外周血單核細胞基因組ｄｎａ的提取方法
【專利摘要】本發明公開了外周血單核細胞基因組ＤＮＡ的提取方法，其特征在于，步驟如下：首先，取目的淋巴細胞，其中注入所需緩沖液GA，震蕩至徹底懸浮；加入PA，100毫升，高速離心振蕩至少半分鐘，然后在35攝氏度的環境下靜置3-5分鐘；加入蛋白酶，顛倒混勻，放置10分鐘后，再次顛倒混勻，反復三到四次；加入緩沖液，吹打混勻；加入純無水乙醇；注入離心管中，高速離心，去除沉淀物；將沉淀物吸附出來；沉淀物種加入漂洗也，然后棄上清；采用分光光度計即可進行測定ＲＮＡ純度；在進行鑒定濃度之前，需要在先在零下十度的環境下放置三到五分鐘；所述測定濃度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脫緩沖液。本發明的有益效果是：操作簡單，成本較低，為腫瘤免疫治療提供新的思路、方法和途徑，同時可以促進免疫殺傷作用。
【專利說明】外周血單核細胞基因組DNA的提取方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及生化實驗領域，具體涉及外周血單核細胞基因組D N A的提取方法。【背景技術】 [0002]外周血是除骨髓之外的血液，臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血外周血液中，再在從血液中提取分離得到造血干細胞，我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞，在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中首次提出外周血這一新概念，正常人外周血中一般看不見幼稚的干細胞的，只存在有極少量的造血干細胞，其含量為
0.01%左右。如果幼稚細胞的比例大幅增加，有可能是類白血病。正因為存在0.01%的造血干細胞，可利用細胞分離的技術(血細胞自動分離機)，將外周血中含有造血干細胞的單個核細胞進行分離保存，重復數次達一定細胞數量后，回輸給患者以之代替骨髓而進行的干細胞移植，稱為外周血干細胞移植。

【發明內容】

[0003]本發明要解決的技術問題在于，針對現有技術缺陷，提供一種技術方案:
外周血單核細胞基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟如下:首先，取目的淋巴細胞，其中注入所需緩沖液GA，震蕩至徹底懸浮；加入PA，100毫升，高速離心振蕩至少半分鐘，然后在35攝氏度的環境下靜置3-5分鐘；加入蛋白酶，顛倒混勻，放置10分鐘后，再次顛倒混勻，反復三到四次；加入緩沖液，吹打混勻；加入純無水乙醇；注入離心管中，高速離心，去除沉淀物；將沉淀物吸附出來；沉淀物種加入漂洗也，然后棄上清；采用分光光度計即可進行測定RNA純度。
[0004]本發明中，在進行鑒定濃度之前，需要在先在零下十度的環境下放置三到五分鐘。
[0005]本發明中，所述測定濃度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脫緩沖液。
[0006]本發明的有益效果是:操作簡單，成本較低，為腫瘤免疫治療提供新的思路、方法和途徑，同時可以促進免疫殺傷作用。
【具體實施方式】
[0007]外周血單核細胞基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟如下:首先，取目的淋巴細胞，其中注入所需緩沖液GA，震蕩至徹底懸??；加入PA，100毫升，高速離心振蕩至少半分鐘，然后在35攝氏度的環境下靜置3-5分鐘；加入蛋白酶，顛倒混勻，放置10分鐘后，再次顛倒混勻，反復三到四次；加入緩沖液，吹打混勻；加入純無水乙醇；注入離心管中，高速離心，去除沉淀物；將沉淀物吸附出來；沉淀物種加入漂洗也，然后棄上清；采用分光光度計即可進行測定R N A純度。在進行鑒定濃度之前，需要在先在零下十度的環境下放置三到五分鐘，所述測定濃度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脫緩沖液。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或 改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.外周血單核細胞基因組DNA的提取方法，其特征在于，步驟如下:首先，取目的淋巴細胞，其中注入所需緩沖液GA，震蕩至徹底懸??；加入PA，100毫升，高速離心振蕩至少半分鐘，然后在35攝氏度的環境下靜置3-5分鐘；加入蛋白酶，顛倒混勻，放置10分鐘后，再次顛倒混勻，反復三到四次；加入緩沖液，吹打混勻；加入純無水乙醇；注入離心管中，高速離心，去除沉淀物；將沉淀物吸附出來；沉淀物種加入漂洗也，然后棄上清；采用分光光度計即可進行測定RNA純度。
2.如權利要求1所述的外周血單核細胞基因組DNA的提取方法，其特征在于，在進行鑒定濃度之前，需要在先在零下十度的環境下放置三到五分鐘。
3.如權利要求1所述的外周血單核細胞基因組DNA的提取方法，其特征在于，所述測定濃度之前，可以向其中央滴入三到四滴洗脫緩沖液。
【文檔編號】C12N15/10GK103614364SQ201310537799
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2013年11月5日 優先權日:2013年11月5日
【發明者】辛竹 申請人:辛竹