專利名稱：一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳及其制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于獸藥領域，涉及一種可以用于畜禽因厭氧菌感染引起的腸炎的藥物，具體涉及一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳及其制備方法。
背景技術：
厭氧菌是廣泛存在于自然界的其代謝過程不需要氧參與既能生長和繁殖的一類微生物菌群。主要包括革蘭氏陰性桿菌、革蘭氏陽性球菌、革蘭氏陰性球菌等。厭氧菌是機體腸道內主要菌群，可占所有細菌總數(shù)的99%以上，正常情況下，由于受到不同菌群之間的相互制約和腸道環(huán)境的影響，一般和機體處于互利共生狀態(tài)，機體不會發(fā)病，但當機體免疫力低下或腸道環(huán)境改變時，厭氧菌便會伺機大量繁殖，造成細菌性腸炎而對健康造成威脅。當畜禽發(fā)生厭氧菌感染而引起腸炎時，動物表現(xiàn)食欲降低或廢除，拉惡臭糞便，有 時糞便中帶血，動物表現(xiàn)消瘦，喜臥伏，不愿走動，精神萎靡，常常脫離群體。本病若不及時治療，病情容易加重，最后因脫水而死亡。同時，由于腸壁粘膜被破壞，病原菌可伺機經腸壁進入血液，引起菌血癥和敗血癥而加速動物死亡。有些病原菌具有產氣特征，比如產氣莢膜梭菌等，這些細菌產出的氣體在正常情況下可由腸道有節(jié)律的蠕動而排除，但當腸道發(fā)生炎癥時，一方面腸道螺動規(guī)律被破壞，造成氣體排出障礙，另一方面由于病原菌的大量繁殖，產出的總氣體量比正常狀況下大大增加，最終會使動物出現(xiàn)腸鼓氣而死亡。本病具有一定的傳染性，主要經消化道傳染，養(yǎng)殖過程中，一旦發(fā)現(xiàn)有動物有拉稀的癥狀，立即將其隔離觀察，對糞便進行清理，對環(huán)境進行徹底消毒，杜絕隱患。對發(fā)病動物進行有針對性治療，目前常用的有微生態(tài)療法和藥物療法。微生態(tài)療法是利用微生物菌群間的排他性，利用益生菌的優(yōu)勢而抑制病原菌的繁殖，但本方法目前技術還不成熟，尤其是動物的十二指腸和空腸前段，腸液環(huán)境很難適合微生物生長，一般口服微生態(tài)制劑在到達此段時，益生菌會大量死亡，很難有效到達患部腸段；藥物療法是目前養(yǎng)殖業(yè)的主要療法，主要是使用抗生素，雖然有效，但引起了很多社會問題和食品安全問題。過多的使用抗生素不但會使養(yǎng)殖成本上升，同時還會對耐藥性菌群進行選擇，久而久之，菌群的耐藥性逐漸增強，病愈發(fā)難治。由于我國的制度目前還不完善，有相當一部分養(yǎng)殖場盲目追求利益，不遵循藥物休藥期，使藥物通過肉、蛋、奶等食品進入人體，對人體健康造成威脅，我國的肉類食品也多次因抗生素殘留超標而影響出口，造成了一系列社會問題。目前治療畜禽厭氧菌感染性腸炎的藥物劑型以原粉、散劑和注射劑為主，但原粉和散劑在拌料時因用量少容易出現(xiàn)攪拌不均勻現(xiàn)象，有些原粉在飲水給藥時藥物溶解度低或溶解慢，造成畜禽用藥量不足或堵塞引水管等情況。注射給藥費時費力，動物應激大，不利于大群操作，在治療消化道腸炎方面不如口服療效快。因此，有必要研發(fā)一種藥物新劑型來代替?zhèn)鹘y(tǒng)劑型，改進原有劑型的不足，滿足市場需求。

發(fā)明內容
本發(fā)明針對上述問題和現(xiàn)有技術的缺陷，提供一種生物利用度好，穩(wěn)定性高的用于畜禽腸道厭氧菌感染引起的腸炎的治療的納米乳劑。實驗證明該納米乳安全、無副作用且療效顯著。實現(xiàn)上述發(fā)明目的的技術方案是該用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳，由下列質量百分比的原料組成
沉香油O. 1% 8. 0%
香芹酚O. 1% 7. 0%
甲硝唑O. 01% O. 7%
表面活性劑19. 0% 35. 0%
助表面活性劑O 5. 0%
余量為蒸餾水
上述原料的質量百分比之和為100% ；
在表面活性劑的選擇上，本發(fā)明選用無毒性和生物相容性好的非離子型表面活性劑。非離子型表面活性劑在溶液中比較穩(wěn)定，不易受強電解質、無機鹽類的影響，也不易受酸堿的影響，并且與其他表面活性劑的相容性好，溶血作用較小。理論上，0/W型納米乳狀液的制備需要表面活性劑的HLB值介于8 18之間，考慮到制備工藝的簡單性，即納米乳的易形成性和制備出來的納米乳的穩(wěn)定性，本發(fā)明選用HLB介于10 15之間的液態(tài)非離子型表面活性劑。本發(fā)明選擇吐溫-80、聚氧乙烯醚蓖麻油(EL-40)和聚氧乙烯(40)氫化蓖麻油(RH-40)三種。本發(fā)明以沉香油、香芹酚和甲硝唑作為組合，是因為沉香油主要成分為石竹烯氧化物、桉油醇等萜類化合物，這些化合物為沉香揮發(fā)油的主要成分，其含量高低直接與藥效相關，具有行氣止痛、溫中止嘔、納氣平喘等功效，可治療脘腹脹痛、嘔吐呃逆等，對胃腸道具有調理和保健作用；香芹酚具有高效的殺菌活性，可作用于細菌細胞壁結構蛋白，使其變性和凝固，迅速穿透病原微生物細胞膜，使細胞內容物流失，破壞細胞內關鍵代謝過程最終使病原菌死亡；甲硝唑為硝基咪唑類抗菌藥物，其所含的硝基在無氧環(huán)境中可還原成氨基而顯示抗厭氧菌作用，其抗菌譜包括擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、產氣芽孢桿菌、消化球菌屬、真桿菌和糞鏈球菌等，具有理想的治療效果；上述藥物組合后，無配伍禁忌，療效增強。本發(fā)明的助表面活性劑不是本納米乳液形成的必要條件，在助表面活性劑為零的情況下也可以形成一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳。本發(fā)明經透射電子顯微鏡檢測，液滴直徑分布在I IOOnm之間，外觀為無色或淡黃色的透明液體，具有較好的穩(wěn)定性
I、經時穩(wěn)定性
本發(fā)明的納米乳在室溫自然變化條件下儲藏3個月后，經檢驗外觀持久澄清透明，未發(fā)現(xiàn)渾濁、分層、藥物析出等破乳情況，說明經時穩(wěn)定性良好。2、熱貯穩(wěn)定性
將本納米乳分裝于幾個玻璃瓶中，密封之后置于50°C恒溫箱中貯存15d，每隔5d取樣觀察。結果表明，該納米乳熱貯后檢驗外觀仍保持澄清透明的外觀，未發(fā)現(xiàn)渾濁、分層、藥物析出等破乳情況，說明熱貯穩(wěn)定性良好。3、抗冷凍穩(wěn)定性
將本納米乳在冰箱中-10°c保存一周后。恢復至室溫。該納米乳會由固態(tài)融化為液態(tài)，經稀釋檢驗后外觀仍澄清透明，放置一周后繼續(xù)檢驗，未發(fā)現(xiàn)渾濁、分層、藥物析出等破乳情況，表明抗冷凍性良好。4、加速穩(wěn)定性
將本納米乳置于試管，密封，在15000r/min的轉速下離心20分鐘，經稀釋檢驗后外觀仍澄清透明，未發(fā)現(xiàn)渾濁、分層、藥物析出等破乳情況。5、光穩(wěn)定性實驗
將部分該納米乳裝于玻璃瓶中，密封置于日光下，室溫光照10d，于ld、3d、5d、10d分別取樣。經稀釋檢驗表明該納米乳液保持澄清透明，無渾濁、分層、藥物析出等破乳情況，表明光穩(wěn)定性良好。本發(fā)明的一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳具有治療因腸道厭氧菌感 染而引起的腸炎的功效。用法口服或飲水。本發(fā)明的一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳與現(xiàn)有技術相比，具有以下優(yōu)點
1)水溶性好。可以在水中無限稀釋而不會破乳，使用時溶解均勻，不堵塞管道，動物用藥量整齊；
2)熱力學穩(wěn)定性高。本納米乳組合物在一10°C和50°C之間儲存不分相、不沉淀，不渾池，儲存時間長，穩(wěn)定性提聞；
3)生物利用度高。該納米乳乳滴粒徑在fIOOnm之間，很容易通過細胞膜而進入病原菌菌體內而發(fā)揮療效；與普通劑型相比，降低了藥物用量，大大縮短了休藥期，藥物無殘留或殘留量少；
4)提高了甲硝唑在水中的溶解度；
5)方法工藝簡單，適合規(guī)模化生產。
具體實施例方式以下通過藥物安全性試驗和藥效對比試驗來進一步闡述本發(fā)明所述藥物的安全性和有益效果。試驗例I 本發(fā)明的納米乳藥物安全性試驗
本實驗采用改良寇氏法測動物的LD5tl，實驗動物為I月齡蛋雛雞，實驗期限為兩周。將70只一月齡健康蛋雛雞隨機分為7組，每組10只，其中第一組為實驗對照組，第二組為本發(fā)明的納米乳原液組、第三組為O. 6倍稀釋的納米乳原液，依次類推，每一組藥液的濃度為前一組濃度的O. 6倍(即本急性毒性實驗設計的組距為O. 6)。將各組動物分別稱重，各組分別按照10g/kg體重的劑量灌服相對應的納米乳液，對照組灌服等量的生理鹽水，施藥后各組動物飼養(yǎng)于同一環(huán)境下14天，期間觀察動物的精神狀態(tài)、飲食狀況和活動情況等，實驗結束后將未死亡的動物處死，觀察各個器官病變情況，并記錄。結果表明各組雞群活動情況和健康狀態(tài)均正常，剖檢后各臟器也無異常病變，各組之間無差異，LD5tl > 10g/kg體重，屬實際無毒范圍，該結果表明本發(fā)明納米乳液安全性良好。試驗例2本發(fā)明的納米乳與甲硝唑治療家兔梭菌性腹瀉效果對比試驗梭菌性腹瀉是家兔常見胃腸道傳染病，病原體為產氣莢膜梭菌，本病在天氣突變時多發(fā)，發(fā)病兔群多為4月齡以下的幼兔，癥狀主要表現(xiàn)為精神萎靡、食欲不振、糞便稀軟變形或呈膠凍狀，有時帶血，若不及時治療患兔腸道內病原菌將大量繁殖，不斷產氣造成腹部膨大，敲擊有鼓音，體重銳減，吹毛眼觀皮膚呈黑紫色，進入此期一般很難治療。選取臨診上自然發(fā)病梭菌性腹瀉初期的患兔18只，體重在I.擴2. Ikg之間，將其隨機分為對照組、甲硝唑組和本納米乳組3組，每組6只。對照組每只灌服生理鹽水10ml，甲硝唑組每只口服甲硝唑50mg、本納米乳組灌服IOg本納米乳液(載藥量為O. 5%)，每日一次，連續(xù)用藥3天，期間觀察患兔飲食、活動和死亡情況，并作記錄。療效判斷標準
無效患兔腹部膨大、體重銳減、食欲未改善、癥狀加重或死亡；
顯效患兔食欲改善、糞便成形、精神良好、行為恢復；
治愈患兔糞便成形，行為表現(xiàn)、飲食狀況和活動情況和健康兔無差別；
總有效率=顯效率+治愈率
表1本納米乳與甲硝唑治療家兔梭菌性腹瀉效果對比試驗
權利要求
1.一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳，其特征在于，由下列質量百分比的原料組成 沉香油O. 1% 8. 0%、香芹酚O. 1% 7. 0%、甲硝唑O. 01% O. 7%、表面活性劑19. 0% 35. 0%、助表面活性劑O 5. 0%、余量為蒸餾水，上述原料的質量百分比之和為100% ； 所述的表面活性劑是非離子表面活性劑吐溫-80、聚氧乙烯醚蓖麻油和聚氧乙烯40氫化蓖麻油中的一種或幾種混合物； 所述的助表面活性劑是無水乙醇和1，2-丙二醇中的任意一種。
2.根據權利要求I所述的一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳，其特征在于，該納米乳的粒徑在I IOOnm之間。
3.根據權利要求I所述的一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳制備方法，其特征在于，包括以下步驟 1)按配方準確稱取沉香油、香芹酚、甲硝唑、表面活性劑、助表面活性劑和蒸餾水，備用； 2)將所述量的甲硝唑溶于所述量的香芹酚中，并加入所述量的沉香油，攪拌均勻后作為油相； 3)將所述量的表面活性劑和助表面活性劑加入到步驟2)制備的油相中，快速攪拌均勻； 4)將蒸餾水作為水相慢慢加入到步驟3)制備的混合物中，邊加邊攪拌，該體系會出現(xiàn)由稀變粘稠再由粘稠變稀的過程，最終體系澄清透明即得。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用于治療畜禽腸道厭氧菌感染的納米乳，由下列質量百分比的原料組成沉香油0.1%～8.0%、香芹酚0.1%～7.0%、甲硝唑0.01%～0.7%、表面活性劑19.0%～35.0%、助表面活性劑0～5.0%、余量為蒸餾水，上述原料的質量百分比之和為100%。本發(fā)明對大多數(shù)專性厭氧菌具有較強的抑制和殺滅作用，主要用于治療畜禽因厭氧菌感染引起的腸炎的治療，包括擬桿菌屬、梭狀芽孢桿菌屬、產氣芽孢桿菌、消化球菌屬、真桿菌和糞鏈球菌等。本發(fā)明的藥物生物利用度高，抗菌作用明顯，療效顯著，在獸藥領域有廣闊的市場前景。
文檔編號A61K31/05GK102631474SQ20121013440
公開日2012年8月15日 申請日期2012年5月4日 優(yōu)先權日2012年5月4日
發(fā)明者歐陽五慶, 沈巧艷, 郭建軍 申請人:西北農林科技大學