專利名稱：一種穩定的白蛋白脂質載藥系統及其制備方法
技術領域：
一種穩定的白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或微流化技 術將白蛋白結合在脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高藥物在脂質囊 胞中的包封率。
背景技術：
脂質囊胞是利用磷脂雙分子層內嵌入膽固醇所形成的囊泡包裹藥物分子而形成的制 劑，磷脂是構成脂質囊胞的主要化學成分，其中最具有代表性的是卵磷脂。卵磷脂主要 來自蛋黃和大豆，制備成本低，性質穩定，屬于中性磷脂。磷脂酰膽堿是形成許多細胞 膜的主要成分，也是制備脂質囊胞的主要原料，膽固醇也是脂質囊胞另一個重要組成成 分，它是許多天然生物膜的重要成分，本身并不形成膜結構，但是能夠以1:1甚至2:1 的摩爾比插入磷脂膜中。加入膽固醇可以改變脂膜的相變溫度，從而影響膜的通透性和 流動性。因此膽固醇具有穩定磷脂雙分子膜的作用。
按脂質囊胞的結構和粒徑分類，可以分為單室脂質囊胞、多室脂質囊胞和多相脂 質囊胞，按脂質囊胞電荷性可以分為中性脂質囊胞、負鬼性脂質囊胞、正電性脂質囊胞。
藥物包裹于脂質囊胞內，可降低在組織中擴散而緩慢向血液中釋放藥物，從而延長藥 物作用時間，脂質囊胞能選擇性地分布于某些組織和器官，增加藥物對淋巴系統的定向性, 提高藥物在靶部位的治療濃度。尤其對抗癌藥物，能使之選擇性地殺傷癌細胞或抑制癌細 胞，對正常組織、細胞的毒性明顯降低或無損害作用。對脂質囊胞表面性質進行改變,如 粒徑大小、表面電荷、組織特異性抗體等,可提高藥物對耙區的選擇性，從而也降低了毒 性，減少了不良反應。 '
脂質囊胞的常規制備方法
制備脂溶性藥物的脂質囊胞， 一般采用薄膜分散法、注入法、前體脂質囊胞法、超
聲分散法等方法，工業上常用的方法為薄膜分散法。
制備水溶性藥物的脂質囊胞，但要求藥物有比較好的穩定性，具體說來這一類方法
包括反相蒸發法、ra梯度法、復乳法、熔融法、凍融法、冷凍干燥法、表面活性劑處理 法、鈣融合法、離心法等方法，工業上常用的方法為ra梯度法。脂質囊胞應用中存在的問題主要是對于某些水溶性藥物包封率較低，藥物易從脂質 囊胞中滲漏。
由于細胞膜上有白蛋白受體GP60，在Gp60與白蛋白結合后，激活胞膜穴樣內凹，進
行細胞轉運，由腫瘤細胞分泌的富含半光氨酸酸性分泌性蛋白，存在于多種惡性腫瘤組
織間質中，和病人的預后有直接關系，它和GP60同源，能和白蛋白結合，利用其與白蛋 白結合的特性，使表面鑲嵌有白蛋白的脂質囊胞相對富集在腫瘤間質中，通過膜融合和 轉運釋放藥物到腫瘤細胞內，使腫瘤細胞內的藥物局部濃度增高，從而增加腫瘤細胞的 療效。
通過文獻檢索到白蛋白微球以及脂質體的制備方法和相關的研究，而脂質囊胞鑲嵌 白蛋白提高脂質囊胞載藥量和包封率的研究還沒有發現。
檢索國內外專利，發現一種治療癌癥的藥物組合物(申請號200510053892. 2)，由抗 腫瘤活性藥物、聚乙二醇和白蛋白結合的脂質體，該專利使用的方法制備的藥物是用化 學合成方法將白蛋白結合在磷脂上，聚乙二醇也是化學方法與磷脂結合，該組合物的制 備工藝太復雜，成本很高，無法實現工業化生產制成臨床上可以使用的制劑；專利(申 請號03108361. 7)公開了一種紫杉醇白蛋白結合物，研究發現用該專利制備的藥物結合 率低，在制備過程中粉末狀的紫杉醇很難完全與白蛋白結合。
本發明的白蛋白脂質載藥系統不僅有效的實現了腫瘤藥物在腫瘤細胞周圍的富集， 有意義的是可以有效克服脂質囊胞包封率低，容易滲漏的缺陷，見附圖l、 2、 3、 4，其 中附

圖1為水溶性藥物制備的脂質囊泡圖，附圖2為加入白蛋白后水溶性藥物制備的脂 質囊泡圖，附圖3為脂溶性藥物制備的脂質囊泡圖，附圖4為加入白蛋白后脂溶性藥物 制備的脂質囊泡圖，更有意義的是本發明采用的工藝可以實現工業化生產制成臨床使用 的產品，具有非常重要的現實價值。

發明內容
本發明公開了一種穩定的白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，其特征在于將白蛋白 結合在脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高藥物在脂質囊胞中的包封 率，其中白蛋白脂質載藥系統中包含具有活性的藥物、磷脂、甾醇和白蛋白，其制備方 法為用常規制備脂質囊胞的方法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞中，再在體 系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋白的脂質載 藥系統，也可以將白蛋白和藥物同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成前體脂質囊 胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋白的脂 質載藥系統。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，其中各組分質量百分比如下-活性藥物0. 01-20%、磷脂0. 1—60%、甾醇0. 01-20°/。、白蛋白0. 01—90%優選各組分質量百分比如下
活性藥物0. 01-10%、磷脂3-60%、甾醇1-20%、白蛋白0. 1-90%
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，還包含凍干支持劑，選自小分子氨基酸、多糖 或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、山梨醇 中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，還包含PH調節劑，選自鹽酸、磷酸、檸檬酸或
其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋酸或其堿金屬 ±卜
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選自小分子氨基酸 或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的一種或其任意 混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%，其中氨基酸具體選自20種常用氨基酸，比如 20種a-氨基酸:
非極性氨基酸丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、 甲硫氨酸(8種);
極性、不帶電荷氨基酸絲氨酸、甘氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、天冬酰胺、谷氨酰 胺、酪氨酸(7種)； '
酸性氨基酸天門冬氨酸、谷氨酸(2種)； 堿性氨基酸精氨酸、賴氨酸、組氨酸(3種)
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維生素E、維生素C、
亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種以上的混合物。 本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，還可以包括滲透壓調劑劑，選自葡萄糖、氯化
鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%-5%。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、乙醇、乙 酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成磷脂，比如卵磷 脂(大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、二月桂酰磷脂、二肉豆蔻酰磷脂、二棕櫚酰磷脂或二硬 脂酰磷脂等)、磷脂酰乙醇胺(二月桂酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二棕 櫚酰磷脂酰乙醇胺或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺等)磷脂酰絲氨酸(二月桂酰磷脂酰絲氨酸、 二肉豆蔻酰磷脂酰絲氨酸、二棕櫚酰磷脂酰絲氨酸或二硬脂酰磷脂酰絲氨酸等)、磷脂酸、 磷脂酰甘油(二月桂酰憐脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二棕櫚酰磷脂酰甘油或二硬脂酰磷脂酰甘油等)、磷脂酰肌醇(二月桂酰磷脂酰肌醇、二肉豆蔻酰磷脂酰肌醇、二 棕櫚酰磷脂酰肌醇或二硬脂酰磷脂酰肌醇等)、溶血卵磷脂、鞘磷脂、蛋黃卵磷脂、大豆 卵磷脂、羥基卵磷脂、氫化磷脂以及經過PEG修飾過的磷脂中的一種或一種以上的混合 物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚(優選短 鏈聚乙二醇)、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一種以上的混合物； 白蛋白選自動物白蛋白(比如卵白蛋白、血清白蛋白、乳白蛋白或肌肉白蛋白)和植物 白蛋白，優選動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及以及通過基因工程生產的人血清白蛋 白中的一種。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體制備方法有兩種，第一種包括 以下步驟
第一步根據藥物的特點用常規制備脂質囊胞的方法比如選擇旋轉蒸發法、PH梯度 法、注入法、二次乳化法中的一種先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞體系，通 過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在 lOOnm-1000nm;
第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化 技術形成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統，粒徑大小在20腦-1000nm，過濾罐裝即 得；
第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得； 第二種制備方法包括以下歩驟
第一步根據藥物的特點用常規制備脂質囊胞的方法比如選擇旋轉蒸發法、PH梯度 法、注入法、二次乳化法中的一種先將白蛋白和藥物加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中， 減壓蒸發除去有機溶劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質 囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；
第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得；
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統的應用，為非腸道給藥，其中具有活性的藥物， 包括抗生素、抗真菌藥物、腫瘤藥物、心腦血管藥物、多肽和蛋白質藥物等，優選抗腫 瘤藥物，包括抗腫瘤抗生素、垸化劑、各種代謝拮抗劑、抗腫瘤植物成分等小分子抗腫
瘤藥物，也包括多肽和蛋白質抗腫瘤藥物，其中小分子藥物舉例如絲裂霉素C、(鹽酸)
博來霉素、培洛霉素、阿那曲唑、埃坡霉素及其衍生物(包括埃坡霉素A、埃坡霉素B、 埃坡霉素C、埃坡霉素D、埃坡霉素F等)、氨磷汀、卡培他濱、羥基喜樹堿、曲沙他濱、鹽酸伊立替康、鹽酸拓撲替康、盧比特康、鹽酸表柔比星、鹽酸多柔比星、戊柔比星、 吡柔比星、THP-阿霉素、卡鉑、順鉑、奧沙利鉑、多西他賽、環磷酰胺、酒石酸長春瑞 濱、來曲唑、鹽酸伊立替康、異環磷酰胺、放線菌素D、氟脲苷、甲氨蝶呤、克拉屈濱、 磷酸氟達拉濱、硫酸長春新堿、去氧氟尿苷、絲裂霉素、鹽酸阿糖胞苷、鹽酸柔紅霉素、 放線菌素D。
多肽和蛋白質藥物包括胰島素、干擾素(a、 0、 Y)、白介素(2、 7)等
本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，其中平均粒徑大小在20nm-1000nm; 本發明穩定的白蛋白脂質載藥系統，注射液或凍干復溶后溶液的PH范圍為5-8。
具體實施例
1、 紫杉醇/多西紫杉醇白蛋白脂質結合物
取紫杉醇/多西紫杉醇100mg，蛋黃卵磷脂3g、膽固醇lg、白蛋白1.0g，加入50ml 氯仿攪拌使紫杉醇/多西紫杉醇、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去 氯仿，加入蔗糖5克，P朋-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為 50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的苯丙氨酸按常規工藝 凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
2、 埃坡霉素B白蛋白脂質結合物
取埃坡霉素B50mg，蛋黃卵磷脂lg、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚0.5g、白蛋白3.0g， 加入50ml無水乙醇中攪拌使埃坡霉素B、蛋黃卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓 蒸餾除去乙醇，加入蔗糖5g，鹽酸半胱氨酸0. 02g、ra6-7擰檬酸緩沖鹽至總體積為100ml， 高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入體系重量比2-3%的甘露醇作為凍干保護 劑，凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
3、 吡柔比星白蛋白脂質結合物
取吡柔比星50mg，蛋黃卵磷脂2.5g、氫化卵磷脂0.5g、聚乙二醇丁二醇膽固醇醚 0. lg、色氨酸0.2g、白蛋白1.0g，加入50ml氯仿/乙醇攪拌使吡柔比星、蛋黃卵磷脂、 氫化卵磷脂、膽固醇溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去氯仿/乙醇，加入蔗糖3g、葡萄糖2g， PH4擰檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲溶解，用^2(:03調節溶液PH'為7. 5， 40°C保溫30分鐘，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
4、 培洛霉素白蛋白脂質結合物
取培洛霉素50mg，蛋黃卵磷脂0.6g、膽固醇半琥珀酸酯0.2g，加入30ml無水乙醇中攪拌使培洛霉素、蛋黃卵磷脂、膽固醇半琥珀酸酯，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去乙醇，加入白蛋白2.5g、蔗糖5g， PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，擠壓過濾或高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入5% (重量百分比)甘露醇凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
5、 羥基喜樹堿白蛋白脂質結合物
取羥基喜樹堿50mg，蛋黃卵磷脂0.6g、膽固醇0.2g，加入30ml無水乙醇中攪拌使溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去乙醇，加入白蛋白2.0g、海藻糖5g， PH6-7檸檬酸緩沖鹽至總體積為100ml，高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0. 22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入3% (重量百分比)蔗糖凍干即得。如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。'
6、 鹽酸伊立替康白蛋白脂質結合物
取鹽酸伊立替康50mg，磷脂酰肌醇0. 5g、大豆卵磷脂2. Og、氫化卵磷脂0. 5g、膽固醇0.5g，加入50ml氯仿攪拌使溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去乙醇，加入白蛋白1.5g海藻糖5g， PH4檸檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲攪拌溶解，用化2〔03調節溶液ra為7.5， 4(TC保溫30分鐘，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質至粒度為50-200nm，過0.22的濾膜罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入3% (重量百分比)蔗糖凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。7、白介素白蛋白脂質結合物
取白介素0.5g，白蛋白1.5g、磷脂酰乙醇胺0.5g、大豆卵磷脂1.0g、氫化卵磷脂0.5g、膽固醇0.5g，加入50ml乙酸乙酯攪拌使溶解，用旋轉蒸發器減壓蒸餾除去乙酸乙酯，加入白蛋白1.5g、海藻糖5g、吐溫80 0. lg， PH7-8檸檬酸緩沖鹽至總體積為50ml，超聲攪拌溶解，用擠壓過濾法或高壓均勻機均質至粒度為50-200mn，罐裝密封即得。
如果制備冷凍干燥制劑，在上述液體中加入3% (重量百分比)甘露醇凍干即得。
如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成，為了避免白介素的損失，可以考慮無菌生產。
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權利要求
1、一種穩定的白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，其特征在于將白蛋白結合在脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率，其中白蛋白脂質載藥系統中包含具有活性的藥物、磷脂、甾醇和白蛋白，其制備方法為用常規制備脂質囊胞的方法先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞中，再在體系中加入白蛋白溶液，用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統，也可以將白蛋白和藥物同時加入溶入有機溶劑的磷脂、甾醇中形成前體脂質囊胞，再用緩沖鹽溶液水化后用擠壓過濾法或高壓均化法制成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統。
2、 根據權利要求l中穩定的白蛋白脂質載藥系統，其中各組分質量百分比如下活性藥物0. 01-20%、磷脂0. 1-60%、甾醇0. 01-20%、白蛋白0. 01-90%
3、 根據權利要求l中穩定的白蛋白脂質載藥系統，還包含凍干支持劑，選自小分子氨基酸、 多糖或多元醇，具體包括20種天然氨基酸、海藻糖、蔗糖、乳糖、麥芽糖、甘露醇、山梨 醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為2%-50%。
4、 根據權利要求i中穩定的白蛋白脂質載藥系統，還包含ra調節劑，選自鹽酸、磷酸、檸檬酸或其堿金屬鈉鹽、草酸或其金屬納鹽、氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、冰醋酸或其堿金。
5、 根據權利要求1中穩定的白蛋白脂質載藥系統，還可以進一步包含穩定劑，選自小分子 氨基酸或PEG200、 400、 600，吐溫80、泊洛沙姆(poloxamer)、脫氧膽酸鈉中的一種或其任 意混合物，所述的用量以重量計為0.2%-5%;還可以包括滲透壓調劑劑，選自葡萄糖、氯化 鈉、甘油、山梨醇中的一種或任意組合，所述的用量以重量計為0.2%-5%。
6、 根據權利要求l中穩定的白蛋白脂質載藥系統，還可以包括抗氧化劑，選自維生素E、維 生素C、亞硫酸鹽類、乙二胺四乙酸及其衍生物、鹽酸半胱氨酸中的一種或一種以上的混合 物。
7、 根據權利要求1中穩定的白蛋白脂質載藥系統，有機溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷、乙 醇、乙酸乙酯、乙醚、丙酮等低沸點溶劑。
8、 根據權利要求1中穩定的白蛋白脂質載藥系統，各組分中磷脂選自天然或合成磷脂中的 一種或一種以上的混合物；甾醇選自膽甾醇及其衍生物，具體包括膽固醇、聚乙二醇丁二醇 膽固醇醚、膽固醇半琥珀酸酯、麥角固醇、羊毛甾醇中的一種或一種以上的混合物；白蛋白 選自動物血清白蛋白、人血清白蛋白以及通過基因工程生產的人血清白蛋白中的一種。
9、 根據權利要求l中穩定的白蛋白脂質載藥系統得制備方法，具體包括以下兩種方法第一種制備方法包括以下步驟第一步根據藥物的特點用常規制備脂質囊胞的方法比如選擇旋轉蒸發法、PH梯度法、 注入法、二次乳化法中的一種先將藥物包裹在磷脂與甾醇形成的脂質囊胞體系，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比較均勻的顆粒，粒徑大小在100nm-1000nm;第二步在脂質囊胞體系體系中加入白蛋白溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術形成可注射的結合了白蛋白的脂質載藥系統，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；第三步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得；第二種制備方法包括以下步驟第一步根據藥物的特點用常規制備脂質囊胞的方法比如選擇旋轉蒸發法、PH梯度法、 注入法、二次乳化法中的一種先將白蛋白和藥物加入溶入有機溶劑的磷脂與甾醇中，減壓蒸 發除去有機溶劑后加入緩沖鹽溶液，通過超聲波、高壓均質或微流化技術使脂質囊胞形成比 較均勻的顆粒，粒徑大小在20nm-1000nm，過濾罐裝即得；第二步如果制備冷凍干燥制劑，在體系中加入適量凍干支持劑，凍干即得；如果要制備產品，環境、熱源、無菌等需要按照大生產的要求完成。
10、根據權利要求l中穩定的白蛋白脂質載藥系統的應用，為非腸道給藥，其中具有活性的藥物，優選抗腫瘤藥物，包括小分子抗腫瘤藥物，也包括多肽和蛋白質抗腫瘤藥物。
全文摘要
一種穩定的白蛋白脂質載藥系統及其制備方法，通過超聲波、高壓均質或微流化技術將白蛋白結合在脂質囊胞上，可以顯著提高脂質囊胞的穩定性以及提高了藥物在脂質囊胞中的包封率。
文檔編號A61P35/00GK101670112SQ20081014734
公開日2010年3月17日 申請日期2008年8月11日 優先權日2008年8月11日
發明者張文芳 申請人:蘇州世林醫藥技術發展有限公司