本發明涉及一種營養素組合物，更準確地說，本發明涉及一種對維生素d、k及葉酸營養素缺乏人群實施精準營養補充的營養素組合物，該營養素組合物適于制成營養補充劑或保健食品。
背景技術：
維生素d是一種脂溶性維生素，為固醇類衍生物，有五種化合物，與健康關系較密切的是維生素d2和d3，存在于部分天然食物中，受紫外線照射后人體內的膽固醇可轉化為維生素d。維生素d受體存在于身體大部分組織中，許多常見病包括一些常見腫瘤、糖尿病、老年癡呆、心血管疾病和骨質疏松癥都與維生素d缺乏有關。維生素d缺乏已成為公共衛生問題。維生素d是維持骨骼健康必不可少物質之一，促進鈣磷吸收、骨基質鈣化，使骨質堅硬，亦刺激成骨細胞中的骨橋蛋白和堿性磷酸酶合成，抑制成骨細胞凋亡，有利骨形成。維生素d缺乏可導致兒童生長遲緩、骨骼畸形，即兒童佝僂病，補充維生素d則可預防或治療佝僂病，故維生素d又稱抗佝僂病維生素。維生素d缺乏導致或加劇成人骨量減少和骨質疏松癥，甚至引起骨軟化和肌無力，增加骨折風險。
葉酸屬于b族維生素，為機體細胞生長和繁殖的必需物質。葉酸經二氫葉酸還原酶及維生素b12的催化后形成四氫葉酸，后者與多種一碳單位(包括-ch3、-ch2、-cho等)結合成四氫葉酸類輔酶，傳遞一碳單位，參與體內很多重要反應。葉酸缺乏可導致脫氧核糖核酸(dna)合成障礙，進而細胞分裂、繁殖受阻。亞甲基四氫葉酸還原酶(mthfr)基因多態性可能導致我國人群對葉酸利用能力的相對不足：mthfr是5,10-亞甲基四氫葉酸還原為5-甲基四氫葉酸的關鍵酶,如基因突變則使酶活性顯著下降，影響外源性葉酸活化為5-甲基四氫葉酸，一碳單位傳遞受阻，則hcy不能順利轉化為蛋氨酸，形成高hcy血癥。mthfrc677t有三種基因型，即純合野生型(cc)、雜合型(ct)和純合突變型(tt)，tt型酶活性只有cc型30％。我國人群tt基因型頻率平均23.2％，顯著高于歐美國家，加之高溫烹調蔬菜的習慣，葉酸缺乏率(65％)明顯高于歐美國家。
維生素k是一類具有萘醌(naphthoquinone)基團(2-甲基-1，4萘醌)的衍生物，又名凝血維生素或抗出血維生素。1960年，研究發現其除凝血功能之外，尚有促進骨形成、抑制骨吸收的作用，能防治多種原因引起的骨質疏松癥：維生素k通過促進成骨細胞分泌的骨鈣素γ-梭基谷氨酸化而與骨形成密切相關。維生素k可促進骨礦化，影響骨鈣素的生物合成與生物活性，是骨鈣素中谷氨酸γ位梭化的重要輔酶。部分老年性骨質疏松性骨折患者血中維生素k水平明顯低下。維生素k攝人量長期低下者，其股骨頸骨折的危險性增高。接受抗凝治療者，其脊椎骨折的發生率遠遠超過預測值，治療時間愈長，其危險性亦愈高。有些老年人血中骨鈣素水平雖然高值，但其與經磷灰石的結合能力卻下降。骨鈣素在血中呈現高值的女性患者骨折的危險性高。這種情況在給予維生素k以后，可以得到改善。
骨質疏松以骨量減少、骨組織的微觀結構退化為特征，使骨的脆性增加及骨折的危險性增加的一種全身性骨骼疾病。隨著社會人口的老齡化，該病的發病率正日益上升，成為嚴重影響我國老年人健康的重要疾病。骨質疏松已在世界常見病、多發病中位居第7位，多發生于老年人和多種慢性疾病病人，對病人造成生理、心理及社會功能等諸多方面的影響，越來越受到人們的關注。骨質疏松可導致疼痛、骨折、骨骼變形等問題，威脅老年人的健康和生活質量，髖部骨折作為骨質疏松的最嚴重后果，甚至可以引起患者死亡。
同型半胱氨酸(homocysteine，hcy)是一種含硫氨基酸，是蛋氨酸代謝過程的中間產物。研究發現，高hcy血癥不僅是心血管疾病的危險因素(致病機制包括損傷血管內皮、促進血管平滑肌細胞增殖及動脈硬化等)，同時也是骨質疏松性骨折的一個危險因素。高hcy血癥可妨礙膠原蛋白纖維與組織的連接，從而促進骨質疏松癥發生，據推算19％老年性骨折與高hcy水平有關。人體血hcy水平取決于遺傳、飲食等因素，葉酸攝入不足可以使血hcy升高，維生素b12是hcy代謝的輔助因子，如果缺乏則同樣會促使高hcy血癥形成。
目前市場上復合維生素產品眾多，但由于成分多、每種元素含量較低，缺乏針對性，消費者難以選擇，實際保健效果尚難預料。因此，本發明旨在開發一種新的營養素組合物，可針對老年人營養素缺乏特點，輔助保護老年人骨骼健康、預防心腦血管疾病，是對現有市場多種維生素產品的優化，符合精準營養的趨勢。
技術實現要素：
本發明的目的在于提供一種對維生素d、k及葉酸缺乏的人群實施精準營養補充的營養素組合物；特別是針對營養素缺乏的中老年人，提供一種對中老年人骨骼有輔助保護作用、對心腦血管疾病有預防作用的營養補充劑或保健食品。
為了實現上述目的，本發明采用以下技術方案：
一種營養素組合物，由以下成分組成：
(1)維生素d
(2)葉酸
(3)維生素k
(4)保健食品可接受的輔料。
本發明所述的營養素組合物中，維生素d含量為2～100μg，優選2～20μg；所述葉酸含量為30～2000μg，優選30～1200μg；所述維生素k含量為10～500μg，優選15～100μg。
本發明所述的維生素d包括維生素d2和維生素d3，以及其他各組來源的各種維生素d形式。
本發明所述的葉酸包括葉酸、5-甲基四氫葉酸、甲酰四氫葉酸鈣、l-甲基葉酸、亞葉酸、左亞葉酸鈣、葉酸鹽、葉酸或葉酸鹽的活性代謝物和可在體內釋放/生成葉酸的物質，即包括人工合成及植物提取物來源的各種葉酸形式。
本發明所述維生素k包括植物來源的k1、微生物來源的k2，以及人工合成的k3和k4，優選植物來源的k1和微生物來源的k2。
本發明所述的營養素組合物可制成普通片劑、咀嚼片劑、軟膠囊劑、硬膠囊劑、粉劑及顆粒劑等口服劑型。
在本發明中，所述的保健食品可接受的輔料選自填充劑(分散劑)、助懸劑、潤濕劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑、穩定劑、包埋物、包衣預混劑、食用色素中的一種或幾種組合。
其中，本發明所述的填充劑(分散劑)包括淀粉、可溶性淀粉、糊精、麥芽糊精、馬鈴薯淀粉、玉米淀粉、小麥淀粉、d-甘露糖醇、磷酸氫鈣、無水磷酸氫鈣、麥芽糖、木糖醇、山梨糖醇、微晶纖維素、異麥芽酮糖、乳粉、低取代羥丙纖維素、蔗糖、葡萄糖、乳糖、預膠化淀粉、食用植物油、聚乙二醇等的一種或幾種。
本發明所述的助懸劑包括蜂蠟、蟲蠟、卵磷脂、單硬脂酸甘油酯、乙基纖維素等其中的一種或幾種，所述的潤濕劑包括純化水和乙醇，所述的粘合劑包括羥丙基甲基纖維素、聚維酮、羥丙纖維素、羧甲纖維素鈉、淀粉、甲基纖維素、乙基纖維素、明膠、聚乙二醇、預膠化淀粉、蔗糖、葡萄糖等其中一種或幾種。
本發明所述的崩解劑包括淀粉、羧甲淀粉鈉、交聯聚維酮、交聯羧甲纖維素鈉、低取代羥丙纖維素、碳酸氫鈉與枸櫞酸等其中的一種或幾種，所述的潤滑劑包括硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石粉、二氧化硅、氫化植物油、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉、山崳酸甘油酯、硬脂富馬酸鈉等其中的一種或幾種。
本發明所述的矯味劑包括水果粉、食用香精、高倍甜味劑、酸味劑等其中的一種或幾種，所述的水果粉包括橙粉、檸檬粉、櫻桃粉、蘋果粉、草莓粉、草莓粉、獼猴桃粉、橘粉、沙棘果粉、青梅果粉、芒果果粉、桑葚果粉、山楂果粉、西瓜果粉、菠蘿果粉、藍莓果粉、水蜜桃果粉、哈密瓜果粉、葡萄果粉、香草果粉、石榴果粉、玫瑰果粉等其中的一種或幾種。
本發明所述的食用香精包括香草香精、甜橙香精、牛奶香精、蘋果香精、葡萄香精、草莓香精、菠蘿香精、水蜜桃香精、哈密瓜香精、檸檬香精、櫻桃香精、甜玉米香精、香蕉香精、提子香精、葡萄香精、玫瑰香精、黑加侖香精、青蘋果香精、芒果香精、青芒果香精、桔子香精、香橙香精、雪梨香精、草莓香精、青梅香精、藍莓香精、楊梅香精、柚子香精、菠蘿香精、番石榴香精、百香果香精、奇異果香精、櫻桃香精、獼猴桃香精、西瓜香精、木瓜香精、哈密瓜香精、榴蓮香精、荔枝香精、山楂香精、橄欖香精、桑葚香精等其中的一種或幾種。
本發明所述的高倍甜味劑包括三氯蔗糖、阿斯巴甜、羅漢果甜苷、紐甜、甜菊苷，所述的酸味劑包括檸檬酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸、酒石酸和富馬酸，所述的食用色素包括焦糖色、梔子黃、姜黃色素和葉綠素、辣椒橙、辣椒紅、葡萄皮紅、胭脂紅及其鋁色淀、日落黃及其鋁色淀、亮藍及其鋁色淀、靛藍及其鋁色淀、甜菜紅、天然莧菜紅、梔子藍、植物炭黑、氧化鐵黑、氧化鐵紅、黑豆紅、喹啉黃、番茄紅素、紅曲紅、黃氧化鐵、可可殼色、紅花黃、紅曲黃色素等的一種或幾種。
本發明所述的穩定劑包括維生素e、二丁基羥基甲苯(bht)、丁基羥基茴香醚(bha)、維生素c，所述的包埋物包括β-環糊精、α-環糊精、γ-環糊精、糊精、淀粉、食用變性淀粉、蔗糖、麥芽糊精、阿拉伯樹膠等其中的一種或幾種。
本發明所述的營養素組合物根據目標人群營養素缺乏特點，篩選功能協同的維生素進行科學組方，實施精準營養補充，從而確保產品的功效，通過補充最佳劑量維生素d、葉酸、維生素k，特別是針對容易缺乏上述維生素的中老年人，輔助防治中老年人骨質疏松癥，兼輔助預防心血管疾病的功能。
適量針對性補充維生素d、葉酸和維生素k，不僅促進鈣磷吸收，促進骨基質鈣化，使骨質堅硬，還可使血漿hcy水平降低，保護血管內皮，增加骨密度，三者共同發揮對中老年人骨質疏松癥和心血管疾病的預防作用以及對這一人群骨骼、心血管系統的保健作用，并且該營養素組合物作用效果顯著強于組成成分的單獨或聯用的作用效果。
與現有產品相比，本發明所述的產品是一種效果更佳、更精準的維生素功能保健食品。下面結合實施例對本發明的實施方式作進一步描述，以下實施例中所列活性維生素的量均以有效成分計。
具體實施方式
實施例1：本發明所述保健食品的片劑制備(1000片量)
配方：
制備方法：取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、5-甲基四氫葉酸、三氯蔗糖與預膠化淀粉混合、過篩，再加入牛奶香精、羧甲淀粉鈉、糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片。將包衣預混劑配制成溶液，素片包衣，即制得本發明所述保健食品的片劑。
實施例2：本發明所述保健食品的片劑制備(1000片量)
配方：
制備方法：取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸、三氯蔗糖與預膠化淀粉混合、過篩，再加入牛奶香精、羧甲淀粉鈉、糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片。將包衣預混劑配制成溶液，素片包衣，即制得本發明所述保健食品的片劑。
為了證明本發明保健品有預防心腦血管疾病的作用，我們設計了以下實驗，主要是對實驗動物hcy及血管內皮因子et-1和no的水平，考察本發明保健品的功效作用。
取本實施例2制得的保健食品，進行安全性毒理學評價和藥效學試驗。
急性毒性：取本實施例1所制片劑，按劑量5g/kg給予20只sd大鼠(雌雄各半)，按照40ml/kg的體積灌胃給予，給藥1次，連續觀察14天，sd大鼠一般狀況未見異常，實驗結果表明該保健品對sd大鼠的最大耐受量大于5g/kg。
本發明保健品降低hcy，保護血管內皮的藥效學研究：
實驗動物：雄性sd大鼠，spf級，6周齡，體重在200g±20g,購自廣東省醫學實驗動物中心，許可證號scx(粵)2013-0002。
飼料：正常對照組(c)喂飼飼料采用標準ain93m配方純化飼料，其他試驗組飼料均在ain93m基礎上制備的葉酸缺乏純化飼料。
實驗方法：80只雄性sd大鼠適應性飼養一周后，按照體重隨機選取10只喂飼標準ain93m純化飼料作為正常對照組，其余動物喂飼葉酸缺乏的純化模型飼料4周后，采血檢測hcy。根據hcy水平，將模型動物隨機分成5組，每組9-10只，繼續葉酸缺乏飼料喂養,一組作為模型組，另4組分別為保健品高中低劑量組和葉酸組，也繼續喂飼葉酸缺乏飼料，灌胃給藥(給藥劑量見表1)，連續給藥8周，眼眶采血，檢測大鼠hcy水平、et-1及no水平。
統計分析：試驗數據采用graphpadprism5統計分析軟件進行統計處理；數據結果均以
實驗結果：見表1。結果表明，本發明維生素保健品具有顯著降低大鼠血hcy作用，并能夠顯著提高no水平、降低et-1水平，顯示良好的降hcy、血管內皮保護的作用，保健品中高劑量組的作用效果，較單獨葉酸組有進一步改善的作用。
表1.本發明保健食品對大鼠的降hcy、血管保護作用
模型組與對照組比較，*p<0.05，**p<0.01；與模型組比較，#p<0.05，##p<0.01
實施例3：本發明所述保健食品的軟膠囊制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將蜂蠟加入大豆油中，50℃加熱，使蜂蠟溶解，放置至室溫，取維生素d、葉酸、維生素k加入大豆油中制成混懸液，備用。另取明膠、純化水、焦糖色、對羥基苯甲酸酯配制成膠液，將制得的混懸物用壓丸機壓丸制成軟膠囊，經定型，洗丸和干燥處理后，即制得本發明所述的保健食品的軟膠囊劑。
實施例4：本發明所述保健食品的軟膠囊制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將蜂蠟加入大豆油中，50℃加熱，使蜂蠟溶解，放置至室溫，取維生素d、葉酸、維生素k加入大豆油中制成混懸液，備用。另取明膠、純化水、焦糖色、對羥基苯甲酸酯配制成膠液，將制得的混懸物用壓丸機壓丸制成軟膠囊，經定型，洗丸和干燥處理后，即制得本發明所述的保健食品的軟膠囊劑。
實施例5：本發明所述保健食品的硬膠囊劑制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將葉酸與20％微晶纖維素混合，過篩，再加入維生素d干粉、維生素k混合，將所得的原料混合物與剩余量的微晶纖維素等量遞增混合，再加入乳糖、硬脂酸鎂混合，然后采用全自動膠囊填充機進行填充，經拋光處理后即制得本發明所述保健食品的硬膠囊劑。
實施例6：本發明所述保健食品的硬膠囊劑制備(1000粒量)
配方：
制備方法：將葉酸與20％微晶纖維素混合，過篩，再加入維生素d干粉、維生素k混合，將所得的原料混合物與剩余量的微晶纖維素等量遞增混合，再加入乳糖、硬脂酸鎂混合，然后采用全自動膠囊填充機進行填充，經拋光處理后即制得本發明所述保健食品的硬膠囊劑。
實施例7：本發明所述保健食品的顆粒劑制備(1000份量)
配方：
制備方法：將蔗糖粉碎過100目篩備用；取聚維酮k30用50％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸與蔗糖混合、過篩，再加入蘋果粉、蘋果香精、羧甲淀粉鈉、麥芽糊精混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，即制得本發明所述保健食品的顆粒劑。
實施例8：本發明所述保健食品的咀嚼片制備(1000片量)
配方：
制備方法：取羥丙甲纖維素e5用60％乙醇溶液配制成粘合劑，再將維生素d加入粘合劑中攪拌均勻，備用。另取維生素k、葉酸與微晶纖維素混合、過篩，再加入甜菊苷、檸檬香精、奶粉、木糖醇混合，加入配制好的含有維生素d粘合劑制軟材，24目篩制粒，55℃干燥2h，24目篩整粒，加入硬脂酸鎂混合，壓片即制得本發明所述保健食品的咀嚼片。
為了證明本發明保健品對骨質疏松的治療和預防功效，我們設計了以下實驗，主要是對實驗動物股骨干重(wb)、右股骨密度(bmdf)及l2～l4骨密度(bmdl)的含量，考察本發明保健品(實施例8所制)的功效作用。
實驗方法：雌性sd大鼠，21-22月齡(老年)，體重(420±20)g；選取雌性sd大鼠18只，3月齡，體重(300±20)g作為陰性對照組。老年雌性sd大鼠隨機分為4組：老年大鼠組、維生素d+葉酸+維生素k(3+80+20)μg/kg/d，維生素d3μg/kg/d，維生素k20μg/kg/d，每組12只，陰性對照組和老年模型組每日灌胃相應體積溶媒，12周后頸椎脫臼處死動物，剝離雙側股骨、脛骨和腰椎(l2-4)仔細剔除結締組織，進行相關指標測定。
統計分析：試驗數據采用graphpadprism5統計分析軟件進行統計處理；數據結果均以
實驗結果：見表2。
表2.本發明保健品對大鼠股骨質量、密度及椎骨密度的影響
老年組與陰性對照組比較，*p<0.05，**p<0.01；與對老年組比較，#p<0.05，##p<0.01。
結果顯示，維生素d、e及本發明保健品均可使老年雌性大鼠的骨重及松質骨密度均有所改善，其中保健品,較單獨的維生素組效果有進一步的改善，可見組方各成分間具有協同作用。另外，安全性毒理學試驗表明本保健品安全、無毒副作用。