專利名稱：：熊果烷型五環三萜氨基酸衍生物、其制備方法及其醫藥用途的制作方法
技術領域：
：本發明涉及天然藥物和藥物化學領域，具體涉及一類新型的熊果烷型五環三萜衍生物。該類化合物可用于制備抗糖尿病及其并發癥藥物、抗腦缺血藥物、抗心血管疾病藥物、降血脂藥物、減肥藥物、抗動脈粥樣硬化藥物、治療代謝綜合癥藥物或抗腫瘤藥物。本發明還涉及這類化合物的合成方法以及含有它們的藥物組合。
背景技術：
：熊果烷型五環三萜化合物在植物界分布廣泛，科羅索酸(1)及積雪草酸(2)是其中有代表性的化合物，具有抗肝炎、抗腫瘤、抗病毒、降血糖及降血脂等多種藥理活性，且毒性低，副作用小，具有重要的開發價值及廣泛的應用前景。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>在降血糖方面，文獻報道，科羅索酸通過興奮葡萄糖的轉運，促進細胞對葡萄糖的吸收和利用，從而實現其降血糖功效(Chew.Ptor/w.Bm//.，1993，41，2129-2131)。專利WO2006054370公開了科羅索酸及其類似物積雪草酸作為一種糖異生抑制劑，不僅可以降低血糖，同時還可以降低血壓，血脂，降低動脈硬化和肥胖的發生概率。韓國學者研究證明科羅索酸對蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)具有一定的抑制活性，可用于治療2型糖尿病(尸/朋/aA/ed2006,72,261-263)。發明人先期的中國專利申請(CN1682740A)公開了科羅索酸和積雪草酸具有抑制糖原磷酸化酶的作用，因而可用于降血糖、降血脂、抗缺血性心腦血管疾病和抗腫瘤等。目前，己有糖原磷酸化酶抑制劑進入臨床研究階段用于治療糖尿病及其并發癥，但尚無相關藥物被批準上市。缺血性心、腦損傷是導致冠心病、心絞痛、心肌梗死、心律失常、腦梗死、中風和缺血性神經退行性疾病的重要病理因素。目前，在臨床上尚無有效的防治缺血性心腦損傷的藥物。在正常情況下，心、腦主要依賴有氧代謝來供應能量。但是，在嚴重缺血(缺氧)情況下，無氧糖代謝成為重要的能量供應渠道，此時，糖原磷酸化酶高度活躍，糖原的降解加劇，并經無氧糖酵解產生大量乳酸，導致乳酸中毒(lacticacidosis),進而引發缺血性心、腦損傷。因此，通過部分抑制糖原磷酸化酶(在缺血、缺氧及葡萄糖供應不足的情況下，適度的糖原降解供能是必需的)，可避免因糖原過度降解和隨后的無氧糖酵解所導致的乳酸中毒，因而有望成為抗缺血性心、腦血管疾病的有效新途徑J尸/j;wW.//eawC/rc./V2"/0/.2004,286,H1177-H1184;Nat.Neurosci.2007,10，1377-1386)。尤其值得重視的是，糖原磷酸化酶巳逐漸成為臨床上用于診斷心肌缺血的一個重要生化指標。崔福貴在專利文獻(CN1582946)中指出，積雪草酸能明顯減少結扎冠狀動脈造成的心肌梗死區質量，同時使反映心肌損害的生化代謝指標LDH及CK明顯下降，提示可將積雪草苷用于制備防冠心病、心肌梗死和腦血栓形成、腦梗死等心腦血管疾病。在腫瘤治療方面，文獻報道，科羅索酸對A549、SK-OV-3、SK-MEL-3、XF498和HCT15五種腫瘤細胞的EDsq在3.9~5.5pg/mL之間(戶/a"似Med,2000,66，485-486)。積雪草酸可誘導人黑素瘤細胞SK-MEL-2的凋亡(Ca"cer丄e紅，2005，218，81)。熊果垸型五環三萜化合物作為中國傳統中藥的主要活性成分，在體內具有多靶點、多途徑發揮藥效的特點。其中科羅索酸和積雪草酸正是通過對多個靶點的協調作用而產生廣泛的藥理活性，因此不僅可用于治療糖尿病及其并發癥、缺血性心腦血管疾病，也可應用在降血脂、減肥、抗動脈粥樣硬化、治療代謝綜合癥以及抗腫瘤方面。但是，科羅索酸和積雪草酸水溶性極差，其制劑的生物利用度低，大大限制了其在臨床上的應用。為改善其水溶性、增加給藥途徑并提高藥物在體內的生物利用度，根據前藥原理，對科羅索酸和積雪草酸進行了結構修飾，引入氨基酸為化學修飾物，使其成為水溶性大大提高的前體藥物。
發明內容本發明首次公開了式(I)所示的具有藥用價值的新型熊果烷型五環三萜衍生物、其制備方法及醫藥用途，包括在制備抗糖尿病及其并發癥藥物、抗腦缺血藥物、抗心血管疾病藥物、降血脂藥物、減肥藥物、抗動脈粥樣硬化藥物、治療代謝綜合癥藥物和抗腫瘤藥物方面的用途。尤其是式(I)所示的化合物具有糖原磷酸化酶抑制活性，因此可以用于治療與糖原代謝異常相關的疾病，這些疾病包括糖尿病(特別是2型糖尿病)及其并發癥、缺血性心腦血管疾病(特別是心肌梗死、心絞痛、心律失常、冠心病、中風、腦梗死或缺血性神經退行性疾病等)、高胰島素血癥、胰島素抵抗、代謝綜合征、肥胖、禁食高血糖癥和腫瘤。此外，本發明還提供一種含有(I)所示化合物的藥物制劑。本發明涉及式(I)所示的化合物及其藥學上可接受的鹽或酯<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>其中:Ri代表H或R5CO;R2代表H或R5CO;R3代表H、OH或RsCOO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)；R5代表120個碳的非取代的或X取代的直鏈或支鏈烷烴、烯烴、炔烴、苯基、芐基或萘基；X代表H、F、Cl、Br、I、CN、N02、NH2、CF3、SH、OH、OCH3、OC2H5、COOH、1~10個碳的直鏈或支鏈烷烴、烯烴、炔烴、苯基、芐基或萘基。上述化合物中優選化合物的特征在于Ri代表H或CH3CO;R2代表H或CH3CO;R3代表H、OH或CH3COO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)。更為優選的化合物是N-(2a，3j3,23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2fl，3j3,23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2fl,3j3,23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸；N-(2fl，3j3，23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3j，23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸；N《2fl,3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"脯氨酸；N-(2fl,3j3,23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2fl,3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸；N-(2fl，3j5,23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl,3j3，23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"酪氨酸；N-(2fl，3jS，23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸；N-(2",3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2a，3》-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2",3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2",3》-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸；N-(2a，3"-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3^C羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸；N-(2fl，3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸；N-(2fl，3》-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2fl，3^-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸；N-(2a,3"-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl，3jS-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸；N-(2a,3,二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸；N-(2a,3》-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯；N-(2a，3j3，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯；N-(2fl,3/J,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2a，3i,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯；N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2a，3j3，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸甲酯；N-(2a,3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2a，3j,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸二甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯；N-(2a，3y-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)甘氨酸甲酯；N-(2fl，3j-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N陽(2fl，3"-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯；N-(2fl，3j-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2fl,3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯；N-(2a，3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2a,3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2fl，3》-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸甲酯；N-(2a，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2fl,3jS-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2a，3》-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸二甲酯；N-(2fl，3^-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯。本發明的部分衍生物可用下列方法制備得到a.按照常規的羥基酯化方法，將科羅所索酸或積雪草酸與各種酰氯、酸酐或羧酸反應，得到羥基保護的科羅索酸或積雪草酸衍生物；b.將a產物溶解在有機溶劑中，加入氯化亞砜或者草酰氯，反應l-24小時，溫度為0。C至120。C。所采用的溶劑可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己垸、環己垸、四氫呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作為溶劑；c.將氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽與有機胺或無機堿在有機溶劑中混合，加入b產物，反應l-48小時，溫度為0'C至回流，得到羥基保護的科羅索酸或積雪草酸-28-酰胺氨基酸酯。所采用的有機胺為三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶。所采用的無機堿為碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀或碳酸氫鉀。所采用的溶劑可以是二氯甲垸、1，2-二氯乙烷、氯仿、甲苯、正己烷、環己烷、四氫呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作為溶劑；d.將c產物溶解在有機溶劑中，加入堿溶液進行水解反應，溫度為0'C至回流，得到科羅索酸或積雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物。所采用的溶劑可以是甲醇、四氫呋喃、二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、環己烷、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用甲醇或四氫呋喃作為溶劑。所采用的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰。本發明還包括藥物制劑，該制劑包含作為活性劑的通式(I)化合物或其藥用鹽、酯或藥學上可接受的載體。上述藥學上可接受的載體是指藥學領域常規的藥物載體，是指一種或幾種惰性的、非毒性的固體或液體填充物、稀釋劑，助劑等，它們不逆向與活性化合物或病人發生作用。本發明組合物的劑型可以是片劑、膠囊、丸劑、栓劑、軟膠囊、口服液、混懸劑、注射液等藥劑學上常用的劑型。口服用藥片和膠囊含有傳統的賦形劑如填充物、稀釋劑、潤滑劑、分散劑以及粘合劑。本發明藥物組合物的各種劑型可以按照藥學領域中熟知的方法進行制備。以上活性劑的劑量將因配方而異。一般地，已證明有利的量，為達到所需結果，每千克每24小時給藥的式(1)化合物的總量為約0.01-800mg，優選的總量為0.1-100mg/kg。如果必要，以幾次單劑量的形式給藥。然而，如果必要，也可以偏離上述用量，即這取決于待治療的受試者的類型和體重、個體對藥物的行為、疾病的性質和嚴重性、制劑和給藥的類型、以及給藥時間和間隔。圖1是表示本發明部分積雪草酸氨基酸衍生物的制備過程。圖2是表示本發明部分科羅索酸氨基酸衍生物的制備過程。在圖l和圖2中，Rs如上述式(I)中所定義；NH2CHR7COOR6代表各種氨基酸酯，包括天然存在的所有氨基酸或人工合成的D-型氨基酸，其中，R6代表l-5個C的烷基或芐基，R7代表氨基酸的不同取代基。具體實施例方式下面通過實施例具體說明本發明的內容。在本發明中，以下所述的實例是為了更好的闡述本發明，并不是用來限制本發明的范圍。目標化合物對于糖原磷酸化酶的抑制活性試驗試劑的配制1)顯色液的配制稱量鉬酸銨5g，溶解于500mllMHCI中，用攪拌器攪拌，至全部溶解后在加入孔雀綠190mg，繼續攪拌至全部溶解，并用錫箔紙避光；2)緩沖液的配制①精密稱量Hepes0.5958g，溶于5mlH20中，用10MNaOH調PH至7.2，配制成終濃度為0.5M的Hepes;②精密稱量KC10.3728g，溶于5mlH20中，配制成終濃度為1M的KC1;③精密稱量MgCl20.0255g，溶于lmlH20中，配制成終濃度為125mM的MgCl2;④精密稱量EGTA0.0476g，溶于5mlH20中，用IOMNaOH調PH至7.0，配制成終濃度為25mM的EGTA;⑤精密稱量G-l-P0.0152g，溶于10mlH2O中，配制成終濃度為5mM的G-l-P;⑥精密稱量glycogen10mg，溶于lmlH20中，配制成終濃度為10mg/ml的glycogen;3)陽性藥caffeine溶液的配制將caffeine溶于10mlH20配制0.5、5、50和500nM的溶液；4)配制GPa溶液取1y1的GPa加入到100ui反應體系中，終濃度為250ng/100P1;5)待測試化合物溶液的配制將待測試化合物溶于DMSO配制成濃度為10mM溶液，取適量化合物溶液加入到反應體系中至不同終濃度。測定rabbit肌糖原磷酸化酶活性的量效曲線通過讀取不同濃度的GPa加入顯色液后的在655nm下的OD值，來測定其量效曲線。由量效曲線可選擇GPa的量為250ng。實驗步驟1)設計PC(陽性對照)、Blank(空白對照)、陽性藥(咖啡因)；2)加反應buffer52u1;3)加測試化合物至終濃度；4)加酶1u1，終濃度為250ng/100u1;5)加顯色液150yl;6)2025攝氏度條件下反應20分鐘；7)在波長655nm條件下比色；8)數據的讀取及抑制率的計算抑制率=[陽性對照-待測樣品]/[陽性對照-空白對照]。測試結果表中列出了部分衍生物對rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性數據，結果顯示，科羅索酸或積雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物對糖原磷酸化酶具有不同程度的抑制活性?？屏_索酸或積雪草酸氨基酸衍生物對rabbit肌糖原磷酸化酶的抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>fNI^(2,3凡23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸fNHar#^。HN-(2a,3A23-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)七-丙氨酸fNIHS/hoN-(2a，3j8,23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸fNIhoN-(2a，3/，23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸fNIi^Kt^、hhoN-(2a,3jS，23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸亍NI/hoN-(2a，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)丄-脯氨酸f95.6N-(2a,3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸T361.5'1'1I^IT"Yoh1^-(2^3"-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L"苯丙氨酸!NI'I^T"vohN-(2fl,3"-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸aiC5Q值均為三次實驗的平均值；bNI表示在100fxM濃度下沒有活性。以上藥理學數據顯示，本發明通式(I)化合物具有糖原磷酸化酶的抑制作用，因此可用于制備抗糖尿病藥物、抗腦缺血藥物、抗心血管疾病藥物、降血脂藥物、減肥藥物、抗動脈粥樣硬化藥物或抗腫瘤藥物。以下通過實施例進一步說明本發明的實施實施例l2a，3A23-三乙酰氧基積雪草酸的合成將積雪草酸(0.20g,0.40mmol)、乙酸酐(76mg,0.74mmol)加入吡啶(10ml)中，室溫攪拌過夜。反應液以乙酸乙酯稀釋后，依次以水、1N稀鹽酸、飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗滌，有機相干燥、過濾、濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯10/1V/V)，得2fl，3A23-0-三乙酰基積雪草酸(170mg,78%)。M.p.93-95。C。ESI-MSm/z:637[M+Na]+.丄H-NMR(CDC13，300MHz):0.78,0.85，0.88，0.94，1.07,1.11(each3H,s)，1.98,2.02，2.08(each3H，力，2.19(1H,d，J=11.3Hz),3.58(1H，/=11.8Hz),3.85(IH，J=11.8Hz)，5.07(1H,d，/=10.3Hz),5.12-5.17(1H,m)，5.25(1H,0.實施例2N-(2^3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯的合成將2fl，3j3,23-三乙酰氧基積雪草酸(0.25g，0.40腿o1)溶解于精制干燥的二氯甲烷(20ml中，冰浴下滴加草酰氯(0.8ml)，室溫攪拌24小時，減壓蒸除二氯甲烷，再加入精制干燥的二氯甲垸(20X3)，溶解，蒸除，得到2fl，3A23-三乙酰氧基積雪草酰氯。將甘氨酸甲酯鹽酸鹽(0.15g，1.20mmol)禾CIDMAP(0.03g,0.22mmol)溶于干燥的二氯甲垸中，滴加上述新鮮制備的三乙?；e雪草酰氯的二氯甲垸溶液，滴畢，室溫攪拌12小時，反應液依次使用1N鹽酸水溶液、飽和食鹽水洗滌，有機層干燥、過濾、濃縮，快速柱層析(石油醚/乙酸乙酯4/1V/V)，得N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯(244mg,87%)。M.p.175-178°C。ESI-MSm/二686.4[M+H]+.工H-NMR(CDC13，300MHz):.0.73,0.87，0.89,0.96(each3H,勻，1.10(6H,s),1.98,2.02，2.08(each3H,勻，3.58(1H,d，>/=11.8Hz)，3.76(3H,s),3.81-3.88(2H，m),4.05-4.13(1H，m),5.12-5.21(2H,m),5.43(1H，f),6.85(1H，f).實施例3N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2fl，3A23-三乙酰氧基積雪草酸和L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯。M.p.220-222°C。ESI-MS/n/z:700.5[M+H]+.力-固R(CDC13，300MHz):0.70(3H,5)，0.88(6H,力，0.96(3H，力，1.09(9H，力，1.98，2.62,2.08(each3H，力，3.57(1H，d，J=11.8Hz),3.75(3H，力，3.84(1H，《/=11.8Hz),4.45-4.49(1H，m),5.07(1H，《J=10.3Hz),5.12-5.17(1H，m)，5.40(1H，f)，6.57(1H，《/=5.9Hz).實施例4N-(2fl，3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2a，3A23-三乙酰氧基積雪草酸和L-纈氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2fl，3",23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯。M.p.205-208°C。ESI-MSm/z:728.5[脅H]十.工H-NMR(CDC13，300MHz):0.68(3H,s)，0.88-0.97(15H，w),1.09(6H，力，1.98，2.02，2.08(each3H，力，3.57(1H，/=11.8Hz)，3.70(3H，力，3.84(1H，c，/=11.8Hz)，4.42-4.46(1H，m)，5.07(1H，d,J=10.3Hz)，5.11-5.19(1H,m)，5.38(1H，0，6.36(1H,d,/=7.4Hz).實施例5N-(2"，3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2fl，3凡23-三乙酰氧基積雪草酸和L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2a,3j3，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯。M.p.120-124。C。ESI-MSw/二776.4[M+H]+,丄H-NMR(CDC13，300MHz);0.60，0.83，0.88，0.94,1.05，1.06(each3H,力，1.97,2.02,2.08(each3H,s)，3.00-3.17(2H,m)，3.56(1H，d,/=11.7Hz),3.68(3H，力，3.84(1H,d,/=12.0Hz)，4.71(1H,瓶J=6.0,12.0Hz)，5.06(1H,d,J=10.2Hz)，5.10-5.19(1H,m)，5.25(1H，f),6.34(1H，d,J=6.0Hz)，7.08-7.31(5H，m).實施例6N-(2a,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2a，3A23-三乙酰氧基積雪草酸和L-絲氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2a，3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯。M.p.217-219°C。ESI-MS716.5[M+H]+.iH-NMR(CDC13,300MHz);0.70,0.88，0.88,0.97，1.09，1.10(each3H，s)，1.98,2.02,2.08(each3H，5),2.26(1H，=17.1Hz),3.57(1H，d，/=11.8Hz)，3.79(3H，5),3.82-3.86(2H，m)，3.94-3.99(1H，m)，4.52-4.53(1H，5.07(1H，d，/=10.3Hz),5.12-5.16(1H，m)，5.43(1H，f),6.85(1H，d，h5.1Hz).實施例72fl,3"-二乙酰氧基科羅索酸的合成參照實施例l的方法，以科羅索酸和乙酸酐制得2a，3j5-二乙酰氧基積雪草酸。M.p.225-227。C。ESI-MSm/2:555.3[M-H]—.'H-畫R(CDC13，300MHz):0.76，0.89，0.90(each3H，力，1.07(6H，"，0.85(3H，《J=6.5Hz)，0.95(3H，d,■/=6.3Hz)，1.97(3H,力，2.05(3H，力，2.19(1H，d，/=11.2Hz)，4.76(1H，《/=10.3Hz),5.10(1H,w)，5.23(1H，f，/=3.6Hz).實施例8N-(2fl,3^-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2fl，3y^二乙酰氧基科羅索酸和L-亮氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯。M.p.133-135°C。ESI-MSw/二684.4[M+H]+.丄H畫R(CDC13，300MHz):0.68(3H,力，0.86(3H,力，0.89(6H,"，0.91(3H,力，0.93(3H,力,0.95(3H，力，1.05(3H，力，1.08(3H，力，1.97，2.04(each3H,"，3.69(3H，力，4.55(1H,w),4.74(1H，《/=10.3Hz)，5.04-5.12(1H，w)，5.36(1H,0,6.33(1H，d，/=7.08Hz).實施例9N-(2fl,3,二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2fl，3"-二乙酰氧基科羅索酸和L"蛋氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯。M.p.130-133°C。ESI-MSm/z:702.4[M+H]+.工HNMR(CDC13，300MHz):0.67(3H,力，0.89(6H，d，/=6.90Hz)，0.90(3H，力，0.96(3H，力，1.05(3H，力，1.08(3H，5),1.97，2.05(each3H，力，3.73(3H，力，4.58(1H,瓶/=5.91，11.82Hz)，4.74(1H,A=10.34Hz)，5.04-5.12(1H,w)，5.40(1H，0，6.60(1H,《/=6.22Hz).實施例ION-(2"，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰膨-L-苯丙氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2",3j5-二乙酰氧基科羅索酸和L-苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2fl，3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯。M.p.128-132°C。ESI隱MSw/二718.3[M+H]+.丄HNMR(CDC13，300MHz):0.60(3H，"，0.82(3H，d，/=6.29Hz)，0.89(6H，力，0.94(3H，",1.02(3H,力，1.05(3H,力，1.96，2.04(each3H,"，3.05-3.12(2H，m)，3,67(3H,力，4.70-4.75(2H，w)，5.03-5.12(1H，w)，5.24(1H，0，6.35(1H，d，J=6.18Hz),7.08-7.11(2H,附)，7.25-7.28(3H，m).實施例llN-(2a,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯的合成參照實施例2的方法，以2fl,3j-二乙酰氧基科羅索酸和L-酪氨酸甲酯鹽酸鹽制得N-(2fl,3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯。M.p.160-164°C。ESI隱MSm/z:734.4[M+H]+.力NMR(CDC13，300MHz):0.61(3H,5),0.83(3H，《J=6.35Hz)，0.89(6H,力，0.94(3H，力,1.02(3H，力，1.05(3H，力，1.97，2.05(each3H，5),2.91-3.09(2H，3.67(3H，5),4.66-4.76(2H,m)，5.05-5.09(1H,w)，5.26(1H，0,5.82(1H,br力，6.41(1H，d,>/=6.40Hz)，6.73(2H，W,_/=8.41，63.74Hz),6.95(2H，瓶J=8.42，63.74Hz).實施例12N-(2a，3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸的合成將N-(2fl，3jS，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯(152mg，0.22mmol)溶于甲醇(3mL)和四氫呋喃(4.5mL)的混合溶劑中，加入氫氧化鈉水溶液(1.1ml，4N)，室溫攪拌3小時。反應液以乙酸乙酯稀釋，并以lN稀鹽酸調節pH值，得到的混合物依次以水、飽和食鹽水洗滌，有機層干燥、過濾、濃縮，柱層析(二氯甲垸/甲醇10/1V/V)，得^[-(2^3凡23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸(107mg，89%)。M.p.269°C(dec.)。ESI-MSm/z:544.3[Af-H]扁.工H-NMR(d6-DMSO+D20，300MHz):0.55,0.65，0.84，0.92，0.92，1.04(each3H,s)，2.09(1H，d，/=10.7Hz),3.06(1H，d，J=10.6Hz),3.18(1H，《/=9.5Hz)，3.30(1H，/=10.9Hz)，3.49-3.53(1H,m)，3.59(1H，d，J=17.3Hz)，3.74(1H,d，J=17.5Hz)，5.24(1H，f).實施例13N-(2fl,3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl，3j3,23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯為原料制得N-(2fl，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸。M.p.226-230°C。ESI-MSm/z:558.3[M-H]\工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):0.51，0.62,0.80,0.88,0.88，1.00，1.19(each3H，力，2.04(IH，/=10.5Hz)，3.02(1H，d，/=10.5Hz)，3.13(1H,《/=9.1Hz),3.26(1H，d，J=10.7Hz)，3.48(IH，f)，4.06(1H,d，/=6.3Hz)，5.20(1H，br力.實施例14N-(2a，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2a,3jS，23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯為原料制得N-(2fl,3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸。M.p.214-218°C。ESI-MSm/二588.3[脅H]+,工H-NMR(d6-DMSO+D20，300MHz):.0.54，0.63,0.83，0.86,0.87，0.91，0.91，1.04(each3H，s)，2.09(1H，10.5Hz),3.03(1H,d,/=10.5Hz)，3.16(1H，d,/=9.3Hz)，3.29(2H,d，/=10.5Hz)，4.00(1H，0,5.20(1H,brs)，6.90(1H，d，J=7.5Hz).實施例15N-(2",3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl，3j，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯為原料制得N-(2fl，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸。M.p.210-214°C。ESI-MSw/z:636.3[M+H]+.工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):.0.52，0,76，0.78,0.83，0.87，0.94(each3H,",2.88-2.91(1H，m),2.92-2.96(2H，fn),3.13(1H,d,■/=9.3Hz),3.27(1H,d,/=10.2Hz),4.16(1H，br5),5.01(1H,f)，7.20(5H,".實施例16N-(2c，3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯為原料制得N-(2a，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸。M.p.224-227°C。ESI-MSw/z:574.2[Af隱町.工H-NMR(d6-DMSO+D20,300MHz):0.50，0.60,0.79,0.86，0.87,1.00(each3H，力，2.99(1H,d,/=10.6Hz)，3.11(1H,J,/=9.3Hz)，3.24(1H，/=11.0Hz)，3.45-3.54(2H,m),4.10-4.11(1H，m)，5.21(1H，br"，6.96(1H，cf，J=6.1Hz).實施例17N-(2fl,3j-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl，3"-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯為原料制得N-(2fl，3^二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸。M.p.156-16CTC。ESI-MSm/z:584.4[M陽H]-.丄H-畫R(d6-DMSO+D20，300MHz):0.53，0.64,0.75,0.77，0.82，0.84，0.85,0.860.97(each3H，s),2.06(1H，《J=16.14Hz)，2.72(IH,0,3.39-3.40(IH，m),4.07-4.15(IH，m)，5.14(1H，f)，7.12(IH,《J^7.08Hz).實施例18N-(2a，-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl,3/-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯為原料制得N-(2a，3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸。M.p.180°C(dec;ESI-MSm/z:642.6[M-町.工H-NMR(CD3OD，300MHz):0.69(3H,5)，0.80(3H,",0.85(3H，d，J=6.46Hz),0.94(3H,d，/=6.23Hz),0.97(3H，s)，1.00(3H，力，1.09(3H,力，2.90(IH，d，/=9.60Hz)，3.07-3.28(2H,/n)，3.56-3.61(IH，m)，4.23(IH,瓶J=4.51，5.61Hz)，5.34(IH，f)，7.13-7.18(5H,nx).實施例19N-(2^3》-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸的合成參照實施例12的方法，以N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯為原料制得N-(2fl,3jS-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸。M.p.182°C(dec.)。ESI-MSm/z:634.4[M-H]—.丄H-畫R(CD3OD,300MHz):0.57(3H,力，0.79(3H，力，0.85(3H,c，/=6.32Hz)，0,94(3H，力,0.97(3H，s),0.99(3H，力，1.07(3H，s)，2.87(1H,d，>/=9.57Hz),2.93-2.97(1H,m)，3.07-3.14(1H,;n)，3.53-3.64(1H,m),4.30(1H，br5)，5.27(1H，f)，6.64(2H,AJ=7.61Hz)，6.99(2H，d，/=8.27Hz).權利要求1.下述通式(I)化合物及其藥學上可接受的鹽或酯R1代表H或R5CO；R2代表H或R5CO；R3代表H、OH或R5COO；R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)；R5代表1～20個碳的非取代的或X取代的直鏈或支鏈烷烴、烯烴、炔烴、苯基、芐基或萘基；X代表H、F、Cl、Br、I、CN、N02、NH2、CF3、SH、OH、OCH3、OC2H5、COOH、1～10個碳的直鏈或支鏈烷烴、烯烴、炔烴、苯基、芐基或萘基。2.權利要求1的化合物及其藥學上可接受的鹽或酯，其特征在于Ri代表H或CH3CO;R2代表H或CH3CO;R3代表H、OH或CH3COO;R4代表取代的氨基酸或氨基酸酯(包括天然存在的所有氨基酸和人工合成的D-型氨基酸)。3.權利要求l的化合物，其中化合物可以是下列任一化合物及其藥用鹽或酯酰胺)-甘氨酸；酰胺)-L-丙氨酸；酰胺)-L-纈氨酸；酰胺)-L-苯丙氨酸；酰胺)-L-絲氨酸；酰胺)-L-脯氨酸；酰胺)-L-亮氨酸；酰胺)-L-異亮氨酸；酰胺)-L-蛋氨酸；酰胺)-L-酪氨酸；酰胺)-L-天東氨酸；酰胺)-L-谷氨酸；2N-(2fl，3j3，23-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a，，23誦三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羥基熊果烷-12-烯-28N-(2fl，3j3，23-三羥基熊果烷-12-烯-28N-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2"，3j3,23-三羥基熊果烷-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3j3,23-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3A23-三羥基熊果烷-12-烯-28N-(2fl,3j3,23-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a,3A23-三羥基熊果垸-12-烯-28N-(2a，3-，23-三羥基熊果烷-12-烯-28N-(2a,3"-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸；N-(2fl，3j3-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸；N-(2"，3j5-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸；N-(2fl，3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸；N-(2fl，3j3-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸；N-(2fl,3j3-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸；N-(2^,3j-二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸；N-(2a,3^-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸；N-(2fl,3》-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸；N-(2fl，3^二羥基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸；N-(2a，3"-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸；N-(2fl,3^-二羥基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸；N-(2fl,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-甘氨酸甲酯；N-(2a，3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯；N-(2a,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2fl，3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L脯氨酸甲酯；N-(2fl,3j3,23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3凡23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸甲酉旨；N-(2a,3jS，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2fl，3y，23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸二甲酉lN-(2a,3A23-三乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯；N-(2"，3jS-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)甘氨酸甲酯；N-(2fl,3jS-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-丙氨酸甲酯；N-(2a，3^二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-纈氨酸甲酯；N-(2"，3jS-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-苯丙氨酸甲酯；N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-絲氨酸甲酯；N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-脯氨酸甲酯；N-(2fl,3"-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-亮氨酸甲酯；N-(2a，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-異亮氨酸甲酯；N-(2fl，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-蛋氨酸甲酯；N-(2a,3j3-二乙酰氧基熊果烷-12-烯-28-酰胺)-L-酪氨酸甲酯；N-(2fl，3j5-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-天東氨酸二甲酯；N-(2fl，3j3-二乙酰氧基熊果垸-12-烯-28-酰胺)-L-谷氨酸二甲酯。4.權利要求l、2、3的化合物的制備方法，包括a.按照常規的羥基酯化方法，將科羅所索酸或積雪草酸與各種酰氯、酸酐或羧酸反應，得到羥基保護的科羅索酸或積雪草酸衍生物；b.將a產物溶解在有機溶劑中，加入氯化亞砜或者草酰氯，反應l-24小時，溫度為0。C至12(TC。所采用的溶劑可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、環己烷、四氫呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用二氯甲垸、1，2-二氯乙烷或甲苯作為溶劑；c.將氨基酸酯或氨基酸酯鹽酸鹽與有機胺或無機堿在有機溶劑中混合，加入b產物，反應l-48小時，溫度為0。C至回流，得到羥基保護的科羅索酸或積雪草酸-28-酰胺氨基酸酯。所采用的有機胺為三乙胺、吡啶或4-二甲氨基吡啶。所采用的無機堿為碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀或碳酸氫鉀。所采用的溶劑可以是二氯甲烷、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己垸、環己垸、四氫呋喃、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用二氯甲烷、1，2-二氯乙垸或甲苯作為溶劑；d.將c產物溶解在有機溶劑中，加入堿溶液進行水解反應，溫度為0'C至回流，得到科羅索酸或積雪草酸-28-酰胺氨基酸衍生物。所采用的溶劑可以是甲醇、四氫呋喃、二氯甲垸、1，2-二氯乙垸、氯仿、甲苯、正己烷、環己垸、叔丁基甲基醚或上述溶劑的混合溶劑，優先采用甲醇或四氫呋喃作為溶劑。所采用的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氫氧化鋰。5.—種藥物組合物，其中含有治療有效量的式(I)化合物和藥學上可接受的載體。6.權利要求1至3的化合物，其特征在于這些化合物是新型糖原磷酸化酶抑制劑。7.權利要求1至3的化合物在制備用于預防和治療糖尿病及其并發癥、缺血性心腦血管疾病、高血脂癥、肥胖、動脈粥樣硬化癥、代謝綜合征或腫瘤的藥物中的用途。8.權利要求7的用途，其特征在于糖尿病是2型糖尿病，其并發癥包括糖尿病腎病、糖尿病足、糖尿病神經病變或糖尿病并發的心腦血管疾病。9.權利要求7的用途，其特征在于缺血性心腦血管疾病是心肌梗死、心絞痛、心律失常、冠心病、腦缺血、中風、腦梗死或缺血性神經退行性疾病。10.權利要求7的用途，其特征在于權利要求1至3的化合物可用于預防和治療高血脂癥和動脈粥樣硬化癥。全文摘要本發明涉及天然藥物及藥物化學領域，具體涉及一類熊果烷型五環三萜氨基酸衍生物(I)、其制備方法及其醫藥用途。這類化合物有糖原磷酸化酶抑制作用，可用于制備抗糖尿病藥物、抗腦缺血藥物、抗心血管疾病藥物、降血脂藥物、減肥藥物、抗動脈粥樣硬化藥物和抗腫瘤藥物。本發明還涉及該類化合物的制備方法及含有它們的藥物制劑。文檔編號A61P3/04GK101337984SQ200810147378公開日2009年1月7日申請日期2008年8月13日優先權日2008年8月13日發明者孫宏斌,張麗穎,軍柳申請人:中國藥科大學