專利名稱：一種輔酶q的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種輔酶Q10乳劑及其凍干乳劑及制備方法。
背景技術：
輔酶Q10(Co Q10)的化學結構為2、3-二甲氧基-5-甲基-6-十異戊二烯基苯醌(2，3-dimethoxy-5-methyl-6-decoprenyl benzoguinone)，它是一類與維生素有共同特征的脂溶性醌類化合物。
早在70年代，國外對輔酶Q10就開始了大量臨床應用研究，發現其對心臟病、惡性腫瘤、高血壓、腦血管障礙、壞血病、急性肝炎等疾病有極好的療效，可作為肌體非特異性免疫增強劑、細胞代謝及細胞呼吸激活劑。目前輔酶Q10上市制劑有注射劑和口服劑型如片、膠囊、膠丸等，已在臨床得到廣泛應用。
研究表明，由于輔酶Q10在水中的溶解度很低，藥物口服吸收緩慢，健康人體口服輔酶Q10后需要5～6hrs血漿中藥物濃度才能達到峰值。同時由于輔酶Q10具有高度親脂性，經口服以后，藥物10天內從糞便中排出的量約為口服劑量的62％，實際上口服吸收的藥量僅占口服劑量的10～20％。(Lucker etal，Biomedical and Clinical Aspects of Coenzyme Q.V4；K.Folkers andY.Yamamura，eds.，Elsevier/North-Holland BiomedicalPress，Amsterdam，143-151，1984)冠狀動脈側支移植手術后的病人應用輔酶Q10改善其心肌缺血狀況和保護心臟功能時，口服輔酶Q10很難在組織中達到理想的藥物濃度，從而無法達到理想的治療效果。此外，很多情況下必須采用注射形式給予輔酶Q10對患者進行治療，例如心血管疾病的患者在發生急性心肌缺血、急性心肌梗死或胸疼時需要快速有效的治療，口服輔酶Q10很難滿足臨床治療的要求；心肌病患者口服輔酶Q10，由于藥物吸收緩慢且吸收量不確定使得很難達到理想的療效；對于嬰兒、兒童、昏迷或嚴重創傷的患者而言，他們不能夠按常規方式進行口服給藥治療，只能采用注射給藥；此外，靜脈注射給藥由于其方便、劑量準確、可控性強、可以避免口服給藥帶來的胃腸道刺激，容易滿足連續和間斷式的給藥方案。
為實現輔酶Q10臨床注射給藥的目的，現有技術中公開了一些技術方案。英國專利GB1112568報道將輔酶Q10制備成混懸液；美國專利US4068003報道使用表面活性劑Nikkol HCO-60，芝麻油，聚乙二醇制備輔酶Q10的乳劑；美國專利US4156718報道應用含有0.4％吐溫20制備輔酶Q10乳劑；美國專利US4824669報道將輔酶Q10溶于油后再與上市的靜脈注射用脂肪乳劑混合制備輔酶Q10乳劑；中國專利CN1593392A報道了以表面活性劑吐溫80來制備輔酶Q10普通注射液的凍干粉針，以提高其穩定性，但表面活性劑用量仍然較大且凍干品重建時較難以復溶；中國專利CN1208052C報道將輔酶Q10制備成固體形式的前體脂質體，以提高其穩定性。
輔酶Q10在水中溶解度小，難以直接制成注射劑使用，目前臨床應用的輔酶Q10注射液一般采用非水溶劑及較大量表面活性劑增溶，給藥后可能導致過敏、溶血等不良反應，稀釋及注射速度過快可能產生藥物沉淀影響用藥安全性。此外，輔酶Q10對光敏感，加工及貯存過程中制劑質量不夠穩定，產品臨床應用受到限制。
乳劑型注射劑由于其自身的諸多優點使其成為近年來藥物制劑領域的新熱點。將難溶性不穩定性藥物包封于脂質載體中形成乳劑，可以有效減少藥物在水、空氣和光照等不利因素中的暴露，從而提高藥物的穩定性。注射用乳劑粒徑一般控制在100～1000nm范圍內，可以安全有效的應用于人體注射給藥。將乳劑制備成凍干乳，能進一步改善輔酶Q10的物理化學穩定性，為臨床應用提供一種新型藥物組合物。

發明內容
本發明的目的是提供一種新的藥物組合物——輔酶Q10乳劑及其凍干乳劑及相應的制備方法，其制備工藝簡單可控，可以提高藥物輔酶Q10制劑的物理、化學和生物學穩定性，為臨床提供更加安全、穩定、有效的制劑。
其主要技術方案是該乳劑的成分為藥物和藥用輔料，藥物為2、3-二甲氧基-5-甲基-6-十異戊二烯基苯醌，藥用輔料為油相(注射用油)、乳化劑、輔助乳化劑、其它穩定劑、等滲調節劑、pH調節劑，凍干乳劑中含有凍干保護劑，其余為注射用水；1.輔酶Q10乳劑注射液，各組分的重量體積百分如下輔酶Q100.25％注射用油 1～20％乳化劑0.01～10％輔助乳化劑0.001～5％其它穩定劑0～2％等滲調節劑1～10％
其余為pH調節劑及注射用水。
所述的注射用油可為注射用大豆油和中鏈油(MCT)中的一種或其混合物；注射用油用量為1～20％(w/v)。
其優選用量為3％～10％(w/v)。
所述的乳化劑包括，但不限制于，磷脂，例如天然磷脂，如蛋黃卵磷脂、大豆磷脂；合成或半合成的磷脂，如磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油；膽甾醇和膽甾醇酯；非離子型表面活性劑，如HS15，吐溫類，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物如泊洛沙姆和poloxamines；或其混合物；優選的表面活性劑是磷脂或磷脂與上述一種或多種表面活性劑的混合物。
其優選用量為0.05％～3％(w/v)。
所述的輔助乳化劑，包括直鏈或支鏈C6～18的飽和或不飽和脂肪酸，如油酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸及其鹽類；氨基酸如賴氨酸、組氨酸、精氨酸；固醇類如膽固醇、膽酸及其鈉鹽、去氫膽酸及其鈉鹽、去氧膽酸及其鈉鹽、甘氨膽酸及其鈉鹽；非離子型表面活性劑，如吐溫和泊洛沙姆；磷脂酸和荷電脂質如PA、PG、DPPA、DPPG；多羥基類化合物如甘油、PVP。
其優選用量為0.005％～2％(w/v)。
其它穩定劑包括金屬離子螯合劑如乙二胺四乙酸鹽；抗氧化劑，如氮氣、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、維生素C、α-生育酚。這些穩定劑均可加入適量pH調節劑可以為鹽酸、氫氧化鈉、醋酸、醋酸鈉、磷酸鹽、檸檬酸、檸檬酸鹽的一種或幾種混合物，調節pH為3.0～9.0。
優選調節pH值為5.0～7.0。
等滲調節劑為多羥基類化合物如甘油、PVP、PEG、甘露醇、葡萄糖、山梨醇、木糖醇。
其優選用量為2％～5％(w/v)。
制備注射用乳劑方法包括如下步驟將注射用油預熱至40～80℃，然后加入藥物至溶解完全，再加入脂溶性乳化劑和脂溶性的輔料，在40～80℃時強烈攪拌使其溶解分散形成油相；在40～80℃時，將水溶性成份或表面活性劑加入注射用水中，攪拌溶解或分散后形成水相；在40～80℃時將水相加入油相，剪切使形成初乳，調節pH值5.0～7.0，過均質機，均質壓力在500～15000psi，將乳液反復均質，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑。
將上述得到的乳劑經微孔濾膜過濾，充氮氣，灌封，滅菌常規處理后，得輔酶Q10乳劑產品。
本發明還提供一種輔酶Q10注射用凍干乳劑，凍干乳劑凍干前的液態乳劑中各組分的重量體積百分含量如下輔酶Q100.25％～1.0％注射用油 1～20％乳化劑0.01～10％輔助乳化劑0.001～5％其它穩定劑0～2％凍干保護劑1～40％其余為pH調節劑及注射用水。所述的注射用油可為注射用大豆油和中鏈油(MCT)中的一種或其混合物；其優選用量為1％～8％(w/v)。
所述的乳化劑包括，但不限制于，磷脂，例如天然磷脂，如蛋黃卵磷脂；合成或半合成的磷脂，如磷脂酰膽堿，磷脂酰乙醇胺和磷脂酰甘油；非離子型表面活性劑，如HS15，吐溫類，聚氧丙烯-聚氧乙烯嵌段共聚物如泊洛沙姆和poloxamines；或其混合物；優選的表面活性劑是磷脂或磷脂與上述一種或多種表面活性劑的混合物。
其優選用量為0.1％～3％(w/v)。
所述的輔助乳化劑，包括直鏈或支鏈C6～18的飽和或不飽和脂肪酸，如油酸、棕櫚酸、肉豆蔻酸及其鹽類；氨基酸如賴氨酸、組氨酸、精氨酸；固醇類如膽固醇或其酯、膽酸及其鈉鹽、去氫膽酸及其鈉鹽、去氧膽酸及其鈉鹽、甘氨膽酸及其鈉鹽；非離子型表面活性劑，如吐溫和泊洛沙姆；磷脂酸和荷電脂質如PA、PG、DPPA、DPPG；多羥基類化合物如甘油、PVP等。
其優選用量為0.005％～2％(w/v)。
其它穩定劑包括金屬離子螯合劑，如乙二胺四乙酸鹽；抗氧化劑，如氮氣、亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、維生素C、α-生育酚。這些穩定劑均可加入適量。
pH調節劑為鹽酸、氫氧化鈉、醋酸、醋酸鈉、磷酸鹽、檸檬酸、檸檬酸鹽的一種或幾種混合物，調節pH為3.0～9.0。
優選調節pH值為5.0～7.0。
凍干保護劑為糖類物質或多羥基類物質；糖類選自葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇的一種或幾種。
其優選用量為2～30％，更優選用量為5～20％。
制備注射用凍干乳劑的方法包括如下步驟將制備注射用乳劑的步驟中得到的乳劑中加入適量凍干保護劑，溶解完全后無菌過濾，分裝。將分裝好的乳劑進行冷凍干燥，于-40℃預凍4～8h，升溫至-30℃～-25℃維持至少20h，真空減壓除去水分，升溫至-10℃～0℃，維持10～12h繼續真空減壓除去水分，再升溫至25℃～30℃，維持6～8h，繼續真空減壓除去水分，得干燥的凍干乳劑。
制得的凍干乳劑按需要量加水，重建后使其復原成乳劑，所制得乳劑的粒徑范圍是50nm～500nm，可供靜脈注射。
輔酶Q10的含量測定采用HPLC法。相關粒徑測定采用Brookhaven 90plusparticle size analyzer激光粒度測定儀測定。
根據本發明提供的輔酶Q10乳劑及其凍干乳劑的組方及其制備工藝，所制備的輔酶Q10乳劑及其凍干乳劑在高溫(40℃)及光照(4500LX±500)條件下均具有良好的穩定性；凍干乳劑在凍干前后粒徑無顯著變化，初步穩定性結果顯示具有良好穩定性。
具體實施例方式
實施例1<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，大豆油10g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，甘油2.5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下40℃下將輔酶Q10加入豆油中至溶解完全，再加入純化的蛋黃卵磷脂剪切攪拌均勻，制得油相；40℃下將甘油溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑389.5nm，pH 6.5，輔酶Q10含量為標示量的98.3％。
實施例2<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油10g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，甘油2.5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下40℃下將輔酶Q10加入中鏈油中至溶解完全，再加入純化的蛋黃卵磷脂剪切攪拌均勻，制得油相；40℃下將甘油溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑375.6nm，pH 6.3，輔酶Q10含量為標示量的98.5％。
實施例3<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油5g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.015g，甘油2.5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下60℃下將輔酶Q10加入中鏈油中至溶解完全，再加入純化的蛋黃卵磷脂剪切攪拌均勻，制得油相；60℃下將poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑235.6nm，pH 6.8，輔酶Q10含量為標示量的98.7％。
實施例4<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油10g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.025g，甘油2.5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下60℃下將輔酶Q10加入中鏈油中至溶解完全，再加入純化的蛋黃卵磷脂剪切攪拌均勻，制得油相；60℃下將poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑201.2nm，pH 6.4，輔酶Q10含量為標示量的98.1％。
實施例5<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，大豆油5g，中鏈油5g，純化的蛋黃卵磷脂1.5g，poloxamer188 0.025g，甘油2.5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下50℃下將大豆油和中鏈油混合均勻，加入輔酶Q10至溶解完全，制得油相；50℃下將純化的蛋黃卵磷脂poloxamer188、甘油溶解于注射用水中，加入純化的蛋黃卵磷脂，剪切攪拌均勻，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑214.2nm，pH 6.6，輔酶Q10含量為標示量的98.3％。
實施例6<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油5g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.015g，VE 0.05g，葡萄糖5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下40℃下將VE和中鏈油混合均勻，加入輔酶Q10至溶解完全，制得油相；40℃下將純化的蛋黃卵磷脂poloxamer188、葡萄糖溶解于注射用水中，加入純化的蛋黃卵磷脂，剪切攪拌均勻，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑231.1nm，pH 6.7，輔酶Q10含量為標示量的98.9％。
實施例7<1>輔酶Q10乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油5g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，poloxamer188 0.015g，油酸0.1g，甘油2.25g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10乳劑制備工藝如下60℃下將油酸加入中鏈油中混合均勻，加入輔酶Q10至溶解完全，再加入純化的蛋黃卵磷脂剪切攪拌均勻，制得油相；60℃下將poloxamer188和甘油溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌30min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑，0.22μm微孔濾膜過濾，分裝，充氮，100℃滅菌30min，得輔酶Q10乳劑產品。該乳劑平均粒徑211.3nm，pH 6.5，輔酶Q10含量為標示量的98.6％。
實施例8<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油10g，純化的蛋黃卵磷脂1.2g，膽固醇0.2g，Tween-80 0.2g，EDTA-2Na0.01g，蔗糖8g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下40℃下將純化的蛋黃卵磷脂和膽固醇剪切攪拌溶解于中鏈油中，再加入輔酶Q10溶解完全制得油相；將EDTA-2Na和Tween-80溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌10min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑蔗糖至溶解混合混合均勻，以0.22μm微孔濾膜過濾，然后將所得乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑50～400nm，可供注射使用。
實施例9<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油8g，注射用蛋黃卵磷脂2.0g，Poloxamer1.0g，油酸0.05g，EDTA-2Na 0.005g，蔗糖10g，甘露醇5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下50℃下將中鏈油、油酸混勻，再加入輔酶Q10溶解完全制得油相；將注射用蛋黃卵磷脂分散于含有EDTA-2Na和Poloxamer的注射用水中，制得水相；40℃下將水相加入到油相中剪切10min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑蔗糖和甘露醇至溶解混合均勻，以0.22μm微孔濾膜過濾，然后將所得乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑100～350nm，可供注射使用。
實施例10<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，豆油15g，純化的大豆卵磷脂2.4g，油酸0.05g，EDTA-2Na0.005g，乳糖10g，甘油2.25g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下40℃下將純化的大豆卵磷脂分散于豆油中，再加入油酸、輔酶Q10混合均勻制得油相；將甘油和EDTA-2Na溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中剪切10min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化2次，再調節均質機壓力為10000～15000psi，反復均化3～5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑乳糖至溶解完全得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑80～350nm可供注射使用。
實施例11<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q101g，豆油12g，注射用蛋黃卵磷脂0.6g，poloxamer 2g，甘油0.5g，海藻糖8g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下40℃下將豆油和輔酶Q10混合均勻制得油相；將注射用蛋黃卵磷脂分散于含poloxamer的40℃注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌15min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化2次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3次得均勻乳劑。加入凍干保護劑海藻糖至溶解完全得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑100～400nm，可供注射使用。
實施例12<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，豆油2g，純化的大豆卵磷脂2.0g，DPPG0.1g，poloxamer1.0g，HS-150.5g，α-生育酚0.02g，PVPC300.5g，蔗糖20g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下40℃下將純化的大豆卵磷脂和DPPG分散于豆油中，加入α-生育酚，再加入輔酶Q10混合均勻制得油相；將PVPC30、poloxamer和HS-15溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌10min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化3次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化3～5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑蔗糖至溶解完全得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑50～300nm可供注射使用。
實施例13<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，大豆油6g，純化的大豆卵磷脂1.8g，poloxamer0.5g，油酸0.03g，PVPC300.5g，EDTA-2Na0.01g，甘露醇5g，蔗糖5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下50℃下將純化的大豆卵磷脂分散于豆油中，加入油酸，再加入輔酶Q10混合均勻制得油相；將poloxamer、PVPC30和EDTA-2Na溶解于40℃的注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌15min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化2次，再調節均質機壓力為10000～15000psi，反復均化4次得均勻乳劑。加入凍干保護劑甘露醇和蔗糖至溶解完全得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑70～360nm，可供注射使用。
實施例14<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.25g，中鏈油3g，tween-80 0.5g，膽酸鈉0.005g，EDTA-2Na0.005g，甘油1.0g，蔗糖10g，甘露醇5g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下60℃下將輔酶Q10加入中鏈油中混合均勻制得油相；將tween-80、膽酸鈉、甘油和EDTA-2Na溶解于注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中攪拌15min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化2次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑蔗糖和甘露醇至溶解完全得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑100～240nm可供注射使用。
實施例15<1>輔酶Q10凍干乳劑的成分為輔酶Q100.5g，中鏈油8g，純化的蛋黃卵磷脂1.8g，poloxamer1g，油酸0.05g，α-生育酚0.02g，EDTA-2Na0.005g，蔗糖10g，乳糖2g，其余為注射用水，共100ml。
<2>輔酶Q10凍干乳劑制備工藝如下60℃下將中鏈油、油酸、α-生育酚混合均勻，再加入輔酶Q10制得油相；將純化的蛋黃卵磷脂分散于含poloxamer和EDTA-2Na的注射用水中，制得水相；將水相加入到油相中剪切10min得初乳，調節pH值5.5～7.0，將初乳過高壓均質機，首先調節均質機壓力為5000psi反復均化2次，再調節均質機壓力為15000psi，反復均化5次得均勻乳劑。加入凍干保護劑蔗糖和乳糖至溶解完全后得均勻乳劑，過0.22μm微孔濾膜，然后將所得均勻乳劑分裝，經冷凍干燥除去水分，充氮氣，得輔酶Q10凍干乳劑。
<3>制得的凍干乳按需要量加入滅菌注射用水，水合振蕩后，復原成乳劑，粒徑100～350nm可供注射使用。
實施例16依實施例3制備輔酶Q10乳劑，模擬上市包裝，置于盛有飽和氯化鈉溶液(RH75％±5％)的干燥器內，再放置于溫度為40℃±2℃的恒溫箱中，分別于1、2、3、6月取樣，考察樣品的外觀、pH值、有關物質、乳粒粒徑及含量變化。結果見表1表1 輔酶Q10乳劑加速留樣測定結果

實施例17依實施例3制備輔酶Q10乳劑，模擬上市包裝條件下，與自制溶液型注射劑產品同時置溫度25℃±2℃，相對濕度60％±10％，強光照射4500±500LX的條件下放置，分別于0、5和10天取樣測定藥物含量，結果見表2。
表2 輔酶Q10乳劑光照實驗結果

實驗結果表明，乳劑比溶液型注射液產品具有更好的光穩定性。
實施例18依實施例15制備輔酶Q10凍干乳，模擬上市包裝條件下，在溫度25℃±2℃，相對濕度60％±10％的條件下放置，分別于0、1、2、3月取樣，考察樣品的外觀、pH值、有關物質、乳粒粒徑及含量變化。結果見表3。
表3 輔酶Q10凍干乳劑長期留樣考察測定結果

實施例19
依實施例3制備輔酶Q10乳劑，規格2ml:5mg。考察其血管刺激性。取健康家兔4只，雌雄兼用。用無菌操作方法于左耳注射氯化鈉注射液1.0ml/kg，于右耳耳緣靜脈注射供試品溶液1.0ml/kg，每天一次，連續五天。給藥后肉眼觀察給藥部位的靜脈血管及周圍的紅腫情況。于末次注射24小時后將動物放血處死，分別距注射部位進針點2cm處向心端剪下耳緣約2cm作為標本，標本福爾馬林固定，常規組織切片，觀察血管周圍變化、血管壁是否損傷、內皮細胞有無脫落、有無血栓形成以及其他病理變化。
試驗結果表明家兔左右耳肉眼觀察注射部位均無異常，血管無充血，周圍組織無水腫等現象。病理切片觀察結果表明，給予氯化鈉注射液的4例耳緣和給予輔酶Q10注射乳的4例耳緣均未見血管壁擴張和水腫，血管周圍未見出血和炎細胞浸潤，且兩組未見明顯差異。提示本品對家兔血管沒有明顯的刺激作用。
實施例20依實施例3制備輔酶Q10乳劑，規格2ml:5mg。考察其肌肉刺激。取健康家兔4只，雌雄兼用。以無菌操作方法分別在其左腿股四頭肌肉內滅菌氯化鈉注射液1.0ml/只；右腿股四頭肌肉內注射供試品溶液1.0ml/只。注射后48小時處死動物，解剖取出股四頭肌，縱向切開，觀察注射局部刺激反應，按附表換算成相應的反應分值；同時標本用福爾馬林固定，常規組織切片，觀察注射部位肌肉組織的變化。
試驗結果表明兩組家兔經肌肉注射后，家兔健康正常，腿部活動正常。家兔處死取出股四頭肌后，肉眼觀察給藥部位，給予氯化鈉注射液的4例股四頭肌刺激反應級數分別為0、0、0、0級；給予輔酶Q10注射乳的4例股四頭肌刺激反應級數分別為0、1、1、0級。病理切片結果表明，其中給予輔酶Q10注射乳的4例股四頭肌有2例肌間質可見輕微充血，其余2例和給予氯化鈉注射液的4例股四頭肌肌纖維均無水腫、壞死；肌間質無出血、無炎細胞浸潤。提示本品對家兔股四頭肌有輕微的刺激作用。
實施例21依實施例3制備輔酶Q10乳劑，規格2ml:5mg?？疾炱淙苎?。取健康家兔一只，從動脈取血約20ml，放置于盛有玻璃珠的200ml的燒杯中，振搖5分鐘，除去纖維蛋白原，使成脫纖血。加約5倍量的氯化鈉注射液洗滌，搖勻，每次2000r/min離心5分鐘，除去上清液，如此反復，直至上清液不顯紅色透明為止。
取離心至上清液無色后的紅細胞2ml，加氯化鈉注射液至100ml，即得2％的兔紅細胞混懸液。
取試管7支，按下表配比量依次加入2％兔紅細胞混懸液和氯化鈉注射液，混勻后，于37℃恒溫30min，然后分別加入不同量的上述藥液(第6管為陰性對照管，第7管為陽性對照管)，搖勻，置37℃恒溫箱中。開始每隔15min觀察一次，1h后，每隔1h觀察一次，共4h。

結果判定全溶血溶液澄明紅色，管底無細胞殘留；部分溶血溶液澄明紅色或棕色，管底有少量紅細胞殘留；無溶血，紅細胞全部下沉，上層液體無色澄明；凝集，雖無溶血，但出現紅細胞凝集，振搖后不分散。樣品2000r/min離心5分鐘，在波長為545nm處比色測定吸收度，計算得溶血率。
一般以0.3ml注射劑(第3管)，在2小時內不產生溶血作用者認為可供注射用。如有紅細胞凝集現象，可按下法進一步判定是真凝集還是假凝集。若凝聚物在試管震蕩后又能均勻分散，或凝聚物放在載玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴氯化鈉注射液，在顯微鏡下觀察。凝集紅細胞能被沖散者為假凝聚，供試品可供臨床使用。若凝聚物不能搖散或有玻片上不被沖散者為真凝聚，供試品不宜供臨床使用。
肉眼觀察結果如下

附-表示無溶血或凝集，+表示有溶血或凝集反應比色測定結果如下本品離心后，仍為乳白色液體，樣品管下面均少量紅細胞殘留，在545nm波長處測得上面乳白色的液體的各管的吸收值均大于2，且吸收值相差不大，即乳白色液體對測量結果有干擾。
上述結果表明，輔酶Q10注射乳無溶血和凝集現象。
權利要求
1.一種注射用輔酶Q10乳劑，各組分的重量體積百分如下輔酶Q10 0.25％注射用油1～20％乳化劑 0.01～10％輔助乳化劑 0.001～5％其它穩定劑 0～2％等滲調節劑 1～10％其余為PH調節劑及注射用水；其中所述的注射用油可為注射用大豆油和中鏈油(MCT)中的一種或其混合物；所述的乳化劑包括磷脂，天然或合成的磷脂，膽甾醇和膽甾醇酯，非離子型表面活性劑，或其混合物；所述的輔助乳化劑，包括直鏈或支鏈C6～C18的飽和或不飽和脂肪酸，氨基酸，固醇類，非離子型表面活性劑，磷脂酸和荷電脂質，多羥基類化合物；其它穩定劑包括金屬離子螯合劑，抗氧化劑。
2.根據權利要求1所述的注射用輔酶Q10乳劑，其特征在于注射用油的優選用量為3％～10％(w/v)。
3.根據權利要求1所述的注射用輔酶Q10乳劑，其特征在于乳化劑的優選用量為0.05％～3％(w/v)。
4.根據權利要求1所述的注射用輔酶Q10乳劑，其特征在于輔助乳化劑的優選用量為0.005％～2％(w/v)。
5.制備權利要求1至4之一所述的注射用輔酶Q10乳劑的方法，包括如下步驟將注射用油預熱至40～80℃，然后加入藥物至溶解完全，再加入脂溶性乳化劑和脂溶性的輔料，在40～80℃時強烈攪拌使其溶解分散形成油相；在40～80℃時，將水溶性成份或表面活性劑加入注射用水中，攪拌溶解或分散后形成水相；在40～80℃時將水相加入油相，剪切使形成初乳，調節pH值5.0～7.0，過均質機，均質壓力在500～15000psi，將乳液反復均質，測定乳劑粒徑，得到粒徑＜500nm且分散均勻的乳劑。
6.一種輔酶Q10注射用凍干乳劑，凍干乳劑凍干前的液態乳劑中各組分的重量體積百分含量如下輔酶Q10 0.25～1.0％注射用油 1～20％乳化劑0.01～10％輔助乳化劑0.001～5％其它穩定劑0～2％凍干保護劑1～40％其余為PH調節劑及注射用水；其中所述的注射用油可為注射用大豆油和中鏈油(MCT)中的一種或其混合物；所述的乳化劑包括磷脂，天然或合成的磷脂，非離子型表面活性劑，或其混合物；所述的輔助乳化劑，包括直鏈或支鏈C6～C18的飽和或不飽和脂肪酸，氨基酸，膽酸類及其鈉鹽，非離子型表面活性劑，磷脂酸和荷電脂質，多羥基類化合物；其它穩定劑包括金屬離子螯合劑，抗氧化劑；凍干保護劑為糖類和多羥基類物質；糖類選自葡萄糖、右旋糖酐、乳糖、蔗糖、麥芽糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇的一種或幾種。
7.根據權利要求6所述的注射用凍干乳劑，其特征在于注射用油的優選用量為1％～8％(w/v)。
8.根據權利要求6所述的注射用凍干乳劑，其特征在于乳化劑的優選用量為0.1％～3％(w/v)。
9.根據權利要求6所述的注射用凍干乳劑，其特征在于輔助乳化劑的優選用量為0.005％～2％(w/v)。
10.根據權利要求6所述的注射用凍干乳劑，其特征在于凍干保護劑的優選用量為2～30％(w/v)。
11.制備權利要求6-10之一的注射用凍干乳劑的方法，包括如下步驟將制備注射用乳劑的步驟中得到的乳劑中加入適量凍干保護劑，溶解完全后無菌過濾，分裝；將分裝好的乳劑進行冷凍干燥，于-40℃預凍4～8h，升溫至-30℃～-25℃維持至少20h，真空減壓除去水分，升溫至-10℃～0℃，維持10～12h繼續真空減壓除去水分，升溫至25℃～30℃，維持2～4h，繼續真空減壓除去水分，得干燥的凍干乳劑。
全文摘要
本發明公開了一種新的藥物組合物——輔酶Q
文檔編號A61P37/00GK101066260SQ20061013670
公開日2007年11月7日 申請日期2006年11月17日 優先權日2006年11月17日
發明者姚瑤, 陶昱斐 申請人:姚瑤, 陶昱斐