專利名稱：一種蟾皮提取物干粉吸入劑及其制備方法、應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及干粉吸入劑，具體的說是蟾皮提取物制成的干粉吸入劑、所述干粉吸入劑的制備方法和在制備治療肺部腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
華蟾素為蟾蜍科(Bufonidae)動物中華大蟾蜍Bufobufo gargarizans Cantor的干燥皮經提取純化制得的提取物，具有解毒、消腫、止痛之功效，用于治療中、晚期腫瘤、慢性乙型肝炎等癥，其生理活性物質主要是蟾蜍毒素類(bufotoxins)及其水解產物蟾毒配基類(bufageins)、蟾毒色胺類(bufoteinines)等。目前華蟾素注射劑、口服液、片劑已應用于臨床，對肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的療效。尤其華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經加工制成的水溶性制劑，治療原發性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和16%，且對化療和放療具有協同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應較少，但仍存在靜脈滴注會出現局部靜脈反應，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長期刺激致靜脈非特異性炎癥；皮膚反應，主要表現為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現早搏、竇性心動過緩、竇性心動過速、房室傳導阻滯等心血管系統反應， 產生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產生的心臟毒性反應。此外，針劑需要在醫院內使用，病人順應性差。而華蟾素口服制劑需經過肝臟的首過效應，起效慢，制劑生物利用度較低。肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細胞組成，使得藥物分子極易進入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應小等諸多優點。肺吸入給藥中干粉吸入劑(drypowder inhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產生的氣流使藥物粉末霧化，進而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應用方便、吸收迅速、無肝臟首過、速釋和靶向定位的特點，是一種新型的給藥系統。肺癌的發病率在全世界范圍內正在迅速上升，已經成為癌癥死因的第一位。當前的抗腫瘤藥物大多數都是注射給藥，這種全身給藥方式不利于藥物蓄積于腫瘤部位，導致藥物的療效降低，不良反應增多。采用定位給藥將抗腫瘤藥物運送到人體的腫瘤病患部位，使藥物在病患部位的濃度提高，對降低藥物的毒副作用、提高藥物的治療效果具有重大的臨床應用價值。采用經肺給藥方式的吸入劑可將蟾皮提取物直接傳遞肺癌的病灶，有利于提高蟾皮提取物對肺癌的療效并降低其對正常組織的毒副作用。目前具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物干粉吸入劑的研究未見報道。

發明內容
發明目的本發明的一個目的是提供蟾皮提取物的肺部干粉吸入制劑及其制備方法。本發明的另一個目的是提供本發明所述干粉吸入劑在制備治療肺部腫瘤藥物中的應用。
針對上述發明目的，本發明提供以下技術方案一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料組成，蟾皮提取物(按照干燥后所得固體物質量)與所述的輔料的質量比為 1:0-1: 110。所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，是由蟾皮提取物加入輔料制成的粉末，粉末團聚形成可再分散顆粒；或者是蟾皮提取物負載在輔料顆粒表面形成顆粒；上述兩種顆粒的粒徑以D5tl計在0. 5-1000微米之間。所述的蟾皮提取物，為蟾蜍科動物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮經提取純化制得的提取物。蟾皮提取物的制備方法為取蟾皮1份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0. 1-48小時，合并水提液，濃縮至相對密度為1. 01-1. 50 (60_100°C )，加乙醇(65% -100%, W/W)沉淀，使乙醇含量達到50% (W/W)以上，靜置或離心或過濾處理， 取上清液回收乙醇，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮1份，力卩2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0. 1-48小時，合并水提液，濃縮至相對密度為 1.01-1.50(60-100°C)，加乙醇(65%-100%，W/W)沉淀，使乙醇含量達到 50% (W/W)以上， 靜置或離心或過濾處理，取上清液回收乙醇至無醇味，加乙醇(65% -100%, W/W)沉淀，使乙醇含量達到60% (W/W)以上，靜置或離心或過濾處理，取上清液回收乙醇至無醇味，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮1份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0. 1-48小時，合并水提液，經分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮1份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1% -100%, W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0. 1-48小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加0-100倍水，靜置或離心或過濾處理，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮1份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1^-100%, W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次0. 1-48小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加0-100倍水，經分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、干燥后得到蟾皮提取物。所述的輔料選用糖、醇、氨基酸、磷脂、表面活性物質、環糊精、高分子物質、硬脂酸鎂、硬脂酸、硬酯富馬酸鈉、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種混合物。所述的糖，可選用半乳糖、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖中的一種或幾種混合物；所述的醇，可選用甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨醇中的一種或幾種混合物；所述的氨基酸，可選用甘氨酸、門冬氨酸、丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、胱氨酸、賴氨酸、脯氨酸、精氨酸中的一種或幾種；所述的磷脂，可選用大豆磷脂、卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、合成磷脂中的一種或幾種；所述的表面活性物質， 可選用肺源性表面活性物質如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、膽固醇中的一種或幾種混合物；所述的高分子物質，可選用符合安全要求的高分子，優選可生物降解的高分子物質例如白蛋白、淀粉、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、聚乙二醇、泊洛沙姆、透明質酸、透明質酸鈉、海藻酸鈉中的一種或幾種混合物。優選的方式為所述輔料為吸入用乳糖顆粒平均粒徑在45-220微米與微粉化乳糖平均粒徑在1-10微米的混合物，其中乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為1000 1-1 1。 最優選的方式為乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為100 1-7 1。一種制備蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內。一種制備蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末負載在輔料顆粒表面形成顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內。一種蟾皮提取物干粉吸入劑在制備肺部腫瘤藥物中的應用。有益效果1、肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細胞組成，使得藥物分子極易進入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應小等諸多優點。肺吸入給藥中干粉吸入劑 (drypowder inhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產生的氣流使藥物粉末霧化，進而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應用方便、吸收迅速、無肝臟首過、速釋和靶向定位的特點，是一種新型的給藥系統。目前有關于干粉吸入劑多用于治療呼吸道和肺部的感染，但未見在肺部腫瘤的治療。同時，具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物干粉吸入劑的研究也未見報道。目前蟾皮提取物注射劑、口服液、片劑已應用于臨床，對肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的效果。尤其是華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經加工制成的水溶性制劑，治療原發性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和 16%,且對化療和放療具有協同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應較少，但仍存在靜脈滴注會出現局部靜脈反應，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長期刺激致靜脈非特異性炎癥；皮膚反應，主要表現為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現早搏、竇性心動過緩、竇性心動過速、房室傳導阻滯等心血管系統反應，產生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產生的心臟毒性反應。此外針劑需要在醫院內使用，病人順應性差。而蟾皮提取物口服制劑需經過肝臟的首過效應，起效慢，制劑生物利用度較低。使用蟾皮提取物的干粉吸入劑主要是針對肺部腫瘤，直接作用于患部，同時不存在肝臟的首過效應，起效快， 并且沒有上述的不良反應，對新藥開發具有極大的前景。
2、由于蟾皮提取物是混合物，其中含有吲哚堿類物質、華蟾酥毒基，脂蟾毒配基等，在實際操作中發現，加入一定配比的特定輔料能夠克服提取物粉碎到一定粒徑時而產生的靜電作用、內聚力等引起的團聚，減小吸濕性。申請人經過大量實驗獲知，特別是輔料選用乳糖顆粒與微粉化乳糖的混合物或者采用粉末團聚技術可以做成吸入性能優良的干粉吸入劑。
具體實施例方式下面結合實例對本發明作進一步詳細說明，但本發明的范圍并不受這些實例的任何限制。實施例11、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮2次，每次1. 5小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 1-1. 2(85°c )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達60%，靜置 M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至稠膏，60°C干燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物采用氣流粉碎至D5tl在5微米以下，與粒徑在 45-70微米的乳糖按質量比1 10進行混合，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例21、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加12倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 2-1. 3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達70%，靜置 24小時，取上消液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85 %，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、粒徑在45-80微米的乳糖、粒徑在20_50微米的亮氨酸按質量比10 100 1的比例進行混合，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內， 獲得吸入劑。實施例31、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加30倍量水，微波輔助提取3次，每次1小時，合并提取液，經分子量1000的超濾膜超濾，超濾液噴霧干燥得到蟾皮提取物粉末，粉末 D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例41、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加12倍量60% (W/W)的乙醇，回流提取2次， 每次2小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，低溫冷藏48小時，濾過，加入0. 3%的活性炭 (W/V)，煮沸30分鐘，濾過，噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、乳糖、甘露醇、甘氨酸、二月桂酰磷脂酰膽堿、卵磷脂、硬脂酸鎂按質量比1 5 5 2 0.5 0.5 0. 1的比例進行混合，氣流粉碎至粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例5
1、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加20倍量的無水乙醇，回流提取2次，每次 1小時，合并提取液，回收乙醇，經分子量3000的超濾膜超濾，超濾液真空濃縮至比重為 1. 20 (450C )，浸膏50°C真空干燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物、乳糖、膽固醇按1 8 1的比例進行混合，氣流粉碎至粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例61、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加15倍量的60% (W/W)乙醇，回流提取3次， 每次1小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液加2倍量水沉，靜置M小時，高速離心，取上清液得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備分別將上述蟾皮提取物中所含固形物質量5倍、1倍、2倍的乳糖、聚乙二醇6000、白蛋白加入蟾皮提取物中，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例71、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加10倍量的10% (W/W)乙醇，回流提取2次， 每次1小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物， 噴霧干燥，得到蟾皮提取物，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物藥物粉末、粒徑在10-90微米的甘露醇、微粉化硅膠按質量比10 89 1的比例進行混合，混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內， 獲得吸入劑。實施例81、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加10倍量的50% (W/W)乙醇，回流提取2次， 每次1小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物， 噴霧干燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物藥物粉末、甘露醇、亮氨酸按質量比10 100 3 的比例進行混合，混合后加水適量，噴霧干燥得到D5tl為4. 8微米的粉末，用有聚合物內襯的旋轉混合機混合，制成疏松的團聚物，團聚物的D5tl為390微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例91、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加10倍量的40% (W/W)乙醇，回流提取3次， 每次0.5小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、甘露醇、亮氨酸按質量比10 80 2的比例進行混合，用有聚合物內襯的旋轉混合機混合，制成疏松的團聚物，團聚物的1)5(1為120微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例101、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 2-1. 3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達70%，靜置 M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。
2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖 (D5tl = 5.1微米)按質量比5 90 5的比例進行混合，混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到32. 6%，室溫條件下放置18個月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯
著變化。實施例111、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 2-1. 3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達70%，靜置 M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂丨nhaLac 70乳糖、微粉化乳糖 (D5tl = 4. 9微米)按質量比3 95 1的比例進行混合，混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到30. 2%，室溫條件下放置18個月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯
著變化。實施例121、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 2-1. 3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達70%，靜置 M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂丨nhaLac 70乳糖、微粉化乳糖 (D5tl = 5. 5微米)按質量比3 77 11的比例進行混合，混合均勻后包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以制劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到29. 8%，室溫條件下放置18個月后，制劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯
著變化。實施例131、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮2次，每次1小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 3-1. 4 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達60%，靜置 48小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達80%，靜置48小時，濾過， 回收乙醇至無醇味，噴霧干燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物粉末、亮氨酸按1 5的比例進行混合，混合后顆粒的D5tl為292微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例14
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1、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加6倍量水，煎煮5次，每次1小時，合并濾液，濃縮至相對密度為1. 05 (700C )，冷卻至40°C，加乙醇沉淀，使含醇量達65%，靜置48小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達70%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物與亮氨酸按1 1的比例進行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與9倍量的甘露醇混合，混合后顆粒的D5tl為3 微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例151、蟾皮提取物的制備取干蟾皮洗凈，加30倍量水，煎煮1小時，提取液濃縮至相對密度為1. 30 (600C )，冷卻至20°C，加乙醇沉淀，使含醇量達70%，靜置M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達90%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物與泊洛沙姆按質量比10 1的比例進行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與8倍量的乳糖顆粒、1倍量的硬脂酸鎂混合， 混合后顆粒的D5tl為653微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內，獲得吸入劑。實施例161、蟾皮提取物的制備取蟾皮洗凈，加10倍量水，煎煮1小時，提取液濃縮至相對密度為1.20(50°C )，冷卻至室溫，加乙醇沉淀，使含醇量達50%，靜置M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達70%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味， 減壓濃縮，真空干燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的制備將蟾皮提取物氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與 20倍量的乳糖顆粒混合，混合后顆粒的D5tl為286微米，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內， 獲得吸入劑。實施例17按照實施例1-16獲得吸入劑，進行藥效學實驗，其中對比藥物為華蟾素注射液 (市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法制備蟾皮注射液A 取干蟾皮洗凈，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為 1. 2 (85°C )，冷卻至200C，加乙醇沉淀，使含醇量達60 %，靜置M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，加水至每毫升相當于原生藥5g，調節pH至6. 5,0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B 取干蟾皮洗凈，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時，濾過，加入0. 3%的活性炭(W/V)，煮沸30 分鐘，濾過，加水至每毫升相當于原生藥5g，調節pH至7，0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實驗苯并芘經皮穿刺肺內注射的方法建立大鼠肺腫瘤動物模型，取建模大鼠200只， 隨機分為20組，每組10只。每天1次，用藥7天。給藥方式第1-16組為實施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量為15g生藥/kg ；第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量15g生藥/kg ；第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量15g生藥/kg ；第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量15g生藥/kg ；第20組為生理鹽水對照組，腹腔注射10mL/kg。 停藥次日處死大鼠，解剖大鼠肺臟，觀察肺臟病變情況。實驗結果吸入劑給藥各組的大鼠的肺部出現腫塊或結節病變的發生率最低為 10.5%，最高為30.3% ；華蟾素注射液組(市售)為60.5%，蟾皮注射液A組為50. 1%， 蟾皮注射液B組為60.8%，生理鹽水組為100%，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組在肺部病變發生率上有顯著性差異(P < 0. 05)。實施例18按照實施例1-16獲得吸入劑，進行藥效學實驗，其中對比藥物為華蟾素注射液 (市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法制備蟾皮注射液A 取干蟾皮洗凈，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時，合并濾液，濃縮至相對密度為 1. 2 (85°C )，冷卻至200C，加乙醇沉淀，使含醇量達60 %，靜置M小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，加水至每毫升相當于原生藥5g，調節pH至6. 5,0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B 取干蟾皮洗凈，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時，合并提取液，回收乙醇至無醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時，濾過，加入0. 3%的活性炭(W/V)，煮沸30 分鐘，濾過，加水至每毫升相當于原生藥5g，調節pH至7，0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實驗1、家兔VX2原位肺癌模型的建立1)荷瘤種兔的制作常規復蘇VX2腫瘤冰凍細胞懸液，制成106/mL的活細胞懸液，取ImL接種于1只兔右后腿外側肌肉內，3周后于接種部位可捫及一直徑約30cm的腫塊，即制成荷瘤種兔。2)組織塊懸液的制備無菌條件下切取荷瘤種兔腿外側肌肉內的腫瘤，取呈魚肉樣生長旺盛的腫瘤組織，剪成泥狀。RPMI 1640培養液沖洗下過30目篩，去除單個細胞和過小的組織塊，篩上部分在RPMI 1640培養液沖洗下過20目篩，去除過大的組織塊。取篩下部分，離心沉淀后，取沉淀物2mL，加RPMI 1640培養液配制成組織塊懸液20mL。3)肺內接種所有家兔右胸壁脫毛，肌內注射速眠新合劑0. 8mL/kg麻醉后固定，常規消毒，取無菌三通接頭，分別接12號注射針頭、吸有兔自身血凝塊的ImL注射器及吸有VX2腫瘤組織塊懸液或細胞懸液ImL的注射器。在X線透視下，將12號針頭刺入兔右肺下葉內，回吸無血后，注入0. 4mL組織塊懸液或細胞懸液，然后注入0. 2mL兔自身血凝塊， 拔出針頭，接種完畢。4)移植瘤生長情況的觀測全部家兔自接種后第3天起，每日對胸部進行層寬、層厚均為5mm的CT掃描，觀察腫瘤生長、胸腔內轉移情況。5)家兔VX2原位肺癌模型建立結果家兔全部有肺內腫瘤生長，接種成功率100%。2、藥效實驗取成功建模家兔200只，隨機分為20組，每組10只。每天1次，用藥12天。給藥方式第1-16組為實施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量15g生藥/kg ；第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量15g生藥/kg;第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量15g生藥/kg ；第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量15g生藥/kg ；第20組為生理鹽水對照組，腹腔注射10mL/kg。停藥次日處死家兔，解剖家兔肺臟，剝離腫瘤組織，稱重。實驗結果吸入劑給藥各組的家兔的抑瘤率最小為58. 7%，最高為64. 3% ；華蟾素注射液組(市售)為56. 3 %，蟾皮注射液A組為45. 1 %，蟾皮注射液B組為48. 9 %，生理鹽水對腫瘤幾乎無抑制作用，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A 組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組的抑瘤率有顯著性差異(P < 0. 05)。
權利要求
1.一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料組成，蟾皮提取物與所述的輔料的質量比為1 0-1 110。
2.根據權利要求1所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物加入輔料制成的粉末，粉末團聚形成可再分散顆粒；或者是蟾皮提取物負載在輔料顆粒表面形成顆粒；上述兩種顆粒的粒徑以D5tl計在0. 5-1000微米之間。
3.根據權利要求1所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于所述的輔料選用糖、醇、氨基酸、磷脂、表面活性物質、環糊精、可生物降解的高分子物質、硬脂酸鎂、硬脂酸、 硬酯富馬酸鈉、微粉硅膠、滑石粉中的一種或幾種混合物。
4.根據權利要求3所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于所述的糖，選用半乳糖、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖中的一種或幾種混合物；所述的醇，選用甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨醇中的一種或幾種混合物；所述的氨基酸，選用甘氨酸、門冬氨酸、丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、胱氨酸、賴氨酸、脯氨酸、精氨酸、蛋氨酸中的一種或幾種；所述的磷脂，可選用大豆磷脂、卵磷脂、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、合成磷脂中的一種或幾種；所述的表面活性物質，選用肺源性表面活性物質如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、膽固醇中的一種或幾種混合物；可生物降解的高分子物質為白蛋白、淀粉、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、聚乙二醇、泊洛沙姆、透明質酸、透明質酸鈉、海藻酸鈉中的一種或幾種混合物。
5.根據權利要求3所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于所述輔料為不同粒徑乳糖或乳糖與微粉化乳糖的混合物。
6.根據權利要求5所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于所述輔料為吸入用乳糖顆粒與微粉化乳糖的混合物，其中乳糖顆粒平均粒徑為45-220微米，微粉化乳糖平均粒徑為1-10微米，乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為1000 1-1 1。
7.根據權利要求6所述的輔料，其特征在于乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為 100 1-7 1。
8.一種制備權利要求2所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻制成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內。
9.一種制備權利要求2所述的一種蟾皮提取物干粉吸入劑的方法，其制備步驟如下將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末與處方中剩余輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內；或者將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧干燥制成粉末，粉末負載在輔料顆粒表面形成顆粒，包裝入膠囊或泡罩或干粉吸入器內。
10.權利要求1的一種蟾皮提取物干粉吸入劑在制備治療肺部腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及干粉吸入劑，具體的說是一種蟾皮提取物制成的干粉吸入劑、所述干粉吸入劑的制備方法和在制備治療肺部腫瘤藥物中的應用。一種蟾皮提取物干粉吸入劑，其特征在于它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料組成，蟾皮提取物與所述的輔料的質量比為1∶0-1∶110。將一種蟾皮提取物制成干粉吸入劑，可直接作用于肺部病患，降低毒副反應的發生，提高藥物的生物利用度，既可克服口服制劑起效慢，具有肝臟首過效應，及全身性毒副作用，制劑生物利用度較低等缺點；同時也可解決針劑的使用不便，病人順應性差等問題。
文檔編號A61P35/00GK102210712SQ201110147809
公開日2011年10月12日 申請日期2011年6月2日 優先權日2011年6月2日
發明者張振海, 王晉艷, 賀俊杰, 賈曉斌, 陳彥 申請人:陳彥