專利名稱：一種采用膜分離技術分離純化荷葉提取物的制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種從植物中提取分離藥用活性成分的綠色化學制備方法，更具體涉及一種采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物及其制備方法與用途。
背景技術：
睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn)，為一種藥食兩用植物，在我國南北方均有種植，種植歷史長達3000多年，目前盛產于福建、江西、湖北、湖南和浙江等省份，尤其以福建建寧出產的白蓮(建蓮)和湖南洞庭湖地區出產的紅蓮(湘蓮)聞名遐爾于海內外。荷葉(Nelumbo nucifera leaf)為中國蓮的葉子，又名蓮葉或藕葉，入選中國衛生部“既是食品，又是藥品”的植物名錄，民間廣泛用作食物和藥物。
在中國，荷葉資源豐富，價廉易得，藥效明確，為不可多得的可以綜合開發利用的大宗天然藥食兩用植物資源。但在產地，大量荷葉被作為廢棄物而未被合理利用，造成資源的極大浪費，也帶來一定程度的環境污染。
傳統醫學認為，荷葉性味寒，具有清暑利濕、減肥降脂、清心去熱、止血利水的活性，可開發制成袋泡茶、飲料、沖劑、膠囊等保健食品，臨床醫學上也常以粗加工的復方制劑用于肥胖癥和高脂血癥的治療，療效明顯，但較少對諸如荷葉黃酮和荷葉生物堿等有效部位群進行深入研究。
現代藥理研究表明，荷葉所含的黃酮和生物堿等成分的生物活性較高，為荷葉中主要的藥用活性成分，含量可分別達1.5％和0.3％。荷葉黃酮和荷葉生物堿具有明顯的減肥、降脂、抑菌、抗病毒、解毒、戒毒、抗氧化、抗衰老等功能[孔文琦等，《中藥研究與信息》，2005，7(6)22-24]。這些研究成果將為荷葉在食品、藥品中的應用提供科學依據。研究荷葉黃酮和荷葉生物堿的制備方法與用途，對于荷葉的精深加工和系列產品開發具有一定的指導意義。
目前，提取荷葉黃酮的主要方法有水提取法[陳海光等，《食品科學》，2002，23(1)69-72]、水提取后采用大孔樹脂富集吸附法[蔡為榮等，《江蘇食品與發酵》，2002，24(4)1-5；趙駿等，《中藥材》，2005，28(9)832-834]等。提取荷葉生物堿常用的方法有酸性水溶液提取法[陳海光等，《食品與機械》，2001，17(5)16-17；蔣益虹，《浙江大學學報(農業與生命科學版)》2004，30(5)519-523；]、酸性水提取后采用大孔樹脂富集吸附法[趙駿等，《中藥材》，2003，26(9)669-670]。
由于荷葉化學成分復雜，既含有易溶于乙醇等極性溶劑的生物堿、黃酮等醇溶性藥用活性成分，也含有易溶于水或緩沖液的蛋白質、酶、多糖等水溶性生物大分子雜質和鞣質、有機酸、低聚糖等水溶性生物小分子雜質，甚至還含有易溶于石油醚等非極性溶劑的葉綠素、脂類、樹膠等脂溶性雜質成分。
采用水提取方法制備的荷葉提取物，雖然含有荷葉生物堿和荷葉黃酮等主要藥用活性成分，但是也有大量的蛋白質、多糖、鞣質、葉綠素和有機酸等雜質成分存在，產品明顯存在易吸濕、保存困難、生物堿和黃酮的純度不高、藥效不明顯、產品的品質和市場競爭力不足等缺陷。
水提取后采用大孔樹脂富集吸附法，雖然有助于荷葉提取物中生物堿和黃酮的純度提高，但是由于荷葉提取物中尚存的蛋白質、多糖以及其它生物大分子雜質，將嚴重影響大孔吸附樹脂對荷葉生物堿和荷葉黃酮的分離純化效率和單位樹脂飽和吸附量，甚至導致大孔吸附樹脂的不可再生，將嚴重影響大孔吸附樹脂的使用壽命，導致荷葉提取物產品收率較低、制備成本居高不下。
膜分離技術是國際公認的21世紀最有發展前途的前沿技術，已廣泛應用于生物、食品、動植物藥物的分離純化。膜分離技術是根據分離膜孔徑大小或者所截留的物質分子量大小的差異，以壓力為推動力，依靠膜的選擇性透過作用，使物質透過膜或被膜截留，從而達到不同物質的分離、純化與濃縮目的的一種技術，其實質近似于篩分過程。
與傳統的分離技術相比，膜分離技術具有下列優點①膜分離過程不發生相變化，與有相變化的分離法相比，能耗要低。②膜分離過程是在常溫下進行，特別適用于對蛋白質、酶、多糖、藥物等熱敏性物質的分離、濃縮與富集。③膜分離技術不僅適用于從病毒、細菌到微粒的廣泛分離的范圍，而且還適用于許多特殊溶液體系的分離，如溶液中大分子與小分子、有機物和無機物等的分離。④由于只是用壓力作為膜分離的推動力，膜分離裝置簡單，操作容易，易自控、維修。本發明采用膜分離技術可高效率、低能耗地去除荷葉粗提物中蛋白質、多糖等大分子雜質成分，能達到明顯提高荷葉提取物中生物堿和黃酮等小分子藥用活性成分的純度和品質的目的。

發明內容
本發明的目的之一在于提供一種采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，該方法不僅有利于含有荷葉黃酮和荷葉生物堿等主要藥用活性成分的粗提物的進一步純化和保存，而且工藝簡單便于實施。
本發明的目的之二在于將所制備的荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物，進一步制成臨床上可適用的任何一種具有減肥、降脂、抑菌、抗病毒或者抗氧化作用的口服藥劑，如膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
本發明的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法是這樣實現的以水提取或極性有機溶劑提取的荷葉粗提物為原料，加適量水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
上述膜分離除雜過程可選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
上述膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
本發明所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，所述的水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經減壓回收溶劑，真空濃縮成荷葉粗提物。
本發明所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，所述的極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑，真空濃縮成荷葉粗提物。
上述極性有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優先選用甲醇或丙酮。這主要基于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮等極性有機溶劑的提取效果相當，但相對于其它極性有機溶劑而言，甲醇或丙酮的沸點更低、能耗更小，能顯著降低產品的制備成本。
本發明制備工藝的主要優點之一在于通過膜分離技術能有效去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質，從而使含有荷葉黃酮和荷葉生物堿等主要藥用活性成分的荷葉粗提物得到進一步的純化，并有利于該制品的保存。
本發明制備工藝的主要優點之二在于通過膜分離技術能有效去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質，從而有利于后續工藝采用大孔吸附樹脂或聚酰胺進一步分離純化荷葉黃酮和荷葉生物堿等主要藥用活性成分，將明顯提高大孔吸附樹脂或聚酰胺對荷葉黃酮和荷葉生物堿的分離純化效率，將明顯提高單位樹脂或聚酰胺的飽和吸附量，將顯著延長大孔吸附樹脂或聚酰胺的使用壽命，能極大提高產品的收率和品質，顯著降低產品的制備成本。
本發明制備工藝的主要優點之三在于組合采用水提取或極性有機溶劑提取、膜分離除雜的工藝，不僅能工業化生產荷葉粗提物或膜分離純化后的荷葉提取物，用于后續的減肥、降脂功能產品的制備，而且工業化生產過程產生的荷葉廢渣經簡單處理后可進一步用于制備荷葉膳食纖維添加劑產品，而且富含蛋白質和多糖等大分子雜質的膜分離除雜后的濃縮液經簡單發酵處理后可進一步用于制備荷葉肥料或荷葉飼料添加劑產品，從而能真正地安全、簡便、合理、經濟地實現荷葉的全組分綜合利用和系列產品的工業化生產，充分體現出綠色化學生產的理念和循環經濟的策略，具有理論新穎、技術合理、操作安全、工藝簡便、經濟可行、環境友好等優點。
本發明制備工藝的主要優點之四在于采用中藥現代化生產技術提取荷葉主要藥用活性成分制成國際通行的中藥提取物，具有現代中藥產品的“三高”、“三小”和“三便”等優點，能適應和滿足現代中醫臨床用藥需求，符合國家倡導的中藥現代化及國際化的產業政策。
具體實施例方式
本發明采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，包括荷葉粗提物的水提取或極性有機溶劑提取步驟，其特征在于以水提取或極性有機溶劑提取的荷葉粗提物為原料，加適量水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經減壓回收溶劑，真空濃縮成荷葉粗提物。
極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的終濃度為30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑，真空濃縮成荷葉粗提物。
上述極性有機溶劑可以是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優先選用甲醇或丙酮。這主要基于甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮等極性有機溶劑的提取效果相當，但相對于其它極性有機溶劑而言，甲醇或丙酮的沸點更低、能耗更小，能顯著降低產品的制備成本。
膜分離除雜的荷葉提取物的制備方法是加適量水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
上述膜分離除雜過程可選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
上述膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
本發明荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物的用途是可按照常規的制劑方法制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑。所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
本發明各制備物的理化參數測定方法如下(1)荷葉黃酮的含量測定采用高效液相色譜法，以槲皮素為對照。色譜條件色譜柱選用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，預柱C18(3.9mm×15mm)，流動相為甲醇∶0.2％磷酸水溶液(45∶55)，流速1.0mL/min，柱溫34℃，檢測波長365nm，進樣量20μL。樣品的測定取待測液4mL(或待測物粉末0.1g，溶于4mL溶劑中)，加甲醇6mL及12mol/L鹽酸1mL，搖勻后置80℃水浴回流水解1h。而后將水解液轉入50mL容量瓶中，用50％甲醇稀釋至刻度，作為HPLC待測液。HPLC測定過程中采用外標法定量，以槲皮素為對照，計算水解后各苷元的含量，統一用因子2.51計算荷葉黃酮含量。
(2)荷葉黃酮的定性判斷采用鋁鹽比色法，以蘆丁為對照。將試樣溶液稀釋到一定的倍數，取1mL到試管中，加入0.1mL 5％NaNO2溶液，搖勻，5min后加入0.1mL 10％Al(NO3)3溶液，6min后再加入1mL 1mol/L NaOH溶液，混勻，10min后若產生紅色或紫紅色表明存在荷葉黃酮，以試劑作為空白。
(3)荷葉生物堿的含量測定采用高效液相色譜法，以荷葉堿為對照。色譜條件為色譜柱選用Waters Nova-Pak C18柱(Φ3.9×15mm，4μm)，預柱C18(3.9mm×15mm)，流動相為甲醇∶H2O∶二乙胺(75∶25∶0.01，pH值9.0～10.5)，流速1.0mL/min，柱溫34℃，檢測波長270nm，進樣量20μL。
(4)荷葉生物堿的的定性判斷采用碘-碘化鉀比色法，以荷葉堿為對照。將試樣溶液稀釋到一定的倍數，取1mL到試管中，加入1～2滴碘-碘化鉀試劑溶液，搖勻，放置5min，若產生棕色或褐色沉淀表明存在荷葉生物堿，以試劑作為空白。
(5)多糖含量的測定采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖或D-半乳糖為對照。
(6)蛋白質含量的測定采用FoLin-酚法測定，以小牛血清白蛋白為對照。
本發明口服藥劑制備方法如下(1)噴霧干燥條件為進料液濃度10～20波美度(60℃)，PG-5型噴霧干燥機進口溫度160～250℃，出口溫度60～110℃，離心轉頭工作壓力1.6～3.0kgf/cm2。
(2)膠囊劑制備按照常規的制劑方法，選擇1號硬膠囊，每粒內容物裝填量約0.30g，于NJP-1000B型全自動硬膠囊充填機上進行藥粉充填，于JPB-25IIB型平板式自動泡罩包裝機上進行鋁箔泡罩包裝，可制成臨床適用的荷葉提取物口服膠囊劑。
(3)滴丸劑制備按照常規的制劑方法，調整TZDW-1型通用滴丸機的溫度控制系統，使滴頭溫度保持在50～85℃，液體石蠟等冷卻劑的溫度保持在-4～40℃；取荷葉提取物及其1～9倍重量的甘油明膠，置于加熱器中，在攪拌條件下加熱制成混懸液，將其置于滴丸機的滴頭罐內，通過滴頭滴入冷卻劑中，由滴丸機出口將收縮成型的滴丸取出，去掉表面的冷卻劑，干燥成荷葉提取物口服滴丸劑。
(4)顆粒劑制備按照常規的制劑方法，于SHK-220型高效濕法混合制粒機上造粒，于JXD-30A型顆粒自動包裝機上進行包裝，可制成臨床適用的荷葉提取物口服顆粒劑。以下進一步闡述本發明的部分實施例，旨在詳細描述本發明的制備方法，但不限于此。
實施例1以福建省建寧產荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的40％甲醇水溶液，于63℃條件下提取3次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為96.7％，荷葉生物堿的提取率為95.9％。
接著，先將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05，然后采用截留分子量為10000聚砜膜，在1.0MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為95.2％，荷葉生物堿回收率為95.6％，蛋白質去除率為96.1％，多糖去除率為96.9％。
實施例2將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的30％甲醇水溶液，于50℃條件下提取2次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為93.4％，荷葉生物堿的提取率為92.3％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.18，然后采用截留分子量為60000的聚偏氟乙烯膜，在0.6MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為95.8％，荷葉生物堿回收率為95.9％，蛋白質去除率為94.6％，多糖去除率為96.2％。
實施例3將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末17倍干重(W/W)的65％甲醇水溶液，于80℃條件下回流提取1小時，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為92.7％，荷葉生物堿的提取率為91.2％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.2MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖等大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為96.2％，荷葉生物堿的回收率為96.4％，蛋白質去除率為93.1％，多糖去除率為95.4％。
實施例4以福建省建寧產荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的65％乙醇水溶液，于80℃條件下提取1小時，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為92.1％，荷葉生物堿的提取率為90.4％。
先將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.15，然后采用截留分子量為80000聚偏氟乙烯膜，在0.4MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為96.0％，荷葉生物堿回收率為96.1％，蛋白質去除率為94.1％，多糖去除率為95.8％。
實施例5將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末30倍干重(W/W)的自來水，于50℃條件下提取2次，每次2小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為92.1％，荷葉生物堿的提取率為90.5％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的無機陶瓷膜，在0.2MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為96.3％，荷葉生物堿的回收率為96.2％，蛋白質去除率為93.4％，多糖去除率為95.3％。
實施例6將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的38％乙醇水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為94.7％，荷葉生物堿的提取率為95.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05，然后采用截留分子量為20000的聚砜膜，在0.8MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為95.4％，荷葉生物堿回收率為95.9％，蛋白質去除率為94.8％，多糖去除率為96.4％。
實施例7
以福建省建寧產荷葉為原料，將鮮荷葉水洗、干燥(風干、烘干或曬干均可)、粉碎、過16～20目篩得荷葉粉末，將3.0kg荷葉粉末放入提取罐中，用荷葉粉末14倍干重(W/W)的30％丙酮水溶液，于50℃條件下提取3次，每次3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為94.6％，荷葉生物堿的提取率為93.8％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.30，然后采用膜孔徑為0.22μm的聚偏氟乙烯膜，在0.3MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為96.2％，荷葉生物堿回收率為96.3％，蛋白質去除率為93.6％，多糖去除率為95.1％。
實施例8將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末10倍干重(W/W)的65％丙酮水溶液，于80℃條件下回流提取2次，每次1小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為93.2％，荷葉生物堿的提取率為92.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.21，然后采用截留分子量為50000的聚砜膜，在0.5MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為95.2％，荷葉生物堿回收率為96.2％，蛋白質去除率為95.0％，多糖去除率為96.1％。
實施例9將16～20目荷葉粉末2.5kg放入提取罐中，用荷葉粉末20倍干重(W/W)的自來水，于80℃條件下提取2小時，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。經測定，荷葉黃酮的提取率為90.8％，荷葉生物堿的提取率為90.1％。
將荷葉粗提物加適量水攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.16，然后采用截留分子量為100000的無機陶瓷膜，在0.3MPa下進行膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。經測定，荷葉黃酮回收率為96.0％，荷葉生物堿回收率為96.2％，蛋白質去除率為94.1％，多糖去除率為95.7％。
關于本發明荷葉提取物用途的實施例將前述實施例1制備的荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物分別進行噴霧干燥，然后直接充填制成臨床使用的口服膠囊，進行減肥降脂動物藥效學評價。
1材料雌性小鼠(體重14～16g)，由福建醫科大學動物中心提供。基礎飼料，購自福建醫科大學動物中心。高脂飼料(基礎飼料92.5％、食鹽2％、蛋黃粉2％、豬油3％、膽固醇0.5％)，本所自制。總膽固醇(TCH)試劑盒(CHOD-PAP法)，浙江東歐生物工程有限公司。甘油三酯(TG)試劑盒(GPO-PAP法)，浙江東歐生物工程有限公司。丙二醛(MDA)試劑盒(TBA法)，南京建成生物工程研究所。膽固醇，上海試一化學試劑有限公司。
2實驗方法將小鼠以基礎飼料飼養5天后隨機分為A、B、C、D組，每組10只，小鼠自由進食和飲水。其中給藥組A為荷葉粗提物，給藥組B為膜分離純化后的荷葉提取物，C組作為高脂陽性對照組，D組作為正常陰性對照組。A、B、C組采用高脂飼料造模，D組以基礎飼料飼養，各組小鼠均在飼養7天后開始給藥，各藥物均配成1g/mL，給藥量均為0.6ml/只·天，其中C組和D組改成生理鹽水。分別給藥42天，禁食12h后摘眼球取血并解剖，進行各項生化指標的測定。TCH、TG和MDA均用相應的試劑盒并嚴格按照說明書測定。數據用SPSS軟件進行，采用Independent-Sample T Test方法對各組數據進行均值、標準誤計算以及顯著性檢驗。
3降脂動物藥效學結果不同提取物對小鼠血漿總膽固醇、甘油三酯和MDA含量的影響見表1。
給藥42天后，高脂陽性對照組小鼠血漿的膽固醇比正常陰性對照組顯著提高了96.7％，說明本實驗條件下小鼠高膽固醇模型已建模成功。同時發現，給藥組A和B的小鼠血漿膽固醇含量均顯著低于高脂陽性對照組，A組膽固醇含量顯著減少了34.3％，B組膽固醇含量也顯著減少25％以上，說明不同純度的荷葉提取物樣品均有明顯的降脂、降膽固醇效果。
表1不同純度的荷葉提取物對小鼠血漿總膽固醇、甘油三酯和丙二醛含量(X±SD)的影響n＝10

A荷葉粗提物給藥組；B膜分離純化后的荷葉提取物給藥組；C高脂陽性對照組；D正常陰性對照組。
與高脂陽性對照組比較*P＜0.05；**P＜0.01；***P＜0.001。
本發明構思新穎，工藝簡單，提取效率高，生產成本低，而且所制的荷葉提取物具有現代中藥產品的“三高”、“三小”和“三便”等優點，能適應和滿足現代中醫臨床用藥需求，符合國家倡導的中藥現代化及國際化的產業政策，具有較大的推廣意義。
權利要求
1.一種采用膜分離技術分離純化荷葉提取物的制備方法，包括荷葉粗提物的極性有機溶劑提取或水提取步驟，其特征在于以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
2.根據權利要求1所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于所述的極性有機溶劑提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～20倍荷葉干重(W/W)的30～65％的極性有機溶劑水溶液，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.05～-0.09MPa、50～65℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
3.根據權利要求1所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于所述的水提取的荷葉粗提物的制備方法是以荷葉為原料，采用10～30倍荷葉干重(W/W)的水，于50～80℃條件下提取1～3次，每次1～3小時，合并提取液，過濾，濾液在-0.06～-0.095MPa、50～80℃條件下，經減壓回收溶劑、真空濃縮成荷葉粗提物。
4.根據權利要求1所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于所述的膜分離除雜方法是以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，使懸浮液比重達到1.05～1.30，在0.2～1.0MPa下經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物。
5.根據權利要求1、2或4所述的荷葉提取物的制備方法，其特征在于所述極性有機溶劑是甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、正丁醇或丙酮中的一種或幾種混合溶劑，優先選用甲醇或丙酮。
6.根據權利要求1或4所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于膜分離除雜過程選用10000截留分子量～0.22μm膜孔徑的分離膜。
7.根據權利要求1或4所述的采用膜分離技術分離純化的荷葉提取物的制備方法，其特征在于膜分離除雜過程的分離膜材料可以是無機陶瓷膜、聚砜膜或聚偏氟乙烯膜中的一種或幾種混合膜材料，優先選用聚砜膜或聚偏氟乙烯膜。
8.一種如權利要求1、2、3或4所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
9.根據權利要求8所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
10.根據權利要求5所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
11.根據權利要求10所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
12.根據權利要求6所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
13.根據權利要求12所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
14.根據權利要求7所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途。
15.根據權利要求14所述的荷葉提取物用于制備具有減肥、降脂、抑菌、解毒、戒毒、抗病毒或抗氧化作用的口服藥劑的用途，其特征在于所述的口服藥劑為膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。
全文摘要
本發明提供一種采用膜分離技術分離純化荷葉提取物的制備方法與用途。它包括一種采用膜分離技術分離純化荷葉提取物的制備方法，其特征在于以極性有機溶劑提取或水提取的荷葉粗提物為原料，加水，將荷葉粗提物攪拌成懸浮液，經膜分離除雜，去除蛋白質和多糖以及其它大分子雜質后即得膜分離純化后的荷葉提取物；該法所制荷葉粗提物、膜分離純化后的荷葉提取物有制成具有減肥、降脂、抑菌、抗病毒或者抗氧化作用的口服藥劑的用途，如膠囊劑、顆粒劑、片劑、口服液、糖漿劑、微囊劑、散劑、滴丸劑或丸劑等。本發明構思新穎，工藝簡單，提取效率高，生產成本低，所制提取物具有現代中成藥“三高”、“三小”和“三便”等優點，具有較大推廣性。
文檔編號A61K9/50GK1957988SQ20061014195
公開日2007年5月9日 申請日期2006年9月23日 優先權日2006年9月9日
發明者陳劍鋒, 陳浩, 郭養浩 申請人:福州大學