專利名稱：一種紫杉醇靜脈注射脂肪乳的制備及應用的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥領域，涉及以海豹油為基質的紫杉醇靜脈注射脂肪乳的制備。主要涉及該脂肪乳對藥物的增溶作用、穩定性及抗腫瘤方面的應用。
背景技術：
長期以來，脂肪乳主要以營養型脂肪乳的形式應用于臨床，因該乳劑具有體積小、 能量高、靜脈刺激性小、可外周靜脈給藥等優點，越來越多的注意力投向了選擇靜脈乳作為一種新的藥物載體，即把藥物包裹于內相或界面層中。與其他微粒型載體相比，靜脈乳的優點在于將藥物包裹于內相或界面層中，包封率高，提高藥物穩定性并降低藥物刺激性和毒性；載藥量高；具有緩釋和靶向作用；己具備進行大規模生產的條件和技術，更易于實現產品化；有長期臨床應用經驗；無需苛刻的儲運條件，使用方便。另外，脂肪乳能夠提供熱能和必需脂肪酸，可以完全被機體代謝與利用。所以將脂肪乳作為藥物載體，使患者在應用藥物的同時，也能補充一定的能量和營養。海豹油是近些年來備受人們關注的富含ω-3不飽和脂肪酸的動物油，被用于人體保健與免疫調節。其富含高比例的ω-3不飽和脂肪酸，EPA、DPA和DHA。而且海豹油可以作為難溶藥物的良好溶媒。基于其以上特點，我們考慮選用海豹油作為制備脂肪乳的油相，以期得到良好效果。紫杉醇首先在1992年被美國食品藥品管理局(FDA)批準上市，用于卵巢癌的治療。1994年批準治療乳腺癌。目前已經將該藥列為多種腫瘤的一線藥物,用于治療非小細胞肺癌，食管癌、肝癌、前列腺癌、頭頸部鱗癌等。但紫杉醇水溶性極差，為了增加其溶解性， 目前國內外商品化的紫杉醇制劑均采用同一配方，即在紫杉醇乙醇，即將紫杉醇溶于聚氧乙烯蓖麻油(cremophor EL)與無水乙醇(50 50, v/v)的油溶液中。但這類紫杉醇制劑自身存在諸多缺陷，主要表現在聚氧乙烯蓖麻油引起的嚴重不良反應，如過敏性休克、支氣管痙攣等；另外，聚氧乙烯蓖麻油可溶解PVC輸液器中的二乙烯己基鄰苯二甲酸鹽，引起毒性反應，影響傳統紫杉類藥物的臨床安全應用。

發明內容
本發明的目的是，提供載有紫杉醇的靜脈注射脂肪乳的制備方法。本發明還包括用所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳藥物緩釋系統，其中紫衫醇含量為 O. 02% -12% (W/V)，其余為靜脈注射脂肪乳。本發明的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，各組分組成如下油相5% -30%，乳化劑 O. 5% -7.5%，甘油1.5% -3.5%，pH調節劑O. 1%，紫杉醇O. 02% _12%，其余為注射用水，其中的百分比均為質量百分比。其中油相為富含ω-3不飽和脂肪酸的海洋生物脂肪，乳化劑選自聚氧乙烯40氫化蓖麻油(HC0-40)、卵磷脂、大豆磷脂、吐溫80或普朗尼克F68中的一種或多種，pH調節劑選自氫氧化鈉或鹽酸。
其中所述的富含ω-3不飽和脂肪酸的海洋生物脂肪為海豹油或深海魚油中的一種。優選的本發明所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，各組分的組成為海豹油或深海魚油5%-30%，乳化劑0. 5%-7. 5%，甘油1. 5%-3. 5%，pH調節劑為O. I %氫氧化鈉或鹽酸溶液，紫杉醇0. 02% -12%，其余為注射用水。特別優選的配方組成為紫杉醇O. 02% -12%海豹油或深海魚油5% -30%HC0-400. 5% -7. 5%甘油imO. 1%氫氧化鈉調pH至8. 5其余為注射用水最優選的配方組成為紫杉醇O. Olg海豹油中I. OgHC0-400. 25g甘油O. 20g注射用水IOmlO. I %氫氧化鈉調pH至8. 5本發明的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其粒徑在180-250nm，PI在O. 15-0. 25之間， Zeta 電位在-30mV—50mV, Ke < O. 5，pH 值在 7-8。本發明的紫杉醇靜脈注射脂肪乳制備方法稱取處方量紫杉醇溶于適量海豹油中，作為油相；稱量適量乳化劑與甘油于一定量注射用水(O. I %氫氧化鈉調pH至8. 5)中混合均勻，作為水相；再將油相緩慢滴加與水相中，經磁力攪拌形成初乳化液，高壓乳勻 800-1200bar的壓力下循環5次，即得到紫杉醇靜脈注射脂肪乳。本發明提供了一種不含助溶劑聚氧乙烯蓖麻油紫杉醇制劑，解決了臨床應中聚氧乙烯蓖麻油帶來的嚴重不良反應等一系列應用限制，增強患者的順應性。本發明經過配方的篩選，選擇將紫杉醇包裹于以海豹油為油相的脂肪乳中，同時加入HC0-40，解決了脂肪乳常見的穩定性低的問題，經檢測其質量外觀均一，穩定性高，制備方法簡單，所制得的紫杉醇脂肪乳具有明顯的抗腫瘤作用。根據一般脂肪乳劑特點，本發明的紫杉醇脂肪乳劑還具有緩釋、靶向、為機體提供能量和營養等作用。以下通過實驗數據來說明本發明的有益結果(以實施例I為代表進行實驗):I、紫杉醇靜脈注射脂肪乳的穩定性本發明屬于注射用納米乳劑，屬于熱力學不穩定體系，分散相易于合并破壞。乳劑的質量與乳劑的物理化學穩定性關系密切，研究乳劑的穩定性是提高其質量的重要環節。 本發明通過監測其在高溫、光照條件下以及加速試驗和長期試驗的物理化學穩定性來評定。結果參見附圖3，4，5，說明制備的紫杉醇脂肪乳穩定性良好，且低溫貯存更有利。2、紫杉醇靜脈注射脂肪乳的體外釋放度載有紫杉醇的脂肪乳的藥物體外釋放，通過以下方式實現制備載藥量為SOOmg/L的紫杉醇脂肪乳，精密吸取3mL于處理好的透析袋中，兩端用透析夾加緊，置于含有50mL 透析介質的廣口瓶中。將廣口瓶放入37°C空氣恒溫震蕩器中，100次/分振蕩，于lh，2h， 4h,8h,12h, 24h，36h，48h，60h取樣，并更換50mL新鮮透析介質。取出的樣品用O. 45 μ m微孔濾膜過濾后進樣，HPLC分析TAX的濃度。同時以游離藥物的釋放作對比。結果參見附圖 6。3、紫杉醇脂肪乳的體內抗腫瘤活性評價藥物療效通過以下方式實現實驗動物采用腋下接種有S180腹水瘤的昆明種雄性小鼠，體重18-22g，給藥方式尾靜脈注射，給藥劑量8mg/kg。實驗分組1紫杉醇脂肪乳組，2紫杉醇注射液組，3紫杉醇懸浮液組，4空白脂肪乳組，5生理鹽水組。各組小鼠正常飼養，從接種腫瘤后24小時開始靜脈注射上述藥物O. 2ml，于1、3、5、7天給藥，共4次。7 天后將各組荷瘤小鼠處死，解剖，取瘤，稱取瘤重，計算抑瘤率。結果見附圖7。4、紫杉醇脂肪乳對人宮頸癌Hela細胞系的體外殺傷作用評價藥物療效通過以下方式實現選用人宮頸癌Hela細胞系，接種于96孔板中，每孔5000個細胞，37°C，5% CO2孵箱中培養。實驗分為紫杉醇脂肪乳組和紫杉醇懸浮液組，每組設定五個濃度，紫杉醇含量分別為=80. 00mg/L，8. 00mg/L，8. OOXlO^mg/L, 8.00X10-2mg/L，8.00X10-3mg/L。細胞培養24h(此時單層細胞鋪滿孔底80%左右)后，加入各濃度梯度的藥物，分別培養24h，48h，72h。培養結束后各孔加入5mg/ml MTT溶液20ul， 孵育4h，棄上清，每孔加入150ulDMS0，震蕩器上充分震蕩10分鐘，使結晶充分溶解，在酶聯免疫檢測儀0D570nm(630nm校準)測量各孔的光密度值，計算細胞存活率。結果見附圖8。


附圖I描繪了紫杉醇脂肪乳的掃描電鏡圖。附圖2描繪了紫杉醇脂肪乳的透射電鏡圖。圖3描繪了室溫25°C貯存時以聚氧乙烯40氫化蓖麻油為乳化劑的紫杉醇脂肪乳 (Emulsion A)和以卵磷脂為乳化劑的紫杉醇脂肪乳(Emulsion B)的粒徑與Zeta電位變化。圖4描繪了室溫25°C貯存時以聚氧乙烯40氫化蓖麻油和卵磷脂的pH值及離心穩定常數的變化。圖5描繪了室溫25°C貯存時以聚氧乙烯40氫化蓖麻油和卵磷脂的滲透壓及紫杉
醇含量變化。圖6描繪了以聚氧乙烯40氫化蓖麻油為乳化劑的紫杉醇脂肪乳中紫杉醇的藥物體外釋放曲線。圖7描繪了以卵磷脂為乳化劑的紫杉醇脂肪乳中紫杉醇的藥物體外釋放曲線。圖8描繪了以聚氧乙烯40氫化蓖麻油為乳化劑的紫杉醇脂肪乳和以卵磷脂為乳化劑的紫杉醇脂肪乳的體內抗腫瘤效應。圖9描繪了以聚氧乙烯40氫化蓖麻油為乳化劑的紫杉醇脂肪乳和以卵磷脂為乳化劑的紫杉醇脂肪乳對人宮頸癌Hela細胞的體外殺傷作用。
具體實施方式
為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。實施例一以海豹油作為油相、聚氧乙烯40氫化蓖麻油為乳化劑的紫杉醇脂肪乳的制備精確稱取O. Ig紫杉醇溶于I. Og海豹油中，作為油相；稱量O. 25g聚氧乙烯40氫化蓖麻油(HC0-40)與O. 20g甘油于IOml注射用水(O. I %氫氧化鈉調pH至8. 5)中混合均勻，作為水相；再將油相緩慢滴加與水相中，經磁力攪拌30min形成初乳化液，高壓乳勻 800-1200bar的壓力下循環5次，即得到紫杉醇靜脈注射脂肪乳。實施例二以海豹油作為油相、卵磷脂為乳化劑的紫杉醇脂肪乳的制備精確稱取O. 02g紫杉醇溶于I. Og海豹油中，作為油相；稱量O. 25g卵磷脂與 O. 225g甘油于IOml注射用水(O. I %氫氧化鈉調pH至8. 5)中混合均勻，作為水相；再將油相緩慢滴加與水相中，經磁力攪拌30min形成初乳化液，高壓乳勻800-1200bar的壓力下循環5次，即得到紫杉醇靜脈注射脂肪乳。實施例三紫杉醇脂肪乳的微觀形態觀察取紫杉醇脂肪乳樣品溶液，用蒸餾水稀釋，取IOul置于銅網表面，下襯濾紙，自然揮干后，準備透射電鏡觀察。固定電鏡電子束電壓為80kV，移動坐標，調節放大倍數，尋找觀察粒子并拍照。見附圖I。同時將稀釋的樣品滴20ul于蓋玻片上，自然揮干后，噴金，進行掃描電鏡觀察。見附圖2。本發明通過透射電鏡可以看出，單個納米結構脂質載體為球形粒子，大小比較均一，且分布比較均勻；掃描電鏡視野中也印證了上述結果。
權利要求
1.一種紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，各組分組成如下油相5% -30%，乳化劑0. 5% -7. 5%，甘油1. 5% -3. 5%，pH調節劑O. 1%，紫杉醇O. 02% _12%，其余為注射用水。
2.權利要求I所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，其中油相為富含ω-3不飽和脂肪酸的海洋生物脂肪，乳化劑選自聚氧乙烯40氫化蓖麻油、卵磷脂、大豆磷脂、吐溫 80或普朗尼克F68中的一種或多種，pH調節劑為氫氧化鈉或鹽酸。
3.權利要求2所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，所述的富含ω-3不飽和脂肪酸的海洋生物脂肪為海豹油或深海魚油中的一種。
4.權利要求3所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，各組分組成如下海豹油或深海魚油5%-30%，乳化劑0. 5%-7.5%，甘油1. 5%-3.5%，pH調節劑為O. 1%氫氧化鈉或鹽酸溶液，紫杉醇·0. 02% -12%，其余為注射用水。
5.權利要求4所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于粒徑在180-250nm，PI在·O.15-0. 25 之間，Zeta 電位在-30mV—50mV, Ke < O. 5，pH 值為 7-8。
6.權利要求4所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，各組分組成如下紫杉醇O. 02% -12%海豹油或深海魚油5% -30%HC0-400. 5% -7. 5%甘油 I. 5% -3. 5%·O.I %氫氧化鈉調pH至8. 5 其余為注射用水。
7.權利要求6所述的紫杉醇靜脈注射脂肪乳，其特征在于，各組分組成如下紫杉醇O. Olg海豹油中I. OgHC0-400. 25g甘油O. 20g注射用水IOml·O.I %氫氧化鈉調pH至8. 5。
8.權利要求I所述的靜脈注射脂肪乳的制備方法，其特征在于，步驟如下稱取處方量紫杉醇溶于5% -30%海豹油中，作為油相；稱量O. 5% -7. 5%乳化劑與1.5% -3. 5%甘油于注射用水，用氫氧化鈉調PH至8-9，混合均勻，作為水相；再將油相緩慢滴加與水相中，經磁力攪拌30min形成初乳化液，高壓乳勻800-1200bar的壓力下循環5次，即得到紫杉醇靜脈注射脂肪乳。
9.根據權利要求9的制備方法，其特征在于，步驟如下稱取紫杉醇溶于I.Og海豹油中，作為油相；稱量O. 25g HC0-40與O. 20g甘油于IOml注射用水(O. I %氫氧化鈉調pH至 ·0. 5)中混合均勻，作為水相；再將油相緩慢滴加與水相中，經磁力攪拌30min形成初乳化液，高壓乳勻800-1200bar的壓力下循環5次，即得到紫杉醇靜脈注射脂肪乳。
全文摘要
本發明涉及一種紫杉醇靜脈注射脂肪乳的制備及其應用，本發明的紫杉醇脂肪乳，包括(1)富含ω-3脂肪酸海洋生物脂肪5％-30％，(2)乳化劑0.5％-7.5％，(3)甘油1.5％-3.5％，(4)紫杉醇0.02％-12％，其余為注射用水，本發明的紫杉醇靜脈注射脂肪乳穩定性良好，具有緩釋效果，且在動物體內、體外均顯示出優越的抗腫瘤效果，避免了目前臨床應用紫杉醇制劑中聚氧乙烯蓖麻油帶來的不良反應，為紫杉醇提供了良好的載體。
文檔編號A61K31/337GK102579338SQ20121005436
公開日2012年7月18日 申請日期2012年3月2日 優先權日2012年3月2日
發明者崔國輝, 崔純瑩, 敬婷婷 申請人:首都醫科大學