專利名稱：丹參與三七不同提取部位及其組合抑制平滑肌細胞增生和防治冠狀動脈術后再狹窄的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及丹參三七超聲、熱回流提取，提取物經SP825大孔樹脂進行醇水梯度洗脫的方法，以及50%洗脫部位、95%洗脫部位、50% +95%組合、50% +80% +95%組合及其單體組合等在抑制平滑肌細胞增生和預防冠狀動脈擴張成形術(PTCA)術后再狹窄的用途。
背景技術：
三七為五加科多年生草本植物三七[Panax Notoginseng (Burk.)F.H.Chen]的根，具有活血化淤、消腫定痛的功效，皂苷類是其主要有效成分，如人參皂苷Rbl、Rgl。三七主要含有多種與人參皂苷類似的成分，如人參皂苷Rbl，Rd, Rgl，三七皂苷Rl，R2等皂苷類成分，總皂苷為其主要有效成分。近年來，國內對其化學和藥理進行了廣泛的研究，證實三七總皂苷(PNS)具有實驗性治療心肌缺血、心律失常，降低動脈血壓，抗衰老及改善物質代謝；對中樞神經有抑制和鎮痛作用。丹參為唇形科植物丹參[Slauia miltiorrhiza Bunge]的干燥根及根莖。具有祛瘀止痛、活血通經、清心除煩之功。現代中藥藥理學研究表明，丹參能夠增加冠狀動脈血流量、降血脂、抑制血栓形成或抗血栓、改善微循環作用。心血管疾病嚴重威脅著人類的健康，是全球范圍內造成死亡人數最多的疾病。根據世界衛生組織統計2004年約有1710萬人死于心血管疾病，占全球死亡人數的29%。其中約有720萬人死于冠心病。冠心病(coronary artery heart disease),簡稱CHD,是一種最常見的心臟病，是指因冠狀 動脈狹窄、供血不足而引起的心肌機能障礙和(或)器質性病變，故又稱缺血性心臟病(IHD)。癥狀表現胸腔中央發生一種壓榨性的疼痛，并可遷延至頸、頜、手臂、后背及胃部。發作的其他可能癥狀有眩暈、氣促、出汗、寒顫、惡心及昏厥。嚴重患者可能因為心力衰竭而死亡。2009年中國衛生部第四次國家衛生服務調查顯示，心臟病、腦血管病和高血壓等循環系統疾病明顯增加，總病例數達到1.14億，其中腦血管病患者從500萬增長到1300萬，高血壓患者從1400萬增長到7300萬，而從2009至2025年中國65歲以上老年人口占總人口比例將從7%上升到12%，中國循環系統疾病未來前景極其嚴峻，勢必構成醫療支出的巨大負擔。根據最新出版的《中國心血管病報告2008-2009》數據顯示:中國心血管病(冠心病、腦卒中、心衰、高血壓等)現患病人數2.3億，每十個成年人中有2人是心血管病。其中高血壓2億，腦卒中700萬、心肌梗死200萬、心衰420萬、肺心病500萬，風心病250萬，先心病200萬。估計中國每年死于心血管病的約300萬人，其中一半與高血壓有關。中國總死亡人數中，每死亡3個人中就有I人是心血管病。中國每天心血管病死亡8200多人，估算每10秒就有I人死于心血管病。中國心血管病死亡率高居首位,高于腫瘤及其他疾病。每年消耗很大的國家財力和人力資源。采用外科手術已能對冠狀動脈疾病做有效的治療。尤其是冠狀動脈擴張成形術的快速發展，其對冠心病的治療價值已經得到眾多隨機臨床機制試驗的證實。冠狀動脈擴張術成行術是從內部將動脈狹窄部位擴張，恢復正常血液流量。但是經皮腔內冠狀動脈擴張成形術(PTCA)術后3-6個月約有30% -50%的患者會出現血管內膜增生再狹窄，極大地影響了 PTCA的遠期療效。PTCA術后再狹窄的防治已經成為當今世界上心血管疾病防治研究中最重要的課題之一。

發明內容
本發明的目的在于建立三七與丹參超聲提取物經不同濃度乙醇洗脫的方法及其洗脫部位在抑制平滑肌細胞增生和預防PTCA術后再狹窄的預防與治療的用途。本實驗室模擬PTCA術后血管再狹窄，用球囊損傷SD大鼠左側頸總動脈作為模型，在動物體內反復實驗驗證，證明丹參三七提取物不同洗脫部位及其不同濃度組合對大鼠血管內膜增生的抑制；不同提取物中主要有效單體組合也能有效抑制大鼠血管內膜增生，從而完成了本發明。本發明所用丹參、三七為常用中藥，所用提取物的洗脫部位為丹參三七提取物過SP825打孔樹脂，用不同濃度乙醇洗脫。所用單體組合人參皂苷Rbl，Rgl，丹參酮IIA(可用丹參酮IIA磺酸鈉代替)可以是從三七丹參藥材中提取的單體化合物，也可以化學合成，還可以是主要成分為這些單體的提取物。在實際生產中可以通過改變優化提取工藝提高主要有效成分含量，減少用藥量和提高療效。復方丹參片在目前生產工藝內可以制備成除片劑之外的劑型，如滴丸劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑等；三七丹參提取物不同乙醇洗脫部位及其中含有的主要有效單體人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA也可以制成各種不同的劑型，通過不同的給藥途徑用于PTCA術后再狹窄的預防和治療。 本發明具有以下優點:1、發現了三七、丹參的提取方法及其不同乙醇洗脫部位的洗脫方法。2、發現了三七、丹參的不同乙醇洗脫部位及其組合對血管術后損傷再狹窄的治療作用，可以很好地抑制血管內膜的增厚和官腔狹窄，這些作用有助于提高冠狀動脈成形術的遠期療效，改善患者生活質量。3、發現了人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA不同組合可以有效地抑制血管平滑肌細胞的增殖及治療血管術后內膜球囊損傷再狹窄。4、本實驗所得出提取部位及其組合以及有效單體組合，可以使用藥量比復方丹參片等中藥用藥量減少。


圖1:三七和丹參超聲和熱回流法提取各部位薄層圖。圖2:三七和丹參超聲和熱回流法提取各部位高效液相色譜圖。圖3:不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對SD大鼠動脈血管內膜增生的影響。圖4:不同丹參、三七提取物不同洗脫部位組合對SD大鼠動脈血管內膜增生的影響。圖5:不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對SD大鼠動脈血管內膜增生的影響。圖6:三七和丹參提取洗脫方法流程圖。圖7.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測結果。圖8.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測結果。圖9.不同濃度的三七和丹參提取物洗脫部位對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測結果。圖10.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測結果。圖11.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測結果。圖12.不同濃度丹參和三七提取物不同洗脫部位組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測結果。圖13.不同丹參、三七提 取物及其單體有效成分組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中MDA檢測結果。圖14.不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中NO檢測結果。圖15.不同丹參、三七提取物及其單體有效成分組合對SD大鼠動脈血管球囊損傷各組血清中SOD檢測結果。
具體實施例方式下面結合實施案例對本發明作進一步的說明:下面通過以下實施例來闡述本發明所述三七丹參提取物不同洗脫部位及其組合，以及其有效單體不同組合對抑制血管內膜增厚作用的評價，但并不限于以下途徑。這些生物實驗主要包括:1.三七丹參提取物不同洗脫部位的洗脫方法的建立及優化。2.不同濃度三七丹參提取物不同洗脫部位及其配伍對SD大鼠頸總動脈球囊損傷再狹窄的治療作用。
3.不同濃度三七丹參提取物不同洗脫部位中有效單體組合對SD大鼠頸總動脈球囊損傷再狹窄的治療作用。4.不同濃度三七丹參提取物及其單體有效成分組合對SD大鼠動脈血管內膜增生的影響。[實施例一]三七丹參提取物不同洗脫部位的洗脫方法的建立及優化。1.三七和丹參藥材飲片的購買(購自北京同仁堂藥材公司大柵欄店精品部)。2.三七丹參提取洗脫方法。附圖6。3.大孔樹脂處理:將SP825大孔樹脂用95%的乙醇浸泡3d，使其充分膨脹，濕法裝柱，然后用95%的乙醇洗至流出液加適量水無白色渾濁現象。再用蒸餾水洗盡乙醇，直至流出液無渾濁為止。4.分別取三七和丹參各150g，按上圖方法進行超聲提取；另取一份按上圖進行熱回流提取。5.提取物回收乙醇后，SP825大孔樹脂洗脫，濕法上樣，按上圖洗脫方法進行不同濃度乙醇溶液洗脫。6.回收不同濃度乙醇洗脫部位溶液，冷凍干燥，計算提取率(洗脫部位重量/三七丹參原藥材總重量)，單位:g。7.高效液相色譜法條件設置:以C18為固定相，乙腈為流動相A，水為流動相B，進行梯度洗脫，流速為lml/min，進樣量為20 μ 1，檢測波長為203nm，柱溫為25°C。
權利要求
1.丹參與三七超聲提取物經SP825大孔樹脂在50%、80 %、95 %濃度乙醇洗脫，所得50^^80^^95%洗脫部位的新方法建立。其特征在于超聲后提取物上大孔樹脂乙醇洗脫，較通常所用熱回流法，能提高不同洗脫部位的提取率，且洗脫部位有效單體含量更高。其中50 %洗脫部位主要含有人參皂苷Rgl，80 %洗脫部位主要含有人參皂苷Rbl，95 %洗脫部位主要含有丹參酮ΠΑ。
2.根據權利要求1的應用，各洗脫部位能夠用于抑制血管平滑肌細胞的增生和防治擴張成形術后再狹窄相關疾病的新用途，其特征在于:抑制血管平滑肌細胞的增殖，防治血管球囊損傷其官腔變小，對術后血管再狹窄相關疾病起到預防和治療作用。
3.根據權利要求2的應用，丹參與三七50%、80%、95%洗脫部位在150mg/kg劑量時，對大鼠球囊損傷再狹窄治療效果最佳。
4.根據權利要求2、3的應用，丹參與三七50%、80%、95%洗脫部位兩兩組合，三者組合具有抑制平滑肌細胞增生的作用，治療預防血管術后再狹窄的作用。
5.根據權利要求1-4的應用，人參皂苷Rgl，人參皂苷Rbl，丹參酮IIA為各洗脫部位的有效單體成分，單獨使用各單體及其兩兩組合，三者組合具有抑制平滑肌細胞增生，治療預防血管術后再狹窄的作用。
6.根據權利要求1、5所述的制劑，活性成分為人參皂苷Rgl、人參皂苷Rbl、丹參酮IIA，其中丹參酮I I A可用其磺酸鈉鹽等易容鹽類代替。
7.根據權利要求2-4的應用，含有有效劑量的三七與丹參提取物的組分及其組合可以和一種或多種符合藥典規定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑。
8.根據權利要求1、5的應用，含有有效單體及其組合可以和一種或多種符合藥典規定的其它藥用成分及藥用賦形劑制成制劑。
9.根據權利要求7、8的應用，其藥物成分可用包括含有1%-99%的洗脫部位及其組合，有效單體及其組合和99% -1 %的藥用賦形劑及其它可用組方的藥物制成口服及其他劑型。
10.根據權利要求9所述的口服及其他劑型包括:片劑，丸劑，膠囊劑，軟膠囊劑，顆粒齊U，滴丸，緩釋制劑，控釋制劑，注射劑及其他適宜的劑型。
全文摘要
丹參與三七不同提取部位及其組合抑制平滑肌細胞增生和防治冠狀動脈術后再狹窄的用途。本發明涉及三七與丹參的提取工藝、提取物不同洗脫部位及其組合在抑制血管平滑肌細胞增生和防治冠狀動脈擴張形成術后再狹窄的用途。實驗證明丹參三七提取物中50％、95％、50％+95％組合、50％+80％+95％組合可以有效抑制血管平滑肌的增生，防治球囊損傷術后血管內膜的增厚；其中50％+95％組合、50％+80％+95％組合抑制血管平滑肌的增生，防治球囊損傷術后血管內膜的增厚優于各部位單獨給藥。
文檔編號A61K36/537GK103191187SQ20121000292
公開日2013年7月10日 申請日期2012年1月6日 優先權日2012年1月6日
發明者王升啟, 王云飛, 潘從澤, 苗雨瑞, 洪婷, 鄭冰清 申請人:中國人民解放軍軍事醫學科學院放射與輻射醫學研究所