本發明涉及保健品技術領域，尤其是涉及一種腸道益生菌的保存方法。
背景技術：
益生菌能通過提供酶來促進食物的消化，還可以生產一些保證身體健康的化合物；益生菌可以趕走和殺滅腸內的有害細菌，并能改善腸道內的ph值，從而調整身體內有害細菌產生的過度免疫反應，消除炎癥，改善腸道功能。益生菌通常包含在乳制品中，最常見的含有有益于腸道微生物的乳制品要數酸奶居首，酸奶是常以牛奶、羊奶等經過巴氏滅菌后，經過接種乳酸菌發酵而制成。酸奶不僅口味香醇獨特，還具有對人體較好的功能，能增強人體的免疫力等，因此，酸奶深受大眾的喜愛，具有一定的市場經濟價值。但酸奶的保存有一定的條件，其保質期短，一般在4℃保存益生菌的菌落數量含量變化很大，不夠穩定，因此這就給在市場上流通帶來了一定的難度，所以該如何延長酸奶的保存時間，且有效保持其保存過程中益生菌的活性成為關鍵問題。
現有技術公開的方法主要是將酸奶直接冷凍，這樣能使其中的益生菌處于休眠狀態，以至于能長期的保存酸奶，然而，經過冷凍的酸奶，由于溫差的急劇變化，使其中大多的益生菌的胞體收到損傷，甚至死亡，從而導致益生菌的活率下降，也將使酸奶原本對人體有益的功能大打折扣。
技術實現要素：
有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種腸道益生菌的保存方法，本發明提供的腸道益生菌的保存方法保存時間長，活菌數高，
本發明提供了一種腸道益生菌的保存方法，包括如下步驟：
將酸奶與保護劑混合，得到混合物；所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的一種或幾種；
將混合物梯度降溫，冷凍保存；所述梯度降溫的溫度具體為：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
優選的，所述梯度降溫2℃～3℃保持3～10h，0℃保持3～10h，-2℃～-3℃保持3～10h，-6℃～-7℃保持3～10h，-10℃～-11℃保持3～10h。
優選的，所述冷凍保存的溫度為-18℃～-20℃。
優選的，所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的兩種或兩種以上。
優選的，所述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(50～100)：(5～10)：(5～25)：(5～15)：(200～600)。
優選的，所述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(60～90)：(6～8)：(8～23)：(7～13)：(300～550)。
優選的，所述葡萄籽多糖在酸奶中的添加量為50～100μg/ml，所述枸杞多糖在酸奶中的添加量為5～10μg/ml。
優選的，所述香菇多糖在酸奶中的添加量為5～25μg/ml，所述鐵皮石斛素在酸奶中的添加量為5～15μg/ml；所述維生素c在酸奶中的添加量為200～600μg/ml。
優選的，還包括將冷凍保存的酸奶梯度解凍；所述梯度解凍具體為：-2～0℃保持8～12h，而后置于2～8℃保存。
優選的，所述還包括將保護劑無菌過濾處理。
與現有技術相比，本發明提供了一種腸道益生菌的保存方法，包括如下步驟：將酸奶與保護劑混合，得到混合物；所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的一種或幾種；將混合物梯度降溫，冷凍保存；所述梯度降溫的溫度具體為：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。本發明提供的上述保護劑可以很好的保持益生菌的活性，使得本發明的益生菌保存時間長；同時本發明采用特定溫度的梯度降溫的具體方式，避免益生菌的胞體受到損傷，提高活菌率和保存時間。
附圖說明
圖1為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
具體實施方式
本發明提供了一種腸道益生菌的保存方法，包括如下步驟：
將酸奶與保護劑混合，得到混合物；所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的一種或幾種；
將混合物梯度降溫，冷凍保存；所述梯度降溫的溫度具體為：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
本發明提供的腸道益生菌的保存方法首先將酸奶與保護劑混合，得到混合物。
本發明對于酸奶的具體種類不進行限定，本領域技術人員熟知的酸奶即可。對于上述任何種類酸奶，本發明的保護劑以及保存方式均適用。
在本發明中，所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的一種或幾種；優選選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的兩種或兩種以上；更優選為葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c。
在本發明中，本發明對于所述葡萄籽多糖的來源不進行限定，可以用本領域技術人員熟知的方法提取，也可以市售。
多糖是生物體內一類重要的大分子，其種類繁多、結構復雜、功能多樣,是一切生命有機體必不可少的重要組成成分，與維持生命所必須的生物機能密切相關。多糖有多種多樣的生物活性,越來越多的研究證明:多糖是非特異性的免疫調節劑(生物效應調節劑brm),它主要影響網狀內皮系統(res)、巨噬細胞(mφ)、淋巴細胞、白細胞以及rna、dna、蛋白質的合成,camp(環化腺苷-磷酸)與cgmp(環化鳥苷-磷酸)的含量，抗體的生成、補體的形成以及干擾素(ifn)的誘生,并具有抗腫瘤、抗炎、抗衰老、抗凝血、抗病毒、抗放射、降血糖、降血脂等活性,而且多糖對機體幾乎無毒副作用，隨著研究的深入,多糖在醫療上的價值越來越重要，新的用途不斷被發現。此外多糖在日用化妝品方面,在食品工業、發酵工業及石油工業等行業上也有著廣泛的應用。
葡萄籽是葡萄酒廠的下腳料，經曬干后分離葡萄皮、葡萄梗后所得產物。葡萄籽含有豐富各種氨基酸、維生素及礦物質等。葡萄籽油因其具有保健、美容之功效，所以價格非常昂貴。本發明采用葡萄籽多糖，與其余組分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
枸杞多糖是從枸杞中提取而得的一種水溶性多糖。該多糖系蛋白多糖，由阿拉伯糖、葡萄糖、半乳糖、甘露糖、木糖、鼠李糖6種單糖成分組成。經研究表明，枸杞多糖是枸杞子調節免疫、延緩衰老的主要活性成分，可改善老年人易疲勞、食欲不振和視力模糊等癥狀，并具有降血脂、抗脂肪肝、抗衰老等作用。本發明采用枸杞多糖，與其余組分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
香菇多糖是從優質香菇子實體中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β-(1-3)-d-葡聚糖，主鏈由β-(1-3)-連接的葡萄糖基組成，沿主鏈隨機分布著由β-(1-6)連接的葡萄糖基，呈梳狀結構。臨床與藥理研究表明，香菇多糖具有抗病毒、抗腫瘤、調節免疫功能和刺激干擾素形成等作用。本發明采用香菇多糖，與其余組分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
鐵皮石斛為蘭科石斛蘭屬多年生草本植物，喜在溫暖、潮濕、半陰半陽的環境中生長。分布于福建、浙江、廣西、云南等地。《中國藥典2005年版》石斛功能:益胃生津，滋陰清熱。本發明采用鐵皮石斛素，與其余組分配合作用，可以良好的保存益生菌，提高益生菌的活性。
維生素c(vitaminc，ascorbicacid)又叫l-抗壞血酸，是一種水溶性維生素。食物中的維生素c被人體小腸上段吸收。一旦吸收，就分布到體內所有的水溶性結構中，正常成人體內的維生素c代謝活性池中約有1500mg維生素c，最高儲存峰值為3000mg維生素c。正常情況下，維生素c絕大部分在體內經代謝分解成草酸或與硫酸結合生成抗壞血酸-2-硫酸由尿排出；另一部分可直接由尿排出體外。
本發明對于所述枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的來源不進行限定，本領域技術人員熟知的方法制備提取或者市售均可。優選為市售。
在本發明的一部分實施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(50～100)：(5～10)：(5～25)：(5～15)：(200～600)。
在本發明的一部分實施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(60～90)：(6～8)：(8～23)：(7～13)：(300～550)。
在本發明的一部分實施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(65～85)：(6～7)：(9～20)：(8～11)：(350～500)。
在本發明的一部分實施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(70～80)：(6～7)：(10～18)：(9～11)：(400～500)。
在本發明的一部分實施例中，葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c的質量比為(70～75)：(6～7)：(10～15)：(9～10)：(400～450)。
在本發明中，本發明對于葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c在酸奶中的添加量不進行限定，本領域技術人員可以根據具體實際生產狀況、產品要求以及質量要求進行選擇和調整。
優選具體為：
所述葡萄籽多糖在酸奶中的添加量優選為50～100μg/ml，更優選為60～90μg/ml，最優選為65～85μg/ml，最最優選為70～80μg/ml。
所述枸杞多糖在酸奶中的添加量優選為5～10μg/ml，更優選為6～8μg/ml；最優選為6～7μg/ml。
所述香菇多糖在酸奶中的添加量優選為5～25μg/ml，更優選為8～23μg/ml，最優選為9～20μg/ml，最最優選為10～18μg/ml。
所述鐵皮石斛素在酸奶中的添加量優選為5～15μg/ml；更優選為7～13μg/ml，最優選為8～11μg/ml，最最優選為9～11μg/ml。
所述維生素c在酸奶中的添加量優選為200～600μg/ml，更優選為300～550μg/ml，最優選為350～500μg/ml，最最優選為400～500μg/ml。
上述葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖和鐵皮石斛素、維生素c在酸奶中的添加之前優選經過無菌過濾處理。
本發明對于所述無菌過濾的具體方式不進行限定，本領域技術人員熟知的即可。
得到混合物后，將混合物梯度降溫，冷凍保存。
在本發明中，所述梯度降溫的溫度具體為：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。
所述梯度降溫優選具體為：2℃～3℃保持3～10h，0℃保持3～10h，-2℃～-3℃保持3～10h，-6℃～-7℃保持3～10h，-10℃～-11℃保持3～10h。
更優選具體為：2℃～3℃保持4～9h，0℃保持4～9h，-2℃～-3℃保持4～9h，-6℃～-7℃保持4～9h，-10℃～-11℃保持4～9h。
最優選具體為：2℃～3℃保持5～8h，0℃保持5～8h，-2℃～-3℃保持5～8h，-6℃～-7℃保持5～8h，-10℃～-11℃保持5～8h。
最最優選具體為：2℃～3℃保持6～7h，0℃保持6～7h，-2℃～-3℃保持6～7h，-6℃～-7℃保持6～7h，-10℃～-11℃保持6～7h。
梯度降溫后，冷凍保存，冷凍保存的溫度優選為-18℃～-20℃；更優選為-19℃～-20℃。
通過本發明特定的保護劑與特定的梯度降溫，冷凍保存，使得益生菌保存時間長，活菌數高。
在本發明中，在使用時，將冷凍保存的酸奶梯度解凍即可。
所述將冷凍保存的酸奶梯度解凍優選具體為：-2～0℃保持8～12h，而后置于2～8℃保存；更優選具體為：-1～0℃保持8～12h，而后置于3～7℃保存；最優選具體為：-1～0℃保持9～11h，而后置于4～6℃保存。
本發明提供了一種腸道益生菌的保存方法，包括如下步驟：將酸奶與保護劑混合，得到混合物；所述保護劑選自葡萄籽多糖、枸杞多糖、香菇多糖、鐵皮石斛素和維生素c中的一種或幾種；將混合物梯度降溫，冷凍保存；所述梯度降溫的溫度具體為：2℃～4℃保持3～12h，0℃保持3～12h，-2℃～-4℃保持3～12h，-6℃～-8℃保持3～12h，-10℃～-12℃保持3～12h。本發明提供的上述保護劑可以很好的保持益生菌的活性，使得本發明的益生菌保存時間長；同時本發明采用特定溫度的梯度降溫的具體方式，避免益生菌的胞體受到損傷，提高活菌率和保存時間。
為了進一步說明本發明，以下結合實施例對本發明提供的腸道益生菌的保存方法進行詳細描述。
實施例1
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：50ug/ml，枸杞多糖：5ug/ml，香菇多糖：5ug/ml，鐵皮石斛素：5ug/ml，維生素c：0.2mg/ml。
將上述預處理后的酸奶降溫，首先將上述預處理過的酸奶依次置于4℃、0℃、-2℃、-6℃、-10℃中各3h，而后置于-18℃中冷凍保存。保存過程中，每天測定活菌數，共測定7天。
測定時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置8h，再將其置于2℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
實施例2
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：60ug/ml，枸杞多糖：6ug/ml，香菇多糖：8ug/ml，鐵皮石斛素：7ug/ml，維生素c：0.3mg/ml。
將上述預處理后的酸奶降溫，首先將上述預處理過的酸奶依次置于3℃、0℃、-2℃、-6℃、-10℃中各5h，而后置于-18℃中冷凍保存。保存過程中，每10天測定活菌數，共測定30天。
測定時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置8h，再將其置于2℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
實施例3
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：75ug/ml，枸杞多糖：7.5ug/ml，香菇多糖：15ug/ml，鐵皮石斛素：10ug/ml，維生素c：0.4mg/ml。
將上述預處理后的酸奶降溫，首先將上述預處理過的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各7.5h，而后置于-19℃中冷凍保存。
測定時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置10h，再將其置于4℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
實施例4
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：80ug/ml，枸杞多糖：8ug/ml，香菇多糖：18ug/ml，鐵皮石斛素：11ug/ml，維生素c：0.5mg/ml。
將上述預處理后的酸奶降溫，首先將上述預處理過的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各8h，而后置于-19℃中冷凍保存。
測定時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置10h，再將其置于4℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
實施例5
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：100ug/ml，枸杞多糖：10ug/ml，香菇多糖：25ug/ml，鐵皮石斛素：15ug/ml，維生素c：0.6mg/ml。
將上述預處理后的酸奶降溫，首先將上述預處理過的酸奶依次置于2℃、0℃、-4℃、-8℃、-12℃中各12h，而后置于-20℃中冷凍保存。
測定時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置12h，再將其置于8℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
比較例1
將需要凍存的酸奶置于4℃中冷凍保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
比較例2
將需要凍存的酸奶里加入經過無菌過濾處理的葡萄籽多糖、枸杞多糖、鐵皮石斛素及維生素c，在酸奶中的添加濃度為：葡萄籽多糖：75ug/ml，枸杞多糖：7.5ug/ml，香菇多糖：15ug/ml，鐵皮石斛素：10ug/ml，維生素c：0.4mg/ml。將其置于4℃的環境中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。表2為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
比較例3
將需要凍存的酸奶依次置于3℃、0℃、-3℃、-7℃、-11℃中各7.5h，于-19℃中冷凍保存。需要使用時，直接將冷凍的酸奶轉至0℃放置10h，再將其置于4℃中保存測定。結果如表1和表2所示，表1為本發明實施例和比較例活菌數測定結果。圖1為本發明實施例和比較例酸度測定結果。
表1本發明實施例和比較例活菌數測定結果
以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。