專利名稱：一種馬桑內酯類物質的提純方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，尤其是涉及一種應用超臨界萃取法提純馬桑內酯類物質的方法。
背景技術：
馬桑Cbriaria sinica Maxim.為馬?？岂R桑屬植物，是多年生落葉有毒的小喬木或灌木。其自然資源豐富，在我國分布廣泛。馬桑根部藥用，用于治風濕麻木、風火牙痛、痰飲、跌打損傷、燙火傷、急性結膜炎等。馬桑全株有毒，在民間有用于土農藥的記載，馬桑提取物對多種咀嚼式害蟲具有明顯的拒食和胃毒作用，可用作植物農藥。馬桑內酯類化合物是馬桑的主要活性成分，對中樞神經系統具有顯著的藥理作用。周莉君等研究表明馬桑提取物對真菌抑制效果顯著高于細菌，且醇提物抑菌效果優于水提物。張雁冰等通過對羥基馬桑毒素和馬桑亭的殺蟲活性實驗，表明羥基馬桑毒素對小菜蛾具有明顯的拒食作用。此外，馬桑內酯類化合物還可用于點燃癲癇模型，具有安全性好、對腦無直接機械損傷等優點?，F有馬桑內酯類化合物的提取方法有醇提，石油醚萃取除雜，大孔樹脂吸附，柱色譜及重結晶等方法得到。該方法能耗大，步驟繁多，制備量少。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種馬桑內酯類物質的提純方法，該方法操作簡單，制備量大。本發明是通過以下技術方案實現的
一種馬桑內酯類物質的提純方法，其特征在于包含以下步驟
1)超臨界萃取將馬桑藥材粉碎，過20目篩，置于萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入甲醇作為夾帶劑參與萃取，收集萃取物；
2)石油醚脫脂向上述萃取物中加入3飛倍量石油醚回流提取2、次，離心分離固液， 得脫脂物；
3)柱層析將上述脫脂物進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，高效液相監測，收集相應流分，濃縮干燥得到馬桑內酯類物質。所述的馬桑內酯類物質包括馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等物質。所述步驟1)中的萃取參數為萃取溫度為^_40°C，萃取壓力為20_30MPa，CO2流量為15-25L/h，萃取時間為2-4h，分離釜I溫度為20_30°C，壓力為6_12MPa，分離釜II溫度為 8-15°C，壓力為 4-8MPa。所述步驟3)中的硅膠粒度為10(Γ300目，洗脫劑氯仿-甲醇洗脫比例2 15 :5。本發明的積極效果是
(1)超臨界萃取，萃取過程耗能低，萃取劑(X)2來源豐富、清潔無污染；
(2)本發明采用溶劑萃取法精制馬桑內酯類物質，該法能快速的去處雜質，得到純度高
3的馬桑內酯類物質，工藝簡單，成本低，效率高。下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。
具體實施例方式下述實施例中硅膠柱層析采用高效液相監測接收洗脫液，具體方法如下(參照文獻“馬桑籽中馬桑內酯類化合物的提取分離及其活性”)
高效液相色譜條件
色譜柱0DS 柱 Q50mmX4· 6mmX5Mm)；
流動相15%乙腈；
流速:lml/min ；
檢測波長215nm ；
柱溫室溫。實施例1
取馬桑干燥藥材1kg，粉碎過20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 200ml甲醇作為夾帶劑參與萃取，設定萃取參數為萃取溫度40°C，萃取壓力20MPa，萃取時間2h，CO2通入的量為15L/h，設定分離釜I溫度為20°C，壓力為6MPa，分離釜II溫度為8°C， 壓力為4MPa，在分離釜II中收集萃取物，加入500ml石油醚回流提取4次，離心除去液體得馬桑內酯類化合物粗提物；
取馬桑內酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(100目)柱層析，用氯仿-甲醇 (2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標流分，合并，減壓回收試劑，得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內酯類物質6. 7g。實施例2:
取馬桑干燥藥材1kg，粉碎過20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 300ml甲醇作為夾帶劑參與萃取，設定萃取參數為萃取溫度40°C，萃取壓力30MPa，萃取時間4h，CO2通入的量為25L/h，設定分離釜I溫度為30°C，壓力為12MPa，分離釜II溫度為 15°C，壓力為8MPa，在分離釜II中收集萃取物，加入800ml石油醚回流提取3次，離心除去液體得馬桑內酯類化合物粗提物。取馬桑內酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(200目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標流分，合并，減壓回收試劑， 得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內酯類物質7. Sg。實施例3:
取馬桑干燥藥材^g，粉碎過20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入 1.2L甲醇作為夾帶劑參與萃取，設定萃取參數為萃取溫度30°C，萃取壓力^MPa,萃取時間2. 5h，CO2通入的量為18L/h，設定分離釜I溫度為22°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為 13°C，壓力為6MPa，在分離釜II中收集萃取物，用2. 5L石油醚回流提取2次，離心除去液體得馬桑內酯類化合物粗提物。取馬桑內酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(300目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標流分，合并，減壓回收試劑，得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內酯類物質33. 5g。實施例4:
取馬桑干燥藥材10kg，粉碎過20目篩，加入至萃取釜中，采用超臨界(X)2萃取，通入2L 甲醇作為夾帶劑參與萃取，設定萃取參數為萃取溫度35°C，萃取壓力20MPa，萃取時間池， CO2通入的量為22L/h，設定分離釜I溫度為25°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為14°C，壓力為5MPa，在分離釜II中收集萃取物，用5L石油醚回流提取4次，離心除去液體得馬桑內酯類化合物粗提物。取馬桑內酯類化合物和等量硅膠混合，研勻，上硅膠(200目)柱層析，用氯仿-甲醇(2-15:5)洗脫，每接收IOOml用高效液相色譜跟蹤，收集目標流分，合并，減壓回收試劑， 得到精制的由馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等組成的馬桑內酯類物質45. 7g。
權利要求
1.一種馬桑內酯類物質的提純方法，其特征在于包含以下步驟1)超臨界萃取將馬桑藥材粉碎，過20目篩，置于萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，通入甲醇作為夾帶劑參與萃取，收集萃取物；2)石油醚脫脂向上述萃取物中加入3飛倍量石油醚回流提取2、次，離心分離固液， 得脫脂物；3)柱層析將上述脫脂物進行硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，高效液相監測，收集相應流分，濃縮干燥得到馬桑內酯類物質。
2.如權利要求所述的一種馬桑內酯類物質的提純方法，其特征在于所述的馬桑內酯類物質包括馬桑毒素、羥基馬桑毒素、馬桑亭和馬桑寧等物質。
3.如權利要求所述的一種馬桑內酯類物質的提純方法，其特征在于所述步驟1)中的萃取參數為萃取溫度為^_40°C，萃取壓力為20-30MPa，C02流量為15_25L/h，萃取時間為 2-4h，分離釜I溫度為20-30°C，壓力為6-12MPa，分離釜II溫度為8_15°C，壓力為4_8MPa。
4.如權利要求所述的一種馬桑內酯類物質的提純方法，其特征在于所述步驟3)中的硅膠粒度為ΚΚΓ300目，洗脫劑氯仿-甲醇洗脫比例2 15 :5。
全文摘要
本發明涉及了一種馬桑內酯類物質的提純方法，尤其是涉及一種應用超臨界萃取法提純馬桑內酯類物質的方法，方法步驟包括取馬桑藥材粉碎，置于超臨界萃取釜中，采用超臨界CO2萃取，在分離釜中收集萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質，再采用硅膠柱層析，氯仿-甲醇洗脫，分離精制得馬桑內酯類物質。本發明工藝流程簡單、消耗低、效率高、簡單易操作，可實現大量制備。
文檔編號A61P31/10GK102327261SQ20111026427
公開日2012年1月25日 申請日期2011年9月8日 優先權日2011年9月8日
發明者劉東鋒, 吳艷波 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司