專利名稱：：具鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發明涉及三肽，尤其涉及具鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制備方法，本發明還涉及該氨基酰酪氨酰色氨酸三肽在制備鎮痛藥物中的用途，屬于生物醫藥領域。
背景技術：
：疼痛不僅是許多疾病的并合癥，而且自身已經被看作是一類疾病。從疾病層面上講，由各種各樣的疼痛造成的生活質量下降波及了最大量的人群。由于有效的鎮痛劑往往與依賴性相聯系，所以發明新的無依賴性的鎮痛劑具有重要價值。發明人在多肽研究中偶然發現發現，含色氨酸的寡肽通常具有鎮痛活性。按照這種線索，本發明披露一類氨基酰酪氨酰色氨酸三肽鎮痛劑。
發明內容本發明的目的之一是提供一類具有鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。本發明的目的之二是提供一種制備上述氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法。本發明的目的之三是提供一種能夠鎮痛的藥物組合物。本發明的上述目的是通過以下技術方案來實現的—類具有鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽，其結構為通式I所示AA-Tyr-TrpI其中，AA選自丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、組氨酸殘基、異亮氨酸殘基、賴氨酸殘基、亮氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、天冬酰胺殘基、脯氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、絲氨酸殘基、蘇氨酸殘基、纈氨酸殘基、色氨酸殘基或酪氨酸殘基。—種制備上述具有鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法，包括(1)將叔丁氧羰基保護的酪氨酸和色氨酸芐酯耦聯，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸節酯；(2)脫去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯的叔丁氧羰基，得到酪氨酰色氨酸芐酯；(3)將酪氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯；(4)將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯氫解脫芐基，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；(5)將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脫去叔丁氧羰基，即得通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。其中，步驟(1)中優選在二環己基羰二亞胺J-羥基苯并三唑J-甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將叔丁氧羰基保護的酪氨酸和色氨酸芐酯耦聯，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯；步驟(2)中優選在氯化氫/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯，脫去叔丁氧羰基，制備得到酪氨酰色氨酸芐酯；步驟(3)中優選在二環己基羰二亞胺、^羥基苯并三唑、^甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將酪氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯；所述的叔丁氧羰基保護的氨基酸優選為叔丁氧羰基保護的丙氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬氨酸單芐酯、叔丁氧羰基保護的谷氨酸單芐酯、叔丁氧羰基保護的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保護的甘氨酸、叔丁氧羰基保護的組氨酸、叔丁氧羰基保護的異亮氨酸、叔丁氧羰基保護的二叔丁氧羰基保護的賴氨酸、叔丁氧羰基保護的亮氨酸、叔丁氧羰基保護的蛋氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬酰胺、叔丁氧羰基保護的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保護的硝基精氨酸、叔丁氧羰基保護的絲氨酸、叔丁氧羰基保護的蘇氨酸、叔丁氧羰基保護的纈氨酸、叔丁氧羰基保護的色氨酸或叔丁氧羰基保護的酪氨酸；步驟(4)中優選在鈀碳存在下將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯氫解脫芐基，制備得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；步驟(5)中優選在氯化氫/乙酸乙酯溶液中叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脫去叔丁氧羰基，制備得到通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。在小鼠甩尾模型上評價本發明化合物的鎮痛活性，實驗結果表明，本發明通式I化合物具有優秀的鎮痛活性，臨床上可作為鎮痛劑應用。在此基礎上，本發明的又一目的是提供一種具有鎮痛活性的藥用組合物，該藥用組合物由治療上有效劑量的本發明通式I化合物與藥學上可接受的賦型劑或者輔加劑組成，即將有效量的本發明化合物與藥學上可接受的載體或稀釋劑配合后，按本領域常規的制劑方法將其制備成任意一種適宜的藥物組合物。通常該組合物適合于口服給藥和注射給藥，也適合其他的給藥方法。該組合物可以是片劑、膠囊劑、粉劑、顆粒劑、錠劑、栓劑，或口服液等液體制劑形式。根據不同的給藥方法，本發明藥物組合物可以含有O.1%_99%重量，優選10_60%重量的本發明化合物。圖1為本發明化合物的合成路線圖；(i)DCC，H0Bt，匪，THF;(ii)4NHCl/EtOAc，(TC，30min;(iii)H2/Pd;Boc-AA選自叔丁氧羰基保護的丙氨酸、天冬氨酸單芐酯、谷氨酸單芐酯、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、二叔丁氧羰基保護的賴氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、硝基精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸。具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，本發明的優點和特點將會隨著描述而更為清楚。但這些實施例僅是范例性的，并不對本發明的范圍構成任何限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明的保護范圍內。實施例1制備Ala-Tyr-Trp(AYW)1)制備Boc-Tyr-Trp-OBzl室溫將Boc-Tyr-0H(20.00g，71.17mmol)和H0Bt(9.60g，71.17mmol)溶解于無水THF中，冰浴下用NMM調節pH值到8_9，加入用無水THF溶解的DCC(14.66g，71.17mmol)，0。C攪拌析出大量二環己基脲(DCU)，15-20分鐘后，反應液中加入H3P04'Trp-0Bzl(23.25g，59.31mmol)。半小時后撤去冰浴，室溫攪拌。12小時后停止攪拌，過濾DCU，THF盡量旋干制得黃色粘稠液體。用300ml乙酸乙酯溶解后依次用飽和碳酸氫鈉(200mlX3)，飽和食鹽水(200mlX2)，5%KHS04(200mlX3)，飽和食鹽水(200mlX2)洗滌，無水硫酸鈉干燥。減壓濃縮除去溶劑制得黃色粘稠液體，加入乙醚減壓抽干，反復多次制得淡黃色固體36.473g(92%)，不經過柱層析分離直接用于下步反應。ESI+-MS(m/e)558[M+H]+.2)制備HC1Tyr-Trp-OBzl將Boc-Tyr-Trp-OBzl(10.OOg，17.95,1)溶解于無水乙酸乙酯，0°C下加入100mlHCl/EtOAc(4N)。0.5小時后反應完畢。加入石油醚，析出大量粉白色固體。過濾，濾渣用乙醚(50mlX3)洗滌。濾液減壓濃縮至干，得到8.42g(95X)固體，投入下一步反應。ESI+-MS(m/e)458[M+H]+.3)制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl將Boc-Ala(403mg，2.13mmol)，HOBt(280mg，2.07mmol)溶于無水二甲基甲酰胺(DMF)中，(TC下，用NMM調節pH值至8-9，加入用無水DMF溶解的DCC(483mg，2.13,1)，反應20分鐘。然后加入化合物HC1Tyr-Trp-OBzl(1.Og，2.07,1)。0.5小時后撤去冰浴，室溫攪拌。12小時后停止攪拌，過濾DCU，濾液減壓濃縮得黃色粘稠液體。殘留物用50ml乙酸乙酯溶解后依次用飽和碳酸氫鈉(30mlX3)，飽和食鹽水(30mlX2)，5%KHS04水溶液(30mlX3)，飽和食鹽水(30mlX2)洗滌，無水硫酸鈉干燥、過濾、濾液減壓濃縮得973mg(80%)標題化合物，為黃色固體。ESI+-MS(m/e)629[M+H]+.4)制備Ala-Tyr-Trp將Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl(500mg)溶解于甲醇，加入15%Pd/C，通氫氣48小時、濾除鈀碳、濾液減壓濃縮。殘留物加入5ml4NHCl/EtOAc、(TC攪拌0.5小時、過濾、濾液減壓濃縮。殘留物用無水乙醚洗滌(30mlX3)。得到240mg(79X)標題化合物，為無色粉末。Mp.122-123C;[a]d25=16.6(c=1.23，CH3OH)，ESI+-MS(m/e)439[M+H]+;工HNMR(朋SC-300Hz，DMS0_d6)，10.82(s，1H)，8.37(d，J=8.0Hz，lH)，8.08(d，J=7.5Hz，1H)，7.58(d，J=7.5Hz，1H)，7.31(d，J=7.5Hz，1H)，6.98(m，5H)，6.64(d，J=8.4，2H)，3.55(q，J=6.9Hz，J=14.1Hz，1H)，3.10(m，4H)，2.09(s，1H)，1.20(d，J=7.5Hz，3H)。實施例2制備Cys-Tyr-Trp(CYW)1)制備Boc-Asp(OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到870mg(79X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)763[M+H]+。2)制備Asp-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到100mg(60%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:189-191C;[a]d25=38.7(c=1.08，CH3OH);ESI+-MS(m/e)483[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.83(s，1H)，8.35(d，J=8.OHz，1H)，7.98(d，J=7.5Hz，1H)，7.56(d，J=7.5Hz，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.03(m，4H)，6.62(d，J=8.4Hz，2H)，4.34(m，2H)，3.72(m，1H)，3.22(m，4H)，2.77(d，J=6.5Hz，2H)，2.09(s，1H)。實施例3制備Glu-Tyr-Trp(EYW)1)制備Boc-Glu(OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到760mg(79%)標題化合物，為無色固5體。ESI+-MS(m/e)777[M+H]+。2)制備Glu-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到242mg(88%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:154-155C;[a]D25=52.6(c=1.21，CH30H);ESI+_MS(m/e)497[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，10.87(s，1H)，9.24(s，2H)，8.57(d，J=8Hz，1H)，8.47(d，J=7.5Hz，lH)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.18(s，1H)，7.08(m，4H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.74(m，1H)，2.98(m，2H)，2.75(m，2H)，2.40(d，J=7Hz，2H)，2.10(s，1H)，1.98(m，2H)。實施例4制備Phe-Tyr-Trp(FYW)1)制備Boc-Phe-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到580mg(47%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)727[M+Na]+。2)制備Phe-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到308mg(69%)標題化合物，為無色粉末。Mp:148-149C;[a]D25=l.3(c=1.08，CH30H);ESI+_MS(m/e)514.9[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.93(s，1H)，9.25(s，1H)，8.83(d，J=8Hz，1H)，8.81(d，J=7.5Hz，lH)，8.11(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，1H)，7.21(m，8H)，7.08(d，J=8.4Hz，2H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，4.OO(s，1H)，3.35(d，J=7Hz，2H)，3.15(m，4H)。實施例5制備Gly-Tyr-Trp(GYW)1)制備Boc-Gly-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到990mg(88X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)634[M+Na]+。2)制備Gly-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到320mg(89%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:164-167C;[a]D25=19.6(c=1，CH3OH);ESI+_MS(m/e)425.3[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.94(s，1H)，9.24(s，2H)，8.57(d，J=8.7Hz，1H)，8.51(d，J=7.5Hz，1H)，8.05(s，2H)，7.56(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.19(s，1H)，7.02(m，2H)，6.95(d，J=8.4Hz，2H)，6.63(d，J=8.4Hz，2H)，4.53(m，2H)，3.74(m，1H)，3.57(s，2H)，3.20(s，2H)，3.00(m，4H)，2.08(s，1H)。實施例6制備His-Tyr-Trp(HYW)1)制備Boc-His(Boc)-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到433mg(26X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)795[M+H]+。2)制備His-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到430mg(80%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:118-120C;[a]D25=32.6(c=1.04，CH30H);ESI+_MS(m/e)505[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，11.01(s，1H)，9.40(s，1H)，8.99(d，J=8Hz，1H)，8.93(s，1H)，8.31(d，J=8.OHz，1H)，7.58(d，J=7.5Hz，1H)，7.41(s，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.14(d，J=8.4Hz，2H)，7.04(t，J=7.4Hz，1H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.42(m，2H)，3.30(m，1H)，3.07(m，1H)，2.95(m，2H)，2.78(m，2H)，2.08(s，1H)。實施例7制備Ile-Tyr-Trp(IYW)1)制備Boc-Ile-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到806mg(84%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)691[M+Na]+。2)制備Ile-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到290mg(88%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:168-169C;[a]D25=37.l(c=0.97，CH30H);ESI+_MS(m/e)481[M+H]+;'HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.24(s，1H)，8.53(d，J=8.lHz，1H)，8.43(d，J=7.5Hz，1H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.34(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.08(t，J=7.4Hz，1H)，7.06(d，J=8.4Hz，2H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.17(m，2H)，2.92(m，2H)，2.68(m，1H)，2.10(s，1H)，1.09(m，2H)，0.89(d，J=7.0Hz，3H)，0.8(t，J=7.3Hz，3H)。實施例8制備Lys-Tyr-Trp(KYW)1)制備Boc-Lys(Z)-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到640mg(40X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)787[M+H]+。2)制備Lys-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到280mg(79%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:131-132C;[a]d25=30.4(c=1.24，CH3OH);ESI+-MS(m/e)496[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.68(s，1H)，10.96(s，1H)，9.25(s，1H)，8.73(d，J=8.2Hz，1H)，8.46(d，J=7.5Hz，1H)，8.23(s，2H)，8.03(s，2H)，7.54(d，J=7.5Hz，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，lH)，7.23(s，1H)，7.09(t，J=7.4Hz，1H)，7.06(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.45(m，1H)，3.15(m，2H)，2.90(m，2H)，2.09(s，3H)，1.75(m，2H)，1.56(m，2H)，1.47(m，2H)。實施例9制備Leu-Tyr-Trp(LYW)1)制備Boc-Leu-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1002mg(83%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)671[M+H]+。2)制備Leu-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到190mg(50%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:147-149C;[a]d25=44.0(c=1.07，CH3OH);ESI+-MS(m/e)481.3[M+H]+;工HNMR(朋SC-300Hz，DMS0-d6)，10.84(s，1H)，9.20(s，1H)，8.63(d，J=8Hz，1H)，8.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.38(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，1H)，7.08(t，J=7.4Hz，1H)，7.OO(d，J=8.4Hz，2H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.45(m，1H)，3.20(m，4H)，2.09(s，1H)，2.00(m，1H)，1.64(m，2H)。實施例10制備Met-Tyr-Trp(MYW)1)制備Boc-Met-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到780mg(80%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)711[M+Na]+。2)制備Met-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到480mg(80%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:151-152C;[a]D25=20.7(c=1.05，CH30H);ESI+_MS(m/e)499[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.78(s，lH)，9.21(s，2H)，8.03(d，J=7.5Hz，2H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.32(d，J=7.5Hz，lH)，7.13(s，1H)，7.04(t，J=7.4Hz，1H)，6.97(m，3H)，6.61(d，J=8.4Hz，2H)，4.45(m，1H)，4.35(m，1H)，3.56(m，1H)，3.23(m，2H)，3.06(m，2H)，2.39(t，J=6.7Hz，2H)，2.05(m，2H)，1.98(s，3H)。實施例11制備Asn-Tyr-Trp(NYW)1)制備Boc-Asn-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到876mg(78X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)672[M+H]+。2)制備Asn-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到403mg(82%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:122-123C;[a]D25=22.4(c=1.04，CH30H);ESI+_MS(m/e)483[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.44(s，1H)，8.65(d，J=8.0Hz，1H)，8.50(d，J=7.5Hz，lH)，8.25(s，2H)，7.60(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，2H)，7.12(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(m，3H)，6.69(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.00(m，6H)，2.09(s，1H)。實施例12制備Pro-Tyr-Trp(PYW)1)制備Boc-Pro-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1321mg(92%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)655[M+H]+。2)制備Pro-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到300mg(82%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:160-161C;[a]D25=-12.5(c=1.12，CH30H);ESI+_MS(m/e)466[M+H]+一HNMR(BHSC-300Hz，DMS0-d6)，10.91(s，lH)，9.21(s，lH)，8.72(d，J=8.lHz，1H)，8.40(d，J=7.8Hz，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.35(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.03(d，J=8.4Hz，2H)，6.99(m，2H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，4(m，1H)，3.12(m，4H)，2.95(m，1H)，2.68(m，1H)，2.09(s，1H)，1.78(m，4H)。實施例13制備Gln-Tyr-Trp(QYW)1)制備Boc-Gln-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到730mg(72%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)706[M+Na]+。2)制備Gln-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到322mg(83%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:128-130C;[a]D25=31.5(c=1.08，CH30H);ESI+_MS(m/e)496[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.88(s，1H)，9.18(s，1H)，8.26(d，J=7.7Hz，1H)，7.95(d，J=8.8Hz，1H)，7.77(s，1H)，7.55(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.17(s，2H)，7.08(t，J=7.4Hz，2H)，7.00(m，3H)，6.58(d，J=8.4Hz，2H)，4.50(m，2H)，3.20(dd，J=5.0Hz，J=15.0Hz，2H)，3.09(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.92(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，2.68(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.02(m，1H)。實施例14制備Arg-Tyr-Trp(RYW)1)制備Boc-Arg(N02)-Tyr-Trp_OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到988mg(86X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)759[M+H]+。2)制備Arg-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到530mg(50%)標題化合物，為淡黃色粉末。Mp:174-176C;[a]d25=45.2(c=1.05，CH3OH);ESI+-MS(m/e)524[M+H]+一HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.90(s，1H)，9.28(s，1H)，8.85(d，J=8.1Hz，1H)，8.52(s，2H)，8.04(d，J=7.5Hz，1H)，7.60(d，J=7.5Hz，1H)，7.37(s，1H)，7.36(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.06(m，3H)，6.97(t，J=7.4Hz，1H)，6.62(d，J=8.4Hz，2H)，4.35(m，2H)，3.73(t，J=6.OHz，1H)，3.15(m，2H)，2.90(m，2H)，2.65(m，2H)，1.91(s，1H)，1.85(m，2H)，1.55(m，2H)。實施例15制備Ser-Tyr-Trp(SYW)1)制備Boc-Ser(-OBzl)-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到654mg(34%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)645[M+H]+。2)制備Ser-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到290mg(85%)標題化合物，為無黃色粉末。Mp:121-122C;[a]d25=9.8(c=1.09，CH3OH);ESI+-MS(m/e)455[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，12.78(s，lH)，10.91(s，lH)，9.22(s，lH)，8.60(d，J=8.lHz，1H)，8.42(d，J=7.5Hz，1H)，8.13(s，2H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.34(d，J=7.5Hz，1H)，7.20(s，1H)，7.05(d，J=8.4Hz，1H)，6.98(m，4H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，5.50(s，1H)，4.50(m，2H)，3.78(m，2H)，3.09(m，2H)，2.09(s，1H)。實施例16制備Thr-Tyr-Trp(TYW)1)制備Boc-Thr-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到876mg(87X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)651[M+H]+。2)制備Thr-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到400mg(90%)標題化合物，為無黃色粉末。Mp:114-115C;[a]d25=4.7(c=1.04，CH3OH);ESI+-MS(m/e)469[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.96(s，1H)，8.66(d，=8.1Hz，1H)，8.52(d，J=7.5Hz，1H)，8.18(s，2H)，7.54(d，J=7.8Hz，1H)，7.35(d，J=7.8Hz，1H)，7.22(s，1H)，7.06(m，3H)，6.98(t，J=7.4Hz，1H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，3H)，3.91(m，1H)，3.65(m，1H)，3.21(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，3.08(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.95(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，2.72(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.10(s，1H)，1.10(d，J=6.3Hz，3H)。實施例17制備Val-Tyr-Trp(VYW)1)帶[J備Boc-Val-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到789mg(82%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)657[M+H]+。2)制備Val-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到288mg(89%)標題化合物，為無黃色粉末。Mp:153-155C;[a]D25=7.3(c=0.96，CH30H);ESI+_MS(m/e)467[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.89(s，1H)，9.24(s，2H)，8.55(d，J=7.5Hz，1H)，8.43(d，J=7.5Hz，1H)，8.08(s，2H)，7.53(d，J=7.5Hz，1H)，7.33(d，J=7.5Hz，1H)，7.16(s，1H)，7.06(m，3H)，6.97(t，J=7.4Hz，lH)，6.61(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，3.21(dd，J=5.5Hz，J=15.OHz，1H)，3.10(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.92(dd，J=5.5Hz，J=15.OHz，1H)，2.75(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)，2.13(m，1H)，2.10(s，1H)，1.07(d，J=7.0Hz，6H)。實施例18制備Trp-Tyr-Trp(WYW)1)制備Boc-Trp-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到1098mg(91%)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)745[M+H]+。Boc-Trp-Tyr-Trp-OBzl(3s)2)制備Trp-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到340mg(88%)標題化合物，為無黃色粉末。Mp:171-172C;[a]D25=6.2(c=1.03，CH30H);ESI+_MS(m/e)554[M+H]+,HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，11.OO(s，1H)，10.95(s，1H)，9.24(s，1H)，8.85(d，J=7.9Hz，1H)，8.51(d，J=7.5Hz，1H)，8.00(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，2H)，7.35(d，J=7.5Hz，2H)，7.24(s，1H)，7.22(s，1H)，7.08(d，J=8.4Hz，2H)，7.00(t，J=7.4Hz，2H)，6.93(t，J=7.4Hz，2H)，6.65(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，4.OO(s，1H)，3.25(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，2H)，3.15(dd，J=7.8Hz，J=15.0Hz，1H)，2.97(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，2H)，2.75(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，1H)。實施例19制備Tyr-Tyr-Trp(YYW)1)制備Boc-Tyr-Tyr-Trp-OBzl按照制備Boc-Ala-Tyr-Trp-OBzl的操作得到694mg(80X)標題化合物，為無色固體。ESI+-MS(m/e)722[M+H]+。2)制備Tyr-Tyr-Trp按照制備Ala-Tyr-Trp的操作得到548mg(88%)標題化合物，為無黃色粉末。Mp:126-127C;[a]D25=10.5(c=1.06，CH30H);ESI+_MS(m/e)531[M+H]+;'HNMR(BHSC-500Hz，DMS0-d6)，10.92(s，1H)，9.35(s，1H)，9.30(s，1H)，8.78(d，J=8.0Hz，1H)，8.48(d，J=8.5Hz，1H)，7.97(s，2H)，7.57(d，J=7.5Hz，2H)，7.35(d，J=7.5Hz，2H)，7.21(s，1H)，7.06(m，6H)，6.99(t，J=7.4Hz，2H)，6.69(d，J=8.4Hz，2H)，6.64(d，J=8.4Hz，2H)，4.55(m，2H)，3.15(dd，J=5.OHz，J=15.OHz，1H)，3.00(dd，J=7.8Hz，J=15.0Hz，2H)，2.92(dd，J=5.OHz，J=15.0Hz，1H)，2.68(dd，J=7.8Hz，J=15.OHz，2H)。實驗例1本發明化合物的鎮痛作用評價實驗1、受試化合物本發明實施例1-19制備的19個化合物；2、實驗方法雄性ICR小鼠，體重在(22士2g)，每日光照12小時，室內溫度為20_24°〇，濕度保持在45-65%，充足的食物和水。實驗前一天開始禁食飼養，并將老鼠放入實驗操作間適應環境，每只老鼠只參與一次實驗。實驗時將小鼠裝入特制的固定筒內，尾部暴露于外，75%酒精進行消毒，測痛閾時以特制聚光燈產生的光束照射鼠尾下三分之一處，用秒表計時，計從照射開始到甩尾反應的潛伏期(tailflicklatency,TFL)作為痛閾。調節聚光燈與鼠尾距離使剌激強度較為靈敏TFL為2-6s。實驗開始時先測3次，每次間隔5min，取均值作為基礎痛閾。將受試化合物分別懸浮于0.5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)水溶液中，灌胃給藥，按每次灌胃劑量為0.2ml以及0.13mmol/kg劑量調節懸浮濃度。每次試驗設0.5%CMC-Na組作平行對照。為防止皮膚燙傷，光照截止時間10s，間隔30min復測TFL以觀察藥物鎮痛時效關系。以痛閾提高率評定藥物鎮痛強度痛閾提高率=(給藥后痛閾值_基礎痛閾值)+基礎痛閾值。得到的結果列入表l，結果表明本發明化合物具有明確的鎮痛作用。表1本發明化合物的鎮痛活性實驗結果<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>注痛閾提高率用均數士SDX表示，n=IO，給藥劑量O.13mmol/kg;a)與CMC-Na組比較P<0.05;b)與CMC-Na組比較P<0.01;c)與CMC-Na組比較P<0.001。實驗例2不同劑量AYW和KYW的鎮痛活性1)受試化合物本發明實施例所制備的化合物AYW和KYW;2)實驗方法采用實驗例1的小鼠光輻射熱甩尾模型評價了受試化合物在0.13mmol/kg、0.08mmolmol/kg和0.05mmol/kg三種劑量下的鎮痛作用。結果列入表2。實驗結果表明受試化合物都劑量依賴地顯示鎮痛作用。表2不同給藥劑量AYW和KYW的鎮痛作用<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>注痛閾提高率用5c士SDo/。表示，n=10;a)與0.08mmol/kg組比較P<0.05;b)與0.05,1/kg組比較P<0.05。權利要求具有鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽，其結構式為通式I所示AA-Tyr-TrpI其中，AA選自丙氨酸殘基、天冬氨酸殘基、谷氨酸殘基、苯丙氨酸殘基、甘氨酸殘基、組氨酸殘基、異亮氨酸殘基、賴氨酸殘基、亮氨酸殘基、甲硫氨酸殘基、天冬酰胺殘基、脯氨酸殘基、谷氨酰胺殘基、精氨酸殘基、絲氨酸殘基、蘇氨酸殘基、纈氨酸殘基、色氨酸殘基或酪氨酸殘基。2.—種制備權利要求1所述具有鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的方法，包括(1)將叔丁氧羰基保護的酪氨酸和色氨酸芐酯耦聯，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯；(2)脫去叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯的叔丁氧羰基，得到酪氨酰色氨酸芐酯；(3)將酪氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯；(4)將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯氫解脫芐基，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸；(5)將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脫去叔丁氧羰基，即得通式I的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽。3.按照權利要求2所述的方法，其特征在于步驟(1)中在二環己基羰二亞胺、N-羥基苯并三唑J-甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將叔丁氧羰基保護的酪氨酸和色氨酸芐酯耦聯，合成叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯。4.按照權利要求2所述的方法，其特征在于步驟(2)中在氯化氫/乙酸乙酯溶液中加入叔丁氧羰基酪氨酰色氨酸芐酯，脫去叔丁氧羰基，制備得到酪氨酰色氨酸芐酯。5.按照權利要求2所述的方法，其特征在于步驟(3)中在二環己基羰二亞胺、N-羥基苯并三唑J-甲基嗎啉和無水四氫呋喃存在下將酪氨酰色氨酸芐酯與叔丁氧羰基保護的氨基酸進行耦聯，得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯。6.按照權利要求2所述的方法，其特征在于；步驟(3)中所述的叔丁氧羰基保護的氨基酸選自叔丁氧羰基保護的丙氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬氨酸單芐酯、叔丁氧羰基保護的谷氨酸單芐酯、叔丁氧羰基保護的苯丙氨酸、叔丁氧羰基保護的甘氨酸、叔丁氧羰基保護的組氨酸、叔丁氧羰基保護的異亮氨酸、叔丁氧羰基保護的二叔丁氧羰基保護的賴氨酸、叔丁氧羰基保護的亮氨酸、叔丁氧羰基保護的蛋氨酸、叔丁氧羰基保護的天冬酰胺、叔丁氧羰基保護的谷氨酰胺、叔丁氧羰基保護的硝基精氨酸、叔丁氧羰基保護的絲氨酸、叔丁氧羰基保護的蘇氨酸、叔丁氧羰基保護的纈氨酸、叔丁氧羰基保護的色氨酸或叔丁氧羰基保護的酪氨酸中的任意一種。7.按照權利要求2所述的方法，其特征在于步驟(4)中在鈀碳存在下將叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸芐酯氫解脫芐基，制備得到叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸。8.按照權利要求2所述的方法，其特征在于步驟(5)中在氯化氫/乙酸乙酯溶液中叔丁氧羰基氨基酰酪氨酰色氨酸脫去叔丁氧羰基。9.一種治療疼痛的藥物組合物，由有效量的權利要求1所述的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽和藥學上可接受的載體或輔料組成。10.權利要求1所述的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽在制備鎮痛藥物中的用途。全文摘要本發明公開了具鎮痛活性的氨基酰酪氨酰色氨酸三肽及制備方法和應用。本發明氨基酰酪氨酰色氨酸三肽的結構式為AA-Tyr-Trp，其中，AA選自丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、甘氨酸、組氨酸、異亮氨酸、賴氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、天冬酰胺、脯氨酸、谷氨酰胺、精氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、色氨酸或酪氨酸殘基。動物實驗表明本發明化合物具有優秀的鎮痛活性，是臨床潛在的鎮痛劑。文檔編號A61P29/00GK101747410SQ20081022752公開日2010年6月23日申請日期2008年11月28日優先權日2008年11月28日發明者彭師奇,譚櫟,趙明申請人:北京大學