專利名稱：一種中華獨尾草根提取物及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及ー種植物根莖提取物及其制備方法，具體涉及ー種具有抗氧化、抗腫瘤活性的中華獨尾草根提取物及其制備方法。
背景技術：
中華獨尾草(五rewtfr^s chinensis Fedtsch.)屬百合科獨尾草屬多年生草本植物，又名石參，石蒜苔、崖參，為中國特有品種，主要分布在西部地區(qū)，據(jù)調查，其在陜西的分布僅見于略陽縣境內西淮壩鄉(xiāng)的西淮壩村、張家山等幾個狹窄地帯，目前野生中華獨尾草已非常少見。其根肉質，柔軟，黃色或深褐色，為其食用部分，干制加工產品呈金黃色，味甘甜，氣味甘香，性溫和，具有悠久的民間食用歷史，古代曾作貢品進獻帝王。《本草綱目》記載中華獨尾草根溫補腎陽、滋陰、清肝去濕，對失眠、多夢有一定療效。研究表明，中華獨尾草含有豐富的蛋白質纖維素及微量元素，蛋白質幾乎接近于大米中的含量，并含有較多的多糖、黃酮等活性物質。目前，中華獨尾草根主要用于鮮食及簡單加工，對其進行的深入研究較少。中華獨尾草屬于中國特有資源，對其根中活性物質進行提取，井深入研究其功能活性，可拓寬中華獨尾草的應用范圍及產品類型，提高其附加值，增加收入，具有十分重要的意義和潛在的市場前景。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供一種中華獨尾草根提取物及其制備方法，其解決了背景技術中對中華獨尾草根深入研究匱乏的技術問題。本發(fā)明的技術解決方案是
ー種中華獨尾草根提取物，其特殊之處在于該提取物包括酚類及黃酮類化合物，其中酚類含量為18. 25 23. 26 mg/g、黃酮類化合物含量為16. 24 20. 15mg/g。上述提取物中酚類含量為19. 46 21. 52 mg/g、黃酮類化合物含量為17. 56 19.22mg/g0上述提取物中酚類含量為20. 52mg/g、黃酮類化合物含量為18. 13mg/g。上述提取物中酚類為大黃酚及其他酚類。ー種上述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特殊之處在于，該方法包括
1)取新鮮中華獨尾草根，去除雜物，水洗清潔干凈，在30 50°C烘干，再粉碎后過30 60目篩，得均勻的粉碎物；
2)將步驟1)所得粉碎物經體積百分比為60 80%乙醇按料液比1:5 1 :20g/ml室溫浸泡2 證，然后超聲輔助提取2 4次，每次1 池，超聲功率為50 200W，提取溫度為35 50°C，將提取液在4000rpm條件下離心15min，取上清液；
3)將步驟2)所得上清液減壓濃縮至原體積的1/5，濃縮條件為溫度40 50°C，真空度為0. 1 0. 2mbar，然后加入2 4倍體積的無水乙醇沉淀多糖，攪拌均勻，4°C靜置1 4h，在4000rpm條件下離心15min，取上清液；4)將步驟3)所得上清液在40 50°C、0.1 0. 2mbar條件下減壓濃縮至無乙醇流出， 得到乙醇提取膏狀物；
5)將步驟4)所得乙醇提取膏狀物在-45°C -20°C、0.35 0. 7mbar下真空冷凍干燥 24 72h，即得淺褐色的中華獨尾草根提取物。上述步驟2)中粉碎物經體積百分比為75%乙醇按料液比1 :8 1 :15g/ml室溫浸泡。上述步驟2)中粉碎物經體積百分比為75%乙醇按料液比1 :10g/ml室溫浸泡。上述步驟3)中加入3倍體積的無水乙醇沉淀多糖。上述步驟1)中粉碎后過40 50目篩，得均勻的粉碎物。上述步驟中超聲輔助提取的超聲功率為100W，提取溫度為40°C。本發(fā)明的優(yōu)點在干提供了一種系統(tǒng)科學的中華獨尾草根提取物的制備方法，所得中華獨尾草根提取物具有抗氧化和抗腫瘤活性，拓寬了中華獨尾草的應用范圍及產品類型，提高其附加值，增加收入，具有十分重要的意義和潛在的市場前景。


圖1中華獨尾草根提取物對ABTS自由基的清除能力； 圖2中華獨尾草根提取物對DPPH自由基的清除能力；
圖3中華獨尾草根提取物金屬螯合能力；
圖4中華獨尾草根提取物鐵還原能力；
圖5中華獨尾草根提取物對人肝癌HepG2細胞活力的影響。
具體實施例方式本發(fā)明的エ藝流程可歸納為
中華獨尾草根烘干、粉碎ヰ乙醇提取ヰ離心取上清液ヰ減壓濃縮ヰ乙醇沉淀多糖ヰ離心取上清液ヰ減壓濃縮ヰ冷凍干燥，即得提取物。具體是
1)取新鮮中華獨尾草根，挑去雜物，水洗，30 50°C烘干，粉碎后過30 60目篩，得到均勻的粉碎物；
2)將步驟1)所得粉碎物經60 80%乙醇按料液比1:5 1 :20 (g/ml)室溫浸泡 2 證，然后超聲輔助提取2 4次，每次1 池，超聲功率為50 200W，提取溫度為35 500C，提取液4000rpm離心15min，取上清液；
3)將步驟2)所得上清液減壓濃縮至原體積的1/5，濃縮條件為溫度40 50°C，真空度為0. 1 0. 2mbar，然后加入2 4倍體積的無水乙醇沉淀多糖，攪拌，4°C靜置1 4h， 4000rpm離心15min離心取上清液；
4)將步驟3)所得上清液在40 50°C、0.1 0. 2mbar條件下減壓濃縮至無乙醇流出， 得到乙醇提取膏狀物；
5)將步驟4)所得乙醇提取膏狀物在 45°C、0.35 0. 7mbar下真空冷凍干燥M 72h，即得淺褐色的中華獨尾草根提取物；
6)將步驟5)所得中華獨尾草根提取物檢測其抗氧化能力，當提取物濃度為ang/ml吋，CN 102526439 A
對ABTS自由基的清除率達97. 82%，參見圖1 ；當提取物濃度為％ig/ml時，對DPPH自由基的清除率達84. 21%，參見圖2 ；當提取物濃度為lmg/ml吋，其金屬螯合能力為79. 67%，參見圖 3 ；當提取物濃度為lmg/ml吋，其鐵還原カ為1. 13 (593nm下吸光度)，參見圖4。用DMEM1640培養(yǎng)基分別配制成0. 01,0. 1,0. 5、l、2mg/ml的溶液，MTT法測定其對人肝癌HepG2細胞活力的影響。中華獨尾草提取物可抑制人肝癌HepG2細胞的増殖并呈現(xiàn)劑量和時間依賴關系，當提取物濃度為2mg/ml，作用時間Mh吋，細胞活力僅為54. 34%，參見圖5。7)經測定，該提取物中的酚類、黃酮類化合物的含量分別為20. 52mg/g、18. 13mg/ go LC MS分析中華獨尾草提取物中化學成分包括大黃酚及其他酚類、黃酮類化合物。
權利要求
1.一種中華獨尾草根提取物，其特征在于該提取物包括酚類及黃酮類化合物，其中酚類含量為18. 25 23. 26 mg/g、黃酮類化合物含量為16. 24 20. 15mg/g。
2.根據(jù)權利要求1所述中華獨尾草根提取物，其特征在于所述提取物中酚類含量為19.46 21. 52 mg/g、黃酮類化合物含量為17. 56 19. 22mg/g。
3.根據(jù)權利要求2所述中華獨尾草根提取物，其特征在于所述提取物中酚類含量為20.52mg/g、黃酮類化合物含量為18. 13mg/g。
4.根據(jù)權利要求3所述中華獨尾草根提取物，其特征在于所述提取物中酚類為大黃酚及其他酚類。
5.一種權利要求1所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于，該方法包括1)取新鮮中華獨尾草根，去除雜物，水洗清潔干凈，在30 50°C烘干，再粉碎后過30 60目篩，得均勻的粉碎物；2)將步驟1)所得粉碎物經體積百分比為60 80%乙醇按料液比1:5 1 :20g/ml室溫浸泡2 證，然后超聲輔助提取2 4次，每次1 池，超聲功率為50 200W，提取溫度為35 50°C，將提取液在4000rpm條件下離心15min，取上清液；3)將步驟2)所得上清液減壓濃縮至原體積的1/5，濃縮條件為溫度40 50°C，真空度為0. 1 0. 2mbar，然后加入2 4倍體積的無水乙醇沉淀多糖，攪拌均勻，4°C靜置1 4h，在4000rpm條件下離心15min，取上清液；4)將步驟3)所得上清液在40 50°C、0.1 0. 2mbar條件下減壓濃縮至無乙醇流出， 得到乙醇提取膏狀物；5)將步驟4)所得乙醇提取膏狀物在-45°C -20°C、0.35 0. 7mbar下真空冷凍干燥 24 72h，即得淺褐色的中華獨尾草根提取物。
6.根據(jù)權利要求5所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于所述步驟2)中粉碎物經體積百分比為75%乙醇按料液比1 :8 1 :15g/ml室溫浸泡。
7.根據(jù)權利要求6所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于所述步驟2)中粉碎物經體積百分比為75%乙醇按料液比1 :10g/ml室溫浸泡。
8.根據(jù)權利要求5所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于所述步驟3)中加入3倍體積的無水乙醇沉淀多糖。
9.根據(jù)權利要求5所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于所述步驟1)中粉碎后過40 50目篩，得均勻的粉碎物。
10.根據(jù)權利要求5所述中華獨尾草根提取物的制備方法，其特征在于所述步驟中超聲輔助提取的超聲功率為100W，提取溫度為40°C。
全文摘要
一種中華獨尾草根提取物，包括酚類及黃酮類化合物，其中酚類含量為18.25～23.26mg/g、黃酮類化合物含量為16.24～20.15mg/g。一種中華獨尾草根提取物本制備方法為中華獨尾草根烘干、粉碎→乙醇提取→離心取上清液→減壓濃縮→乙醇沉淀多糖→離心取上清液→減壓濃縮→冷凍干燥，即得提取物。本發(fā)明提供了一種系統(tǒng)科學的中華獨尾草根提取物的制備方法，所得中華獨尾草根提取物具有抗氧化和抗腫瘤活性，拓寬了中華獨尾草的應用范圍及產品類型，提高其附加值，增加收入，具有十分重要的意義和潛在的市場前景。
文檔編號A61K125/00GK102526439SQ20121005470
公開日2012年7月4日 申請日期2012年3月5日 優(yōu)先權日2012年3月5日
發(fā)明者劉學波, 肖海芳 申請人:西北農林科技大學