專利名稱：一種氯法齊明用于治療結(jié)核病的藥物新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物的新用途，特別涉及一種氯法齊明的藥物新用途。本申請(qǐng)是第200910131770. 9號(hào)專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。
背景技術(shù)：
結(jié)核病是結(jié)核桿菌引起的慢性傳染病，目前約有占世界1/3的人口感染過(guò)結(jié)核菌。我國(guó)結(jié)核病疫情也呈蔓延趨勢(shì)，具有患病率高、耐藥率高等特點(diǎn)，為全球結(jié)核病高負(fù)擔(dān)國(guó)家之一。氯法齊明是10-(對(duì)-氯苯基)-2，10- 二氫-3-(對(duì)-氯苯氨基)-2-異丙亞胺基吩嗪，按干燥品計(jì)算，含C27H22Cl2N4不得少于98. 0%，曾用名為氯苯吩嗪，氯法齊明為棕紅色或紅褐色的結(jié)晶或結(jié)晶性粉末；無(wú)臭。氯法劑明為抗麻風(fēng)藥，對(duì)麻風(fēng)桿菌、潰瘍分枝桿菌有抑制和殺滅作用，此外還具有抗炎作用，對(duì)治療和預(yù)防II型麻風(fēng)反應(yīng)結(jié)節(jié)性和多形性紅斑等均有效。其抗菌作用可能通過(guò)干擾麻風(fēng)桿菌的核酸代謝，與其DNA結(jié)合，抑制依賴DNA的 RNA聚合酶，阻止RNA的合成，從而抑制細(xì)菌蛋白的合成，發(fā)揮其抗菌作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于公開(kāi)一種藥物用于治療結(jié)核病的新用途。本發(fā)明目的是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)本發(fā)明藥物氯法齊明為10-(對(duì)-氯苯基)-2，10- 二氫-3-(對(duì)-氯苯氨基)-2-異丙亞胺基吩嗪，按干燥品計(jì)算，含C27H22Cl2N4不得少于98. 0%。按藥劑學(xué)方法，將本發(fā)明藥物氯法齊明制備成多種臨床藥物劑型作為治療結(jié)核病的藥物，包括膠丸、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、滴丸、蜜丸、丸劑、顆粒劑、蜜煉膏劑、緩釋制劑、 速釋制劑、控釋制劑、口服液體制劑或注射制劑。本發(fā)明藥物是一種吩嗪染料，通過(guò)與分支桿菌的DNA結(jié)合抑制轉(zhuǎn)錄而產(chǎn)生抑制分支桿菌生長(zhǎng)的效果；它的另外一個(gè)重要作用是與干擾素合用，可以恢復(fù)細(xì)胞吞噬和殺菌活性的作用，從而成為吞噬細(xì)胞的激發(fā)劑，屬于免疫治療的一部分。下面實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例用于進(jìn)一步說(shuō)明但不限于本發(fā)明。實(shí)驗(yàn)例1氯法齊明治療結(jié)核病的藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康挠^察氯法齊明(clofazimine，CLF)在體外及體內(nèi)抗結(jié)核分枝桿菌的活性，為臨床應(yīng)用提供依據(jù).2、實(shí)驗(yàn)材料菌株結(jié)核分枝桿菌H37Rv (ATCC27294)本研究室保存菌株；30株耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株均為國(guó)家結(jié)核病參比實(shí)驗(yàn)室保存菌株。試劑培養(yǎng)基稱取7H9培養(yǎng)基(美國(guó)Difico公司)4. 7g，溶于900ml蒸餾水中， 加入2. Oml甘油，121°C高壓lOmin，待使用前加入0. 1體積分?jǐn)?shù)的營(yíng)養(yǎng)添加劑白蛋白-葡萄糖-過(guò)氧化氫酶(albumin dextrose catalase，ADC)。阿爾瑪藍(lán)(Alamar blue)；英國(guó)ktotec公司產(chǎn)品，4°C避光保存。二甲基亞砜(DMSO)分析純，成都化學(xué)試劑廠產(chǎn)品。動(dòng)物SPF級(jí)6-8周齡雌性BALB/C小鼠36只，體重為18_20g，購(gòu)自首都醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。藥物異煙胼(INH)、利福平(RFP)均為美國(guó)Sigma公司產(chǎn)品；氯法齊明為南京立業(yè)制藥有限公司惠贈(zèng)。3、實(shí)驗(yàn)方法(I)MIC測(cè)定；將200 μ 1滅菌水加入無(wú)菌96孔板四周邊的各孔中，防止培養(yǎng)過(guò)程中孔內(nèi)的成分蒸發(fā)。以DMSO或滅菌蒸餾水溶解藥物制成初濃度，用7Η9培養(yǎng)基(不含 twecnSO)稀釋成所需的濃度，加入無(wú)菌96孔板100 μ 1，測(cè)定對(duì)H97RvMIC的各藥物終濃度分別為:INH :0. 0125,0. 025,0. 05,0. 1、0· 2、0· 4μ g/ml ；RFP :0. 0125,0. 025,0. 05,0. 1、0· 2、 0. 4 μ g/ml ；CLF :0. 03,0. 06,0. 12,0. 24,0. 48,0. 96,1. 92 μ g/ml 測(cè)定對(duì)耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株MIC的各藥物終濃度分別為:ΙΝΗ :1、5、10、20、40μ g/ml ；RFP :1、5、10、20、 40 μ g/ml ；CLF :0. 06,0. 12,0. 24,0. 48,0. 96、1. 92,3. 84 μ g/ml。選取 H37Rv 和 30 株耐多藥臨床分離菌株的培養(yǎng)物制成菌懸液，接種到含0. 05% tween80U0% ADC的7H9培養(yǎng)基中， 37°C靜止培養(yǎng)1-2周，生長(zhǎng)至濁度為MoFarland 1. 0 (相當(dāng)于107CFU/ml)時(shí)，1 20稀釋后加入各孔100 μ 1，菌液的終濃度為106CFU/ml。每板均設(shè)2個(gè)不含抗菌藥的生長(zhǎng)對(duì)照孔，96 孔板于37°C孵育。7d后加入生長(zhǎng)對(duì)照孔20 μ 1 IOXAlamar blue和5% tween80 50 μ 1 的混合液，37°C孵育Mh，如果顏色從藍(lán)色變?yōu)榉凵瑒t在各實(shí)驗(yàn)藥物的孔內(nèi)加入上述量的 Alamar blue和tween80混合液，37°C孵育24h記錄各孔的顏色，藍(lán)色孔為無(wú)生長(zhǎng)，粉紅色孔為有生長(zhǎng)。MIC定義為阻止顏色變化(從藍(lán)色變?yōu)榉奂t色)的最低藥物濃度。(2)小鼠結(jié)核病模型的建立及治療選取結(jié)核分枝桿菌H37Rv2_3周的培養(yǎng)物制成濃度為(5X 105)CFU/ml的菌懸液，36只雌性BALB/C小鼠尾靜脈注射0. 2ml/只，感染菌量 IO5CFU/只。于感染后第2天解剖6只小鼠以提供脾重、肺重及活菌數(shù)的基礎(chǔ)值。將其余小鼠隨機(jī)分成5組，每組6只。并于感染后第2天開(kāi)始給藥，空白對(duì)照組0. 5%羥甲基纖維素鈉(CMC)，INH組(陰性對(duì)照組):25mg/kg,每周給藥5次；CLF-I組:20mg/kg，每周給藥5 次；CLF-2組10mg/kg，每周給藥5次；CLF-3組20mg/kg，每周給藥2次；異煙胼和氯法齊明均應(yīng)用0. 5% CMC制成混懸液灌胃給藥，給藥至感染后30d。最后1次給藥后的次日，將各組小鼠處死，進(jìn)行小鼠脾、肺活菌計(jì)數(shù)。活菌計(jì)數(shù)方法記錄小鼠體重，無(wú)菌操作下解剖， 取脾、肺分別勻漿，加入生理鹽水制成組織混懸液，分別取小鼠脾、肺的組織混懸液系列10 倍稀釋，取0. Iml接種于改良羅氏培養(yǎng)基，各樣品的各濃度接種3支，37°C培養(yǎng)4周。觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，計(jì)算活菌數(shù)(CFU)。(3)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)以^ 士S表示，采用SPSS11.0軟件，組間比較采用單因素方
差分析，LSD方差分析法，P <0.01為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)最低抑菌濃度結(jié)果氯法齊明對(duì)結(jié)核分枝桿菌H37Rv的MIC是0. 12-0. 24 μ g/ml ；異煙胼和利福平的 MIC分別是0. 025,0. 05 μ g/ml ；氯法齊明對(duì)30株耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的MIC范圍為0. 12-1. 92 μ g/ml，具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。表1氯法齊明對(duì)30耐多藥結(jié)核分枝桿菌臨床分離株的MIC ( μ g/ml)
權(quán)利要求
1.氯法齊明在制備治療結(jié)核病藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種氯法齊明用于治療結(jié)核病的藥物新用途，氯法齊明為10-(對(duì)-氯苯基)-2，10-二氫-3-(對(duì)-氯苯氨基)-2-異丙亞胺基吩嗪，同時(shí)也公開(kāi)了以氯法齊明為制藥原料制備成膠丸、片劑、膠囊劑、滴丸、注射劑等藥物制劑。大量試驗(yàn)證明本發(fā)明藥物具有治療結(jié)核病的作用，臨床使用安全有效。
文檔編號(hào)A61K31/498GK102406643SQ20111037909
公開(kāi)日2012年4月11日 申請(qǐng)日期2009年4月1日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月1日
發(fā)明者余述南 申請(qǐng)人:立業(yè)制藥股份有限公司