專(zhuān)利名稱(chēng)：一種短葶山麥冬多糖及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供一種短葶山麥冬多糖及其制備方法，尤其是含有留體皂苷類(lèi)成分的短 葶山麥冬多糖，以及該總皂苷的制備提純方法，該方法提取精制得到的短葶山麥冬多糖具 有抗腫瘤作用。
背景技術(shù)：
麥冬始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，是常用滋陰中藥，具有滋陰潤(rùn)肺、益胃生津、清心除煩 的功效。《中國(guó)藥典》2010年版(一部)收載的麥冬類(lèi)藥材包括麥冬和山麥冬，其中麥冬的 來(lái)源為百合科沿階草屬麥冬(Ophiopogon japonicus (Thumb.) Ker-Gawl)的干燥塊根；山 麥冬的來(lái)源為百合科山麥冬屬湖北麥冬(Liriope spicata(Thunb.)Lour. Var. prolifera Y. Τ. Ma)和短葶山麥冬(L. muscari (Decne. )Bailey)的干燥塊根。麥冬類(lèi)藥材在中國(guó)有4 大產(chǎn)區(qū)，分別是浙江、四川、湖北和福建。其中浙江慈溪、蕭山等地主產(chǎn)杭麥冬；四川綿陽(yáng)等 地主產(chǎn)川麥冬；而湖北麥冬的主產(chǎn)區(qū)在漢水流域的襄陽(yáng)、襄城、谷城、老河口等；短葶山麥 冬主要分布在泉州、仙游、永泰等縣市。化學(xué)成分上，山麥冬中除高異黃酮類(lèi)未檢出外，主要的化學(xué)成分類(lèi)別與麥冬相似， 也含有皂苷、氨基酸、多糖及銅、鐵、鎂、鈷等微量元素。由于山麥冬的功效等同于傳統(tǒng)藥材 麥冬，所以在實(shí)際應(yīng)用中常作為麥冬同等入藥。對(duì)麥冬類(lèi)藥材的早期研究主要集中在皂苷及黃酮部位，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)麥冬類(lèi)藥材中 的多糖也具有抗心肌缺血、降血糖、增強(qiáng)免疫、抗過(guò)敏等多方面的藥理活性。目前對(duì)麥冬類(lèi) 藥材中多糖成分的已有研究涉及單糖組成、多糖結(jié)構(gòu)、藥理活性、質(zhì)量控制等方面，為麥冬 類(lèi)藥材中多糖成分的開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)，但也存在一些不足。比如，現(xiàn)有研究集中于麥 冬，山麥冬相關(guān)研究較少，目前尚無(wú)短葶山麥冬多糖化學(xué)研究的報(bào)道。藥理活性研究方面， 集中于粗多糖，缺少對(duì)有效成分的確證。質(zhì)量控制上多以比色法測(cè)定總糖含量為手段，方法 選擇性不高，容易受到雜質(zhì)干擾，靈敏度有限，且測(cè)定結(jié)果隨標(biāo)準(zhǔn)單糖選取的不同而有很大 差異，不能保證方法的準(zhǔn)確性，同時(shí)，由于多糖類(lèi)的活性往往是與其分子量分布相關(guān)的，單 純測(cè)定總糖含量來(lái)控制藥材質(zhì)量，并不能做到真正的合理有效。因此，現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法 有待進(jìn)一步完善與提高。因此，本領(lǐng)域急需一種可以分離出短葶山麥冬多糖的制備分離方法，目的是可以 得到具有相對(duì)明確的組成的、治療效果明確的短葶山麥冬多糖，使多糖可以直接用于醫(yī)藥 領(lǐng)域的治療目的明確的各種制劑，明確規(guī)范該植物提取物的醫(yī)學(xué)用途，降低含有短葶山麥 冬多糖的產(chǎn)品的副作用以及降低其醫(yī)藥用途風(fēng)險(xiǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明經(jīng)過(guò)大量的實(shí)驗(yàn)，研制出一種短葶山麥冬多糖及其提取和精制的方法，該 方法簡(jiǎn)單高效，分離度高，使得多糖的活性更加有效、準(zhǔn)確和針對(duì)性強(qiáng)，相對(duì)純度高。本發(fā)明目的在于提供一種短葶山麥冬中多糖的制備方法，其在現(xiàn)有的常規(guī)技術(shù)得到的短葶山麥冬提取物，進(jìn)一步經(jīng)過(guò)精制，從而提純了活性成分，使其有益的活性效果更加 明確。麥冬類(lèi)藥材的早期研究主要集中在皂苷及黃酮部位，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)其中的多糖也具 有抗心肌缺血、降血糖、增強(qiáng)免疫、抗過(guò)敏等多方面的藥理活性。已有對(duì)麥冬類(lèi)藥材中多糖 成分的研究涉及化學(xué)結(jié)構(gòu)、藥理活性、質(zhì)量控制等方面。其中藥理活性研究結(jié)果表明麥冬多 糖其具有良好的抗心肌缺血、降血糖、增強(qiáng)免疫、抗過(guò)敏等活性，是重要的功能性成分之一。 三種藥典收載的品種當(dāng)中，短葶山麥冬多糖的研究較少，目前尚未見(jiàn)到其結(jié)構(gòu)研究的報(bào)道。 已有的藥理活性研究集中于粗多糖，缺乏有效部位的確證。在藥材質(zhì)量控制上多以比色法 測(cè)定總糖為手段，由于比色法本身選擇性不好、靈敏度有限、測(cè)定結(jié)果隨單糖對(duì)照選取不同 有很大差異，并且多糖的活性往往是分子量相關(guān)的，單純測(cè)定總糖含量來(lái)控制藥材質(zhì)量，并 不能真正的合理有效，現(xiàn)有的質(zhì)量控制方法有待進(jìn)一步提高與完善。本發(fā)明目的在于對(duì)麥 冬類(lèi)藥材中多糖成分的研究涉及單糖組成、多糖結(jié)構(gòu)、藥理活性、質(zhì)量控制等方面。本發(fā)明目的還在于提供短葶山麥冬多糖抗心肌缺血活性方面的治療作用。本發(fā)明提供了一種短葶山麥冬中多糖的制備方法，該方法包括1).取短葶山麥冬藥材，75%濃度以上的乙醇提取，得到提取液和藥材殘?jiān)?).取藥材殘?jiān)尤胨崛?，提取液濃縮，梯度加乙醇至醇濃度為60% 95%，例 如，梯度加乙醇至醇濃度20%、40%、60%、80%或更高，放置，取沉淀部分，得乙醇沉淀多 糖，即粗多糖浸膏；3).將乙醇沉淀多糖過(guò)纖維素DE-52柱層析，依次用水、NaCl洗脫，收集水洗部分， 濃縮后冷凍干燥，得短葶山麥冬多糖。上述步驟1)中得到的主要是皂苷部分，也是本發(fā)明主要想除去的部分，為了驗(yàn)證 該部分主要是皂苷，可以采用進(jìn)一步試驗(yàn)驗(yàn)證的方法，包括提取液濃縮后過(guò)AB-8大孔樹(shù) 脂，依次用水和由10%到90%濃度的乙醇洗脫，收集60%乙醇洗脫部位，即可得到皂苷部 位S ；洗脫用乙醇溶液的濃度很重要，本發(fā)明優(yōu)選10-90% wt的乙醇進(jìn)行洗脫，收集60%乙 醇洗脫部位。經(jīng)過(guò)常規(guī)的皂苷驗(yàn)證方法驗(yàn)證，其為皂苷類(lèi)成分。洗脫用乙醇溶液的濃度很 重要，本發(fā)明優(yōu)選10-90 % wt的乙醇進(jìn)行洗脫，收集60 %乙醇洗脫部位。上述的步驟2)包括加乙醇至醇濃度為60%，以及至醇濃度為80%，放置，取沉淀 部分，得60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多糖，合計(jì)為粗多糖浸膏。上述步驟3)為將60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多糖分別過(guò)纖維素DE-52柱 層析，依次用水、0. Imol/lNaCUO. 2mol/lNaCl洗脫，收集水洗部分，濃縮后冷凍干燥，得多 糖部位Tl、T2，合計(jì)為短葶山麥冬多糖。常規(guī)對(duì)麥冬質(zhì)量控制或有效部位的說(shuō)明都是集中在皂苷，所以，本發(fā)明把皂苷和 多糖都分別制備出來(lái)，用藥理實(shí)驗(yàn)的方法明確有效部位不是皂苷而是多糖。本發(fā)明優(yōu)選提供了一種短葶山麥冬中多糖的制備方法，該方法包括1).除皂苷取短葶山麥冬藥材，75%濃度以上的乙醇提取，得到提取液；2).提取粗多糖藥材殘?jiān)尤胨崛?，提取液濃縮，加乙醇至醇濃度為60%，以 及至乙醇濃度為80%，放置，取60%和80%的沉淀部分，即得粗多糖浸膏，該粗多糖浸膏包 括60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多糖；也可將粗多糖浸膏加水溶解，冷凍干燥后，得粗多糖；該60%乙醇沉淀部分為T(mén)l，80%乙醇沉淀部分為T(mén)2，Tl和T2合并為粗多糖；上述上述提取皂苷用的乙醇采用75% 95%濃度的乙醇提取，在本發(fā)明優(yōu)選實(shí) 施例中，優(yōu)選95 %濃度的乙醇。3).初級(jí)分離將60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多糖分別過(guò)纖維素DE-52柱 層析，依次用水、NaCl (0. Imol/lNaCUO. 2mol/lNaCl)洗脫，收集水洗部分，濃縮后冷凍干 燥，得多糖部位Tl、T2。本發(fā)明所述的短葶山麥冬多糖粗提物優(yōu)選通過(guò)下述方法制得1.除皂苷步驟同上述步驟1)；2.提取粗多糖步驟同上述步驟2)，得粗多糖浸膏；3.分級(jí)沉淀取一定量粗多糖浸膏溶解于適量蒸餾水中，依次加乙醇至醇濃度 20%,40%,60%,80%分級(jí)沉淀，每次都在4°C靜置過(guò)夜，離心；20%、40%醇沉均無(wú)明顯沉 淀；取60%、80%乙醇沉淀，適量水溶解后冷凍干燥，得到60%、80%乙醇沉淀多糖；4.纖維素DE-52柱脫色以及初級(jí)分離將60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多 糖，分別過(guò)纖維素DE-52柱層析，依次用水、NaCl (0. Imol/lNaCUO. 2mol/lNaCl)洗脫，收集 水洗部分，濃縮后冷凍干燥，得多糖部位T1、T2。本發(fā)明所述的“浸膏”為本領(lǐng)域公知，其相對(duì)密度約在1. 25以上，例如1. 3。本發(fā)明的原料可為短葶山麥冬或其中間產(chǎn)物短葶山麥冬粗多糖粗提物，后者可通 過(guò)市售購(gòu)得或按常規(guī)提取方法得到。經(jīng)藥理試驗(yàn)證明，該藥理試驗(yàn)在本文后述部分將詳細(xì)描述，多糖部位Τ2具有顯著 地抗心肌缺血活性，因此，本發(fā)明對(duì)Τ2做進(jìn)一步的分離純化，以期從中得到均一多糖并進(jìn) 行相關(guān)的結(jié)構(gòu)研究。具體分離純化過(guò)程如下儀器Agilent 8453紫外-可見(jiàn)分光光度儀，Mettler AE-240電子天平，SB3200 Branson超聲儀(上海必能信超聲有限公司，220V, 50kHz)，F(xiàn)D-I冷凍干燥機(jī)(北京博醫(yī)康 技術(shù)公司)，BtiCHI Rotavapar R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，美國(guó)Waters公司高效液相色譜系統(tǒng) Waters 515高效液相色譜儀；717自動(dòng)進(jìn)樣儀；2410示差折光檢測(cè)器；Empower〗工作站。試劑DE-52纖維素(Whatman公司，北京欣經(jīng)科生物技術(shù)有限公司分裝)； SephadexG-25 (Pharmacia Biotech公司)；無(wú)水乙醇、硫酸、氯化鈉及蒽酮均為國(guó)產(chǎn)AR級(jí)試 劑。T2的分離純化取T21. 266g，過(guò)S印hadexG-25柱，水洗，流速lml/min，5ml/瓶收 集。硫酸-蒽酮顯色后繪制多糖洗脫曲線(xiàn)，按洗脫曲線(xiàn)合并相同組分，濃縮，真空冷凍干燥 后得白色粉末狀多糖LMP (469. 3mg)。本發(fā)明僅采用水，根據(jù)時(shí)間不同能洗脫下來(lái)不同的多糖，借助分子篩原理。純度鑒定多糖是大分子物質(zhì)，其純度標(biāo)準(zhǔn)不能用通常小分子的純度標(biāo)準(zhǔn)來(lái)衡量。 多糖的純度只代表某一多糖的相似鏈長(zhǎng)的平均分布。通常所說(shuō)的多糖純品實(shí)質(zhì)上是一定分 子量范圍的均一組分，其微觀是不均一的。測(cè)定多糖純度的方法有功能團(tuán)分析、比旋光度 法、凝膠層析法、高效凝膠層析法、高壓電泳、超濾離心分析法等。其中高效凝膠層析法采用 多糖專(zhuān)用柱，配以示差檢測(cè)器或激光光散射儀，具有高效、快速、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，是目前檢 測(cè)多糖均一性誤差最小最常用的一種方法。在分子量不超出色譜柱的有效測(cè)試范圍的前提 下，在HPSEC譜中呈現(xiàn)單一對(duì)稱(chēng)尖峰的多糖組分可被認(rèn)為是純化的均一多糖。
供試品制備取樣品6mg，溶2ml流動(dòng)相中，經(jīng)0. 45um微孔濾膜過(guò)濾即得。色譜條件=Waters高效液相色譜系統(tǒng)(515泵，717自動(dòng)進(jìn)樣器，2410示差 折光檢測(cè)器)；TOSOH TSK gel 2500Pffxl (7. 8mmX 300mm) column 凝膠柱；TOSOH TSK PWxl (6. OmmX4. 0cm) column凝膠預(yù)柱；流動(dòng)相0. 05mol/L硫酸鈉；檢測(cè)器溫度:35°C ；流 速0. 4ml/min ；運(yùn)行時(shí)間45min。測(cè)定結(jié)果表明，從短葶山麥冬中分離得到的水溶性多糖 LMP為均一多糖。短葶山麥冬多糖LMP的結(jié)構(gòu)分析儀器CAMAG半自動(dòng)點(diǎn)樣儀；CAMAG電加熱板；CAMAG薄層照相系統(tǒng)；Agi 1 ent 6890N-5975C氣相色譜-質(zhì)譜儀，配7683B自動(dòng)進(jìn)樣器，帶HP-5型毛細(xì)管柱；BlJCHI Rotavapar R-205旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；NicOlet5700型傅里葉變換紅外光譜儀(美國(guó)熱電公司)； Centaurus 傅里葉變換紅外顯微鏡；MALDI-TOF-MS (Autoflex，Bruker) ；VNS-500 核磁共振 分析儀。材料樣品LMP ；單糖對(duì)照品葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、甘露糖、阿拉伯糖、果糖均 由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；山梨糖及木糖為Fluka公司出品。試劑1-甲基咪唑(sigma公司)優(yōu)級(jí)純；鹽酸羥胺、乙酸酐、三乙基硅烷、三氟化 硼乙醚、三氟醋酸、碘甲烷分析純；二甲基亞砜、吡啶分析純，使用前用4 A分子篩處理。多糖完全酸水解常用的酸有硫酸、鹽酸、硝酸、三氟乙酸等。一般中性糖的水解多 采用硫酸或者三氟乙酸水解。硫酸可在0. 005mol/l-10(TC下快速水解果聚糖和其他五碳 或六碳呋喃聚糖，在lmol/l-lOCTC條件下水解五碳或六碳吡喃聚糖；三氟乙酸水解，多用 2mol/l-100 120°C封管加熱數(shù)小時(shí)，得到水解后的單糖混合物。兩種方法水解效果相當(dāng)， 但在后處理上存在差異。硫酸多采用加入過(guò)量碳酸鋇的方法將酸中和，而三氟乙酸沸點(diǎn)較 低，可以通過(guò)氮吹或減壓蒸干的方法除去。鹽酸水解多用于較難水解的糖苷，如在2mol/ 1 6mol/l，100 120°C加熱數(shù)小時(shí)水解氨基糖苷，可得到徹底水解的氨基單糖，但會(huì)使中 性糖和酸性糖破壞。硝酸水解糖苷鍵要求低濃度，如3%的稀硝酸條件下。如果存在氮的氧 化物，由于其具有氧化性，就會(huì)同鹽酸一樣，使水解得到的游離單糖遭到破壞。本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)采用比較溫和的三氟乙酸水解法和硫酸水解法。樣品在不同條件下 水解后，經(jīng)薄層色譜及GC-MS法檢測(cè)，結(jié)果如下。三氟乙酸水解薄層色譜法檢測(cè)展開(kāi)系統(tǒng)乙酸乙酯-乙醇-水(70 22 8)顯色劑1 苯胺-鄰苯二甲酸顯色劑；顯色劑2 硫酸_乙醇顯色劑；首先用總糖做水解條件的初步摸索，在2mOl/lTFA-120°C分別水解lh、2h、4h，然 后用TLC法檢測(cè)。結(jié)果顯示，在White R下，不同水解時(shí)間樣品在單糖對(duì)照品相應(yīng)位置上有 對(duì)應(yīng)的斑點(diǎn)；但在366nm下，不同水解時(shí)間樣品在溶劑前沿有明顯的單糖碎片斑點(diǎn)。說(shuō)明上 述水解條件(2mOl/lTFA-120°C _lh/2h/4h)均不適用于本品的水解。GC-MS 法檢測(cè)進(jìn)一步將LMP按上述條件水解，GC-MS檢測(cè)進(jìn)行驗(yàn)證。得到總離子流圖后與本實(shí) 驗(yàn)室自建的“糖類(lèi)”譜庫(kù)進(jìn)行單糖種類(lèi)的初步檢索，結(jié)果顯示第一個(gè)峰可能是葡萄糖/半乳 糖/甘露糖，第二個(gè)峰可能是果糖/山梨糖，其余碎片譜庫(kù)檢索無(wú)對(duì)應(yīng)單糖，表明它們都是酸水解產(chǎn)生的雜質(zhì)碎片。因此，2mol/l TFA-120°C水解lh、2h均不適用于LMP。改用更加溫 和的條件(2mol/l TFA-100°C _2h、0. 05mol/l TFA_110°C _5h)，仍有明顯的雜質(zhì)峰，但雜質(zhì) 峰的強(qiáng)度隨酸水解條件的溫和而有所降低。嘗試改變酸的種類(lèi)，采用硫酸水解，如下。薄層色譜法檢測(cè)展開(kāi)劑乙酸乙酯-吡啶-醋酸-水(5:5:1:3);顯色劑1 苯胺-鄰苯二甲酸顯色劑；顯色劑2 硫酸_乙醇顯色劑；LMP加入0. 05mol/L H2SO4,分別在50°C和100°C下水解Ih后，采用薄層色譜法檢 測(cè)。結(jié)果顯示，LMP在50°C水解Ih后的樣品，在單糖相應(yīng)斑點(diǎn)位置以下有明顯條帶，說(shuō)明水 解不完全；而LMP在100°C下水解Ih的樣品，斑點(diǎn)與單糖對(duì)照品斑點(diǎn)相近，且在溶劑前沿?zé)o 碎片斑點(diǎn)出現(xiàn)，說(shuō)明此水解條件合適，進(jìn)一步用GC-MS法確證。GC-MS法檢測(cè)由GC-MS檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，0. 05mol/L硫酸-100°C水解Ih的樣品總 離子流圖中除溶劑空白峰外，只有峰1和峰2，無(wú)其他雜質(zhì)碎片，表明LMP合適的水解條件為 0. 05mol/L 硫酸-100°C _lh。單糖組成分析LMP在0. 05mol/L硫酸100°C水解Ih后，采用GC-MS法分析單糖組 成，得到的總離子流圖與申請(qǐng)人自建“糖類(lèi)”譜庫(kù)進(jìn)行譜庫(kù)檢索后，提示峰1可能是葡萄糖 /半乳糖/甘露糖，峰2可能是果糖/山梨糖。取相應(yīng)對(duì)照品衍生化產(chǎn)物進(jìn)行GC-MS分析， 通過(guò)保留時(shí)間比較，確定峰1為葡萄糖，峰2為果糖。因此，LMP主要由果糖組成，含極少量 葡萄糖(兩者峰面積之比約為32 1)。糖殘基連接方式分析一般多糖糖苷鍵連接位點(diǎn)的分析，是將多糖完全甲基化后，通過(guò)酸水解、硼氫化鈉 還原、乙?；幚砗螅玫讲糠旨谆陌柕洗家阴ｕィ龠M(jìn)行GC-MS分析。但單糖組成 中同時(shí)含有果糖和葡萄糖的多糖使用此法可能會(huì)引入混淆。因?yàn)楣鞘峭牵?jīng)還原后生 成相應(yīng)的甘露糖醇和葡萄糖醇。如果樣品中本身含有類(lèi)似連接的葡萄糖，兩者就會(huì)混淆。 如1位連接的果糖和2位連接的葡萄糖，經(jīng)還原乙?；?，都產(chǎn)生了 3，4，6-0-三甲基-1，2， 5-0-三乙?；咸烟谴?，這樣就無(wú)法確定它們的組成比。而還原-裂解法是將完全甲基化的樣品用硅烷直接進(jìn)行還原，斷裂糖苷鍵，仍保 留糖環(huán)的結(jié)構(gòu)，吡喃環(huán)的還原裂解產(chǎn)物仍是吡喃環(huán)，呋喃環(huán)的還原裂解產(chǎn)物仍是呋喃環(huán)，在 氣相色譜上能明顯區(qū)分開(kāi)。如1，2連接的葡萄糖經(jīng)還原裂解后，產(chǎn)生的是3，4，6-0_三甲 基-2-0-乙?；?1，5-縮水葡萄糖醇，而1位連接的果糖產(chǎn)生的是相應(yīng)的3，4，6-0-三甲 基-1-0-乙?；?2，5-縮水葡萄糖醇和甘露糖醇，兩者能明顯區(qū)分。
MeOMeO
權(quán)利要求
一種短葶山麥冬中多糖的制備方法，該方法包括1).取短葶山麥冬藥材，75％濃度以上的乙醇提取，得到提取液和藥材殘?jiān)?).取藥材殘?jiān)尤胨崛?，提取液濃縮，梯度加乙醇至醇濃度為60％～95％，放置，取沉淀部分，得乙醇沉淀多糖，即粗多糖浸膏；3).將乙醇沉淀多糖過(guò)纖維素DE 52柱層析，依次用水、NaCl洗脫，收集水洗部分，濃縮后冷凍干燥，得短葶山麥冬多糖。
2.權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述的步驟2)包括加乙醇至醇濃度為60%，以 及至醇濃度為80 %，放置，取沉淀部分，得60 %乙醇沉淀多糖和80 %乙醇沉淀多糖，合計(jì)為 粗多糖浸膏。
3.權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，所述的步驟2)為加乙醇至醇濃度為80%，放置， 取沉淀部分，得80%乙醇沉淀多糖，其為粗多糖浸膏。
4.權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，步驟2)為藥材殘?jiān)尤胨崛。崛∫簼饪s，力口 乙醇至醇濃度為60%，以及至乙醇濃度為80%，放置，取60%和80%的沉淀部分，即得粗多 糖浸膏，該粗多糖浸膏包括60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀多糖。
5.權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，步驟3)為將60%乙醇沉淀多糖和80%乙醇沉淀 多糖分別過(guò)纖維素DE-52柱層析，依次用水、0. Imol/lNaCUO. 2mol/lNaCl洗脫，收集水洗 部分，濃縮后冷凍干燥，得多糖部位Tl、T2，合計(jì)為短葶山麥冬多糖。
6.權(quán)利要求1所述的制備方法，其中，該制備方法包括1)取短葶山麥冬藥材，75%濃度以上的乙醇提取，得到提取液和藥材殘?jiān)?)取藥材殘?jiān)尤胨崛?，提取液濃縮，加乙醇至醇濃度為80%，放置，取沉淀部分， 得80%乙醇沉淀多糖，其為粗多糖浸膏；3)將80%乙醇沉淀多糖過(guò)纖維素DE-52柱層析，依次用水、0.Imol/lNaCUO. 2mol/ INaCl洗脫，收集水洗部分，濃縮后冷凍干燥，得短葶山麥冬多糖。
7.一種短葶山麥冬多糖，其為采用權(quán)利要求1 6任一項(xiàng)所述的方法得到。
8.權(quán)利要求7所述的短葶山麥冬多糖，該短葶山麥冬多糖中，以水解后果糖含量計(jì)，所 述的方法得到的短葶山麥冬多糖在藥材中的含量為0. 6% 6%。
9.權(quán)利要求7所述的短葶山麥冬多糖在制備治療心血管疾病的藥物中的用途。
10.權(quán)利要求9所述的用途，其中，所述的心血管疾病包括心肌缺血、糖尿病、血管平滑 肌增生。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種短葶山麥冬中多糖的制備方法，包括取短葶山麥冬藥材，75％濃度以上的乙醇提取，棄去提取液；取藥材殘?jiān)尤胨崛?，提取液梯度加乙醇至醇濃?0％～95％，放置取沉淀，得乙醇沉淀多糖；將乙醇沉淀多糖過(guò)纖維素DE-52柱層析，依次用水、NaCl洗脫，收集水洗部分，濃縮后冷凍干燥，得短葶山麥冬(粗)多糖；本發(fā)明還提供了上述方法得到的短葶山麥冬(精)多糖；本發(fā)明的方法提取精制得到的短葶山麥冬多糖具有明確的治療心血管疾病的作用。
文檔編號(hào)A61P3/10GK101935359SQ201010277930
公開(kāi)日2011年1月5日 申請(qǐng)日期2010年9月10日 優(yōu)先權(quán)日2010年9月10日
發(fā)明者何鳳艷, 林瑞超, 王鋼力, 聶黎行, 謝文利 申請(qǐng)人:中國(guó)藥品生物制品檢定所