000U/g，然后置于40°C水浴中水解12h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，得到海地瓜水解液；
步驟(4).將海地瓜水解液置于80°C水浴中滅活蛋白酶20min,冷卻至常溫后，3000r/min離心30分鐘，取上清液；
步驟(5).采用超濾膜技術對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經50°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。實施例2
步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，低于2°C的溫度下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至7.0，60 0C自溶酶解8h，得到海地瓜組織水解液；
步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌20min，冷卻至常溫后，調整pH值至7.0，添加木瓜蛋白酶5000U/g，然后置于60°C水浴中水解6h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，得到海地瓜水解液；
步驟(4).將海地瓜水解液置于100°C水浴中滅活木瓜蛋白酶IOmin,冷卻至常溫后，8000r/min離心10分鐘,取上清液；
步驟(5).采用超濾膜技術對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經60°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。實施例3
步驟(1).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，低于rc的溫度下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至6.0，50°C自溶酶解IOh，得到海地瓜組織水解液；
步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌15min，冷卻至常溫后，調整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于50°C水浴中水解9h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，得到海地瓜水解液；
步驟(4).將海地瓜水解液置于90°C水浴中滅活木瓜蛋白酶15min,冷卻至常溫后，5000r/min離心20分鐘,取上清液； 步驟(5).采用超濾膜技術對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經55°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。實施例4
步驟(1).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，(TC下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；
步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜組織水解液；
步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌lOmin，冷卻至常溫后，調整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55 °C水浴中水解8h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，制得海地瓜水解液；
步驟(4).將海地瓜水解液置于85°C水浴滅活木瓜蛋白酶20min,冷卻至常溫后，5000r/min離心15分鐘,取上清液；
步驟(5).采用截留分子量為3000Da的切向流超濾膜包對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液；
步驟￠).海地瓜小分子多肽液經55°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。實施例4制得的海地瓜抗氧化多肽經ABTS法檢測結果表明1.0mg/mL海地瓜抗氧化多肽抗氧化能力相當于1.3mmol/L維生素C,即VCEAC值為1.3mmol/g。
權利要求
1.一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟: 步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，低于4°C的溫度下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒徑小于等于0.5cm ； 步驟(2).在海地瓜肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至5.0 7.0，45 60°C自溶酶解8 14h，得到海地瓜組織水解液； 步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌10 20min，冷卻至常溫后，調整pH值至6.0 7.0，添加蛋白酶1000 5000U/g，然后置于40 60°C水浴中水解6 12h，水解過程中保持攪拌速度與PH恒定，得到海地瓜水解液； 所述的蛋白酶可為所有蛋白酶； 步驟(4).將海地瓜水解液置于80 100°C水浴中滅活蛋白酶10 20min，冷卻至常溫后，3000 8000r/min離心10 30分鐘，取上清液； 步驟(5).采用超濾膜技術對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液； 步驟￠).海地瓜小分子多肽液經50 60°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。
2.如權利要求1所述的一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法，其特征在于該方法包括以下步驟: 步驟(I).將海地瓜剖開后去除消化道內容物，(TC下斬拌切碎，得到海地瓜肉糜；所述的海地瓜肉糜粒徑小于等于0.5cm ； 步驟(2).在海地瓜 肉糜中加入等體積去離子水，攪拌混勻后，調整pH值至6.0，50°C自溶酶解12h，得到海地瓜組織水解液； 步驟(3).將海地瓜組織水解液煮沸滅菌lOmin，冷卻至常溫后，調整pH值至6.5，添加木瓜蛋白酶3000U/g，然后置于55°C水浴中水解8h，水解過程中保持攪拌速度與pH恒定，制得海地瓜水解液； 步驟(4).將海地瓜水解液置于85°C水浴滅活木瓜蛋白酶20min,冷卻至常溫后，5000r/min離心15分鐘,取上清液； 步驟(5).采用截留分子量為3000Da的切向流超濾膜包對上清液進行超濾，獲得海地瓜小分子多肽液； 步驟￠).海地瓜小分子多肽液經55°C旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得海地瓜抗氧化多肽凍干粉。
全文摘要
本發明涉及一種海地瓜抗氧化多肽的制備方法。現有用自溶及蛋白酶復合酶解制備海地瓜抗氧化多肽的研究甚少。該方法是將清洗干凈的海地瓜在低于4℃下斬拌切碎，加入等體積去離子水，混勻，調pH值至5.0～7.0，45～60℃自溶酶解8～14h，然后煮沸滅菌10～20min，調pH值至6.0～7.0，加入蛋白酶1000～5000U/g，于40～60℃水浴水解6～12h，然后于80～100℃水浴滅酶10～20min，離心取上清液，再采用超濾膜技術對上清液超濾，最后經50～60℃旋轉蒸發濃縮、真空冷凍干燥，制得產品。本發明制備多肽有較好水溶性，多肽分子量低，易被人體吸收；抗氧化活性穩定，具有延緩衰老的功效。
文檔編號A23L1/325GK103120328SQ20131002273
公開日2013年5月29日 申請日期2013年1月22日 優先權日2013年1月22日
發明者王天明, 馬永鈞, 蘇意鋼, 楊志堅, 秦乾安, 朱燕芳, 肖金星, 鄭剛 申請人:浙江大學舟山海洋研究中心, 舟山瑞洋水產品研發有限公司