一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法
【專利摘要】一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法，包括：(1)過(guò)濾待檢測(cè)的制藥用水，轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上；(2)轉(zhuǎn)移短期培養(yǎng)Milliflex膜至含有染色溶液的平板上；(3)使用染色試劑盒所配置的染色液染色30min；(4)用觀察裝置對(duì)發(fā)出熒光的微生物菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，記為FC；(5)轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上再培養(yǎng)至5天，計(jì)數(shù)記為RIC，長(zhǎng)期培養(yǎng)5天的Milliflex膜使用常規(guī)菌落計(jì)數(shù)，記為CC；(6)考察不同時(shí)間點(diǎn)的FC，減低劑量預(yù)處理(RIC)的結(jié)果與CC比較。本發(fā)明可以更快地確認(rèn)制藥用水中否存在污染，避免產(chǎn)品的生產(chǎn)中斷。更早得到微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果以對(duì)生產(chǎn)用水有更好的了解和掌握。該發(fā)明適用于微生物實(shí)驗(yàn)室，制藥廠使用。
【專利說(shuō)明】一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種微生物檢測(cè)方法，具體涉及一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 微生物快速檢測(cè)方法是微生物學(xué)中的一個(gè)快速發(fā)展的方向，無(wú)論是對(duì)食品，藥品 用水安全的監(jiān)督和管理，都需要一種較為快速的微生物檢測(cè)方法。
[0003] 目前，對(duì)于微生物菌含量的檢測(cè)，主要是依照傳統(tǒng)的方法，將待檢測(cè)的對(duì)象，接種 到適合的培養(yǎng)基中，進(jìn)行培養(yǎng)，觀察和計(jì)數(shù)。
[0004] 但是目前的這種方法由于需要長(zhǎng)期的培養(yǎng)，需要數(shù)天，這對(duì)于需及時(shí)檢測(cè)到待檢 對(duì)象中的含菌量是不利的。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于，提供一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法，以克服現(xiàn)有技 術(shù)所存在的上述缺點(diǎn)和不足。本發(fā)明建立Milliflex Quantum方法快速檢測(cè)制藥用水中微 生物的含量，可以更快地確認(rèn)制藥用水中否存在污染，避免產(chǎn)品的生產(chǎn)中斷。更早得到微生 物實(shí)驗(yàn)結(jié)果以對(duì)生產(chǎn)用水有更好的了解和掌握。該發(fā)明適用于微生物實(shí)驗(yàn)室，制藥廠使用。
[0006] Milliflex Quantum基于突光染色法的，設(shè)計(jì)用于可過(guò)濾產(chǎn)品的快速微生物計(jì)數(shù) 檢測(cè)的技術(shù)。這一簡(jiǎn)單易用的系統(tǒng)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的工業(yè)薄膜過(guò)濾技術(shù)來(lái)培養(yǎng)單個(gè)樣品中低至 1CFU活的可培養(yǎng)的微生物。該方法是基于傳統(tǒng)的薄膜過(guò)濾法，因此任何實(shí)驗(yàn)室都可以對(duì)此 快速檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。
[0007] 本發(fā)明是一種快速檢測(cè)微生物的Miliflex Quantum試劑盒的使用方法，該方法將 傳統(tǒng)的微生物肉眼觀察方法轉(zhuǎn)化為使用熒光顯微鏡對(duì)熒光的檢測(cè)。
[0008] 本發(fā)明所需要解決的技術(shù)問(wèn)題，可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)：
[0009] 一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0010] (1)過(guò)濾待檢測(cè)的制藥用水，轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上，根據(jù)微生物 的種類培養(yǎng)42小時(shí)，66小時(shí)和5天；
[0011] (2)轉(zhuǎn)移短期培養(yǎng)包括24,42,66小時(shí)的Milliflex膜至含有染色溶液的平板上；
[0012] (3)使用染色試劑盒所配置的染色液染色30min ;
[0013] (4)用觀察裝置對(duì)發(fā)出熒光的微生物菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，記為FC ;
[0014] (5)轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上再培養(yǎng)至5天，計(jì)數(shù)記為RIC，長(zhǎng)期培 養(yǎng)5天的Milliflex膜使用常規(guī)菌落計(jì)數(shù)，記為CC ;
[0015] (6)考察不同時(shí)間點(diǎn)的熒光計(jì)數(shù)結(jié)果FC，減低劑量預(yù)處理RIC與傳統(tǒng)膜過(guò)濾法計(jì) 數(shù)結(jié)果CC比較，最終確定在42小時(shí)，各種微生物的FC值與CC值無(wú)顯著性差異。
[0016] 進(jìn)一步，步驟（1)中，所述染色溶液采用Miliflex Quantum試劑盒，包括：復(fù)溶劑、 熒光劑和染色緩沖液，首先將復(fù)溶劑與熒光劑混勻，然后再與染色緩沖液混勻制成。
[0017] 進(jìn)一步，步驟（2)中，所述染色溶液使用量為2ml/平板。
[0018] 進(jìn)一步，步驟（3)中，所述染色的溫度為30_35°C。
[0019] 本發(fā)明的有益效果：
[0020] 1、本發(fā)明與傳統(tǒng)的方法細(xì)菌培養(yǎng)相比較，該方法在42小時(shí)就可以將待檢微生物 檢出，比較傳統(tǒng)的5天培養(yǎng)法，較為快速，將污染的檢出提前。
[0021] 2、本發(fā)明Milliflex Quantum基于突光染色法的，設(shè)計(jì)用于可過(guò)濾產(chǎn)品的快速微 生物計(jì)數(shù)檢測(cè)的技術(shù)，檢測(cè)過(guò)程易于操作和觀察。這一簡(jiǎn)單易用的系統(tǒng)應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的工業(yè)薄 膜過(guò)濾技術(shù)來(lái)培養(yǎng)單個(gè)樣品中低至1CFU活的可培養(yǎng)的微生物。該方法是基于傳統(tǒng)的薄膜 過(guò)濾法，因此任何實(shí)驗(yàn)室都可以對(duì)此快速檢測(cè)系統(tǒng)進(jìn)行驗(yàn)證。
[0022] 3、本發(fā)明檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性高。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0024] 圖2為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0025] 圖3為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0026] 圖4為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0027] 圖5為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0028] 圖6為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0029] 圖7為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0030] 圖8為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0031] 圖9為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。
[0032] 圖10為微生物的FC，RIC以及CC菌落計(jì)數(shù)圖。

【具體實(shí)施方式】
[0033] 以下結(jié)合具體實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)步說(shuō)明。應(yīng)理解，以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā) 明而非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0034] 實(shí)施例IMiliflex Quantum試劑盒的使用
[0035] Miliflex Quantum試劑盒包括：1復(fù)溶劑、2突光劑、3染色緩沖液。
[0036] 開始復(fù)溶前1小時(shí)從冰箱中取出Miliflex Quantum試劑盒。在層流罩下或微生 物安全柜下復(fù)溶。室溫下振搖瓶1至復(fù)溶劑完全溶解，將瓶1中復(fù)溶劑轉(zhuǎn)移至瓶2熒光劑 中，混勻。將瓶2中混勻的試劑轉(zhuǎn)移至瓶3染色緩沖液中，混勻，作為染色溶液。
[0037] 將培養(yǎng)箱中的Milliflex培養(yǎng)平板取出，放入層流臺(tái)或微生物安全柜內(nèi)；用1塊用 無(wú)菌變性乙醇70/30濕潤(rùn)的無(wú)紡布擦拭清潔膜轉(zhuǎn)移裝置的表面；將Milliflex液體培養(yǎng)基 平皿放在膜轉(zhuǎn)移裝置上；將Milliflex液體培養(yǎng)基平皿上的保護(hù)膜移除。根據(jù)微生物的種 類培養(yǎng)42小時(shí)，66小時(shí)和5天。
[0038] 用移液管，在Milliflex液體培養(yǎng)基平皿墊片的中心位置加2ml染色溶液。加入 染色液時(shí)，請(qǐng)勿觸摸墊片；使用除膜支架，分開Milliflex固體培養(yǎng)基和Milliflex膜。膜 上的蓋子不要取下；啟動(dòng)Milliflex泵；將Milliflex膜連同蓋子一起裝配至Milliflex液 體培養(yǎng)基平皿上；按"C"停止泵；壓下膜轉(zhuǎn)移裝置的桿子，將Milliflex液體培養(yǎng)基平皿從 轉(zhuǎn)移裝置上取下。
[0039] 將Milliflex液體培養(yǎng)基平皿放置于30-35°C，倒置培養(yǎng)30min。使用觀察裝置對(duì) Mi 11 if lex膜計(jì)數(shù)。染色步驟后，從培養(yǎng)箱中將Mi 11 if lex液體培養(yǎng)基平皿取出。
[0040] 確認(rèn)觀察裝置處于正常狀態(tài)，并可以使用；打開觀察裝置的抽屜，將裝配了 Milliflex膜的Milliflex液體培養(yǎng)基平皿放置在抽屜中；關(guān)閉抽屜；觀察裝置的抽屜被關(guān) 閉后，觀察裝置開始照射Milliflex膜。屏幕上會(huì)顯示出計(jì)數(shù)器；通過(guò)觀察裝置的窗口人工 觀察Milliflex膜，按下計(jì)數(shù)按鈕進(jìn)行計(jì)數(shù)；計(jì)數(shù)完成后，記錄計(jì)數(shù)結(jié)果，打開抽屜，從觀察 裝置中取出Milliflex膜。
[0041] 轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上再培養(yǎng)至5天，計(jì)數(shù)記為RIC，長(zhǎng)期培養(yǎng)5 天的Milliflex膜使用常規(guī)菌落計(jì)數(shù)記為CC，也稱為熒光染色后的再培養(yǎng)計(jì)數(shù)結(jié)果。
[0042] 考察不同時(shí)間點(diǎn)的FC，減低劑量預(yù)處理（RIC)的結(jié)果與CC比較，最終確定在42小 時(shí)，各種微生物的FC值與CC值無(wú)顯著性差異（如圖1-10所示）。
[0043] 取出后的Milliflex膜可以繼續(xù)培養(yǎng)。
[0044] 實(shí)施例2檢測(cè)的微生物
[0045] 檢測(cè)的微生物種類包括：哈替草螺菌、金黃桿菌屬、貪銅菌屬、皮氏羅爾斯通氏菌、 刺狀鞘氨醇單胞菌、柄桿菌屬、不動(dòng)桿菌、血紅鞘氨醇單胞菌、食酸菌屬和斐氏棒桿菌。
[0046] 對(duì)照采用傳統(tǒng)的薄膜過(guò)濾法。
[0047] 兩種方法的參數(shù)比較見(jiàn)表1。
[0048] 表1兩種方法的參數(shù)比較
[0049]

【權(quán)利要求】
1. 一種快速檢測(cè)制藥用水中微生物的方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 過(guò)濾待檢測(cè)的制藥用水，轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上，根據(jù)微生物的種 類培養(yǎng)42小時(shí)，66小時(shí)和5天； (2) 轉(zhuǎn)移短期培養(yǎng)包括24,42,66小時(shí)的Millif lex膜至含有染色溶液的平板上； (3) 使用染色試劑盒所配置的染色液染色30min ; (4) 用觀察裝置對(duì)發(fā)出熒光的微生物菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，記為FC ; (5) 轉(zhuǎn)移Milliflex膜至含培養(yǎng)基的平板上再培養(yǎng)至5天，計(jì)數(shù)記為RIC，長(zhǎng)期培養(yǎng)5 天的Mi 11 if lex膜使用常規(guī)菌落計(jì)數(shù)，記為CC ; (6) 考察不同時(shí)間點(diǎn)的熒光計(jì)數(shù)結(jié)果FC，減低劑量預(yù)處理RIC與傳統(tǒng)膜過(guò)濾法計(jì)數(shù)結(jié) 果CC比較，最終確定在42小時(shí)，各種微生物的FC值與CC值無(wú)顯著性差異。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（1)中，所述染色溶液采用Miliflex Quantum試劑盒，包括：復(fù)溶劑、熒光劑和染色緩沖液，首先將復(fù)溶劑與熒光劑混勻，然后再 與染色緩沖液混勻制成。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（2)中，所述染色溶液使用量為2ml/ 平板。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于：步驟（3)中，所述染色的溫度為30-35°C。
【文檔編號(hào)】C12Q1/04GK104099399SQ201410342511
【公開日】2014年10月15日 申請(qǐng)日期:2014年7月18日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月18日
【發(fā)明者】馬衛(wèi)東, 張錦文, 吳國(guó)平 申請(qǐng)人:上海羅氏制藥有限公司