專利名稱：分泌高中和活性傳染性法氏囊病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種分泌高中和活性傳染性法氏囊病毒(IBDV)單克隆抗體的雜交瘤細胞，屬于生物技術領域，涉及抗體工程技術。具體為單克隆抗體雜交瘤細胞C128株具有優良的生產性能，分泌的單克隆抗體不僅中和效價高而且對不同動物源的IBDV毒株均具有高中和活性，可以用于傳染性法氏囊病(IBD)發病動物的臨床治療。
背景技術：
傳染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease, IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus, IBDV)引起的以侵害雛禽淋巴組織,特別是中樞免疫器官一法氏囊為主要特征的傳染病。該病不但引起患病動物死亡，而且還導致機體免疫抑制，使機體的免疫防御能力降低和疫苗免疫接種失敗，是引起我國及世界養禽業經濟損失嚴重的主要傳染病之一。盡管采取了以免疫接種疫苗為主的綜合性防控措施，但由于IBDV的生物學性質穩定、易變異以及多種禽鳥類可帶毒傳播，目前仍是危害養雞業的主要傳染病之一，由該病導致的經濟損失巨大。IBDV是雙RNA病毒科禽雙RNA病毒屬成員，基因組由大(A)小(B)兩個節段組成，編碼五種病毒蛋白:乂？1、￥ 2、￥ 3、￥ 4和￥ 5。VPl是病毒的非結構蛋白，是由B節段編碼的一種依賴RNA的RNA聚合酶，與病毒RNA的復制和毒力有關。A節段(3.3 kb)含有2個部分重疊的開放閱讀框(0RF)，其中較大的ORF編碼多聚蛋白VP2-4-3，然后該蛋白進一步剪切加工成三個成熟蛋白VP2、VP4、VP3。VP2和VP3是病毒的結構蛋白，構成病毒衣殼。VP2占結構蛋白總量的51%，分子量為37 40kD，既是病毒的的主要結構蛋白又是病毒的主要保護性抗原，與病毒中和抗體的誘導、抗原和毒力的變異等有關。VP3和病毒RNA組成螺旋狀的核蛋白復合物，位于病毒顆粒內部。VP4為病毒自身蛋白酶。另一個小ORF編碼VP5，是病毒的非結構蛋白，與病毒的毒力和復制效率有關。目前，預防IBD的主要手段是疫苗免疫接種。低毒力的傳染性法氏囊病活疫苗在有母源抗體存在的條件下難以達到理想的免疫效果，無法有效地抵抗IBDV野毒的感染。中等毒力的傳染性法氏囊病活疫苗可突破母源抗體，有效激發免疫保護，有效地抵抗IBDV感染，但這些毒株會不同程度地造成法氏囊的損傷?；钜呙绲氖褂么嬖谥鳬BDV發生自然重配而產生變異強毒株的風險，變異強毒株與超強毒株(vvIBDV)的出現，以及野外IBDV毒株VP2基因變異引起的毒力變化和VP2抗原表位的漂移產生的抗原變異株，使傳統的疫苗毒株不能提供完全有效的免疫保護，IBD疫苗免疫預防失敗不斷發生。在養雞生產中，對IBD免疫預防失敗的IBD發病動物進行治療，可降低發病動物的死亡率，減少經濟損失。目前，使用的IBDV卵黃抗體或高免血清治療方法，因免疫動物與抗原存在著批次差異，不僅生產的不同批次的抗體效價不一致，更重要的是由于多種疫病可以通過卵黃垂直傳播和血液水平傳播，因此在卵黃抗體或高免血清生產過程中存在著蛋源性和血源性疫病傳播的巨大風險，產生嚴重的生物安全問題。運用淋巴細胞雜交瘤技術制備的單克隆抗體具有特異性高、效價高、可大規模生產、便于質量控制等優點。應用具有高中和活性的IBDV單克隆抗體治療IBD發病動物，可以克服目前使用的IBDV卵黃抗體或高免血清的諸多缺點，提高療效。目前，有關分泌IBDV單克隆抗體的雜交瘤細胞株已有報道，部分細胞株分泌的單克隆抗體對IBDV具有中和活性，但中和效價低，對不同IBDV毒株的中和活性未見報道。本發明從IBD疫苗免疫預防失敗的發病雞法氏囊組織中分離IBDV當前流行強毒株為免疫原，運用淋巴細胞雜交瘤技術建立了 IBDV特異單克隆抗體雜交瘤細胞庫，通過IBDV中和試驗篩選出了分泌高中和效價的單克隆抗體雜交瘤細胞C128株，分泌的單克隆抗體對雞源IBDV強毒株、鴨源IBDV強毒株、鵝源IBDV強毒株以及IBDV弱毒疫苗株均具有高中和活性(達到101(1)，本發明的單克隆抗體雜交瘤細胞C128株具有優良的生產性能，分泌的單克隆抗體不僅中和效價高而且抗IBDV毒株范圍廣，將本發明制備的高中和活性單克隆抗體治療劑應用于IBD發病動物的臨床治療，不僅療效顯著，并且在單克隆抗體生產過程中沒有引入外源 疫病的風險等生物安全問題。

發明內容
技術問題
傳染性法氏囊病(IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的雞和火雞的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，是引起我國及世界養禽業經濟損失嚴重的主要傳染病之一。在養雞生產中，對IBD免疫預防失敗的IBD發病動物進行治療，可降低發病動物的死亡率，減少經濟損失。目前，使用卵黃抗體和高免血清治療IBD，雖然可降低發病動物的死亡率，減少經濟損失，但在卵黃抗體或高免血清生產過程中存在著蛋源性和血源性疫病傳播的巨大風險，產生嚴重的生物安全問題。本發明的目的是提供一種分泌高中和活性IBDV單克隆抗體的雜交瘤細胞株。雜交瘤細胞株的建立是用近期從疫苗免疫失敗的IBD發病雞群中分離的現行流行毒株IBDV-AHl為抗原，免疫BALB/c小鼠，利用淋巴細胞雜交瘤技術建立的167株IBDV特異單克隆抗體雜交瘤細胞庫中獲得的。用該雜交瘤細胞C128株制備的小鼠腹水，經病毒中和試驗證明不僅中和效價高而且抗IBDV毒株范圍廣，應用于IBD發病動物的臨床治療，療效顯著，并且在單克隆抗體生產過程中沒有引入外源疫病的風險等生物安全問題。
技術方案
一種分泌高中和活性傳染性法氏囊病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞C128株，該雜交瘤細胞株于2013年3月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址:中國武漢武漢大學，保藏編號為CCTCC NO:C201322，分類命名:雜交瘤細胞。用所述雜交瘤細胞C128株制備的傳染性法氏囊病毒單克隆抗體。所述的單克隆抗體可在制備傳染性法氏囊病毒單克隆抗體治療劑中得到應用。所述單克隆抗體治療劑對雞源IBDV強毒株、鴨源IBDV強毒株、鵝源IBDV強毒株以及IBDV弱毒疫苗株的中和效價高達101(1。所述單克隆抗體治療劑可用于IBD發病動物的臨床治療。所述單克隆抗體治療劑制備方法為，將雜交瘤細胞C128株注射到經BALB/c小鼠腹腔，制備單克隆抗體腹水，離心，收集上清液，滅活補體，過濾除菌，中和效價測定，稀釋，加入穩定劑，分裝，低溫凍存。
有益效果本發明的特點和優點如下:
1.本發明使用的IBDV免疫原是從疫苗免疫預防失敗的發病雞法氏囊組織中分離的IBDV當前流行強毒株。2.本發明從建立的167株分泌IBDV單克隆抗體的雜交瘤細胞庫中篩選出一株雜交瘤細胞C128株，用其制備的小鼠腹水抗體對IBDV的病毒中和效價高達101(1。3.本發明的雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體對雞源IBDV強毒株、鴨源IBDV強毒株、鵝源IBDV強毒株以及IBDV弱毒疫苗株均表現高中和活性，抗IBDV毒株范圍廣。4.本發明的雜交瘤細胞株制備的單克隆抗體治療劑，用于IBD發病動物的臨床治療，治愈率達96%，療效顯著，安全無不良副反應。于-20°C保存二年后抗體中和效價不降低，穩定性好。
具體實施例方式(一)單克隆抗體雜交瘤細胞株的建立
1.1BDV抗原的制備從近期IBD疫苗免疫失敗的發病雞法氏囊組織中分離當前流行IBDV強毒株(王永山等，近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征，中國獸醫科學，2008，38(12): 919-925)，感染4周齡的SPF雞，采取死亡雞的法氏囊組織，制成組織勻漿，凍融三次，9000rpm離心30min，取上清液，采用PEG沉淀和不連續蔗糖密度梯度方法進行純化，夾心ELISA檢測純化后病毒抗原，紫外分光光度計測定病毒濃度，-70°C保存備用。
2.動物免疫用純化的IBDV作為免疫原，腹腔注射免疫6 8周齡雌性BALB/c小鼠(購自揚州大學比較醫學實驗中心)，50yg/只。首免用等體積弗氏完全佐劑(Sigma公司產品)乳化抗原，以后每隔14d用弗氏不完全佐劑(Sigma公司廣品)乳化抗原,再免疫2次。3免后第7d斷尾采血，用間接ELISA方法測定血清抗體效價，選取血清抗體ELISA效價> IO6的小鼠，在融合前3d用不加佐劑的IBDV抗原經腹腔注射加強免疫。3.細胞融合采用PEG細胞融合方法。取SP2/0骨髓瘤細胞與免疫的BALB/c小鼠脾細胞按1:5 1:10的比例，充分混勻，IOOOrpm離心lOmin，棄上清，用手掌輕擊管底，使細胞松散均勻，置40°C水浴預熱，用ImL吸管在45s內加完預熱至40°C的50% PEG4000(Sigma公司產品)ImL,邊加邊輕輕振蕩,然后在90s內加入15mL預熱至37°C的無胎牛血清的RPM1-1640培養基，室溫靜置lOmin，IOOOrpm離心lOmin，棄上清，加入含15%胎牛血清(FCS)(蘭州民海公司產品)和HAT (Sigma公司產品)的RPM1-1640培養基重懸，分裝到已有飼養細胞的96孔板上，于5% CO2培養箱培養。3d后補加含HAT (Sigma公司產品)和15% FCS (蘭州民海 公司產品)的RPM1-1640培養基，5d后改用含HT (Sigma公司產品)和15% FCS (蘭州民海公司產品)的RPM1-1640培養基，IOd后換成含15% FCS (蘭州民海公司產品)的RPM1-1640培養基培養，當融合的細胞生長至96孔板孔底面積的1/5時，取上清進行抗體檢測。4.雜交瘤細胞的篩選按方陣法確定純化IBDV抗原的包被濃度，用包被液為
0.05 mo I/L pH 9.6碳酸鹽緩沖液對純化的IBDV抗原進行倍比稀釋，用稀釋至400倍的IBDV抗原量包被ELISA板，100 μ L/孔，置4 °C包被過夜，PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；以含10%小牛血清的PBST封閉每孔，200 μ L/孔，37°C放置2h，PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；將融合后12d的細胞上清、1:1600稀釋的免疫小鼠陽性血清和1:1600稀釋的小鼠陰性血清，加入相應孔內，100 4 17孔，37°〇作用lh，PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；加入1:2000稀釋的辣根過氧化物酶(HRP)標記的羊抗鼠IgG (本實驗室自制)，100 μ L/孔，37°C放置lh，PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；加入TMB底物，100 μ L/孔，室溫避光顯色5 IOmin ;每孔加入50 μ L 2mol/L硫酸終止反應。經酶標儀測定OD45tlnm值，以空白對照調零，P為各檢測孔的值，N為陰性參考血清的OD45tlnm值，當陰性參考血清的OD45tol值蘭0.1，陽性參考血清的OD45tlnm值與陰性參考血清的OD45tol值的比值3 2.1，即陰、陽性對照成立的前提下，P/N ^ 2.1的檢測孔判為陽性，隔2 3d后再檢測一次，對兩次檢測結果均為陽性的雜交瘤細胞進行克隆化。5.雜交瘤細胞的克隆化首先將陽性孔活細胞用臺盼蘭進行染色和計數，用含15% FCS (蘭州民海公司產品)的RPM1-1640培養基稀釋成100個細胞/15mL培養基，將稀釋的細胞懸液加入96孔細胞培養板，每孔0.15mL，37°C，5 % CO2培養箱中培養，4 5d后，顯微鏡下可觀察到克隆細胞的形成，記錄下只有單個克隆生長孔，8 9d時取細胞上清，及時進行ELISA檢測。選擇陽性的單克隆細胞再進行同樣的克隆3次以上，直至克隆后所有細胞孔上清檢測均為陽性、且各孔檢測OD45tlnm值較接近。將克隆化的IBDV特異單克隆抗體雜交瘤細胞株擴大培養，凍存。經過 20次的細胞融合、篩選、克隆、鑒定，建立了 167株穩定分泌IBDV特異單克隆抗體的雜交瘤細胞庫。6.腹水的制備將滅菌的液體石蠟腹腔注射8 10周齡的BALB/c小鼠(購自揚州大學比較醫學實驗中心)，0.5mL /只，7天后，將雜交瘤細胞株注射入小鼠腹腔，每只0.2mL(含2X106 5X106個雜交瘤細胞)，7 10天后采取腹部明顯鼓起小鼠的腹水，5000 rpm離心10 min，收集上清，分裝后于-20°C保存備用。7.病毒中和試驗用建立的167株穩定分泌IBDV特異單克隆抗體的雜交瘤細胞株制備的腹水，分別進行IBDV中和試驗，進一步篩選分泌中和效價高、且抗IBDV毒株范圍廣的單克隆抗體雜交瘤細胞株。7.1雞源IBDV強毒株的病毒中和試驗測定雞源IBDV強毒株(王永山等，近期引起免疫失敗的傳染性法氏囊病病毒VP2基因的分子特征，中國獸醫科學，2008，38(12):919-925)的TCID5(I。采用固定病毒稀釋抗體的方法，將CEF細胞消化后，接種于96孔細胞板中。將10倍系列稀釋的各株單克隆抗體小鼠腹水分別與等體積含200 TCID5tl的IBDV懸液混合均勻，37°C作用I h，取該病毒-抗體混懸液每孔0.1ml接種于上述96孔細胞板中，并設立IBDV及正常CEF細胞對照，置37°C，5%C02溫箱培養，觀察結果。在167株IBDV特異單克隆抗體的雜交瘤細胞株中，雜交瘤細胞C128株制備的小鼠腹水對雞源IBDV強毒株的中和效價最高，中和效價為10'7.2鴨源IBDV強毒株的病毒中和試驗測定鴨源IBDV強毒株(周宗安等，傳染性法氏囊病病毒的生態學與流行病學研究[J].中國獸醫學報，1998，18(5):43(Γ433.)的TCID50 0采用固定病毒稀釋抗體的方法，將CEF細胞消化后，接種于96孔細胞板中。將雜交瘤細胞株C128制備的小鼠腹水10倍系列稀釋，與等體積含200 TCID50的鴨源IBDV強毒株懸液混合均勻，37°C作用I h，取該病毒-抗體混懸液每孔0.1ml接種于上述96孔細胞板中，并設立IBDV及正常CEF細胞對照，置37°C，5%C02溫箱培養，觀察結果，雜交瘤細胞C128株制備的小鼠腹水對鴨源IBDV強毒株的中和效價為10'7.3鵝源IBDV強毒株的病毒中和試驗測定鵝源IBDV株(周宗安等，傳染性法氏囊病病毒的生態學與流行病學研究.中國獸醫學報，1998，18(5):430 433 )的TCID5tl。采用固定病毒稀釋抗體的方法，將CEF細胞消化后，接種于96孔細胞板中。將雜交瘤細胞株C128制備的小鼠腹水10倍系列稀釋，與等體積含200 TCID50的鵝源IBDV強毒懸液混合均勻，37°C作用I h，取該病毒-抗體混懸液每孔0.1ml接種于上述96孔細胞板中，并設立IBDV及正常CEF細胞對照，置37°C，5%C02溫箱培養，觀察結果，雜交瘤細胞C128株制備的小鼠腹水對鵝源IBDV強毒株的中和效價為10'7.4 IBDV弱毒疫苗株的病毒中和試驗測定IBDV弱毒疫苗B87株(南京天邦生物科技有限公司產品)的TCID5tlt5采用固定病毒稀釋抗體的方法，將CEF細胞消化后，接種于96孔細胞板中。將雜交瘤細胞C128株制備的小鼠腹水10倍系列稀釋，與等體積含200TCID50的IBDV疫苗毒懸液混合均勻，37°C作用I h，取該病毒-抗體混懸液每孔0.1ml接種于上述96孔細胞板中，并設立IBDV及正常CEF細胞對照，置37°C，5%C02溫箱培養，觀察結果，雜交瘤細胞株C128制備的小鼠腹水對IBDV弱毒疫苗株的中和效價為101(1。8雜交瘤細胞株C128的生物學特性
8.1雜交瘤細胞株染色體分析用姬姆薩染色法對雜交瘤細胞進行染色體計數。分別取SP2/0骨髓瘤細胞和陽性雜交瘤細胞培養，生長到對數期，向細胞瓶中加入秋水仙素，使其終濃度為0.1 μ g/ml，然后放入細胞培養箱中繼續培養4 5h。用5mL 37°C預溫的
0.075mol/L KCI低滲液將細胞吹起混勻，置37°C溫箱作用30min，向其中加入新配制的固定液(甲醇:冰醋酸為3:1)1 mL， 邊滴加邊混勻，IOOOrpm離心lOmin。棄上清留細胞沉淀，用5mL固定液將細胞吹起，37°C作用30min，IOOOrpm離心lOmin，重復上述操作一次。細胞沉淀用ImL固定液懸起混勻，用滴管吸取懸液I滴，滴在預先冰凍的載玻片上，平鋪于載玻片上，自然干燥。用新配制的吉姆薩染液染色lOmin，自來水沖洗后晾干，置于顯微鏡下進行觀察。此雜交瘤細胞株的染色體數量為94條，而骨髓瘤細胞的染色體的數量為54飛4條，小鼠脾細胞染色體數量為40條，證明所獲得的此雜交瘤細胞株是兩種細胞融合的結果。8.2分泌抗體穩定性測定將獲得的雜交瘤細胞C128株進行連續培養傳代50次、液氮凍存與復蘇試驗，用IBDV抗體間接ELISA方法連續檢測雜交瘤細胞培養上清液中的抗體效價均為104，證明此雜交瘤細胞株C128能持續穩定地分泌抗IBDV單克隆抗體。8.3單克隆抗體的亞類測定用單克隆抗體亞類鑒定試劑盒(購于Thermoscientific公司)測定雜交瘤細胞C128株分泌單克隆抗體的亞類，結果顯示,該單克隆抗體亞類為IgGl K。8.4單克隆抗體的效價測定用間接ELISA測定雜交瘤細胞培養上清和小鼠腹水的效價，結果顯示，雜交瘤細胞C128培養上清ELISA效價為104，腹水ELISA效價為IO12/病毒中和效價為101CI。
8.5單克隆抗體的間接免疫熒光試驗實驗在24孔細胞培養板中進行。將雞源IBDV強毒株、鴨源IBDV強毒株、鵝源IBDV強毒株和IBDV弱毒疫苗B87疫苗株分別接種到CEF細胞，培養72h病變后，吸棄細胞培養液，用無血清的培養液洗2次，然后向細胞培養孔中加入-20°C預冷的無水乙醇ImL/孔，4°C固定30 min，用PBS洗3次，拍干；加入雜交瘤細胞培養上清液，200 μ L/孔，37°C孵育lh，PBS洗滌3次，拍干；加入200倍稀釋的FITC標記的羊抗鼠IgG抗體(購買于武漢博士德生物工程有限公司)，200yL/孔，37°C孵育lh，PBS洗滌5次，置于熒光顯微鏡下觀察。在熒光顯微鏡下，單克隆抗體均能與雞源IBDV強毒株、鴨源IBDV強毒株、鵝源IBDV強毒株和IBDV弱毒疫苗株感染的CEF細胞反應，產生熒光，而與正常CEF細胞無熒光，證明單克隆抗體對IBDV的特異性。8.6單克隆抗體對SPF法氏囊組織的反應性用ELISA包被液(0.05 mo I/L pH
9.6碳酸鹽緩沖液)將SPF雞法氏囊組織懸液抗原稀釋500倍，包被ELISA板，100 μ L/孔，置4°C包被過夜；PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；以10 %小牛血清封閉每孔，200μ L/孔，37°C放置2h ;PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；將分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞培養上清液、免疫小鼠陽性血清(1:1600稀釋)和小鼠陰性血清(1:1600稀釋)，加入相應孔內，100 yL/孔，37°C作用90 min ;PBST洗滌3次，每次5min，最后一次拍干；加入I: 2000稀釋的酶標羊抗鼠IgG, 100 μ L/孔，37°C放置60min ；PBST洗滌5次，每次5min,最后一次拍干；加入TMB 底物，100μ L/孔,室溫避光顯色5 10 min;每孔加入50yL 2 mo I/L硫酸終止反應。經酶標儀測定OD45tlnm值，分泌單克隆抗體的雜交瘤細胞培養上清液和小鼠陰性血清的OD45tol值均小于0.1，表明單克隆抗體與SPF法氏囊組織無反應性，進一步證明了單克隆抗體對IBDV的特異性。(二)單克隆抗體治療劑的制備與檢驗
1.單克隆抗體治療劑的制備將液體石蠟注射入8 10周齡BALB/c小鼠，7天后，將雜交瘤細胞株C128注射小鼠腹腔，每只注射2 X IO6 5 X IO6個雜交瘤細胞，7 10天后采取腹部明顯鼓起小鼠的腹水，5000 rpm，離心10 min，收集上清。單克隆抗體腹水經56°C、30 min處理，離心，收集上清液，滅活補體，過濾除菌，用PBS稀釋，加入適宜穩定劑，分裝，置-20°C保存備用。2.單克隆抗體治療劑的效力試驗將30日齡SPF雞(南京天邦生物技術有限公司)隨機分成若干組，用IBDV強毒株感染，感染后，肌肉注射不同劑量的單克隆抗體治療劑，逐日觀察，觀察臨床表現、檢測IBDV。實驗同步設立不注射單克隆抗體治療劑對照組。結果:單克隆抗體治療組中的雞未出現IBD臨床癥狀，IBDV檢測陰性；對照組出現IBD臨床癥狀，死亡率90%，IBDV檢測陽性。3.單克隆抗體治療劑的安全性試驗為了檢驗該制劑的安全性，將5倍的治療劑量肌肉注射SPF雞，逐日檢測試驗雞的體溫、精神狀態以及飲食等表現，試驗雞無不良副反應。4.單克隆抗體治療劑的穩定性試驗將分裝的單克隆抗體治療劑，分別置于37°C、4°C、-20°C保存，經不同的保存時間后，取樣，用病毒中和試驗測定效價。其中置-20°C保存二年后的單克隆抗體治療劑，中和效價仍為io1C1。(三)單克隆抗體治療劑的臨床應用
將制備的單克隆抗體制備的治療劑用于養殖場IBD發病雞的治療，采用肌肉注射的方法，并輔以對癥治療，治 愈率為96%。
權利要求
1.一種分泌高中和活性傳染性法氏囊病毒單克隆抗體的雜交瘤細胞，該雜交瘤細胞C128株于2013年3月13日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址:中國武漢武漢大學，保藏編號為CCTCC N0:C201322，分類命名:雜交瘤細胞。
2.用權利要求1所述雜交瘤細胞C128株制備的傳染性法氏囊病毒單克隆抗體。
3.用權利要求2所述的單克隆抗體制 備的傳染性法氏囊病毒單克隆抗體治療劑。
全文摘要
本發明涉及一種分泌高中和活性傳染性法氏囊病毒(IBDV)單克隆抗體的雜交瘤細胞株，屬于生物技術領域。本發明從建立的分泌IBDV單克隆抗體的雜交瘤細胞庫中篩選出一株雜交瘤細胞C128株，用其制備的小鼠腹水單克隆抗體對IBDV的中和效價高達1010。本發明的雜交瘤細胞C128株分泌高中和活性IBDV單克隆抗體不僅中和效價高而且抗IBDV毒株范圍廣，用于傳染性法氏囊病(IBD)發病動物的臨床治療，療效顯著，安全無不良副反應。本發明的雜交瘤細胞C128株制備的單克隆抗體治療劑，保存二年后中和效價不降低，穩定性好。
文檔編號C12R1/91GK103232974SQ20131008519
公開日2013年8月7日 申請日期2013年3月18日 優先權日2013年3月18日
發明者王永山, 吳曉悠, 諸玉梅, 夏興霞, 畢振威, 潘群興, 王曉麗, 歐陽偉, 董晨紅 申請人:江蘇省農業科學院