專利名稱：：微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及畜牧行業(yè)，尤其涉及一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法。
背景技術(shù)：
：仔豬腹瀉是養(yǎng)豬生產(chǎn)中的一種典型的多因素疾病，據(jù)統(tǒng)計，仔豬腹瀉的發(fā)病率為35%，其間接損失又表現(xiàn)在治愈仔豬生長發(fā)育遲緩，飼料轉(zhuǎn)化率低，嚴(yán)重威脅養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。自2006年5月以來，在全國各地先后爆發(fā)流行豬高熱病，引起大批豬只發(fā)病死亡，造成重大的經(jīng)濟損失。直至目前，高熱病仍在全國22個省份的豬群中發(fā)生流行，危害豬只的健康生長，威脅著養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。抗生素在養(yǎng)殖中的使用所帶來的不良后果大家都己充分認(rèn)識。許多專家都認(rèn)為在全國很多地區(qū)廣泛流行的"豬高熱病"的一個重要原因是豬的免疫力低下，抗病力低，而長期地、大劑量地使用抗生素是導(dǎo)致豬免疫力低下的一個重要原因。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，利用該方法得到的藥物和添加劑能有效抗菌，治療仔豬的細(xì)菌性疾病、促生長、可應(yīng)用、提高豬免疫力，而且無殘留、無污染。為了實現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證濃度在300ppm。本發(fā)明的另一個技術(shù)方案如下本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證仔豬每天采食溶菌酶l-2g。本發(fā)明的再一個技術(shù)方案如下-本發(fā)明微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，保證濃度在300ppm,同時添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例為2:11:1。本發(fā)明的有益效果如下-本發(fā)明有效治療豬的細(xì)菌性疾病及高熱病，緩解癥狀，顯著提高豬的免疫力，減緩應(yīng)激反應(yīng)，改善維護胃腸道菌群平衡。療效好、安全性高，成本低廉，無耐藥性、無藥物殘留、無毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。具體實施方式溶菌酶是能溶解細(xì)菌細(xì)胞壁的一種酶，是一類物質(zhì)的的總稱。作為非特異性免疫的重要成員，溶菌酶在防御外源微生物入侵方面發(fā)揮重要的作用，其在動物的免疫細(xì)胞和巨噬細(xì)胞中含量比較高。溶菌酶對革蘭氏陽性菌、好氣性孢子形成的菌、枯草桿菌、耐輻射微球菌均具有良好的分解作用，對大腸桿菌、普通變球菌和副血性弧菌等革蘭氏陰性菌也具有溶解作用。基于此，本發(fā)明將溶菌酶添加到用于預(yù)防豬疾病的藥物和添加劑中，來預(yù)防豬的細(xì)菌性疾病。本專利所用的溶菌酶的要求為通過藥敏試驗，在lOOppm時應(yīng)有明顯的抑菌圈，即抑菌圈的直徑〉10mm。藥敏試驗方法如下做不同細(xì)菌的藥敏試驗可選擇不同的培養(yǎng)基，如做大腸桿菌的藥敏試驗可選擇普通營養(yǎng)瓊脂或麥糠凱培養(yǎng)基。做沙門氏菌可選擇血清培養(yǎng)基。一、一般LB培養(yǎng)基的配制1、液體培養(yǎng)基的配制蛋白胨lg、NaCllg、酵母提取物0.5g(建議選用國外公司產(chǎn)品)溶于100ml水中。2、固體培養(yǎng)基的配制在液體培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上每100ml中添加瓊脂1.7g或瓊脂粉2g。二、滅菌整個實驗過程中所用的培養(yǎng)基、平板、槍頭、棉簽、生理鹽水以及緩沖溶液均需要滅菌。三、操作過程1、將指示菌(大腸桿菌、沙門氏菌等等)從培養(yǎng)液(基)中接種于平板活化培養(yǎng)，待菌落長出后在平板上挑選典型菌落接種于試管中的液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6小時后比濁。2、用涂菌棒(或者滅菌棉簽)將待檢細(xì)菌混懸液涂抹于平皿培養(yǎng)基表面，要求涂布均勻致密。3、以無菌操作將滅菌的不銹鋼小管(也可用玻璃管、瓷管)，放置在培養(yǎng)基上打孔，將孔中的培養(yǎng)基用針頭挑出，并以火焰封底，使培養(yǎng)基能充分的與平皿融合(以防藥液滲漏，影響結(jié)果)。4、將配制好的待測樣品液80微升加入樣孔中，樣品加完后放入30-37'C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)12-18小時后觀察結(jié)果。注意試驗的過程在無菌的條件下操作。四、溶菌酶樣品液的配制1、粉狀樣品的配制取溶菌酶樣品用滅菌好的生理鹽水逐級稀釋到濃度梯度為300ppm，200ppm，lOOppm,50ppm然后分別取80微升稀釋好的溶液置于樣品孔中。(注在溫度較低的情況下，可能會出現(xiàn)稍微的不溶的情況，可加熱至35-4(TC即可溶解)2、注意事項1)配置好的樣品液不要放在冷凍的條件下保存，也不能放在無菌操作臺上被紫外線照射；2)樣品液在配制稀釋過程中注意要逐級稀釋。為了確定溶菌酶在藥物及添加劑中的加入量，我們進行了如下藥敏實驗選擇500ppm,300ppm，200卯m，100ppm，50ppm四個濃度進行試驗，試驗方法同上，以埃希氏大腸桿菌為試驗菌種，通過檢測檢測抑菌圈的大小檢驗試驗結(jié)果，具體如表l。表l抑菌試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從表l可以看出，超過300ppm,抑菌效果增加不明顯。仔豬腹瀉是一種細(xì)菌性疾病，通過給腹瀉的仔豬喂食溶菌酶可以去除其體內(nèi)感染的細(xì)菌從而起到一定的治療作用，同時也能預(yù)防因新攝入的細(xì)菌而再次發(fā)病，預(yù)防腹瀉的選擇體況相同的仔豬進行攻毒試驗，當(dāng)仔豬出現(xiàn)腹瀉情況后，為仔豬灌服溶菌酶制劑日平均0.5g、lg、2g、3g、4g、5g，其治療效果如表2。表2仔豬腹瀉的治療試驗結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>從上表可以看出，在日平均灌服l-2g溶菌酶制劑可以有效的治療仔豬的細(xì)菌性的腹瀉，繼續(xù)增加用量對治愈率增加的影響不明顯。在豬場高熱病的發(fā)病初期，通過喂食含有溶菌酶的飼料可以是預(yù)防高熱病的進一步惡化，并同時添加氟本尼考，可以將發(fā)熱病控制在初期，具體配比參見抑菌試驗結(jié)果，溶菌酶的含量選在300ppm，同時按3:1，2:1，1:1,1:2，1:3的比例配入氟本尼考，混合后，最終的治療效果如表3。表3高熱病初期的治療結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>從上表可以看出，在2:1—1:1的范圍之內(nèi)對疾病的控制已經(jīng)達(dá)到理想的控制效果，在3:1的條件下疾病控制率增加不明顯，所以最終選擇2:1—1:1的范圍。權(quán)利要求1、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證濃度在300ppm。2、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，并且保證仔豬每天采食溶菌酶l-2g。3、微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，在藥物和添加劑中加入溶菌酶，保證濃度在300ppm，同時添加氟本尼考，溶菌酶配比氟本尼考的比例為2:11:1。全文摘要本發(fā)明公開了一種微生物溶菌酶在預(yù)防豬疾病的藥物及添加劑中的應(yīng)用方法，通過控制溶菌酶在藥物或者添加劑中的加入量在300ppm時，可以很好的預(yù)防仔豬腹瀉，通過加入溶菌酶保證每天攝入1-2g，使仔豬在腹瀉初期能夠使病情得到控制，防止進一步的惡化，在添加溶菌酶的基礎(chǔ)上同時添加氟本尼考可以預(yù)防并控制高熱病。本發(fā)明有效治療豬的細(xì)菌性疾病及高熱病，緩解癥狀，顯著提高豬的免疫力，減緩應(yīng)激反應(yīng)，改善維護胃腸道菌群平衡。療效好、安全性高，成本低廉，無耐藥性、無藥物殘留、無毒副作用、是綠色環(huán)保的活性物質(zhì)。文檔編號A61K38/48GK101612393SQ20091014777公開日2009年12月30日申請日期2009年6月19日優(yōu)先權(quán)日2009年6月19日發(fā)明者潘宏濤申請人:杭州康源飼料科技有限公司