專利名稱：：蟲草多糖含片及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種生物工程
技術領域：
的含片及其其制備方法，具體地，本發明涉及一種蟲草多糖含片及其制備方法。技術背景蟲草屬真菌是藥用真菌中的一個大類，屬真菌門((E咖ycota)，子囊菌亞門(Ascmycotina)，核菌綱'(Pyenomycetes)、殼菌目(Sphaerides)，麥角菌科((Clavicipiracese),蟲草屬(Cordyc印s)。此屬現報道的已有350余種，國內發現有30余種，有的種可以入藥，有的種不能入藥，更多的未作研究。蟲草屬中的蛹蟲草(Cordyc印smilitaris)是寄生在夜蛾科等蛹體上的一個品種，在世界各地均有分布，50年代徐家忠在吉林地區采集報道，故而稱為東北蟲草，北冬蟲夏草，簡稱北蟲草。它是國內外公認的可以食用藥用的一種真菌，是最有潛力替代冬蟲夏草C.sinensis入藥的品種。目前，全國北蟲草栽培面積較大，以各種食用菌栽培企業附帶栽培為主，年產量約100噸左右，北蟲草的主要商品形式為子實體，產品加工處于初級階段，如浸泡勾對成酒、粉碎裝入膠囊等。真菌多糖是真菌中具有生物活性的主要有效組分之一，冬蟲夏草C.sinensis等蟲草屬真菌的藥物化學、藥理學研究表明，蟲草屬真菌具有豐富的生物活性物質和廣泛的藥理作用。上世紀在70年代末至90年代初期，對C.sinensis及其代用品真菌多糖的研究多集中在C.sinensis等幾種名貴中藥有性型的多糖，但由于冬蟲夏草C.sinensis等蟲草嚴格的寄生性與特殊的生境成為制約其工業化生產的瓶頸，且野生資源遭有限，市場價格節節攀升。為此國內外學者在C.sinensis代用品方面做了許多富有成效的工作。一是在蟲草資源開發面上的展開，對蟲草屬中C.sinensis外的其它蟲草尤其是民間有藥用史的蟲草做了系統的藥物化學、藥理和毒理等比較研究，以及人工批量培植方面的研究。比如北蟲草C.militaris、涼山蟲草C.1iangshanensisZhang，LiuetHu、霍克斯蟲草C,hawkesii(Gray)Cooke、甘肅蟲草C.gansuensisZhang，WangetYan、香棒蟲草C.barnesisThwaitesexBerk.EtBr.、巴西蟲草C.brasiliensisP.Henn等等。二是在蟲草資源層次上的深入，致力于蟲草無性型及相關真菌等代用品的研究開發，如C.sinensis的相關真菌蝙蝠蛾擬青霉PaecilorayceshepialiChenetDai、中華頭孢霉CephalosporiumsinensisChen、蝙蝠蛾被毛孢霉Mortierellah印ialiChenetU等已相繼產業化。由于多糖研究的復雜性，至今C.sinensis及其代用品真菌多糖多限于研究階段。蟲草多糖(Cordyc印sPolysacchride，CP)是一類高分子復合物，它作為蟲草主要活性成分之一，是蟲草中量最高的藥理活性物質。從目前對天然冬蟲夏草以及人工培育的蟲草真菌中分離純化出的多種多糖組分的研究結果看(1)^M^菌多糖組成主要有葡聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡甘露聚糖幾類。從單糖組成看多含半乳糖、葡萄糖、甘露糖以及少量蛋白質。(2)藥理作用蟲草屬真菌多糖是種生物效應調節劑，能控制細胞的分裂和分化，調節細胞的生長和衰老；具有廣泛的免疫調節功能，能預防和治療機體免疫系統受到嚴重損傷的癌癥和愛滋病以及其它免疫缺損疾病，還具有抗衰老、抗病毒、抗輻射、抗凝血、降血糖、降血脂等活性。研究已表明C.sinensis及其代用品真菌多糖具有多種生物活性。(3)提取和檢測蟲草多糖大多采用水提醇沉的工藝；多糖測定方法主要有堿性酒石酸銅測定法、比色法(蒽酮、苯酚硫酸法)。當成品中的多糖含量大于1%(質量濃度)時，最好選取堿性酒石酸銅滴定法。經查新，蟲草的深加工特別是多糖產品，以膠囊為劑型為主，如蟲草多糖膠囊分別由江蘇沃爾德實業有限公司、深圳市匯康生物科技有限公司等生產；另外還有少量的口服液產品，如蟲草多糖口服液，分別由江蘇沃爾德實業有限公司，天津市寶恒生物科技有限公司等生產。總之，蟲草多糖產品劑型單一，配伍簡單，嚴重制約了多糖產品開發的進程。另外，從國內外生產的口含片的功效來看，大多局限于潤喉和局部消炎作用。
發明內容本發明的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種蟲草多糖含片及其制備方法，使其利用北蟲草提取蟲草多糖(CordycepsPolysaccharides)，并將蟲草多糖和羅漢果提取物配伍，既兼顧了免疫調節的功效，又發揮了口含片清咽潤喉的作用。本發明是通過以下技術方案實現的-本發明所述的蟲草多糖含片，包含的組分及其重量百分比含量為蟲草多糖提取物50%_70%、綠茶提取物2%-10%、羅漢果提取物5%-15%、填充劑20%-30%。本發明既兼顧功效成分，又能明顯改善產品風味。進一步，優選的重量百分比為蟲草多糖提取物55%-65%、綠茶提取物4%-8%、羅漢果提取物7%-12%、復合填充劑20%-29%。所述蟲草多糖提取物，其中多糖含量按照重量百分比計算大于30%。所述羅漢果提取物，其中羅漢果甜甙按照重量百分比計算大于80%。所述綠茶提取物，其中茶多酚按照重量百分比計算大于80%。所述蟲草多糖提取物、羅漢果提取物、綠茶提取物均可從國家認定的生產廠家購買，如西安奧晶科技發展有限公司(羅漢果提取物，產品編號DW-829;綠茶提取物，產品編號BZ-007等，2007購買)，復合填充劑通過市場購買，符合國家食品衛生要求。本發明上述的蟲草多糖含片的制備方法，具體為將蟲草多糖提取物、綠茶提取物、羅漢果提取物、填充劑按比例充分混合，將混合均勻的藥粉置槽型混合機中，然后加入乙醇溶液作為潤濕劑，攪拌，之后將混合充分的軟料投入搖擺式顆粒機中過尼龍篩造粒，再把顆粒入真空千燥機中進行干燥，整粒，用壓片機器壓片。所述蟲草多糖提取物(Cordycepsmilitarispolysaccharidesextracts)是指來源于北蟲草(Cordyc印smilitaris)子實體、固體發酵基質中，通過水提醇沉工藝獲得的粗多糖(crudepolysaccharides),以葡萄糖為對照品，苯酚硫酸法測定多糖含量大于30%。所述羅漢果提取物(Momordicagrosvenori(Luo-Han-Guo)P.E.)是指從羅漢果(Siraitiagrosvenori)中提取的羅漢果甙的總稱，包括羅漢果甙(raogroside)IV、V、VI等，通過UV/HPLC方法檢測，羅漢果總甜甙應大于80%。所述綠茶提取物(GreenTeaExtract)是指從茶葉中提取的純天然復合合物，主要成分茶多酚含量應大于80%。上述三種提取物的提取工藝均采用現有公知的方法進行提取。所述復合填充劑采用現有技術，比如噴霧干燥甘露醇200SD為主要填充劑,附加適量的檸檬酸(或薄荷腦)、10X的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)乙醇溶液，硬脂酸鎂、甘露醇和阿斯巴甜等。所述充分混合，是指投入多項運動混合機中混合20min左右。所述潤濕劑，其配制方法為將純化水乙醇混合，攪拌，使均勻分散，配制成體積百分比為90%-95%的乙醇溶液，作為潤濕劑。所述過尼龍篩，是指過14目尼龍篩。所述顆粒入真空干燥機中進行干燥，是指干燥溫度為55-60°C，時間為2小時，真空度控制在O.053-0.060Mpa，顆粒的水分控制在5%7%。所述整粒，是指把千燥過程中部分互相粘結成塊的顆粒經過篩(14目)整粒，未能通過篩網的塊或粗粒，可加以研碎，使成適宜的(能過12—14目尼龍篩)顆粒并過篩。所述壓片，是指在5.0-7.0kg壓力條件下，使用壓片機器壓片；在壓片前一些揮發性的成分(如薄荷腦)，先用乙醇溶解或與其它成分混合研磨使共熔后，再噴射在顆粒上混勻，然后再進行壓片。按照中藥現代化的理念，物質間"相生相克，相輔相成"，相互配伍，相互協同。大量的研究表明，蟲草多糖是人體免疫調節和免疫保護劑；羅漢果中含有大量的果糖、蛋白質和多種維生素，其性涼味甜，具有抗菌消炎，止咳潤肺等功效，因此它具有清肺、利咽和甜味調節的雙重功能，本發明把蟲草多糖和羅漢果提取物配伍，既兼顧了免疫調節的功效，又發揮了口含片清咽潤喉的作用，使人們在休閑娛樂中達到防病治病的目的，同時解決了現有的北蟲草產品單一，多糖產品口感差、成型不好，營養成分單一等問題。圖1蟲草多糖口含片的制作工藝圖2葡萄糖的標準曲線圖3羅漢果糖苷V的TLC檢測結果，其中1、對照品2、供試品。具體實施方式下面結合實驗室具體的試驗數據和結合具體實施例，進一步闡述本發明。這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，或按照制造廠商所建議的條件。本發明整個蟲草多糖口含片的制作過程可總結為蟲草多糖提取物、羅漢果提取物、綠茶提取物、+填充劑一(加95%乙醇)制粒一(過14目尼龍篩)干燥(55-60°C，2h)—整粒(過12目不銹鋼篩)一壓片一滅菌一包裝。制作工藝如圖l所示，環境要求10萬級潔凈區。蟲草多糖提取物可以參照現有技術中的水提醇沉法得到。實施例1蟲草多糖含片的制備原輔料的組合①蟲草多糖提取物經粉碎后過100目篩的蟲草多糖提取物，多糖含量大于30%;②羅漢果提取物羅漢果甜甙》80%;③綠茶提取物，茶多酚>80%;④復合填充劑噴霧干燥甘露醇200SD為主要填充劑，附加適量的檸檬酸(或薄荷腦)、10X的聚乙烯吡咯烷酮(PVP)乙醇溶液，硬脂酸鎂、甘露醇和阿斯巴甜等，符合國家食品衛生要求。制作的各種原料按照以下重量百分比組合成混合物進行下一步制作。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>制作工藝蟲草多糖提取物、羅漢果提取物、綠茶提取物、+填充劑一(加95%乙醇)制粒一(過14目尼龍篩)干燥(55-60°C，2h)—整粒(過12目不銹鋼篩)一壓片(5.0-7.0kg壓力下)一滅菌一包裝。具體操作如下(1)混合蟲草多糖提取物、羅漢果提取物、茶葉提取物和復合填充劑按一定量比例配制后投入多項運動混合機中混合20min，充分混合。試驗證明，投入混合器內的全部用水必須保持全部投料重的7%-9%之間。使用香精，先用95%的酒精溶解后，在充分混合其它料后，把香精噴灑在軟料中攪勻。(2)造粒與干燥①配潤濕劑將純化水9.5kg與95W的乙醇5.5kg混合，攪拌，使均勻分散，配制成35%的乙醇溶液15kg.②制軟材將混合均勻的藥粉置槽型混合機中，然后加入配好的潤濕劑，攪拌10min。(D制濕顆粒混合充分的軟料投入搖擺式顆粒機中用14目尼龍篩進行造粒。干燥再把顆粒入真空干燥機中進行干燥，真空度控制在O.053-0.060Mpa,溫度控制在55-6(TC，使顆粒的水分控制在5%7%左右。注以14目篩為造粒工具，將軟材壓過篩網變成顆粒狀，將濕粒置于溫度為60'C的電熱鼓風干燥箱，每隔30min翻動一次，以加快干燥速度。干燥終點主要依靠感觀判斷，當手捏干粒時，手感干脆、不粘手，用力一捏可勉強捏碎為宜。(3)壓片與滅菌①壓片顆粒經檢驗符合要求后，按照0.545g平均重量壓片，片重差異限度為±3%，硬度4.0-5.0kg.②篩片除去細粉、殘片，將加工好的素片貼上桶簽待檢驗。③滅菌并將片劑放在紫外線下照射15-20min，然后及時包裝。(4)包裝內外包裝必須檢驗合格，符合國家衛生要求和相關標準。(5)入庫成品按批次分別碼放并掛上待驗標牌，合格后辦理入庫手續。以上幾個單元操作均在十萬級潔凈車間進行，各單元操作要求溫度控制在1S26。C，相對濕度控制在45%65%，人員、物料、設備、環境均需按各自的清潔規程進行清潔。實施例2含片中蟲草多糖的檢測分別取組合l、組合2、組合3制成的含片成品進行多糖含量的檢測。1.樣品處理(1)樣品提取取制成含片10片研缽磨碎，稱取混合均勻的固體樣品2.Og，至于100mL的容量瓶中，加水80mL左右，與沸水上加熱2h，冷卻至室溫后補加水至刻度，混勻后，過濾，棄去初濾液，收集余下濾液供沉淀多糖。(2)沉淀粗多糖準確吸取最終濾液樣品5.0mL(或液體樣品5mL)，置于50mL離心管中，加入無水乙醇20mL，混勻5min后，以3000r/min離心5rain，棄去上清液。殘渣用80%(體積分數)乙醇溶液數毫升洗滌，離心后棄上清液，反復操作3-4次。殘渣用水溶解并定容至5.0mL，混勻后，供沉淀葡聚糖。2.標準曲線的繪制準確吸取葡萄糖標準使用液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1,OOmL(相當于葡萄糖0、0.01、0.02、0.04、0.06、0.08、0.10mg)分別置于20mL加塞試管中，準確補充水至2.OmL，加入50g/L苯酚溶液1.OmL,在旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.OmL，于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻后用分光光度計在490nm波長處以試劑空白溶液為參比，lcm比色皿測定吸光度值。以葡萄糖濃度為橫坐標，吸光度值為縱坐標，繪制標準曲線(見圖2)。3.樣品測定準確吸取樣品測定液2.0mL置于20ml帶塞的試管中，加入50g/L苯酚溶液1.OmL,在旋轉混勻器上混勻，小心加入濃硫酸10.OmL于旋轉混勻器上小心混勻，置沸水浴中煮沸2min，冷卻至室溫，用分光光度計在490mn波長處，以試劑空白為參比，lcm比色皿測定吸光度值。從標準曲線上查出葡萄含量，計算樣品中粗多糖含量。同時做樣品空白實驗。根據表2數據，經過Origin6.O處理得到得標準曲線，并得到回歸方程為Y=0.07664+1.53476X，回歸系數R2=0.99269(n=6)，根據樣品測得吸光值可知樣品的粗多糖含量為分別為組合1制成的含片中多糖含量為6.01%/、組合2為6.56%、組合3為7.05%。實施例3含片中羅漢果糖苷V的TLC(thin-layerchromatography)定性鑒別分別取組合1、組合2、組合3制成的含片成品進行漢果糖苷V的定性鑒別。(1)薄層色譜條件用0.5W羧甲基纖維素鈉溶液為粘合劑鋪制的硅膠G板，板厚0.3mm,在105'C活化30min。以正丁醇-乙醇-水(8:2:3)為展開劑，上行展開，展距為llcm，以10%硫酸乙醇顯色，在105'C烘至斑點清晰。(2)對照品溶液制備精密稱取MogrosideV對照品10.0mg，用蒸餾水定容于lOmL容量瓶中，制成1.0mg/mL溶液。(3)供試品溶液制備供試品溶液制備準確稱取復方蟲草口含片(相當于羅漢果提取物0.2g)，用蒸餾水適量溶解后，轉移至25ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度、搖勻，配制成供試品溶液。(4)薄層分離及掃描試驗分別精確吸取MogrosideV對照品溶液5.0wL和供試品溶液10.0uL點于同一硅膠G薄層板上，按(1)所述色譜條件展開、顯色。(5)結果判斷對照品和供試品在MogrosideV斑點的Rf值一致，供試品的斑點較多(見圖3)。權利要求1、一種蟲草多糖含片，其特征在于，包含的組分及其重量百分比含量為蟲草多糖提取物50％-70％、綠茶提取物2％-10％、羅漢果提取物5％-15％、填充劑20％-30％。2、根據權利要求l所述的蟲草多糖含片，其特征是，重量百分比為蟲草多糖提取物55%-65%、綠茶提取物4%-8%、羅漢果提取物7%-12%、復合填充劑20%-29%。3、根據權利要求1或2所述的蟲草多糖含片，其特征是，所述蟲草多糖提取物，其中多糖含量按照重量百分比計算大于30%。4、根據權利要求1或2所述的蟲草多糖含片，其特征是，所述羅漢果提取物，其中羅漢果甜甙按照重量百分比計算大于80%。5、根據權利要求1或2所述的蟲草多糖含片，其特征是，所述綠茶提取物，其中茶多酚按照重量百分比計算大于80%。6、一種如權利要求l所述的蟲草多糖含片的制備方法，其特征在于，將蟲草多糖提取物、綠茶提取物、羅漢果提取物、填充劑按比例充分混合，將混合均勻的藥粉置槽型混合機中，然后加入乙醇溶液作為潤濕劑，攪拌，之后將混合充分的軟料投入搖擺式顆粒機中過尼龍篩造粒，再把顆粒入真空干燥機中進行干燥，整粒，用壓片機器壓片。7、根據權利要求6所述的蟲草多糖含片的制備方法，其特征是，所述潤濕劑，其配制方法為將純化水乙醇混合，攪拌，使均勻分散，配制成體積百分比為90%-95%的乙醇溶液，作為潤濕劑。8、根據權利要求6所述的蟲草多糖含片的制備方法，其特征是，所述顆粒入真空干燥機中進行干燥，是指干燥溫度為55-60°C，時間為2小時，真空度控制在O.053-0.060Mpa，顆粒的水分控制在5%7%。9、根據權利要求6所述的蟲草多糖含片的制備方法，其特征是，所述整粒，是指把干燥過程中部分互相粘結成塊的顆粒經過14目篩整粒，未能通過篩網的塊或粗粒，加以研碎，過過12目一14目尼龍篩。10、根據權利要求6所述的蟲草多糖含片的制備方法，其特征是，所述壓片，是指在5.0-7.0kg壓力下，采用壓片機器進行壓片，在壓片前揮發性的成分先用乙醇溶解或研磨使共熔后，再噴射在顆粒上混勻，然后再壓片。全文摘要本發明涉及一種蟲草多糖含片及其制備方法，其中蟲草多糖提取物50％-70％、羅漢果提取物5％-15％、綠茶提取物2％-10％，復合填充劑20％-30％，其制備方法為，取蟲草多糖提取物、羅漢果提取物、綠茶提取物分別過100目篩，加入復合填充劑后，混合，將混合均勻的藥粉置槽型混合機中，然后加入配好的潤濕劑，攪拌，之后將混合充分的軟料投入搖擺式顆粒機中過尼龍篩造粒，再把顆粒入真空干燥機中進行干燥，整粒，混勻后用壓片機器壓片。該發明組方合理、活性成分均衡，風味獨特，適合一種適合大多數人服用的保健食品。文檔編號A61P11/00GK101332259SQ20081003676公開日2008年12月31日申請日期2008年4月29日優先權日2008年4月29日發明者周選圍,新汪申請人:黑龍江新醫圣制藥有限責任公司;上海交通大學