一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于：包括DNA提取液，HPV16、58、35、HBB-PCR反應液，HPV18、33、51、66-PCR反應液，HPV45、59、39、56-PCR反應液，HPV31、52、68、53-PCR反應液，Taq/UNG酶混合液，陽性對照，陰性對照。本發明提供的試劑盒能用于檢測宮頸分泌物樣本中人乳頭瘤病毒核酸的存在。
【專利說明】一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒
【技術領域】
[0001]本發明屬體外診斷試劑領域，具體地，涉及一種試劑盒，更具體地，涉及一種人乳頭瘤病毒(15個型)核酸分型檢測試劑盒,主要適用于檢測宮頸分泌物樣本中人乳頭瘤病毒(15個型)核酸的存在。
【背景技術】
[0002]宮頸癌是女性生殖系統常見的惡性腫瘤，世界上每年的新發病例約為50萬，死亡率為50%。WHO指出如不盡快采取措施，在未來十年因宮頸癌導致的死亡人數將上升約25%。大量臨床實驗表明99.7%的宮頸癌可檢測到人乳頭瘤病毒(humanpapillomavirus, HP V) DNA, HPV的持續性感染是宮頸癌發生的必要條件。
[0003]HPV是一組雙鏈環狀DNA病毒，具有嚴格的嗜上皮性。目前確定HPV型別約有120多種，根據生物學特征、致癌潛能可分為高危型和低危型。其中即￥16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68屬于高危型，其基因組能整合到人基因組中，可導致宮頸上皮內高度病變與宮頸癌的發生。由于不同HPV基因型會對宮頸癌的形成造成不同的風險。因此，快速、準確的檢測出高危型HPV感染并對其進行分型對于診斷和預防宮頸癌的發生具有重要的意義。
[0004]目前HPV分型方法主要有核酸雜交(核酸印跡原位雜交、斑點印跡雜交、原位雜交和PCR-反向點雜交)和基因芯片。核酸雜交具有較好的特異性，但操作復雜，耗時長不合適臨床上大規模使用。基因芯片法能檢測同一樣本中多種亞型，但價格昂貴，大大制約了其在臨床上的應用。
[0005]熒光定量PCR具有特異性強、靈敏度高、重復性好、定量準確、速度快、全封閉反應等優點，而且運用Taqman探針的5'末端標記上不同的熒光染料(FAM、JOE等)技術可以進行基因分型方面的研究。因此應用多色熒光PCR技術開發一種人乳頭瘤病毒核酸(15個型)分型檢測試劑盒是非常必要的。
【發明內容】
[0006]本發明旨在克服上述缺陷，利用多色熒光PCR技術提供一種特異性強、靈敏度高、重復性好且準確度高的人乳頭瘤病毒(15個型)核酸分型的試劑盒。
[0007]本發明提供的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:包括DNA提取液,HPV16、58、35、HBB-PCR 反應液，HPV18、33、51、66-PCR 反應液，HPV45、59、39、56-PCR 反應液，HPV31、52、68、53-PCR反應液，Taq/UNG酶混合液，陽性對照，陰性對照。
[0008]其中，DNA提取液包括 1-lOmM、pH 為 5-9 的 EDTA、l_10mM、pH 為 5-9 的 Tris-HCl和體積分數為5-10%的Chexel-100。
[0009]本發明所涉及的HPV16、58、35、HBB-PCR 反應液包括 10XPCR buffer, MgCl2,dNTPs'l-100μΜ的HPV16的引物和探針、1-100 μ M的HPV58的引物和探針、1-100 μ M的HPV35的引物和探針、1-100 μ M的HBB的引物和探針及無菌蒸餾水；
[0010]其中，HPV16的引物和探針為如序列表 SEQ ID N0.USEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3 ；HPV58的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5、SEQ ID N0.6所示的序列；HPV35的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.7、SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9所示的序列；HBB的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.10、SEQ ID N0.1USEQ ID N0.12所示的序列。
[0011]具體地，HPV16、58、35、HBB-PCR反應液包括 10XPCR buffer (1-lOOmM KC1、1-1OOmM (NH4) 2S04、l-200mM Tris-HCl (ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2, dNTPs (l_25mMdATP、l-25mMdGTP、l-25mM dCTP、l_12.5mM dUTP、l_12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV16 基因上游引物 Al、1-100 μ M HPV16 基因下游引物 B1、1-100 μ MHPV16 基因熒光探針 Pl (FAM)、1-100 μ MHPV58基因上游引物All、l-100yMHPV58下游引物BI 1、1-100 μ M HPV58熒光探針Pll (JOE)、1-100 μ M HPV35 基因上游引物 Α5、1-100 μ M HPV35 基因下游引物 Β5、1-100 μ M即￥35基因熒光探針？51?0?(?)、1-10(^]\1 HBB基因上游引物Α17、1-100μΜ HBB基因下游引物Β17、1-100μΜ HBB基因熒光探針P17(CY5)和無菌蒸餾水。
[0012]其中，Al序列為:5-AGAGGAGGAGGATGAAATAGATGGT-3
[0013]BI 序列為:5-CACACTTGCAACAAAAGGTTACAAT-3
[0014]Pl 序列為:5-ACAAGCAGAACCGGACAGAGCCCA-3
[0015]其中Y端標記FAM熒光報告基團，3^端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0016]All 序列為:5-GGTTTCATAATATTTCGGGTCGTT-3
[0017]Bll 序列為:5-CTCTCATGGCGTTGTTACAGGTT-3
[0018]Pll 序列為:5-TGGAGACCCCGACGTAGACAAAC ACAAGT-3
[0019]其中，5'端標記JOE熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0020]A5 序列為:5-CAGCACAAGCATTATTTCATGCA-3[0021 ] B5 序列為:5-GCTCACGCTGCTAAGTGGACTAC-3
[0022]P5R 序列為:5-AGCAAACACACAAAGAGGCTGTACAGGTCC-3
[0023]其中，5 ^端標記ROX熒光報告基團，3'端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0024]Al7 序列為:5-TGAAGGCTCATGGCAAGAAAGT-3
[0025]B17 序列為:5-TTGTCACAGTGCAGCTCACTCA-3
[0026]P17 序列為:5-ACAACCTCAAGGGCACCTTTGCCAC-3
[0027]其中，5'端標記CY5熒光報告基團，3^端標記BHQ2熒光淬滅基團。
[0028]本發明所涉及的HPV18、33、51、66-PCR 反應液 10XPCR buffer、MgC12、dNTPs、1-100μΜ的HPV18的引物和探針、1-100μΜ的HPV33的引物和探針、1-100 μ M的HPV51的引物和探針、1-100 μ M的HPV66的引物和探針及無菌蒸餾水；
[0029]其中，HPV18的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14、SEQ IDN0.15 ；HPV33 的引物和探針為如序列表 SEQ ID N0.16、SEQ ID N0.17、SEQ ID N0.18 所示的序列；HPV51的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.19,SEQ ID N0.20,SEQ ID N0.21所示的序列；HPV66的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.22、SEQ ID N0.23、SEQ ID N0.24所示的序列。
[0030]具體地，HPV18、33、51、66-PCR反應液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、1-12.5mM dUTP、1-12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV18 基因上游引物 A2、1-100 μ M HPV18 基因下游引物 Β2、1-100μΜ HPV18 熒光探針 Ρ2 (FAM)、1-100 μ MHPV33 基因上游引物 Α4、1-100 μ M HPV33 下游引物 Β4、1-100 μ M HPV33 熒光探針 Ρ4 (JOE)、1-100 μ M HPV51 基因上游引物 Α8、1-100μΜ HPV51 下游引物 Β8、1-100 μ M HPV51 熒光探針 P8R(ROX)、1-100 μ M HPV66 基因上游引物 Α13、1-100 μ M HPV66 下游引物 Β13、1-100 μ MHPV66熒光探針P13C(CY5)和無菌蒸餾水。
[0031 ] A2 序列為:5-GGAAGAAAACGATGAAATAGATGGA-3
[0032]B2 序列為:5-CAACATTGTGTGACGTTGTGGTT_3
[0033]P2 序列為:5-CATCAACAITTACCAGCCCGACGAGC-3
[0034]其中，5 ^端標記FAM熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0035]A4 序列為:5-TAAGTGACAGCTCAGATGAGGATGA-3
[0036]B4 序列為:5-ACGAACTGTGGTGTTACAAGTGTGA-3
[0037]P4 序列為:5-ATGGACAAGCACAACCAGCCACAGC-3
[0038]其中，5'端標記JOE熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0039]A8 序列為:5-CCATGAAATAGCGGGACGTT-3
[0040]B8 序列為:5-TTACCACGCATGGCTTTATTACA-3[0041 ] P8R 序列為:5-CGCTAATTGCTGGCAACGTACACGACA-3
[0042]其中，5 ^端標記ROX熒光報告基團，3'端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0043] Al3 序列為:5-GAGGAGCTACGTGTGGTACAACAG-3
[0044]B13 序列為:5-CCCTCCCCATTTGTACCTTCA-3
[0045]P13C 序列為:5-AGTAACGTGCCCACTCTGCGCGTCA-3
[0046]其中，5'端標記CY5熒光報告基團，3^端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0047]本發明所涉及的HPV45、59、39、56-PCR 反應液包括 10 XPCR buffer,MgCl2,dNTPs、1-100 μ M的HPV45的引物和探針、1-100 μ M的HPV59的引物和探針、1-100 μ M的HPV39的引物和探針、l-100μΜ的HPV56的引物和探針及無菌蒸餾水；
[0048]其中，HPV45的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.25、SEQ ID N0.26、SEQ IDN0.27 ；HPV59 的引物和探針為如序列表 SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29、SEQ ID N0.30 所示的序列；HPV39的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.31、SEQ ID N0.32、SEQ ID N0.33所示的序列；HPV56的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.34、SEQ ID N0.35、SEQ ID N0.36所示的序列。
[0049]具體地，HPV45、59、39、56-PCR反應液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、1-12.5mM dUTP、1-12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV45 基因上游引物Α7、1-100μΜ HPV45基因下游引物Β7、1-100μΜ HPV45基因熒光探針Ρ7 (FAM)、1-100 μ M HPV59 基因上游引物 Α12、1-100μΜ HPV59 基因下游引物 Β12、1-100 μ M HPV59基因熒光探針Ρ12 (JOE)、1-100 μ M HPV39基因上游引物Α6、1-100 μ M HPV39基因下游引物Β6、1-100 μ M HPV39 基因熒光探針 Ρ6 (ROX)、1-100 μ M HPV56 基因上游引物 A10U-100 μ MHPV56基因下游引物Β10、1-100μΜ HPV56基因熒光探針PlOC(CY5)和無菌蒸餾水。
[0050]Α7 序列為:5-TGGAAATAGTAATACGTGGGA-3[0051 ] B7 序列為:5-TCGACGTGGAGGCGTGTT-3
[0052]P7 序列為:5-TGACTCTATGTGCAGTACCA-3
[0053]其中，5 ^端標記FAM熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0054]Al2 序列為:5-CTCGGAGTCGGAGTCAGGTAA-3
[0055]B12 序列為:5-AACGACAAGCGCGTAGTGAA-3
[0056]P12 序列為:5-TGCTCGTAGCACACAAGGTCAACTTCCTC-3
[0057]其中，5'端標記JOE熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0058]A6 序列為:5-CACCTTGCAGGACATTACAATAGC-3
[0059]B6 序列為:5-GGTTCCCCGTCCCTATATACTACA_3
[0060]P6 序列為:5-TATTGCAGACGACCACTACAGCAAACCGAG-3
[0061]其中乂端標記ROX熒光報告基團義端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0062]AlO 序列為:5-CCAAAGAGGACCTGCGTGTT_3
[0063]BlO 序列為:5-ACCTTCAGGTGACGCCATTG-3
[0064]PlOC 序列為:5-AGTAACGTGCCCACTCTGCGCRTCA-3
[0065]其中，5'端標記CY5熒光報告基團，3^端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0066]本發明所涉及的HPV31、52、68、53-PCR 反應液包括 10XPCR buffer、MgC12、dNTPs'l-100μΜ的HPV31的引物和探針、1-100 μ M的HPV52的引物和探針、1-100 μ M的HPV68的引物和探針、1-100 μ M的HPV53的引物和探針及無菌蒸餾水；
[0067]其中，HPV31的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.37、SEQ ID N0.38、SEQ IDN0.39 ；HPV52 的引物和探針為如序列表 SEQ ID N0.40、SEQ ID N0.41、SEQ ID N0.42 所示的序列；HPV68的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.43、SEQ ID N0.44、SEQ ID N0.45所示的序列；HPV53的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.46、SEQ ID N0.47、SEQ ID N0.48所示的序列。
[0068]具體地，HPV31、52、68、53-PCR反應液包括 10XPCR buffer(10mM KC1、10mM(NH4)2S04、200mM Tris-HCl(ρΗ8.5))、l_25mM MgCl2、dNTPs(l_25mM dATP、卜25mMdGTP、l-25mM dCTP、l_12.5mM dUTP、l_12.5mM dTTP 混合物)、1-100 μ M HPV31 基因上游引物 Α3-1、1-100μΜ HPV31 基因下游引物 Β3-1、1-100 μ M HPV31 基因熒光探針 Ρ3-1 (FAM)、1-100 μ M HPV52 基因上游引物 Α9-2、1-100μΜ HPV52 基因下游引物 Β9、1-100 μ M HPV52基因熒光探針Ρ9 (JOE)、1-100 μ M HPV68基因上游引物Α14、1-100 μ M HPV68基因下游引物Β14、1-100 μ M HPV68基因熒光探針Ρ14 (ROX)、1-100 μ M HPV53基因上游引物Α18、1-100 μ MHPV53基因下游引物Β18、1-100μΜ HPV53基因熒光探針Ρ18 (CY5)和無菌蒸餾水。
[0069]A3 序列為:5-GCTCAGATGAGGAGGATGTTATAGACA-3
[0070]B3 序列為:5-CACACTGACAACAAAAGGTAACGATA-3[0071 ] P3 序列為:5-TGGACAAGCAAAACCGGACACATCC-3
[0072]其中，5'端標記FAM熒光報告基團，3^端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0073]A9 序列為:5-GTCAAACGCCATTATGTCCTGAA-3
[0074]B9 序列為:5-CTCCACGCATGACGTTACACTT-3
[0075]P9 序列為:5-TGTTGGAGACCCCGACCTGTGACC-3
[0076]其中，5'端標記JOE熒光報告基團，3'端標記BHQl熒光淬滅基團；
[0077]A14 序列為:5-CAAAGGTTGTAGTTCAATGCTGTCA-3
[0078]B14 序列為:5-TCTGGACATTGTTCGTTTACATAGG-3
[0079]P14 序列為:5-TGCACCTGTGCCCCGATTTGTG-3
[0080]其中，5 ^端標記ROX熒光報告基團，3'端標記BHQ2熒光淬滅基團；
[0081 ] A18 序列為:5-ACCAACGACTCACACCTACAACAC-3
[0082]B18 序列為:5-AATGCCATGAGCAATTGAACAG-3
[0083]P18 序列為:5-TCCCGTCTAGCTTGCTGTGGCTGC-3
[0084]其中，5'端標記CY5熒光報告基團，3^端標記BHQ2熒光淬滅基團。
[0085]本發明所涉及的Taq/UNG酶混合液包括耐熱DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
[0086]本發明所涉及的陰性對照為含有黏蛋白和BSA的TE緩沖液。
[0087]本發明所涉及的陽性對照包括冊￥16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66,68和人β -globin的線性化重組質粒的混合液、黏蛋白和BSA的TE緩沖液。
[0088]上述方法制造的試劑盒為人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒。優選為一種人乳頭瘤病毒(15個型)核酸分型檢測試劑盒,主要適用于檢測宮頸分泌物樣本中人乳頭瘤病毒(15個型)核酸的存在。
[0089]本發明的作用和效果
[0090]本發明提供的試劑盒的使用方法包括以下步驟:
[0091](I)樣本的采集和保存；
[0092](2) PCR擴增試劑配制；
[0093](3)樣本、陰性對照和陽性對照的處理；
[0094](4)加樣；
[0095](5) PCR 擴增；
[0096](6)結果分析。
[0097]本發明利用不同熒光標記的探針，采用同一樣本進行4管PCR擴增的方法，能同時檢測15種高危HPV和人β -globin,并確定其型別，與現有HPV基因分型檢測試劑盒相比，具有以下優勢:
[0098](I)具有更高的特異性和靈敏度。
[0099](2)封閉檢測，無需PCR后反應，避免交叉污染和環境污染。
[0100](3)可實現一管PCR反應檢測多種型別，更簡便和快速。
[0101] (4)分四管擴增能檢測15種高危HPV，檢測型別多，使用方便。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0102]附圖1、顯示陽性樣本在4種PCR反應液中的擴增曲線，
[0103]其中，橫坐標為PCR循環數，縱坐標為熒光值。
[0104]附圖2、顯示陰性樣本在4種PCR反應液中的擴增曲線，
[0105]其中，橫坐標為PCR循環數，縱坐標為熒光值。
【具體實施方式】
[0106]下面結合具體實施例，對本發明進一步說明，但發明的保護范圍并不限于此。
[0107]實施例1:試劑盒的組成
[0108]人乳頭瘤病毒(15個型)核酸分型檢測試劑盒的組成如表1所示:
[0109]表1人乳頭瘤病毒(15個型)核酸分型檢測試劑盒的組成
[0110]
【權利要求】
1.一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:包括DNA提取液，HPV16、58、35、HBB-PCR 反應液，HPV18、33、51、66-PCR 反應液，HPV45、59、39、56-PCR 反應液，HPV31、52、68、53_PCR反應液，Taq/UNG酶混合液，陽性對照，陰性對照。
2.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述DNA提取液包括1-1OmM pH為5-9的EDTA、1-1OmM pH為5-9的Tris-HCl和體積分數為5-10%的 Chexel-100。
3.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述HPV16、58、35、HBB-PCR 反應液包括 10XPCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-100 μ M 的 HPV16 的引物和探針、1-100 μ M的HPV58的引物和探針、1-100 μ M的HPV35的引物和探針、1-100 μ M的HBB的引物和探針及無菌蒸餾水； 其中，所述HPV16的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.USEQ ID N0.2、SEQ ID N0.3 ； 所述HPV58的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.4、SEQ ID N0.5、SEQ ID N0.6所示的序列； 所述HPV35的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.7、SEQ ID N0.8、SEQ ID N0.9所示的序列； 所述HBB的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.10、SEQ ID N0.1USEQ ID N0.12所示的序列。
4.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述HPV18、33、51、66-PCR 反應液 10XPCR buffer、MgCl2、dNTPs、1-100 μ M 的 HPV18 的引物和探針、1-100 μ M的HPV33的引物和探針、1-100 μ M的HPV51的引物和探針、1-100 μ M的HPV66的引物和探針及無菌蒸餾水； 其中，所述HPV18的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.13、SEQ ID N0.14、SEQ IDN0.15 ； 所述HPV33的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.16、SEQ ID N0.17、SEQ ID N0.18所不的序列； 所述HPV51的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.19、SEQ ID N0.20、SEQ ID N0.21所不的序列； 所述HPV66的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.22、SEQ ID N0.23、SEQ ID N0.24所示的序列。
5.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述HPV45、59、39、56-PCR 反應液包括 10XPCR buffer、MgCl2' dNTPs、1-100 μ M 的 HPV45 的弓丨物和探針、1-100 μ M的HPV59的引物和探針、1-100 μ M的HPV39的引物和探針、1-100 μ M的HPV56的引物和探針及無菌蒸餾水； 其中，所述HPV45的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.25、SEQ ID N0.26、SEQ IDN0.27 ； 所述HPV59的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.28、SEQ ID N0.29、SEQ ID N0.30所不的序列； 所述HPV39的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.31、SEQ ID N0.32、SEQ ID N0.33所不的序列；所述HPV56的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.34、SEQ ID N0.35、SEQ ID N0.36所示的序列。
6.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述HPV31、52、68、53-PCR 反應液包括 1XPCR buffer, MgCl2' dNTPs、1-100 μ M 的 HPV31 的弓丨物和探針、1-100 μ M的HPV52的引物和探針、1-100 μ M的HPV68的引物和探針、1-100 μ M的HPV53的引物和探針及無菌蒸餾水； 其中，所述HPV31的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.37、SEQ ID N0.38、SEQ IDN0.39 ； 所述HPV52的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.40、SEQ ID N0.41、SEQ ID N0.42所不的序列； 所述HPV68的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.43、SEQ ID N0.44、SEQ ID N0.45所不的序列； 所述HPV53的引物和探針為如序列表SEQ ID N0.46、SEQ ID N0.47、SEQ ID N0.48所示的序列。
7.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述的Taq/UNG酶混合液包括耐熱DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶。
8.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述的陰性對照為含有黏蛋白和 BSA的TE緩沖液。
9.如權利要求1所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述的陽性對照包括 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68 和人 β-globin 的線性化重組質粒的混合液、黏蛋白和BSA的TE緩沖液。
10.如權利要求1-9任一所述的一種人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒，其特征在于:所述試劑盒為人乳頭瘤病毒核酸分型檢測試劑盒。
【文檔編號】C12Q1/68GK104073573SQ201410335816
【公開日】2014年10月1日 申請日期:2014年7月15日 優先權日:2014年7月15日
【發明者】宋冬梅, 劉軍輝, 劉代新 申請人:江蘇同科醫藥科技有限公司