專利名稱：一種原人參二醇衍生物的抗腫瘤用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及一種原人參二醇衍生物25hdt，更具體地，是關 于原人參二醇衍生物25hdt在制備治療癌癥的藥物方面的應用。
背景玟術
癌癥是殘害人類生命的世界第二大疾病，死亡率僅次于心腦血管疾病，是人類死亡的 最主要因素之一。在全世界60億人口中，目前約有各類癌癥患者3500萬。在全世界范圍 內，癌癥每年造成的死亡人數約為630萬人；另據國際權威調査機構統計，到2020年癌 癥死亡人數將翻一番，達到1000萬人以上。
近年來，工業大生產導致人類生存環境不斷惡化，化學、病毒、物理輻射等各種致癌 因素逐漸增多，我國的癌癥發病率也逐年上升。據國家衛生部衛生統計信息中心報道，1999 年全國城市惡性腫瘤患病率男性為169.58人/萬人、女性為110.05人/萬人、大城市中患 病率為148.90人/萬人、中小城市為110.70人/萬人。按我國13億人口計算，每年惡性腫 瘤的新發病例達200萬人。
目前，治療癌癥的常用方法有手術治療、放療、化療和生物治療等。經過50、 60年 代主要依靠外科治療及放射治療的進步提高癌癥病人相對存活率，到現在已有40多年， 外科手術及放射治療的進步也已近頂峰，很難再期待有更大的突破，而化療能成功地治愈 或明顯延長病人的生命，在癌癥的治療中占有越來越主要的地位；然而，化療基本上著眼 于直接殺傷腫瘤細胞，這一治療模式往往存在以下問題對增長緩慢的實體瘤效果差或幾 乎無影響；藥物選擇性很小，毒副反應多且嚴重。腫瘤的生物治療主要通過腫瘤宿主防御 機制或生物制劑的作用以調節機體自身的生物學反應，從而抑制或消除腫瘤。雖然沒有太 大毒副作用，但由于技術要求嚴、工藝復雜、價格高，眾多癌癥患者及家屬難以承受，影 響其在癌癥治療領域的普及。
鑒于上述原因，人們開始把目光轉向天然抗腫瘤藥物的研發上。無論是抑制或殺傷腫 瘤細胞、調整機體免疫功能、減輕放化療毒副作用，還是腫瘤的病后調理，天然抗癌藥物 都具有重要作用，天然植物新療法將成為繼手術、放療、化療、生物療法之后的腫瘤第五 大治療方法。
現有研究表明，人參皂苷具有明顯的抗腫瘤和免疫調節、改善微循環、提高生命質量 等多種生物活性。但是，由于天然人參皂苷較難吸收，而由天然皂苷轉化而來的低極性皂 苷、苷元或二者的衍生物是天然人參皂苷發揮其藥效的原型。因此，有關低極性皂苷、苷 元或二者的衍生物的制備與抗腫瘤活性的研究非常活躍。迄今，已發現多種低極性皂苷、 苷元或二者的衍生物具有抗腫瘤活性，且基本無毒副作用，這些低極性皂苷、苷元或它們
的衍生物包括人參皂苷-Rg3、人參皂苷-Rh2、人參皂苷C-K、人參皂苷Mc、原人參路 二醇(PPD)以及3|3，12卩-二羥—20(22)， 24(25), 二烯達瑪垸[dammar-3p， 12p-dihydroxyl-20 (22)， 24(25)-diene〗和3(3, 6a， 12卩-三羥-20(22), 24(25)-二烯達瑪烷[dammar-3p,6a,12p-trihydroxyl-20(22)， 24(25)-diene]等。現已上市的抗腫瘤藥物有參一膠囊(主要成分是人參 皂苷-Rg3);正在用于臨床實驗研究的抗腫瘤藥物有人參皂苷-Rh2和人參皂苷-C-K。
原人參二醇衍生物25hdt，即20(R)-25-羥基-達瑪垸型-3p, 12p, 20-三醇，其結構如以 下結構式I所示
I
該化合物也是PPD的一種衍生物，在趙余慶等的文獻(趙余慶等，Acta.Pharmaceutica. Sinica., 25(4): 297-301, 1990)中已有報道，但目前對25hdt的研究較少，尚未見到有關該化 合物可用于相關腫瘤治療的報道。

發明內容
發明人在抗腫瘤細胞的研究中，發現原人參二醇衍生物25hdt具有抗人癌細胞的活性。 隨后，發明人通過對25hdt在體內外的抗腫瘤的研究，評價了25hdt在體內外的抗腫瘤效 果。
研究發現，25hdt對體外培養的人癌細胞的抑制作用優于PPD、人參皂苷-Rg3 、 Rh2 和25^0H-PPT,且25hdt對腫瘤細胞具有特異性的抑制生長、誘導凋亡、抑制增殖等作用。 同時，在進行體內實驗時，沒有引起實驗鼠體重的明顯變化，也沒有觀察到任何毒性反應。
因此，本發明的第一個目的，就在于提供一種原人參二醇衍生物25hdt，即20(R)-25-羥基-達瑪垸型-3p， 12P,20-三醇，用于制備抗癌癥藥物的應用。
在本發明的一個優選的實施例中，25hdt對人體外前列腺腫瘤細胞的抑制效果，優于 PPD和人參皂苷-Rh2對人體外前列腺腫瘤細胞系的抑制效果，明顯優于人參皂苷-Rg3和 25^0H-PPT對人體外前列腺腫瘤細胞系的抑制效果。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體外神經膠質瘤細胞的抑制效果，優 于PPD和人參皂苷-Rh2對人體外神經膠質瘤細胞系的抑制效果，明顯優于人參皂苷-Rg3 和25"OH-PPT對人體外神經膠質瘤細胞系的抑制效果。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體外胰腺癌細胞的抑制效果，優于PPD 和人參皂苷-Rh2對人體外胰腺癌細胞系的抑制效果，明顯優于人參皂苷-Rg3和 25~OH-PPT對人體外胰腺癌細胞系的抑制效果。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體外肺癌細胞的抑制效果，優于PPD 和人參皂苷-Rh2對人體外肺癌細胞系的抑制效果，明顯優于人參皂苷-Rg3和25-OH-PPT 對人體外肺癌細胞系的抑制效果。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體外乳腺癌細胞的抑制效果，優于PPD 和人參皂苷-Rh2對人體外乳腺癌細胞系的抑制效果，明顯優于人參皂苷-Rg3和 25-OH-PPT對人體外乳腺癌細胞系的抑制效果。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體前列腺腫瘤細胞具有誘導凋亡作用。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體前列腺腫瘤細胞具有抑制增殖作用。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體前列腺腫瘤細胞具有抑制生長作用。
在本發明的另一個優選的實施例中，25hdt對人體前列腺腫瘤細胞基因表達具有調控 作用。
在本發明的另一個特別優選的實施例中，25hdt對人體前列腺腫瘤細胞具有特異性抑 制生長作用。
在本發明的另一個優選的實施例中，在體內抑制前列腺腫瘤細胞生長同時，25hdt沒 有導致實驗動物體重明顯的變化，也沒有觀察到有任何的毒性作用。
在本發明的另一個更優選的實施例中，25hdt與常規臨床抗癌藥吉西他濱和/或多西紫 杉醇聯合使用，能夠提高對前列腺癌的治療效果。
在本發明的另一個更優選的實施例中，25hdt能夠提高臨床放射線治療前列腺癌的治 療效果。
因此，本發明的25hdt顯然可用于制備癌癥藥物化合物或藥物組合物，也可以用于制 備體外抗癌細胞藥物。
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，以25hdt為有效成分，其總有效劑量為 l-50mg/kg/d。
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，25hdt可與任何法定藥用配合劑和賦形劑制成各 種藥用劑型的制劑。
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，25hdt可與目前市場上的任何化療藥、生物制劑， 包括激素類、烷化劑類、鉑類、抗代謝類、拓撲異構酶抑制劑類、抗微絲微管類、誘導分 化類、抗腫瘤生長類、提高機體免疫類及其他藥物，制備成復方制劑。
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，制劑劑型為口服、注射或局部用藥劑型。
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，口服劑型包括片劑、粉劑、懸濁液、乳濁液、膠 囊、顆粒劑、糖衣片、藥丸、液體、糖漿和檸檬水劑等。
所述注射劑包括水劑、凍干粉針、靜脈乳劑、多相質脂體制劑、靜脈微乳劑、懸濁液
等；
本發明所提供的新型抗腫瘤制劑中，局部用藥劑型包括軟膏、固體、懸濁液、水劑、 粉劑、糊劑、栓劑、氣溶膠、泥敷劑、涂抹劑、灌腸劑和乳劑等。


圖1是5種人參皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3對人肺癌細胞的 細胞毒性的影響。
圖2是5種人參皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3對肺癌細胞凋亡 活性的影響。
圖3是5種人參皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3對肺癌細胞抑制 增殖活性的影響。
圖4是5種人參皂苷化合物25hdt、 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3對肺癌細胞的細 胞周期分布的影響。
圖5是25-OH-PPT和25hdt對人前列腺癌細胞(A) LNCaP和(B) PC3以及對人原 代成纖維細胞(C) IMR90-EEA和(D) IMR90-E1A的細胞毒性的影響。 圖6是25-OH-PPT和25hdt對前列腺癌細胞凋亡活性的影響。 圖7是25-OH-PPT和25hdt對前列腺癌細胞增殖的影響。 圖8是25-OH-PPT和25hdt對前列腺癌細胞周期分布的影響。
圖9是25-OH-PPT和25hdt對前列腺癌細胞基因表達的影響。 圖10是25hdt單獨使用或與多西紫杉醇、吉西他濱、放療聯合使用對前列腺異體移 植瘤活性及體重的影響。
具體實施例方式
本發明分別在體外癌細胞系和癌癥模型動物體內進行了抗癌細胞實驗。實驗結果顯 示，25hdt對體內外癌細胞的抑制作用均優于PPD、人參皂苷-Rg3和Rh2。另外，25hdt 對人癌細胞具有特異性抑制作用，且無毒副作用。25hdt與常規臨床抗癌藥聯合使用，能 提高對前列腺癌的治療效果，還能提高臨床放射線治療的療效。
以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解為，以下實施例僅用于說明本 發明，而非用于限定本發明的范圍。
本申請的發明人采用趙余慶等人(趙余慶等，Acta. Pharmaceutica. Sinica., 25(4)， 297-301,1990)的文獻中所述的提取工藝，首先制備人參果總皂苷初提液，然后經氯仿萃 取、反向HPLC純化獲得了 25hdt,通過電子電離質譜(EI-MS)，紅外光譜(IR)， &核 磁共振譜('H-NMR)和13(3核磁共振譜(l3C-NMR)等方法鑒定，確定所獲得的物質為 25hdt純品。以下實施例中所使用的25hdt，為發明人純化制備獲得的純品。
以下實施例中所用的各細胞系，均購自美國模式培養物收集中心(ATCC， Rockville， MD, USA)。
實施例1、 25hdt對體外癌細胞的特異性生長抑制
1.1、人參皂苷化合物25hdt， 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3抑制人癌細胞體外生長 實驗研究
在本實施例中，以人參皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3為參照，考察了 25hdt對人癌細胞體外生長的抑制作用。
分別配制濃度依次為O、 1^M、 IOhM、 25pM、 100pM、 250pM和500一的25hdt, 25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3。
采用配制好的以上溶液，針對人神經膠質瘤細胞系A172 (p53野生/突變型雜合子， p53wt/mt)和T98G (p53突變型，p53mt)、人胰腺癌細胞系HPAC (p53野生型，p53wt) 和Panc-l (p53mt)、人肺癌細胞系A549 (p53wt)、 H1299 (p53缺失型，p53 null)、 H358 (p53 wt)和H838 (p53 null)、人乳腺癌細胞系MCF7(p53 wt)和MDA-MB-468 (p53 mt)、 人前列腺癌細胞系LNCaP (p53wt)和PC3 (p53 null), 37°C,培養72h。具體培養方式 如下
將上述細胞分別接種96孔細胞培養板，每孔細胞濃度為4-5xl03， 37°C，培養72h。 再采用甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法，測定各細胞系半數細胞生長抑制濃度(IC50)。 具體測定方法為
每孔分別加入10pL的MTT溶液，37'C培養2-4小時后，去上清，用lOO^L DMSO 溶解剩余的甲臜結晶，讀取570nm處的吸光值，計算細胞存活率和IC50。結果如表1所示。
表l、 25hdt、 25~OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3對人癌細胞生長的影響
ic50
癌癥類型細胞系25hdt25-OH-PPTPPDRh2Rg3
神經膠質瘤A17249.4>50077.656.0303.0
T98G27.5125.972.871.8397.0
胰腺癌HPAC22.5>50063.966.4>500
Panc-l21.2>50030.241.3l肌3
肺癌A54922.5>50027.233.9369.1
H129911.6>50020.320.4357.2
H35822.9>50050.465.8470.0
H83825.9>50077.464.4293.0
乳腺癌MCF759.8〉50068.441.5361.2
MDA德-46868.7>50069.043.0153.1
前列腺癌LNCaP35.7>50044.846.7302.1
PC359.8>50029.329.3266.5
由表1的結果可見，25hdt對于人神經膠質瘤細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞、乳腺癌 細胞和前列腺癌細胞，大多數細胞系的IC50值在10-60 pM的范圍，具有明顯的抑制生 長作用。對于人神經膠質瘤細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞的抑制效果，25hdt明顯優于PPD 和Rh2，對于乳腺癌細胞和前列腺癌細胞的抑制效果與PPD和Rh2相當；對于人神經膠 質瘤細胞、胰腺癌細胞、肺癌細胞、乳腺癌細胞和前列腺癌細胞的抑制效果，25hdt明顯 優于Rg3和25- 0H-PPT。
1.2、 25hdt與25~OH-PPT對正常人成纖維細胞系IMR90-EEA和IMR9(WE1A細胞的
體外毒性實驗
在本實施例中，以25-OH-PPT為對照，考察了 25hdt對正常人成纖維細胞系
IMR90"EEA和IMR90-E1A細胞的體外細胞毒性。
按實施例1.1的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lnM、 10pM、 25fiM、 10(HiM、 250^M和500pM的25hdt禾Q 25-OH—PPT處理正常人成纖維細胞系IMR90-EEA和 IMR90-E1A細胞72小時后，采用甲基偶氮唑鹽比色法，測定正常人成纖維細胞 IMR卯-EEA和IMR90~E1A的生長狀況，實驗結果見圖5C和圖5D。
圖5C和圖5D的結果顯示，25-OH-PPT對正常人成纖維細胞的存活率降低幅度的影 響與對前列腺癌細胞的存活率降低幅度的影響差異不大；而25hdt對正常人成纖維細胞的 存活率的影響則不如前列腺癌細胞敏感。因此，25hdt對人癌細胞具有特異性抑制作用。
實施例2、 25hdt在體外肺癌細胞系中的抗肺癌實驗
在以下實施例中，用25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3為參照，考察了25hdt在體外肺 癌細胞系H838和H358中的抗肺癌效果。 2.1 、 25hdt在體外誘導人肺癌細胞凋亡
按照實施例l.l的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lnM、 l(HtM、 25jxM和50nM 的25hdt和其它4種人參皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3處理人肺癌細胞系 H838和H358，待處理細胞48小時后，以Annexin V-FITC凋亡檢測試劑盒(購自Biovision 公司)檢測凋亡細胞發生率，采用與文獻(Li M， Zhang Z， Hill D， Chen X， Wang H， Zhang R. Cancer Res.， 65: 8200-8208. 2005)相同的方法檢測。根據早期和晚期凋亡的檢測數據，相 對于未用藥處理的正常細胞，計算凋亡指數AI (凋亡指數AI是指，隨機計數一定量的細 胞中，凋亡形態的細胞所占的百分數)，并進行比較分析。結果如圖2所示。
圖2的結果顯示，化合物25hdt、 PPD及Rh2均以劑量依存的方式誘導細胞凋亡。在 不同的濃度水平，25hdt均比其他化合物具更強的細胞凋亡誘導活性，而PPD和Rh2在 高濃度時有一定活性，Rg3的活性很小，25-OH-PPT無明顯活性。
2.2、 25hdt在體外抑制細胞增殖
按照實施例1.1的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lnM、 10|iM、 25pM和50pM 的25hdt和其它4種人參皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3處理人肺癌細胞系 H838和H358，待處理細胞24小時后，用溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)核素摻入法(使用 BrdUrd cell proliferation assay kit試劑盒，購自Oncogene Science, La Jolla， CA)，測定細胞 增殖率，計算增殖指數PI (增殖指數PI是指，隨機計數一定量的細胞中，Brdu陽性細胞 所占的百分數)，結果如圖3所示。
圖3的結果顯示，25hdt對人肺癌細胞系H838和H358細胞均能以劑量依存的方式抑
制細胞增殖活性。
2.3、 25hdt在體外阻滯細胞在Gl期
按照實施例1.1的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lpM、 l(VM、 25pM和5(HiM 的25hdt和其它4種人參皂苷化合物25-OH-PPT、 PPD、 Rh2和Rg3處理人肺癌細胞系 H838和H358，待處理細胞24小時后，使用流式細胞儀測定人肺癌細胞周期分布，結果 如圖4所示。
圖4的結果顯示,25hdt對人肺癌細胞系H838和H358細胞均能以劑量依存的方式阻 滯細胞周期在Gl期，而且25hdt的阻滯細胞周期在Gl期的能力要比實驗中所用的其它四 種人參皂苷化合物的能力更強。
因此，25hdt能將人肺癌細胞系H838和H358細胞阻滯在Gl期，從而抑制腫瘤細胞 的增殖。
綜合本實施例和實施例1的體外實驗結果可見，對于人肺癌細胞，25hdt具有抑制肺 癌細胞生長、誘導肺癌細胞凋亡、抑制肺癌細胞增殖和阻滯肺癌細胞于G1期的作用。
實施例3、 25hdt在體外前列腺癌細胞系的抗前列腺癌實驗
在本實施例中，用25~OH-PPT做參照，考察了 25hdt在體外前列腺癌細胞系LNCaP 和PC3的抗前列腺癌的效果。
3.1、 25hdt在體外誘導人前列腺癌細胞凋亡
采用實施例1.1的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lpM、 10nM、 25nM和50pM 的25hdt和25-OH-PPT處理人前列腺癌細胞系LNCaP和PC3的細胞，待處理細胞48小 時后，以AnnexinV-FITC凋亡檢測試劑盒檢測凋亡細胞發生率，采用與文獻(Li M, Zhang Z, Hill D， Chen X， Wang H, Zhang R. Cancer Res., 65: 8200-8208. 2005)相同的方法檢測。根 據早期和晚期凋亡的檢測數據，相對于未用藥處理的正常細胞，計算凋亡指數AI，并進 行比較。結果如圖6所示。
圖6的結果顯示，25hdt以劑量依存的方式誘導細胞凋亡，且在所有的測試濃度下， 25hdt均具較強的細胞凋亡誘導活性，而25-OH-PPT的細胞凋亡誘導活性則很低。因此， 25hdt對前列腺癌細胞具有誘導凋亡作用，即其對前列腺癌細胞具有殺傷作用。
3.2、 25hdt在體外抑制人前列腺癌細胞增殖
采用實施例l.l的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 1hM、 10pM、 25pM和50nM
的25hdt和25-OH-PPT處理人前列腺癌細胞系LNCaP和PC3的細胞，待處理細胞24小 時后，采用溴脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)核素摻入法，參照文獻(Li M， Zhang Z， Hill D， Chen X， Wang H, Zhang R. Cancer Res.， 65: 8200-8208. 2005)中所述的方法，檢測人前列腺癌細 胞增殖率，并計算增殖指數PI，結果如圖7所示。
圖7的結果顯示，25hdt對細胞系LNCaP有劑量依存的抑制細胞增殖活性。在所測試 的濃度水平中，25hdt均顯示出很強的抑制細胞增殖的活性，而25-OH-PPT對細胞增殖則 無明顯影響。
3.3、 25hdt在體外阻滯人前列腺癌細胞在Gl期
采用實施例U的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 lnM、 10pM、 25pM和50nM 的25hdt和25-0H-PPT處理人前列腺癌細胞系LNCaP和PC3，待處理細胞24小時后， 使用流式細胞儀測定人前列腺癌細胞周期分布，結果如圖8所示。
圖8的結果顯示，在處理前列腺癌細胞系LNCaP細胞24小時后，25hdt均以劑量依 存的方式將前列腺癌細胞阻滯在Gl期。25hdt (在最高濃度25|nM)對細胞系LNCaP具更 強的活性；而25"OH-PPT (在最高濃度50nM)對細胞周期分布無明顯影響。
3.4、 25hdt調控人前列腺癌細胞基因表達
采用以上1.1的方法，分別用配制好的濃度依次為0、 1hM、 10pM、 25nM和50pM 的25hdt和25~OH-PPT處理人前列腺癌細胞系LNCaP和PC3的細胞24小時，然后用不 同的特異性抗體作免疫印跡來檢測目標蛋白，結果如圖9A和B所示。所檢測的目標蛋白 包括與癌細胞的增殖密切相關的以下因子
原癌基因蛋白MDM2、 Bcl2;
抑癌基因蛋白p53、 p21、 p27、 BAX;
轉錄因子E2F1、 cleaved PARP;
細胞周期調控因子cdk2、 cdk4、 cdk6和cyclin Dl 。
圖9A和B的結果顯示，在LNCaP細胞中，25hdt導致p21WAF/CIP和p27KIPl及 Bax的增加，同時降低了 MDM2、 Bcl2、 E2F1、 cdk2、 cdk4和cyclin Dl的表達水平。 25~OH-PPT在LNCaP細胞中可適度提高p21的表達、降低cdk2的表達。
綜合本實施例和實施例1的體外實驗結果，對于前列腺癌細胞，25hdt具有抑制前列 腺癌細胞生長、誘導前列腺癌細胞凋亡、抑制前列腺癌細胞增殖和阻滯前列腺癌細胞于 Gl期的作用，且25hdt還能調控人前列腺癌細胞基因表達。
實施例4、 25hdt在癌癥模型動物體內的抗腫瘤實驗
4.1、 25hdt單獨抑制前列腺異體移植瘤的生長。
在本實施例中，在前列腺異體移植瘤模型鼠(Zhang Z， Li M， Wang H， Agrawal S， Zhang R.Proc Natl Acad Sci USA 100: 11636-11641.2003)體內，腹腔注射25hdt抑制前列腺癌生 長作用實驗。本實驗采取了以下給藥方案
以5mg/kg體重/次，或10mg/kg體重/次的劑量給實驗組老鼠腹腔注射25hdt (溶劑為 PEG400)，每周給藥5次，連續給藥4周；同時以相同的劑量給對照組老鼠腹腔注射生理 鹽水，每周給藥5次，連續給藥4周。每天觀察實驗動物生存狀態，并測量體重和腫瘤大 小，結果如圖10B1、圖10B2所示。
圖10B1的結果顯示，在給藥4周后，以5mg/kg體重/次的劑量給藥的小鼠，其腫瘤 大小只有對照組腫瘤大小的一半；而以10mg/kg體重/次的劑量給藥的小鼠，其腫瘤大小 更是只有對照組腫瘤大小的16%。
圖10B2的結果顯示，這種給藥方案沒有引起小鼠體重的明顯變化，也沒有觀察到任 何毒性反應。
根據圖10B1和10B2的結果，腹腔注射25hdt在對前列腺癌取得良好的抑制作用的同 時，沒有引起實驗動物體重的明顯變化，也沒有觀察到任何不良的毒性反應。
因此，根據上述結果，25hdt能在體內抑制前列腺癌細胞生長，有制備成抗前列腺癌 的藥物的良好前景。
4.2、 25hdt與常規臨床抗癌藥聯合使用，提高對前列腺癌的治療效果 本實施例中，在前列腺異體移植瘤模型鼠體內，觀察了25hdt分別和吉西他濱、多西
紫杉醇的聯合使用的效果。其中，吉西他濱為雄激素依賴的治療前列腺癌的一線藥物。
實驗鼠的處理方法以10mg/kg體重/天的劑量，對實驗鼠采用腹腔注射方式注射 25hdt,每周注射5天，持續注射4周，并在第5、 12天對實驗鼠腹腔注射多西紫杉醇(15 mg/kg)或吉西他濱(160mg/kg)。
同時，對實驗對照鼠進行處理，具體處理方法為對照組鼠除注射藥物為生理鹽水外， 其余操作與實驗組相同。
檢測體重、腫瘤大小及其他常見毒性反應指標(如進食量、呼吸、心電圖、血尿糞常 規等)，實驗結果如圖10C1、 IODI所示。
圖10C1和10D1的結果顯示，25hdt可提高臨床抗癌藥的療效。多西紫杉醇單獨使用
可抑制腫瘤生長69%，與25hdt聯合使用腫瘤生長幾乎完全抑制(> 98%)。同樣，與給 予藥物媒介物的小鼠相比，吉西他濱單獨使用會抑制腫瘤生長80%，與25hdt聯合使用時， 可導致腫瘤生長抑制達92%。接受化療的實驗動物出現暫時的體重降低，但之后又有所 恢復，并且沒有觀察到其它毒性反應。
根據本實驗的結果可見，與常規臨床抗癌藥聯合使用，25hdt能提高對前列腺癌的治 療效果。
4.3、 25mdt提高臨床放射線治療的療效
本實施例中，在前列腺異體移植瘤模型鼠體內，觀察了25hdt對臨床放射線治療的影響。
實驗鼠的處理方法以10mg/kg體重/天的劑量，對實驗鼠采用腹腔注射方式注射 25hdt，每周注射5天，持續注射4周，并在第5、 12和19天以3Gy的放射量對實驗鼠進 行放射治療。對照組的模型鼠接受放療，但是不注射25hdt。
檢測體重、腫瘤大小及其他常見毒性反應指標(如進食量、呼吸、心電圖、血尿糞常 規等)，結果如圖10E1和10E2所示，
圖10 El和10 E2的結果顯示，單獨放射線治療可降低約40%的異體移植瘤的生長， 與25hdt聯合使用使腫瘤生長抑制提高到75X。接受放療的實驗動物出現暫時的體重降低， 但之后又有所恢復，并且沒有觀察到其它毒性反應。
根據本實驗的結果可見，25hdt可提高臨床放射線治療的療效。
綜上所述，25hdt具有優于PPD、人參皂苷-Rg3和Rh2的對人體外癌細胞系的抑制效 果，且25hdt對人癌細胞具有抑制調控、誘導凋亡、抑制增殖作用，此外，25hdt對人癌 細胞具有特異性抑制生長作用，在體內抑制前列腺腫瘤細胞生長實驗時，25hdt沒有導致 實驗動物體重發生明顯的變化，也沒有觀察到25hdt對實驗動物有任何毒性作用。
因此，本發明的25hdt顯然可制備為抗癌癥，特別是神經膠質瘤、胰腺癌、肺癌、乳 腺癌和前列腺癌的藥物化合物，或作為抗這些抗癌癥的藥物組合物的活性成分，或與其他 藥用配合劑和/或賦形劑等制成各種藥用制劑。
權利要求
1、具有結構式I的原人參二醇衍生物化合物25hdt，即20(R)-25-羥基-達瑪烷型-3β，12β，20-三醇，用于制備治療癌癥的藥物的應用。id="icf0001" file="A2006101473630002C1.gif" wi="52" he="44" top= "48" left = "79" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>
2、如權利要求l所述的應用，其特征在于，所述癌癥為前列腺癌。
3、如權利要求2所述的應用，其特征在于，用于制備抑制前列腺癌細胞生長的藥物。
4、如權利要求2所述的應用，其特征在于，用于制備特異性抑制前列腺癌細胞生長的藥物.
5、如權利要求2所述的應用，其特征在于，用于制備調控前列腺癌細胞的藥物。
6、如權利要求2所述的應用，其特征在于，用于制備誘導前列腺癌細胞凋亡的藥物。
7、如權利要求2所述的應用，其特征在于，用于制備抑制前列腺癌細胞增殖的藥物。
8、如權利要求l所述的應用，其特征在于，所述癌癥為肺癌。
9、如權利要求8所述的應用，其特征在于,用于制備抑制肺癌細胞生長的藥物。
10、如權利要求8所述的應用，其特征在于，用于制備特異性抑制肺癌細胞生長的藥物。
11、 如權利要求8所述的應用，其特征在于，用于制備調控肺癌細胞的藥物。
12、 如權利要求8所述的應用，其特征在于，用于制備誘導肺癌細胞凋亡的藥物。
13、 如權利要求8所述的應用，其特征在于，用于制備抑制肺癌細胞增殖的藥物。
14、 如權利要求l所述的應用，其特征在于，所述癌癥為神經膠質瘤。
15、 如權利要求14所述的應用，其特征在于，用于制備抑制神經膠質瘤細胞生長的 藥物。
16、 如權利要求14所述的應用，其特征在于，用于制備特異性抑制神經膠質瘤細胞 的藥物。
17、 如權利要求l所述的應用，其特征在于，所述癌癥為胰腺癌。
18、 如權利要求17所述的應用，其特征在于，用于制備抑制胰腺癌細胞生長的藥物。
19、 如權利要求17所述的應用，其特征在于，用于制備特異性抑制胰腺癌細胞生長 的藥物。
20、 如權利要求l所述的應用，其特征在于，所述癌癥為乳腺癌。
21、 如權利要求20所述的應用，其特征在于，用于制備抑制乳腺癌細胞生長的藥物。
22、 如權利要求20所述的應用，其特征在于，用于制備特異性抑制乳腺癌細胞生長 的藥物。
23、 一種治療癌癥的藥物，其特征在于，該藥物以25hdt為有效成分。
24、 如權利要求23所述的治療癌癥的藥物，其特征在于，所述癌癥包括前列腺癌、 肺癌、神經膠質瘤、乳腺癌和胰腺癌。
25、 一種治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，該藥物含有25hdt以及至少一種化療 藥物。
26、 如權利要求25所述的藥物組合物，其特征在于，所述化療藥物包括吉西他濱和 多西紫杉醇。
27、 如權利要求25或26所述的治療癌癥的藥物組合物，其特征在于，所述癌癥包括-前列腺癌、肺癌、神經膠質瘤、乳腺癌和胰腺癌。
全文摘要
本發明公布了一種原人參二醇衍生物化合物25hdt，即20(R)-25-羥基-達瑪烷型-3β，12β，20-三醇，在制備抗癌癥藥物。該化合物25hdt具有優于PPD、人參皂苷-Rg3和Rh2的對人體外腫瘤細胞系的抑制效果，同時，25hdt對人體腫瘤細胞具有抑制調控、誘導凋亡、抑制增殖作用，且25hdt對人腫瘤細胞具有特異性抑制生長作用，使用25hdt治療癌癥，沒有導致實驗動物體重明顯的變化，也沒有任何的毒性作用，和其他化療方法或放療方法同時配合治療癌癥，更能提高治療效果。
文檔編號A61K31/575GK101199534SQ20061014736
公開日2008年6月18日 申請日期2006年12月15日 優先權日2006年12月15日
發明者孫寶山, 張瑞穩, 偉 王, 慧 王, 趙余慶, 凌 韓 申請人:中國科學院上海生命科學研究院