專利名稱：與glp-2受體特異性結(jié)合的藥物融合體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一類與GLP-2受體結(jié)合的特異性藥物融合體及其應(yīng)用。主要涉及通過基因工程手段將具有活性的、能與GLP-2受體有效結(jié)合的多肽片段(幻 通過連接鏈與由(X)n鏡像氨基酸序列組成的多肽片段(X’)n連接在一起，在連接鏈處有聚合物、脂肪酸和糖修飾任一種修飾。所形成的藥物融合體包含2段反向重復(fù)的多肽片段序列(幻 與(X’)n。本發(fā)明還涵蓋了該多肽及其修飾產(chǎn)物在治療炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腸胃道是消化、吸收營養(yǎng)的主要場(chǎng)所，當(dāng)機(jī)體的腸胃道遭到破壞時(shí)，腸胃道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的消化和吸收能力下降。很多生長因子如表皮生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、胰島素樣生長因子-I都參與腸上皮生長的調(diào)控，能再生、修復(fù)損傷的腸粘膜。但缺乏特異性，常常伴隨機(jī)·體的不良反應(yīng)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，類胰高糖素肽-2 (Glucagon-like peptide-2, GLP-2)通過與其受體(胰高糖素樣肽-2受體,Glucagon-like peptide-2 receptor, GLP-2R)結(jié)合，可有效減少胃排空和分泌，并調(diào)節(jié)小腸內(nèi)膜細(xì)胞的生長、增殖和修復(fù)，抑制其凋亡。該藥增加了這些細(xì)胞的數(shù)量，后者可增加小腸吸收、減少腹瀉。因此補(bǔ)充足夠的GLP-2成為炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥治療的關(guān)鍵(Estall et al. , Current PharmaceuticalDesigns, 2006, V12:1731-1750. )0目前基于該機(jī)理開發(fā)的用于糖尿病治療的多肽主要基于內(nèi)源性GLP-2(胰高糖素樣肽-2)改造的多肽-替度魯肽(Teduglutide)。為降低二肽基肽酶對(duì)上述多肽的酶切，該肽將GLP-2的N端第二位的丙氨酸突變?yōu)楦拾彼帷５@類多肽分子量比較小，因此應(yīng)用于臨床時(shí)患者治療的依從性不佳。為延長該類小肽的半衰期，一般通用的做法是將該類活性多肽進(jìn)行聚合物的化學(xué)修飾、微球包埋或蛋白融合(包括Fe融合和人血白蛋白融合)。但上述的幾種常規(guī)解決手段存在下述潛在問題(I) PEG修飾的長效化制劑，其聚合物直接修飾在GLP-2或其類似物的尾部。由于聚合物和GLP-2或其類似物相比，其分子體積較大，存在的空間位阻效應(yīng)會(huì)影響GLP-2與其受體(GLP-2R)的有效結(jié)合，造成體內(nèi)生物學(xué)活性顯著下降；(2)Fc融合多肽后其半衰期的延長并不如所預(yù)期的那樣顯著(US Pat.No. 6，756，480，引入這里作為參考)；(3)其它形式如人血白蛋白融合或微球包埋在患者體內(nèi)有引發(fā)免疫原性降低治療效果的風(fēng)險(xiǎn)。盡管替度魯肽已經(jīng)在美國處于注冊(cè)的狀態(tài)，但患者在需要每天用藥一次，患者的依從性不佳。目前未有長效的、高活性的GLP-2受體激動(dòng)劑。因此，在炎性腸道疾病及相關(guān)領(lǐng)域中，存在進(jìn)一步改良GLP-2受體激動(dòng)劑的極大的、迫切的需要，以在臨床上發(fā)揮更佳的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
針對(duì)上述不足，本發(fā)明提供了下述構(gòu)型的化合物
權(quán)利要求
1.具有下式的與GLP-2受體特異性結(jié)合的藥物融合體
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的藥物融合體，其結(jié)構(gòu)特征在于所述藥物融合體中包含2段反向重復(fù)的多肽序列(互為鏡像的(幻 與(X’)n)，所述的2段重復(fù)序列((幻 與(X’)n)通過連接鏈Y連接在一起；在連接鏈的部位有聚合物、脂肪酸或糖其中任一種修飾；X與Y間和X’與Y間不存在或有1-20個(gè)氨基酸殘基間隔。
3.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)力要求2所述，η是2。
4.根據(jù)權(quán)利要求I和權(quán)力要求2所述，η是I。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述，藥物融合體中連接鏈Y包含一個(gè)可發(fā)生化學(xué)修飾的氨基酸位點(diǎn)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4所述，藥物融合體中X選自 在SEQ ID No: I、No: 2給出的序列; (a)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被絲氨酸替換； Ca)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被甘氨酸替換； Ca)的氨基酸序列中，具有在一個(gè)或多個(gè)位置的氨基酸被丙氨酸替換。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-5項(xiàng)所述的藥物融合體中，連接鏈Y長度為3-20個(gè)氨基酸，所述連接鏈包括但不限于SEQ ID N0:3、SEQ ID NO :4給出的氨基酸序列。
8.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述，制備的藥物融合體中X片段的N端和X’片段的C端為組氨酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述修飾，可發(fā)生化學(xué)修飾的氨基酸位點(diǎn)為半胱氨酸。
10.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述，藥物融合體的化學(xué)修飾，包括但不限于脂肪酸修飾、聚乙二醇修飾、包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物修飾、糖修飾任一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述修飾，是通過Z末端的化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)和連接鏈Y上游離的半胱氨酸反應(yīng)進(jìn)行修飾，制備藥物融合體。
12.根據(jù)權(quán)利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為脂肪酸，所述脂肪酸的碳鏈長度為5-30個(gè)。
13.根據(jù)權(quán)利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為聚乙二醇，所述聚乙二醇的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。
14.根據(jù)權(quán)利要求10所述修飾制備的藥物融合體中Z為包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物，所述的包含乙氧基重復(fù)結(jié)構(gòu)的嵌段共聚物的分子量范圍為5000-40000道爾頓之間。
15.根據(jù)權(quán)力要求13所述的藥物融合體，聚乙二醇包括線性的聚乙二醇和分枝型聚乙二醇。
16.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的藥物融合體的X片段，選自GLP-2(1-33)或其類似物。
17.—種編碼權(quán)利要求1-9、權(quán)利要求16任一項(xiàng)的多肽的核苷酸序列。
18.—種包含權(quán)利要求17的表達(dá)載體的宿主細(xì)胞。
19.權(quán)利要求18的宿主細(xì)胞為真核細(xì)胞。
20.權(quán)利要求18的宿主細(xì)胞為原核細(xì)胞。
21.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的藥物融合體在治療炎性腸道疾病的應(yīng)用。
22.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的藥物融合體在治療克羅恩(Chron’s)疾病的應(yīng)用。
23.任一項(xiàng)在前權(quán)利要求所述的藥物融合體在治療短腸綜合癥的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一類結(jié)合GLP-2R短肽的藥物融合體，還公開了該類藥物融合體的制備方法及利用該藥物融合體治療炎性腸道疾病、克羅恩病及短腸綜合癥的方法。
文檔編號(hào)A61P29/00GK102949731SQ20111040447
公開日2013年3月6日 申請(qǐng)日期2011年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月16日
發(fā)明者于鵬展 申請(qǐng)人:西藏海思科藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司