用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基的制作方法
【專利摘要】本發明涉及用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基。前增菌液體培養基包括蛋白胨、磷酸二氫鉀、磷酸氫二鈉、氯化鈉、蔗糖、丙酮酸鈉、氯化鎂和水。通過大量的食源性致病菌驗證該培養基修復效果，結果表明生長效果和生理生化指標修復效果較現有的BPW、EE、TSB等前增菌培養基均具有較大程度的提高，能克服克羅諾菌在食品檢驗檢疫過程中出現漏檢缺陷，提高克羅諾菌的檢出率，且能有效抑制沙門氏菌等非目標菌的生長繁殖。本發明適用于各類食品中克羅諾菌的快速修復，對預防和控制由食源性克羅諾菌感染導致食源性疾病的發生與傳播具有重要意義。
【專利說明】用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基
【技術領域】
[0001]本發明屬于食品微生物檢驗【技術領域】，具體涉及一種克羅諾菌冷熱損傷修復前增菌液體培養基。
【背景技術】
[0002]克羅諾菌iCronobacter),是一種重要食源性致病菌，屬腸桿菌科的革蘭氏陰性桿菌，能導致新生嬰幼兒腦膜炎、致死性結腸炎和菌血癥等，流行病數據調查表明嬰幼兒配方奶粉是其感染的主要傳播媒介。
[0003]食品加工過程中，經過高熱、低冷、干燥、殺菌等加工工藝單元，易導致克羅諾菌損傷。因此，食品微生物檢驗過程中，現有的前增菌培養基對損傷細菌修復效果不好或者含有選擇性抑制劑而導致損傷細菌無法生長或者生理生化反應發生很大變化，造成食品中克羅諾菌檢驗出現假陰性結果，導致被克羅諾菌污染的食品進入消費市場，而這些損傷細菌一旦通過食物進入人體，在合適條件下可以復活，進而引起克羅諾菌感染食源性疾病的流行暴發。

【發明內容】

[0004]為了防止食品檢驗檢疫過程中出現克羅諾菌漏檢，提高食品中克羅諾菌的檢出率，避免損傷克羅諾菌通過食物進入人體導致食源性疾病的暴發，本發明提供一種用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基。
`[0005]用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:
蛋白胨12~15g、磷酸二氫鉀1.5~3.5g、十二水磷酸氫二鈉8~10g、氯化鈉5g、鹿糖100~120g、丙酮酸鈉0.8~1.2g、氯化鎂0.8~1.2g、水1000ml。
[0006]所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖120g、丙酮酸鈉1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml。
[0007]所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖100g、丙酮酸鈉
0.8g、氯化鎂 0.8g、水 1000ml。
[0008]所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:
蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉
1.2g、氯化鎂 1.2g、水 1000ml。
[0009]本發明配方中各成份的作用說明如下:
1.在緩沖蛋白胨水(BPW)中加入蔗糖的作用在于:蔗糖能抑制培養克羅諾菌時樣品中雜菌的生長和繁殖。研究表明克羅諾菌可以利用蔗糖作為碳源，而很多腸道致病菌無法利用蔗糖作為碳源；2.本發明使用的丙酮酸鈉是三羧酸循環的中間代謝物丙酮酸的鈉鹽，可以為損傷細菌提供能量，有效彌補環境損傷過程中糖酵解過程中酶的失活，進而導致的糖代謝障礙。另外，在細菌受冷熱損傷過程中，易導致重要金屬離子如Mg2+流出細胞，導致相關酶失活，進而抑制重要生理生化與代謝過程如DNA復制等，加入氯化鎂(MgCl2)是為了克服鎂離子(Mg2+)的流失導致克羅諾菌的生長障礙。
[0010]本發明與現有BPW、腸桿菌增菌肉湯(EE)及胰蛋白胨肉湯(TS) B培養基相比較具有以下方面的優點:
1.生長修復效果好
用克羅諾菌標準菌株人工污染奶粉(無菌奶粉)，在高溫(58°C，5min)和低溫(_18°C，IOh)損傷處理人工污染樣品，取IOml人工污染樣品接種至BPW、EE、TSB和本發明培養基37°C培養8h中，通過梯度稀釋記錄不同培養基的菌落總數，結果發現本發明培養基菌落生長數量顯著高于其他培養基，表明該培養基的增菌效果好，修復效率高；相同接種量的情況下，37°C培養8h，菌落數量較BPW、TSB和EE增菌液增加10~100倍；
2.生化指標變化小
用克羅諾菌標準菌株(ATCC28544和ATCC51329)和分離菌株(11株奶粉分離株)人工污染奶粉(無菌奶粉)，在低溫損傷處理人工污染樣品，取IOml人工污染樣品接種至BPW、EE、TSB和本發明培養基中，37 °C培養8h中，用無菌接種環挑取不同前增菌菌懸液接種到營養瓊脂培養基中，采用AP1-20e生化試劑條檢測菌株生理生化指標變化，實驗結果發現其他前增菌培養基修復克羅諾菌生化指標變化較大，而本發明培養基修復后，克羅諾菌的生化反應指標變化小，較BPW、EE和TSB培養基生化指標變化率降低10%以上；
3.具有較好的選擇性
該培養基具有較好地抑制樣品中雜菌生長，將克羅諾菌和沙門氏菌制備混合菌懸液，然后分別進行熱和冷處理 ，加入到本發明培養基中，過夜搖床培養。取不同稀釋度的混合菌液涂布培養于含有5-溴-4-氯-3-吲哚-D-α-葡萄糖苷的營養瓊脂平板上,培養8h，觀察菌落生長，發現95%以上菌落為藍綠色克羅諾菌的菌落。
【具體實施方式】
[0011]下面結合實施例，對本發明作進一步地說明。
[0012]實施例1
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復的前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化鈉5g、鹿糖 120g、丙酮酸鈉 1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml ；
接種過夜克羅諾菌菌懸液1.0PL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養8h，取出培養基，將培養基做十倍稀釋測定菌落總數，結果顯示該修復培養基較BPW增加50倍，較EE和TSB增加10倍。
[0013]實施例2
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復的前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20) 9.0g、氯化鈉5g、鹿糖100g、丙酮酸鈉0.8g、氯化鎂0.8g、水1000ml ；接種過夜克羅諾菌菌懸液1.ομL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養8h，取出培養基，將培養基做十倍稀釋測定菌落總數(三個重復)，結果顯示該修復培養基較BPW增加45倍，較EE和TSB增加10倍。
[0014]實施例3
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復的前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20)9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉1.2g、氯化鎂1.2g、水1000ml ；
接種過夜克羅諾菌菌懸液1.0PL到緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養8h，取出培養基，將培養基做十倍稀釋測定菌落總數，結果顯示該修復培養基較BPW增加65倍，較EE和TSB增加10倍。
[0015]實施例4
用于克羅諾菌(frmo如cter)冷熱損傷修復的前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉(Na2HPO4.12H20)9g、氯化鈉5g、鹿糖110g、丙酮酸鈉1.2g、氯化鎂1.2g、水1000rnl ；
接種克羅諾菌和沙門氏菌的菌懸液各1.ΟμL至緩沖蛋白胨水(BPW)、腸桿菌增菌肉湯(EE)、胰蛋白胨肉湯(TSB)中，37°C 120rpm搖床培養8h，取出培養基，將培養基做十倍稀釋測定菌落總數，涂布于克洛諾菌固體顯色培養基表面，37°C恒溫培養18h，結果顯示培養基表面95%的菌落均為藍綠色的克羅諾菌菌落。表明該培養基對部分雜菌還有較好的抑制作用。`
【權利要求】
1.用于克羅諾菌冷熱損傷修復的前增菌液體培養基，其特征在于:所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨12~15g、磷酸二氫鉀1.5~3.5g、十二水磷酸氫二鈉8~10g、氯化鈉5g、蔗糖100~120g、丙酮酸鈉0.8~1.2g、氯化鎂0.8~1.2g、水1000ml。
2.根據權利要求1所述的前增菌液體培養基，其特征在于:所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖120g、丙酮酸鈉 1.0g，氯化鎂 1.0g,7jC 1000ml。
3.根據權利要求1所述的前增菌液體培養基，其特征在于:所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖100g、丙酮酸鈉0.8g、氯化鎂0.8g、水1000ml。
4.根據權利要求1所述的前增菌液體培養基，其特征在于:所述前增菌液體培養基由下列重量的物質組成:蛋白胨15g、磷酸二氫鉀1.5g、十二水磷酸氫二鈉9g、氯化鈉5g、蔗糖110g、丙酮酸鈉1. 2g、氯化鎂1.2g、水1000ml。
【文檔編號】C12R1/01GK103865849SQ201410080751
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月7日 優先權日:2014年3月7日
【發明者】葉應旺, 李輝, 凌娜, 韓永佳 申請人:合肥工業大學