miR-125b在抗腫瘤中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及miR-125b在抗腫瘤中的應用。更具體地，本發明涉及構建體，抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥性或者誘導腫瘤細胞發生凋亡的方法，該構建體或者miR-125b在制備藥物中的用途，以及用于治療癌癥的藥物。其中，該構建體包括編碼miR-125b的核酸分子，該miR-125b具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列。利用該構建體，能夠將編碼miR-125b的核酸分子引入到腫瘤細胞中，進而可以通過在腫瘤細胞中過表達miR-125b，有效地抑制腫瘤細胞轉移、誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性。
【專利說明】miR-125b在抗腫瘤中的應用

【技術領域】
[0001] 本發明涉及生物【技術領域】，特別是涉及miR-125b在抗腫瘤中的應用。具體地，涉 及miR-125b在抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥性和誘導腫瘤細胞發生凋亡中的應 用。更具體地，本發明涉及構建體，抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥性或者誘導腫瘤 細胞發生凋亡的方法，該構建體或者miR-125b在制備藥物中的用途，以及用于治療癌癥的 藥物。

【背景技術】
[0002] 原發性肝癌，超過90%是肝細胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC)，是世界 上最為常見的惡性腫瘤之一，在世界范圍內最為常見的癌癥致死病因中排名第3,在中國 排名第2。目前肝癌的最有效治療是切除肝癌組織，但手術后復發率很高，手術后5年肝 癌復發率高達61. 5%，究其原因，在于除非在肝癌早期進行手術，否則絕大多數病人的肝癌 細胞已經發生轉移，因此無論是肝切除還是肝移植并不能根本治愈肝癌。近十年來，通過 建立高轉移肝癌細胞系和動物模型，關于肝癌轉移的研究取得了一系列進展，但是仍然有 很多問題尚未解決，關于原發性肝癌轉移和復發的機制仍然存在爭議。上皮-間質轉化 (Epithelial-mesenchymal transition, EMT)是指上皮細胞通過特定程序轉化為具有間質 表型細胞的生物學過程。通過EMT，上皮細胞失去了細胞極性，失去與基底膜的連接等上皮 表型，獲得了較高的遷移與侵襲、抗凋亡和降解細胞外基質的能力等間質表型。EMT是上皮 細胞來源的惡性腫瘤細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程，已在乳腺癌模型中得到 了很好的驗證和研究。由于不同類型腫瘤的發病原因有異同，因此在其它類型腫瘤中，EMT 是否也參與腫瘤的轉移需要進一步驗證。近年來，關于EMT在肝癌轉移過程中的研究也逐 漸表明，在肝癌中，EMT也是引起腫瘤細胞高轉移的主要原因。
[0003] 然而，目前抑制腫瘤轉移、降低腫瘤細胞耐藥性和誘導腫瘤細胞發生凋亡即抗腫 瘤的手段仍有待改進。


【發明內容】

[0004] 本發明旨在至少在一定程度上解決上述技術問題之一或至少提供一種有用的商 業選擇。為此，本發明的一個目的在于提出一種能夠有效抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞 耐藥性和誘導腫瘤細胞發生凋亡即抗腫瘤的手段。
[0005] 本發明是基于發明人的下列發現而完成的：通過在腫瘤細胞中過表達miR_125b， 可以有效地抑制腫瘤細胞轉移、誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥 性。
[0006] 在本發明的第一方面，本發明提出了一種構建體。根據本發明的實施例，該構建體 包括編碼miR-125b的核酸分子，所述miR-125b具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列。利 用該構建體，能夠將編碼miR-125b的核酸分子，引入到腫瘤細胞中，進而可以通過在腫瘤 細胞中過表達miR-125b,有效地抑制腫瘤細胞轉移、誘導腫瘤細胞發生凋亡,或者降低腫瘤 細胞對藥物的耐藥性。
[0007] 根據本發明的實施例，所述編碼miR_125b的核酸分子即miR_125b的核酸前體序 列，具有如SEQ ID NO :2所示的核苷酸序列。由此，可以進一步提高miR-125b的表達效率， 進而進一步提高抑制腫瘤細胞轉移、誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的 耐藥性的效率。
[0008] 在本發明的第二方面，本發明提出了一種抑制腫瘤細胞轉移、耐藥性或者誘導 腫瘤細胞發生凋亡的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：使所述腫瘤細胞過表達 miR-125b，所述miR-125b具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列。由此，可以有效地抑制腫 瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性，從而有效地提高 治療癌癥的效率。該方法也可以應用于非治療目的的癌癥細胞處理。
[0009] 根據本發明的實施例，該方法還可以進一步包括下列附加技術特征：
[0010] 在本發明的一個實施例中，使所述腫瘤細胞過表達miR-125b進一步包括：利用前 面所述的構建體，將編碼miR-125b的核酸分子引入到所述腫瘤細胞中。由此，可以進一步 提高腫瘤細胞過表達miR-125b的效率，從而進一步提高抑制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞 發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性的效率，進而更有效地提高治療癌癥的效率。 [0011] 在本發明的一個實施例中，所述腫瘤細胞為肝癌細胞。
[0012] 在本發明的第三方面，本發明提出了前面所述的構建體、或者miR-125b在制備藥 物中的用途。根據本發明的實施例，該藥物用于治療癌癥，且其作用靶點為miR-125b。根據 本發明的實施例，該藥物可以用于抑制腫瘤細胞的轉移、降低腫瘤細胞耐藥性或誘導腫瘤 細胞發生凋亡。根據本發明的具體的實施例，該癌癥為肝癌。
[0013] 在本發明的第四方面，本發明提出了一種用于治療癌癥的藥物。該藥物包括：適于 使腫瘤細胞過表達miR-125b的試劑。由此，可以通過使腫瘤細胞過表達miR-125b，從而抑 制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性。根據本發明 的實施例，該藥物中適于使腫瘤細胞表達miR-125b的試劑為前面所述的構建體。由此，可 以進一步提高腫瘤細胞過表達miR-125b的效率，從而進一步提高抑制腫瘤細胞轉移，誘導 腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性的效率，更有效地提高治療癌癥的 效率。
[0014] 本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發明的實踐了解到。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0015] 本發明的上述和/或附加的方面和優點從結合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中 ：
[0016] 圖1顯示了根據本發明一個實施例，人肝癌中miR_125b表達情況的檢測結果，其 中，
[0017] 圖IA為實時定量PCR檢測miR_125b在人肝癌細胞系中的表達情況的結果，
[0018] 圖IB為實時定量PCR檢測miR-125b在20對人肝癌(癌旁）組織中的表達情況的 結果，
[0019] 圖IC為餅狀統計圖分析人肝癌(癌旁）組織中miR_125b的表達情況的結果，
[0020] 圖ID為對數統計圖（Log2 (肝癌/癌旁））分析人肝癌(癌旁)組織中miR_125b的 表達情況的結果；
[0021] 圖2顯示了根據本發明一個實施例，miR-125b對人肝癌細胞EMT相關蛋白表達的 影響實驗的結果，其中，
[0022] 圖2A顯示了利用慢病毒轉染的方式過表達miR_125b后的肝癌細胞系及對照的細 胞形態，
[0023] 圖2B顯示了瞬轉miR_125b抑制劑后人胎肝細胞系L02及對照中上皮標志 E-cadherin的表達情況的檢測結果，
[0024] 圖2C顯示了利用慢病毒轉染的方式過表達miR_125b后的人肝癌細胞系及對照的 間質標志的表達情況的檢測結果；
[0025] 圖3顯示了根據本發明一個實施例，mir_125b對人肝癌細胞的耐藥性影響實驗的 結果。

【具體實施方式】
[0026] 下面詳細描述本發明的實施例，這些實施例旨在用于解釋本發明，而不能理解為 對本發明的限制。
[0027] 需要說明的是，本發明是基于發明人在本領域的深入研究所完成的。發明人發現， 與正常肝臟組織相比，無論在人肝癌細胞還是在人肝癌臨床標本中，miR_125b的表達均下 調。進而，發明人發現，通過在腫瘤細胞中過表達miR_125b，可以有效地抑制腫瘤細胞轉移， 誘導腫瘤細胞發生凋亡，降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性。由此，本發明提出了一種能夠有效 抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥性和誘導腫瘤細胞發生凋亡即抗腫瘤的手段。
[0028] 構建體
[0029] 在本發明的第一方面，本發明提出了一種構建體。根據本發明的實施例，該 構建體包括編碼miR-125b的核酸分子，該miR-125b具有如下所示的核苷酸序列： 5'-UCCCUGAGACCCUAACUUGUGA-3'（SEQ ID N0:1)。利用該構建體，能夠將編碼 miR-125b 的 核酸分子，引入到腫瘤細胞中，進而可以通過在腫瘤細胞中過表達miR-125b，有效地抑制腫 瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性。根據本發明的實 施例，所述編碼miR-125b的核酸分子具有如下所示的核苷酸序列：5' -GGGTCCCATTAACTGGC ATATAATCCTTCTTTAATGTAATAGAGGCTATGGTGTTGCTGTACAAATCTGCTAGAAGCAGATTTTAACCCATGTT TAGTCTCTTTCTTTGGATCTAATGGAATGACTCTTAACTGTTCATTGTCTGCATTGTTTCTCATATTCTTCATTATT TTAAGGTCTGGAATTAGTCTATAAATGGTCGTCGTGATTACTCAGCTCATCCTAACTTTTATATATCATATATATTT CTACTGAAGTATTTTAAATAGTATTTAGAGGTAAAAGTCTAAGTGAACCCAACTGTAATTTCTAAGCTATCCTTATT TCTGGAAGAAGAATTCTACCGCATCAAACCAGACTTTTCCTAGTCCCTGAGACCCTAACTTGTGAGGTATTTTAGTA ACATCACAAGTCAGGCTCTTGGGACCTAGGCGGAGGGGAACCAGCAGCTTTGGACCTTATTGATTGTCTGCAGTTAC CACCAGMCAAAAGAACATACATAGATTCTGCCTAGGAGAAMGAACAATGCTTTTCTTTATCATCAGCMCGTTTTC ACCATGACCCATCC-3'（SEQ ID N0:2)。由此，可以進一步提高miR-125b的表達效率，進而進 一步提高抑制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性 的效率。
[0030] 其中，在本文中所使用的術語"構建體"意指能夠運輸它已與之連接的另一種核酸 (目的核酸分子）的核酸分子。一種類型的構建體是"質粒"，它指外源過表達的DNA片段可 以連接到其內的環狀雙鏈DNA環上。另一種類型的構建體是病毒構建體，其中外源過表達 的DNA片段可以連接到病毒基因組內。某些構建體能夠在它們已引入其內的宿主細胞中自 主復制(例如，具有細菌復制起點的細菌構建體和游離型哺乳動物構建體)。其他構建體(例 如非游離型哺乳動物構建體）在引入宿主細胞內后可以整合到宿主細胞基因組內，且因此 連同宿主基因組一起進行復制。此外，某些構建體能夠指導它們與之可操作地連接的基因 表達。一般而言，在重組DNA技術中使用的表達構建體通常為質粒的形式。在本說明書中， "質粒"和"構建體"可以互換使用，因為質粒是最常用的構建體形式。然而，本發明預期包 括此類其他形式的表達構建體，例如提供等價功能的病毒構建體(例如復制缺陷型逆轉錄 病毒、腺病毒和腺伴隨病毒)。在本發明中所使用的術語"核酸"可以是任何包含脫氧核糖 核苷酸或者核糖核苷酸的聚合物，包括但不限于經過修飾的或者未經修飾的DNA、RNA,其長 度不受任何特別限制。對于用于構建體的核酸類型，優選所述核酸為DNA，因為DNA相對于 RNA而言，其更穩定，并且易于操作。
[0031] 另外，根據本發明的實施例的構建體還可以進一步包含其他的元件，從而為構建 體賦予額外的有益效果。本領域技術人員可以根據需要，選擇這些元件在構建體上與編碼 miR-125b的核酸分子的相對位置。既可以設置在編碼miR-125b的核酸分子的上游，也可以 設置在編碼miR-125b的核酸分子的下游，只要這些元件能夠發揮其相應的功能即可。在本 發明中所使用的術語"5'側"可以與"上游"互換使用，"3'側"可以與"下游"互換使用。
[0032] 具體地，根據本發明的一個實施例，本發明的構建體可以進一步包含啟動子序列， 所述啟動子序列與所述編碼miR_125b的核酸分子可操作地相連。在本發明中所使用的術 語"啟動子"指的是這樣一種核酸序列，其能夠指導與其可操縱地連接的核酸分子的轉錄。 在本發明中所使用的術語"可操縱地"指的是核酸表達控制序列例如啟動子、信號序列、增 強子等與目標核酸序列之間的功能連接，其中當合適的分子例如轉錄活化分子與表達控制 序列結合時，表達控制序列影響著對應于目標核酸序列的核酸的轉錄和/或翻譯。由此，可 以直接通過表達構建體在動物細胞中引入特定的啟動子，并且該啟動子可以用于啟動編碼 miR-125b的核酸分子的轉錄和表達，由此，可以提高所獲得的重組細胞中編碼miR-125b的 核酸分子的表達效率。根據本發明的具體實例，所述啟動子為CMV啟動子。發明人發現，當 采用該啟動子時，可以有效地在腫瘤細胞中過表達miR-125b。
[0033] 根據本發明的一個實施例，本發明的構建體(在本文中有時也稱為"表達構建體"） 可以進一步包括編碼報告蛋白的序列。在本發明中所使用的術語"報告蛋白"是指這樣的一 種蛋白質，其在表達后，能夠產生可以直接或者間接檢測的信號，進而能夠反映表達構建體 所攜帶的外源核酸序列是否已經在細胞中被成功表達。根據本發明的實施例，報告蛋白的 種類并不受特別限制，只要其具有可檢測的活性即可。根據本發明的實施例，報告蛋白可以 是一種能夠產生光學信號的蛋白質例如發光蛋白或者熒光蛋白例如綠色熒光蛋白等。或者 報告蛋白可以是一種能夠與底物相互作用以產生可檢測信號的酶，例如IacZ基因編碼的 β-半乳糖苷酶。β -半乳糖苷酶能催化一系列底物轉化成極易檢測的不同顏色的產物。但 是IacZ在細胞內本底表達較高，并且檢測需要破碎細胞壁，從而限制了其應用。因而，根據 本發明的一些實施例，報告蛋白可以為選自發光蛋白、熒光蛋白、酶的至少一種。由此，可以 根據常規的方法，對所述報告蛋白進行監測。例如可以采用：比色法、熒光法、生物發光法、 化學發光法、酶聯免疫法（ELISA)及原位染色法對報告蛋白進行檢測。這其中，優選發光蛋 白，因為發光蛋白能夠發出特定波長的光，因而能夠容易對發光蛋白進行檢測，并且容易對 其進行定量檢測。根據本發明的一個實施例，報告蛋白為綠色熒光蛋白。由此，可以便捷地 通過熒光顯微鏡，就能夠確定表達構建體所攜帶的外源核酸序列是否已經在細胞中被成功 表達。
[0034] 根據本發明的一個實施例，表達構建體可以進一步包括篩選標記基因。在本發明 中所使用的術語"篩選標記基因"指的是這樣的一種基因，其編碼的產物能夠賦予連同構建 體接受該基因的細胞一種特殊的性質，該特殊的性質使得接受該基因的細胞與未接受該基 因的細胞很容易被區分開。由此，便于篩選接受表達構建體的細胞。根據本發明的實施例， 篩選標記基因的類型不受特別限制，根據本發明的一些示例，所述篩選標記基因為藥物抗 性基因。由此，容易地通過接受外源表達構建體的重組細胞的抗藥性來進行篩選，例如在培 養基中添加抗生素，則相應連同構建體接受并表達抗生素抗性基因的細胞將在培養基上能 夠存活下來。根據本發明的具體示例，所述篩選標記基因為新霉素抗性基因。由此，能夠進 一步提高篩選接受外源表達構建體的重組細胞的效率。
[0035] miR-125b 的用途
[0036] 在本發明的第二方面，本發明提出了一種抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥 性或者誘導腫瘤細胞發生凋亡的方法。根據本發明的實施例，該方法包括：使所述腫瘤細胞 過表達miR-125b，所述miR-125b具有SEQ ID N0:1所示的核苷酸序列。由此，可以有效地 抑制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性，從而有效 地提商治療癌癥的效率。
[0037] 根據本發明的實施例，使所述腫瘤細胞過表達miR_125b的方法并不受特別限制。 可以通過向細胞中引入可以表達miR-125b的核酸分子，也可以直接將miR-125b引入到細 胞中來實現。根據本發明的實施例，可以利用前面所述的構建體，將編碼miR-125b的核酸 分子引入到所要處理的腫瘤細胞中。由此，根據本發明的具體實施例，使所述腫瘤細胞過表 達miR-125b的方法進一步包括：利用前面所述的構建體，將編碼miR-125b的核酸分子引入 到所述腫瘤細胞中。由此，可以進一步提高腫瘤細胞過表達miR-125b的效率，從而進一步 提高抑制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性的效 率，進而能夠更有效地提1?治療癌癥的效率。
[0038] 根據本發明的實施例，可以利用本發明的手段處理的腫瘤細胞的類型并不受特別 限制。在本發明的一個實施例中，所述腫瘤細胞可以為選自肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結直 腸癌、胰腺癌、乳腺癌、膀胱癌、腎癌、卵巢癌、宮頸癌、甲狀腺癌、鼻咽癌和腦膠質瘤的至少 一種的細胞。根據本發明的具體實施例，優選肝癌細胞。
[0039] 在本發明的第三方面，本發明提出了前面所述的構建體、或者miR_125b在制備藥 物中的用途。根據本發明的實施例，該藥物用于治療癌癥。根據本發明的實施例，該藥物可 以用于抑制腫瘤細胞的轉移、耐藥性或者使所述腫瘤細胞發生凋亡。根據具體的實施例，該 癌癥可以為肝癌。
[0040] 在本發明的第四方面，本發明提出了一種用于治療癌癥的藥物。該藥物包括：適 于使腫瘤細胞過表達miR-125b的試劑。由此，可以人為通過使腫瘤細胞過表達miR-125b， 從而抑制腫瘤細胞轉移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性。根據 本發明的實施例，該藥物中適于使腫瘤細胞過表達miR-125b的試劑為前面所述的構建體。 由此，可以進一步提商腫瘤細胞過表達miR-125b的效率，從而進一步提商抑制腫瘤細胞轉 移，誘導腫瘤細胞發生凋亡，或者降低腫瘤細胞對藥物的耐藥性的效率，更有效地提高治療 癌癥的效率。
[0041] 下面參考具體實施例，對本發明進行說明，需要說明的是，這些實施例僅是說明性 的，而不能理解為對本發明的限制。
[0042] 若未特別指明，實施例中所采用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手 段，可以參照《分子克隆實驗指南》第三版或者相關產品（例如《Molecular Cloning:A Laboratory Manual)), Sambrook, J. ,Russell,David ff. ,Molecular Cloning:A Laboratory Manual，3rd edition，2001，NY，Cold Spring Harbor，通過參照將其全文并入本文）進行， 所采用的試劑和產品也均為可商業獲得的。未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公 知的常規方法，所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標 明，其后所用相同試劑如無特殊說明，均以首次標明的內容相同。
[0043] 其中，所述百分比濃度如無特別說明均為質量/體積（W/V)百分比濃度或體積/ 體積（V/V)百分比濃度。所用引物、DNA序列合成及DNA序列測定均由上海英駿公司完成。
[0044] 實施例1人肝癌中miR_125b的表達情況
[0045] 按照以下步驟進行試驗，以檢測人肝癌中miR_125b的表達情況：
[0046] 一、肝癌細胞/組織cDNA模板的制備
[0047] 1、細胞總RNA的提取
[0048] 提取RNA之前用1%。DEPC水處理槍頭和Eppendorf管，高壓滅菌，烤干備用。
[0049] (1)細胞鋪滿瓶底80%時終止培養，吸棄細胞培養液，加入PBS洗滌一次；
[0050] (2)每瓶細胞加入Iml TRIzoI，反復吹打使細胞破碎溶解；
[0051] (3)將液體轉移到I. 5ml的EP管中，室溫靜置5?IOmin ;
[0052] (4)加入0· 2ml氯仿/ml TRIzol,劇烈振蕩混勻15s，室溫靜置IOmin ;
[0053] (5) 12000rpm，4。。，離心 15min ;
[0054] (6)離心后液體分為三層，從下至上依次為酚/氯仿層、中間蛋白層、上層無色水 相。RNA存于上層水相中；
[0055] (7)吸取上層水相至新的EP管中，注意避免將中間蛋白吸出；
[0056] (8)加入預冷的異丙醇0. 5ml/ml TRIzol,顛倒混勻，室溫靜置IOmin ;
[0057] (9) 12000rpm，4°C，離心 IOmin ;
[0058] (10)棄上清，RNA沉淀用75 %乙醇（750 μ 1無水乙醇，250 μ I DEPC水現配)洗滌， 12, OOOrpm，4°C，離心 5min ;
[0059] (11)棄上清，超凈臺中鼓風干燥3分鐘左右，RNA呈半透明狀；
[0060] (12)加入15-20 μ 11 %。DEPC水溶解RNA沉淀，紫外分光光度計測定濃度及OD 值，-70°C保存或直接用于逆轉錄反應。
[0061] 注意：操作過程中戴口罩、手套并注意更換，以防止RNA被RNA酶降解。
[0062] 2.組織總RNA的提取
[0063] (1)切取IOOmg新鮮組織放入勻漿管中，管中加入Iml Trizol ;
[0064] (2)每塊組織勻漿前先用75%乙醇和1%。的DEPC水清洗勻漿機轉頭，將勻漿管置 于冰盒上勻漿，組織經反復勻漿直至無明顯沉淀后，將勻漿液轉入I. 5ml EP管中，室溫靜置 5分鐘；以下步驟同細胞總RNA的提取。
[0065] 3. RNA 反轉錄成 cDNA
[0066] 細胞及組織中提取的總RNA，使用miScript反轉錄試劑盒進行反轉錄，反應體系 (20 μ 1)構成及反應條件如下：
[0067]

【權利要求】
1. 一種構建體，其特征在于，包括編碼miR-125b的核酸分子，所述miR-125b具有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列。
2. 根據權利要求1所述的構建體，其特征在于，所述編碼miR-125b的核酸分子具有如 SEQ ID N0:2所示的核苷酸序列。
3. -種抑制腫瘤細胞轉移、降低腫瘤細胞耐藥性或者誘導腫瘤細胞發生凋亡的方法， 其特征在于，包括： 使所述腫瘤細胞過表達miR-125b，所述miR-125b具有SEQ ID NO : 1所示的核苷酸序 列。
4. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，使所述腫瘤細胞過表達miR-125b進一步 包括： 利用權利要求1或2所述的構建體，將編碼miR-125b的核酸分子引入到所述腫瘤細胞 中。
5. 根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述腫瘤細胞為肝癌細胞。
6. 權利要求1或2所述的構建體、或者miR-125b在制備藥物中的用途，所述藥物用于 治療癌癥。
7. 根據權利要求6所述的用途，其特征在于，所述藥物用于抑制腫瘤細胞的轉移、降低 腫瘤細胞耐藥性或者使所述腫瘤細胞發生凋亡。
8. 根據權利要求6所述的用途，其特征在于，所述癌癥為肝癌。
9. 一種用于治療癌癥的藥物，其特征在于，包括：適于使腫瘤細胞過表達miR-125b的 試劑。
10. 根據權利要求9所述的藥物，其特征在于，所述適于使腫瘤細胞過表達miR-125b的 試劑為權利要求1或2所述的構建體。
【文檔編號】C12N5/10GK104419715SQ201310410006
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年9月10日 優先權日:2013年9月10日
【發明者】裴雪濤, 岳 文, 周軍年, 曾泉, 李思霆, 謝小燕, 姚海雷 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院野戰輸血研究所