專利名稱：一種銀杏葉提取液/物的制備方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，具體的說，涉及一種新的銀杏葉提取液/物的制備方法。
背景技術：
舒血寧注射液系銀杏葉提取物配制成的無菌水溶液，其有效成分主要是黃酮苷類和萜類內酯活性物質，包括槲皮素、山柰素、銀杏三酯、銀杏內酯、苦內脂等。具有擴張心腦血管、改善微循環、抗血小板激活因子(PAF)、抗氧化清除和抑制氧自由基、抗病毒、抗菌消炎等藥理作用，被應用于多種疾病，并取得顯著效果。目前其制備工藝中仍存在許多需要改進的地方。

發明內容
本發明的目的是提供一種新的銀杏葉提取液/物的制備方法。
為了實現本發明的目的，本發明提供了一種新的銀杏葉提取液/物的制備方法，包括如下步驟1)取銀杏葉粉碎至小塊，加入銀杏葉質量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小時以上，加熱回流提取至少1次，每次1～3小時，過濾，合并提取液，調節pH值7.0～9.0，過濾，回收乙醇；2)濾液加水稀釋至生藥4～6倍量體積，調節pH值3.0～6.5，過濾，加于已處理好的大孔樹脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的2～4％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的60～80％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液，經微孔濾膜精濾后，回收乙醇；3)濾液濃縮至4g生藥/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值7.3～7.8，靜置24h，上清液經微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味，加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液；或回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。其中所述的大孔樹脂可以是HPD450、D101、DM130。
所述步驟1)優選的方案為取銀杏葉適量，粉碎至0.5～1.5cm的小塊，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，調節pH值7.5～8.0，過濾，回收乙醇。
所述步驟2)優選的方案為濾液加純化水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值4.0～4.5，過濾，加于已處理好的大孔樹脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的3.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.2～0.3μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇。
所述步驟3)優選的方案為濾液濃縮至4g生藥/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值7.3～7.8，靜置24h，上清液經0.2～0.3μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.2～0.3μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味，加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液；或回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。
本發明也提供了所述提取方法制得的銀杏葉提取液/物，其中銀杏葉提取液中總黃酮醇苷的含量為1.0～8.0mg/ml，銀杏內酯A的含量為0.07～0.8mg/ml，銀杏內B的含量為0.03～0.5mg/ml，銀杏內酯C的含量為0.04～0.6mg/ml，而以干燥品重量計，所制得的銀杏葉提取物中的總黃酮醇苷的含量為20～36％，銀杏內酯A的含量不少于1.7％。銀杏內酯B的含量不少于0.3％。銀杏內酯C的含量不少于1.0％。
本發明的銀杏葉提取液/物的各項成分純度更高，由此降低了將來由于中藥成分復雜所帶來的問題，由其制備得到的制劑質量完全滿足有關規定，可以更好的為患者所使用。
本發明也提供了含有銀杏葉提取液/物與藥用輔料的制劑，其特征在于，所述的銀杏葉提取液/物通過上述制備方法制得，藥用輔料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化鈉，聚山梨酯80等。所述制劑可以是注射液、凍干粉針劑、輸液劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、片劑等。當該制劑為注射液時，每1ml該注射液含有總黃酮醇苷0.76～1.25mg，銀杏內酯A 0.07～0.3mg，銀杏內酯B 0.01～0.15mg，銀杏內酯C 0.02～0.2mg具體實施方式
以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
實施例1 銀杏葉提取液的制備取銀杏葉適量，粉碎至1cm的小塊，加入5倍量的50％的乙醇浸泡12h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，調節pH值7.6，過濾，回收乙醇，加水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值4.2，過濾，加于已處理好的HPD450大孔吸附樹脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的3.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.22μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇，并濃縮至4g(生藥)/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值7.5，靜置24h。上清液經0.22μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.22μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液。
經測定，該提取液中總黃酮醇苷的含量為1.0mg/ml，銀杏內酯A的含量為0.14mg/ml，銀杏內B的含量為0.06mg/ml，銀杏內酯C的含量為0.07mg/ml。
實施例2 銀杏葉提取液的制備取銀杏葉適量，粉碎至1cm的小塊，加入8倍量的70％的乙醇浸泡18h，回流提取3h；第二次加入6倍量70％乙醇回流提取2h；第三次加入5倍量70％乙醇回流提取1h；合并提取液，調節pH值至7.8，過濾，回收乙醇，加水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值至4.3，過濾，加于已處理好的HPD450大孔吸附樹脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的4.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.22μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇，并濃縮至4g(生藥)/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值至7.6，靜置24h。上清液經0.22μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.22μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液。
經測定，該提取液中總黃酮醇苷的含量為6.2mg/ml，銀杏內酯A的含量為0.45mg/ml，銀杏內B的含量為0.20mg/ml，銀杏內酯C的含量為0.30mg/ml。
實施例3 銀杏葉提取液的制備取銀杏葉適量，粉碎至1cm的小塊，加入10倍量的80％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入8倍量80％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量80％乙醇回流提取1h；第四次加入4倍量80％乙醇回流提取1h；合并提取液，調節pH值至7.5，過濾，回收乙醇，加水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值至4.4，過濾，加于已處理好的HPD450大孔吸附樹脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的4.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.22μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇，并濃縮至4g(生藥)/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值至7.7，靜置24h。上清液經0.22μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.22μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味。加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液。
經測定，該提取液中總黃酮醇苷的含量為5.12mg/ml，銀杏內酯A的含量為0.8mg/ml，銀杏內B的含量為0.5mg/ml，銀杏內酯C的含量為0.6mg/ml。
實施例4 銀杏葉提取物的制備取銀杏葉適量，粉碎至1cm的小塊，加入6倍量的60％的乙醇浸泡30h，回流提取2h；第二次加入3倍量60％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，調節pH值7.5，過濾，回收乙醇，加水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值4.3，過濾，加于已處理好的HPD450大孔吸附樹脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的3.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.22μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇，并濃縮至4g(生藥)/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值7.5，靜置24h。上清液經0.22μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.22μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。
經測定，以干燥品重量計，該提取物中含總黃酮醇苷為20％，含銀杏內酯A為1.7％、含銀杏內酯B為0.3％、含銀杏內酯C為1.0％。
實施例5 銀杏葉提取物的制備取銀杏葉適量，粉碎至1cm的小塊，加入10倍量的75％的乙醇浸泡24h，回流提取3h；第二次加入7倍量75％乙醇回流提取2h；第三次加入6倍量75％乙醇回流提取1h；合并提取液，調節pH值至7.7，過濾，回收乙醇，加水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值至4.5，過濾，加于已處理好的HPD450大孔吸附樹脂柱上。以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的3.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫。收集洗脫液，經0.22μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇，并濃縮至4g(生藥)/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值至7.5，靜置24h。上清液經0.22μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.22μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。
經測定，以干燥品重量計，該提取物中含總黃酮醇苷為36％，含銀杏內酯A為8.2％、含銀杏內酯B為4.0％、含銀杏內酯C為5.3％。
實施例6 銀杏葉提取液的測定取實施例1所制備的銀杏葉提取液，用0.22μm微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋，用氫氧化鈉溶液調pH5.0，加入0.3％藥用炭，攪拌均勻，煮沸15分鐘，調pH6.0，粗濾脫炭，0.22μm微孔濾膜精濾后，灌裝，105℃30分鐘高壓滅菌，得規格為2ml/支的銀杏葉注射液。
經測定，該注射液中含總黃酮醇苷0.88mg/ml，含銀杏內酯A0.12mg/ml，銀杏內酯B 0.05mg/ml，銀杏內酯C 0.06mg/ml。
實施例7 銀杏葉提取液的測定取實施例3所制備的銀杏葉提取液，用0.22μm微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋，用氫氧化鈉溶液調pH5.5，加入0.3％藥用炭，攪拌均勻，煮沸15分鐘，調pH6.5，粗濾脫炭，0.22μm微孔濾膜精濾后，灌裝，105℃30分鐘高壓滅菌，得規格為2ml/支的銀杏葉注射液。
經測定，該注射液中含總黃酮醇苷1.18mg/ml，含銀杏內酯A0.22mg/ml，銀杏內酯B 0.12mg/ml，銀杏內酯C 0.15mg/ml。
實施例8 銀杏葉提取物的測定取實施例5所制備的銀杏葉提取物，用注射用水溶解，用0.22μm微孔濾膜過濾，加注射用水稀釋，用氫氧化鈉溶液調pH5.6，加入0.3％藥用炭，攪拌均勻，煮沸15分鐘，調pH6.4，粗濾脫炭，0.22μm微孔濾膜精濾后，灌裝，105℃30分鐘高壓滅菌，得規格為2ml/支的銀杏葉注射液。
經測定，該注射液中含總黃酮醇苷1.25mg/ml，含銀杏內酯A0.3mg/ml，銀杏內酯B 0.15mg/ml，銀杏內酯C 0.2mg/ml。
而目前的生產工藝制得的舒血寧注射液中各成分的含量為總黃酮醇苷0.84mg/ml，銀杏內酯A 0.07mg/ml，銀杏內酯B 0.03mg/ml，銀杏內酯C 0.04mg/ml。
由此可以看出，本發明所述提取方法制得的銀杏葉提取液/物中，各項成分純度更高，可降低將來由于中藥成分復雜所帶來的問題。由其制得的制劑，含量高，療效好，更安全。
權利要求
1.一種銀杏葉提取液/物的制備方法，包括如下步驟1)取銀杏葉粉碎至小塊，加入銀杏葉質量2～16倍的50％～85％的乙醇浸泡12小時以上，加熱回流提取至少1次，每次1～3小時，過濾，合并提取液，調節pH值7.0～9.0，過濾，回收乙醇；2)濾液加水稀釋至生藥4～6倍量體積，調節pH值3.0～6.5，過濾，加于已處理好的大孔樹脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的2～4％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％～30％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的60～80％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0-1.2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液，經微孔濾膜精濾后，回收乙醇；3)濾液濃縮至4g生藥/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值，靜置24h，上清液經微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味，加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液；或回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。
2.如權利要求1所述的銀杏葉提取液/物制備方法，其特征在于，所述步驟1)為取銀杏葉適量，粉碎至0.5～1.5cm的小塊，加入5倍量的50％的乙醇浸泡24h，回流提取2h；第二次加入4倍量50％乙醇回流提取1.5h；合并提取液，調節pH值7.5～8.0，過濾，回收乙醇。
3.如權利要求1所述的銀杏葉提取液/物制備方法，其特征在于，所述步驟2)為濾液加純化水稀釋至生藥5倍量體積，調節pH值4.0～4.5，過濾，加于已處理好的大孔樹脂柱上，以1.2～1.85BV/h的流速吸附，用樹脂1倍量純化水沖洗樹脂柱，然后用樹脂2倍量的3.0％的醋酸鈉溶液以5.0～6.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，繼續用純化水以6.0～7.5BV/h的流速沖洗樹脂柱至中性，再用樹脂1.5倍量的20％乙醇以3.0～4.0BV/h的流速沖洗樹脂柱，最后用樹脂5倍量的70％乙醇加入樹脂柱內浸泡30min，以1.0～1.2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液，經0.2～0.3μm的微孔濾膜精濾后，回收乙醇。
4.如權利要求1-3任一項所述的銀杏葉提取液/物制備方法，其特征在于，步驟3)為濾液濃縮至4g生藥/ml，加入高濃度乙醇使含醇量達到85％，用10％NaOH調pH值7.3～7.8，靜置24h，上清液經0.2～0.3μm的微孔濾膜精濾，沉淀用離心機離心后經0.2～0.3μm的微孔濾膜過濾，回收乙醇至無醇味，加注射用水稀釋至生藥等量，灌于適宜的容器中，110℃30分鐘高壓滅菌，冷凍，冷藏，獲得銀杏葉提取液；或回收乙醇后減壓干燥得銀杏葉提取物。
5.根據權利要求1或3的銀杏葉提取液/物制備方法，其特征是所用大孔樹脂包括HPD450、D101、DM130。
6.根據權利要求1～5任意一項方法制備的銀杏葉提取液，其特征在于，該銀杏葉提取液中總黃酮醇苷的含量為1.0～8.0mg/ml，銀杏內酯A的含量為0.07～0.8mg/ml，銀杏內酯B的含量為0.03～0.5mg/ml，銀杏內酯C的含量為0.04～0.6mg/ml。
7.根據權利要求1～5任意一項方法制備的銀杏葉提取物，其特征在于，以干燥品重量計，該銀杏葉提取物中總黃酮醇苷的含量為20～36％，銀杏內酯A的含量不少于1.7％。銀杏內酯B的含量不少于0.3％。銀杏內酯C的含量不少于1.0％。
8.一種含有銀杏葉提取液/物制劑，其特征在于，所述的銀杏葉提取液/物通過權利要求1-5任一項制備方法制得，藥用輔料包括葡萄糖、乙醇(95％)，甘露醇，右旋糖酐，乳糖，氯化鈉，聚山梨酯80等。
9.根據權利要求8所述的制劑，其特征在于，該制劑可以是注射液、凍干粉針劑、輸液劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、片劑。
10.根據權利要求8或9所述的制劑，其特征在于，該制劑為注射液，每1ml該注射液含有總黃酮醇苷0.76～1.25mg，銀杏內酯A0.07～0.3mg，銀杏內酯B 0.01～0.15mg，銀杏內酯C 0.02～0.2mg。
全文摘要
本發明涉及一種新的銀杏葉提取液/物的制備方法，根據本發明所述方法得到的銀杏葉提取液/物，各項成分純度更高，可大大減少將來由于中藥成分復雜所帶來的問題，由其制備的制劑，療效更好，安全性更高。
文檔編號A61K9/08GK101032533SQ20071009849
公開日2007年9月12日 申請日期2007年4月18日 優先權日2007年4月18日
發明者方同華 申請人:黑龍江省珍寶島制藥有限公司