在雙相系統中選擇性還原膽汁酸,它們的鹽或衍生物的方法
【專利摘要】立體和區域選擇性酶促還原膽汁酸，它們的鹽或衍生物，如7-酮基-石膽酸，7-酮基脫氧膽酸甲酯，或7,12二酮基石膽酸甲酯的新方法，所述方法在葡萄糖脫氫酶(GDH)和葡萄糖作為用于NAD(P)H輔因子的再生的共底物的存在下，在緩沖劑/有機溶劑兩相體系中，通過NAD(P)H-依賴性7β-羥基類固醇脫氫酶(7β-HSDH)的反應而進行。
【專利說明】在雙相系統中選擇性還原膽汁酸，它們的鹽或衍生物的方 法
[0001] 本發明涉及一種用于從不同的膽汁酸，它們的鹽或衍生物（以舉例的方式在方案 1中示出）工業生產熊去氧膽酸的新方法，所述膽汁酸，它們的鹽或衍生物是容易商購獲得 的，例如7-酮基-石膽酸（3 α-羥基-7-酮基-5 β-膽烷酸，（I ))，7-酮基-脫氧膽酸 甲酯（3a，12a-二羥基-7-酮基-5β-膽烷酸甲酯，（II ))和7，12_二酮基-石膽酸甲 酯（3α-羥基-7, 12-二酮基-5β-膽烷酸甲酯，（III))。
[0002]
【權利要求】
1. 用于在具有下式的化合物或它們的鹽或衍生物的7位上進行區域選擇性酶促還原 的方法
(I) ，7-酮基-石膽酸 R = H;R' =H (II) ，7-酮基-脫氧膽酸甲基酯 R = OH;R' =CH3 (III) ，7,12-二酮基-石膽酸甲基酯 R==0;R' =CH3 ，所述方法包括在NAD (P) H-依賴性7 0 -羥基類固醇脫氫酶（7 0 -HSDH)和NAD (P) H輔 因子再生系統的存在下所述的化合物進行反應，所述再生系統包括葡萄糖作為共底物，葡 萄糖脫氫酶（GDH)以及選自由直鏈或支鏈(；-(：1(|烷基醇，直鏈或支鏈的(；-(：1(|酮和乙酸直鏈 或支鏈C3-C5酯組成的組中的有機溶劑。
2. 根據權利要求1的方法，其中所述有機溶劑為2-己醇，3-辛醇，4-甲基-2-戊醇， 2-戊酮或乙酸異丙酯的方法。
3. 根據權利要求1的方法，其中所述NAD (P) H-依賴性7 0 -HSDH具有的酶活性為30至 50U/ml。
4. 根據權利要求1的方法，其中所述NAD (P) H-依賴性GDH具有的酶活性為20?30U/ ml。
5. 根據權利要求1的方法，其中具有式（I)，化合物（II)或（III)的化合物，它們的鹽 或衍生物，在有機相中具有的濃度范圍為1%至12% (重量/體積）（25-300mM)，更優濃度 選范圍為5%至10% (重量/體積）（125-250mM)。
6. 根據任一項前述權利要求的方法，其中在100至1000 y M，優選為300至500 ii M的 濃度范圍，以催化量使用NAD(P)+輔因子。 7?根據任一項前述權利要求的方法，其中以相對于每個化合物（I )，（ II )或（III) 的等摩爾濃度，或稍微過量，優選為20?50%，使用所述葡萄糖共底物。
8. 根據任一前述權利要求的方法，其中所述還原是定量的，或高于或等于99. 5%。
9. 根據任一前述權利要求的方法，在室溫，即在約20°C -25°C進行所述方法。
10. 根據任一前述權利要求的方法，在PH7至7. 5進行所述方法。
11. 根據權利要求10的方法，還包括緩沖系統，優選包括緩沖劑磷酸鉀。
12. -種制備熊去氧膽酸（IV )的方法，其特征在于，它包括根據權利要求1至11中任 一項的方法。
13. -種制備烏索膽酸（V )的甲基酯的方法，其特征在于，它包括根據權利要求1至 11中任一項的方法。
14. 一種制備12-酮基-熊去氧膽酸（VI)的甲酯的方法，其特征在于，它包括根據權 利要求1至11中任一項的方法。
【文檔編號】C12P33/06GK104350157SQ201380028163
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年5月27日 優先權日:2012年5月28日
【發明者】D·蒙蒂, E·E·費蘭迪, S·利瓦, F·波蘭蒂尼 申請人:化學藥品與食品產品股份公司