專利名稱：一種內包裹免疫毒素外連接抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物醫藥領域，更具體地，本發明公開了一種內包裹毒素外連接抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)納米顆粒、其制備方法及用途。
背景技術：
免疫毒素是由抗體或抗體片段和蛋白毒素(如綠膿桿菌外毒素PE)進行化學交聯或基因融合而形成的復合物。目前，PE構建的免疫毒素是把除去細胞結合 部分的PE和抗體片段進行基因融合而形成的。盡管PE構建的免疫毒素在腫瘤的臨床治療中取得了令人矚目的成就，然而，其臨床應用仍然受限于免疫毒素的嚴重的非特異毒性，這些非特異毒性主要表現為肝毒性-由于免疫毒素和正常組織非特異性結合造成的一種非特異毒性，PE構建的免疫毒素中的毒素部分在非特異毒性中起著重要的作用。最近人們發現，一些方法(如降低免疫毒素的等電點)可以用作來降低免疫毒素的非特異毒性。此外，針對PE構建的免疫毒素中的毒素部分的免疫反應是治療固體腫瘤的主要障礙，克服免疫毒素的免疫原性的方法一般為聯合使用免疫抑制劑(CTLA4Ig或Rituximab)。如果能減小免疫毒素的免疫原性和非特異毒性，我們便可以加大免疫毒素的臨床使用劑量，從而得到更好的臨床效果。但是，除了聚乙二醇修飾免疫毒素以外，目前很少有同時可以解決這兩個問題的方法。

發明內容
本發明的發明人經過大量實驗，將通常應用于包裹小分子藥物、減少這些藥物毒副作用的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)來包裹PE毒素，這里優選PE38KDEL的I型突變體PE38KDEL I，為了增加其靶向性，本發明的發明人在包裹了 PE38KDEL I的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)表面通過碳化二亞胺技術連接人源化SM5-1單克隆抗體的Fab’片段，得到了一種內包裹PE38KDEL I型突變體，外連接人源化SM5-1抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒。本發明的發明人利用本發明得到的內包裹PE38KDEL I型突變體外連接人源化SM5-1抗體Fab’片段的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒(以下簡稱PE-NP-S)進行了一系列的實驗，實驗結果表明PE-NP-S顯示出更好的抗腫瘤活性，而且具有更小的非特異毒性和免疫原性，對抗PE中和性抗體的敏感度更低，達到了本發明的目的。本發明的發明人還公開了制備上述納米顆粒的方法，包括首先制備包裹免疫毒素的納米顆粒，然后在納米顆粒表面連接抗體兩個步驟。類似地，利用本發明公開的方法，還可以連接其它完整抗體或其它人源化抗體片段(例如Fab’片段或F(ab’ )2)得到外部連接上述抗體或片段的包裹了 PE38KDEL I型突變體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒，這些完整抗體或人源化抗體片段可為被腫瘤細胞內吞的抗體或其片段，如重組人源化抗J1ER2單克隆抗體(rhuMAbHER2)和重組人源化抗CD22單克隆抗體。
相應地，利用本發明公開的方法，還可以利用聚乳酸-羥基乙酸共聚物包裹其他類型的毒素然后再在其外部連接上述的抗體或抗體片段得到各種納米顆粒，這些毒素可以為篤麻毒素和白喉毒素之一。本發明公開的納米顆粒可以和其它藥學上可接受的輔料一起組成藥物制劑。這些藥物制劑可以用于治療腫瘤。腫瘤可以是SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤，或者是HER2、CD22表達陽性的腫瘤。所述的治療SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤藥物，包括但不限于緩解或/和減輕SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤的各種癥狀的藥物。這里所述的SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤包括肝癌、乳腺癌及黑色素瘤等，優選肝癌。更具體地，本發明公開了 I. 一種內包裹免疫毒素外連接抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒。2.如I所述的納米顆粒，其中免疫毒素為篦麻毒素、白喉毒素、PE38KDEL I型突變體之一，抗體為人源化抗體或人源化抗體的Fab’片段。3.如2所述的納米顆粒為內包裹PE38KDEL I型突變體外連接人源化SM5-1抗體Fab’片段的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒。4.如3所述的納米顆粒，其粒徑為70 140nm，包裹效率為35 45%，抗體連接效率為15 25 ii g/mg納米顆粒。5. 一種制備如I至4任一所述的納米顆粒的方法，包括首先制備包裹免疫毒素的納米顆粒，然后在納米顆粒表面連接抗體兩個步驟。6.如5所述的方法，其中制備包裹免疫毒素的納米顆粒步驟包括a)將免疫毒素溶解到水性溶液中然后和聚乳酸-羥基乙酸共聚物一起加入到油性溶劑，超聲得到油包水的初乳；b)利用a)得到的初乳制備復乳；c)復乳再加入到聚乙烯醇溶液中后，攪拌使有機溶劑揮發，溶液經過離心、水洗，低溫凍干即制得成品納米顆粒。7.如6所述的方法，其中步驟a)中的水性溶液為PBS，油性溶劑為乙酸乙酯。8.如6所述的方法，其中步驟a)還包括在溶解了免疫毒素的水性溶液中加入海藻糖。9.如5的方法，其中在納米顆粒表面連接抗體步驟包括將包裹免疫毒素的納米顆粒和EDC、NHS在避光的條件下共同孵育，然后將溶于HEPES (pH 7. 4)的抗體或抗體片段加入到沉淀的納米球中避光反應而得。10.如1-4任一所述的納米顆粒在制備治療腫瘤藥物中的用途。11.如10所述的用途，其中腫瘤為SM5-1結合蛋白抗原或Her2表達陽性的腫瘤。12.如11所述的用途，其中SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤為乳腺癌、黑色素瘤和肝癌。13.如12所述的用途，其中SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤為肝癌。在本發明中，如沒有特別說明，PE-NP-S指的是本發明公開的內包裹PE38KDEL I型突變體外連接人源化SM5-1 Fab’片段的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒，Mut-I為SM5-1單鏈抗體和PE38KDEL I突變體進行基因融合后的免疫毒素(以下如果沒有特別說明，PE38KDEL I均指PE38KDEL I突變體，各附圖中也均同)，PE-NP為包裹PE38KDEL I的PLGA 納米顆粒，FITC-PE-NP-S 為 FITC 標記的 PE-NP-S，PE-NP-CD25 為連接 anti_CD25 的Fab’片段的PE-NP。NP-S為不含免疫毒素的PLGA納米顆粒(NP)連接上SM5-1的Fab’片段。


圖I :PE-NP-S納米顆粒的形態學和粒徑分布圖，其中圖1-1 =PE-NP-S投射電鏡(TEM)的形態學照片，分辨率為0.2微米，圖1-2 =PE-NP-S通過粒徑儀測定的粒徑分布圖。圖2 :競爭結合實驗結果，其中IX 105Ch_h印-3細胞和亞飽和濃度的FITC標記的鼠源SM5-1 (mSM5-l)、逐漸增高濃度的Mut-I、CD25-PE38KDEL或納米顆粒在4°C孵育I小時，細胞洗滌后用流式進行分析。最大熒光強度定義為在沒有競爭抗體時，FITC標記的鼠源SM5-1對Ch-hep-3細胞進行染色得到的平均熒光強度。所有數據為三次獨立實驗的平均值。
圖3 =FITC-PE-NP-S結合并被Ch_h印_3細胞內吞的過程分析，Ch-hep-3細胞在下列時間被染色0，I和30分鐘。圖3-1 :Ch-h印-3細胞，孵育時間為I分鐘，圖3-2 Ch-hep-3細胞，孵育時間為30分鐘，圖3-3 QGY7701細胞，孵育時間為30min，其中圖3_1_1為相差，圖3-1-2為FITC的綠熒光，圖3-1-3為4'，6 二脒基-2-苯吲哚鹽酸(對細胞核進行染色)的藍熒光，圖 3-1-4 為重疊圖象，圖 3-2-1，3-2-2，3-2-3，3-2-4 及 3-3-1，3-3-2，3-3-3，3-3-4均同，分辨率為lOiim。圖4 :抗PE抗體測定結果，圖4-1 :鼠對PE38KDEL I的IgG反應，5組小鼠在箭頭所指的時間分別免疫了 lmg/kg 的 PE-NP-S，PE-NP, PE-NP-CD25，Mut_I，和 PE38KDEL I，血清中抗PE IgG水平在第21天被檢測；對照組免疫PBS ;*，P < 0. 05 ;圖4-2 :抗PE中和性
測定結果。圖5 :] 此-1和？￡-冊-5對841^/(3裸鼠的抗腫瘤效應，5\106 Ch_h印_3細胞在第O天皮下注射到小鼠中，一旦腫瘤長到了 50mm3，在第5，7和9天(箭頭所指)，小鼠接受每天兩次的靜脈治療，每組6只小鼠。數據顯示為平均腫瘤體積土標準差(n = 6)。圖5有八個治療組，分別為 PBS、PE38KDEL I (5mg/kg) ,PE-NP (5mg/kg,按包裹的 PE38KDEL I 計算)+SM5-1Fab’ (按實際抗體連接效率與毒素包裹效率折算，抗體量與5mg/kg劑量的PE-NP-⑶25上連接的抗體等量)、PE-NP-CD25 (5mg/kg,包裹的PE38KDEL I的并連接anti_CD25單抗Fab’片段的PLGA納米顆粒，按包裹的PE38KDEL I計算)、PE-NP-S (0. 5mg/kg,包裹PE38KDEL I并連接SM5-lFab’片段的PLGA納米顆粒，按包裹的PE38KDEL I計算),PE-NP-S (2. 5mg/kg,按包裹的 PE38KDEL I 計算)、Mut-I (0. 5mg/kg)、Mut-I (5mg/kg)。
具體實施例方式以下實施例、實驗例僅僅對本發明進行進一步的說明，不應理解為對本發明的限制。PE38KDEL I 的制備、純化和分析方法見(Wang H, Song S, Kou G, et al. Treatmentof hepatocellular carcinoma in a mouse xenograft model with an immunotoxinwhich is engineered to eliminate vascular leak syndrome. Cancer ImmunolImmunother 2007 ；56(11) 1775-1783. Song S，Xue J，Fan K，et al. Preparationand characterization of fusion protein truncated Pseudomonas ExotoxinA(PE38KDEL-I) in Escherichia coli. Protein Expr Purif 2005 ；44 :52-7.);人源化SM5-1 單克隆抗體通過Li B,Wang H, Zhang D，et al. Construction and characterizationof a high-affinity humanized SM5—1 monoclonal antibody. Biochem Biophys ResCommun 2007 ；357(4) :951-6中提供的方法，用Protein A柱對表達人源化SM5-1單克隆抗體的CHO細胞(中國倉鼠卵巢癌細胞)的細胞上清進行親和層析后得到；另外，除非特別提及，本文中的SM5-1指人源化SM5-1，人源化SM5-1單克隆抗體和人源化anti_CD25單克隆抗體的Fab’片段的方法制備得參見Martin FJ, Hubb ell WL, PapahadjopoulosD. Immunospecific targeting of liposomes to cells a novel and efficient methodfor covalent attachment of Fab’ fragments via disulfide bonds. Biochemistry1981 ；20 :4229-38.;三株肝癌細胞株Ch-hep-1，Ch-hep-3和QGY7701公開資料參見Preparation and Characterization of Paclitaxel-Ioaded PlGA Nanoparticles Coatedwith Cationic SM5—1 Single-chain Antibody,Journal of Biochemistry and MolecularBiology，Vo. 40，No. 5，September 2007，page 731-739 ;PLGA(乳酸和乙醇胺的摩爾比為50 : 50，RG503，分子量為 40 75kDa)購買自德國 Boehringer Ingelheim 公司；Mut_I 的制備方法參見Wang H，Song S，Kou G，et al. Treatment of hepatocellular carcinomain a mouse xenograft model with an immunotoxin which is engineered to eliminatevascular leak syndrome. Cancer Immunol Immunother 2007 ；56 (11) :1775-1783 ;其余化學試劑均購自sigma，為分析級純度。實施例I :包裹PE38KDEL I的納米顆粒PE-NP的制備PE38KDEL I按2mg/ml的濃度溶于PBS(pH 7. 4)，稱取15毫克的海藻糖加入150 u I上述蛋白溶液，顛倒混勻至完全溶解后，再和40毫克的PLGA共同加入到I. 5毫升的乙酸乙酯中，在冰浴中超聲15秒(功率為14瓦)(Branson Sonicator_ 450)得到初乳。然后，2毫升的聚乙烯醇(分子量25-35kDa)，水溶液(質量體積比為1% )加入到制備得到的初乳(油包水)中，再超聲15秒(功率為14瓦)得到復乳水(油包水)。得到的復乳再加入到50毫升的聚乙烯醇(分子量25-35kDa)水溶液中(質量體積比為0. 3% )。最終的溶液再攪拌8小時使有機溶劑揮發，最后制得的納米顆粒經過離心(30000gX30min)，水洗三次后，再低溫凍干(凍干過程樣品分裝至凍干瓶中，2 5ml/瓶，在-20°C條件下預凍4小時，置凍干機內，層板溫度設定為-40°C，待樣品溫度至_30°C以后，開啟真空泵，凍干24小時，無菌條件下釋放真空，并取出樣品)即制得成品納米顆粒PE-NP。空納米顆粒NP的制備也是按照上述方法制備(不含2mg/kg的PE38KDEL I)。實施例2 :FITC (異硫氰酸熒光素)標記的PLGA納米顆粒的制備IOOmg的PLGA溶于5毫升的無水二氯甲烷中，然后用1，3_ 二環己基碳二亞胺(0.7毫克)和N-羥基琥珀酰亞胺(0.4毫克)進行活化。反應4小時以后，副產品dicyclohexyliosurea 用透析的方法除去(透析方法參見 Ataman-Onal，Y.，Munier, S.，Ganee, A.，Terrat, C.，Durand，P. Y.，Battail，N.，Martinon，F.，Le, G. R.，Charles，M. H.，Delair, T.and Verrier, B. (2006)Surfactant-free anionic PLA nanoparticles coatedwith HIV-I p24 protein induced enhanced cellular and humeral immune responsesin various animal models. J. Control. Release 112,175-185.)。透析后，在上述反應液中加入0. 7毫克氨茶堿，反應4小時使PLGA的succinimidyl酯基團轉變為伯胺基團，反應完畢，加入到500毫升的的_20°C預冷乙醚用沉淀法進行純化，然后進行真空干燥(真空度20Pa、干燥溫度為25°C、干燥時間12小時)。將溶于二甲亞砜(DMSO)的FITC(1. 2mg)和50毫克的具有伯胺基團的PLGA(真空干燥后的產品)反應。產物對去離子水透析(透析方法上面所述方法相同)后，凍干。將FITC標記的PLGA聚合物和PLGA按照I : 9的比例混合后，按照實施例I的復乳法來制得FITC標記的PLGA納米顆粒FITC-PE-NP。實施例3 :靶向納米顆粒的制備I毫升的PLGA納米顆粒(實施例I產品PE-NP)溶液(5u g/u I, PE-NP溶于pH6. 3 的 IOmM NaH2PO4 水溶液)和 10 U I 的 50mg/ml EDC (l-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) -carbodiimide)水溶液、10 u I 的 50mg/ml NHS (N-hydroxysuccinimide)水溶液共同避光孵育20分鐘后，30000g離心10分鐘后除去上清，然后將溶于50mM HEPES緩沖液(4-羥乙基哌嗪乙石黃酸，4-(2-hydroxyerhyl)piperazine-l-erhanesulfonic acid) (pH 7. 4)的 SM5-1或anti-⑶25Fab’ (I ug/u I)加入到沉淀的納米顆粒中避光反應2小時后，離心，水洗后制得連接抗體片段的納米顆粒PE-NP-S或PE-NP-⑶25。NP-S的制備可以利用實施例I得到的NP經過實施例3的步驟得到。FITC-PE-NP-S的制備可以利用實施例2得到的FITC-PE-NP通過實施例3的步驟得到。實驗例除非特別說明，以下實驗例均利用上述實施例得到的產品進行實驗實驗例I :包裹效率、平均粒徑和粒徑分布測定被PLGA納米顆粒包裹進去的PE38KDELI的百分比為包裹效率，每毫克納米顆粒中PE38KDEL I的含藥量為PE38KDEL I的載藥量，抗體片段連接效率為每毫克的PLGA納米球連接的抗體片段的質量，包裹效率、PE38KDEL I的載藥量和抗體片段連接效率都是通過 MicroBCA protein assay kit (Pierce, Rockford, IL)按說明書方法進行測定(Ofra Benny, Maayan Duvshani-Eshet, Theresa Cargioli, Lorenzo Bello, AndreasBikfalvi,Rona S. Carroll,and Marcelle Machluf,Continuous Delivery of EndogenousInhibitors from Poly(Lactic-Co-Glycolic Acid)Polymeric Microspheres InhibitsGlioma Tumor Growth, Clinical Cancer Research 2005 ；768 (11) :768-76)。納米顆粒的平均粒徑和粒徑分布是由粒徑儀Zeta Sizer 3000HS (Malvern,UK)測定的。納米顆粒的表面形態和粒徑是通過投射電鏡JEOL 2010 Transmission Electronic Microscopy測定的。結果PE-NP-S的包裹效率為 41. 8±2. 3%，PE38KDEL I 的載藥量是8. 5±0. 2 y g/mg,抗體連接效率是19. 4±2. g SM5-1的Fab’ /mg納米顆粒(mean土SD ;n = 4)。通過Zeta Sizer 3000HS 粒徑儀測量，PE-NP-S 的平均直徑為 107. 7±30. 9nm(mean±SD ；n =10)。通過透射電鏡TEM的觀察，我們發現PE-NP-S的形狀為圓形，而且粒徑分布比較狹窄為 107. 67±27. 6nm，見圖 I。對于PE-NP-⑶25進行上述實驗也得到了相同的結果。實驗例2 :競爭性結合的結合和內吞活性實驗競爭性結合實驗I X 105Ch-hep-3細胞和亞飽和濃度的FITC標記的鼠源SM5-1 (制備方法參見U. Trefzer, N. Rietz, Y. Chen, H. Audring, G. Herberth, P. Siegel,S. Reinke, P. Koniger, S. ffu, J. Ma, Y. Liu, H. Wang, ff. Sterry, Y. Guo, SM5-1 a newmonoclonal antibody which is highly sensitive and specific for melanocyticlesions, Arch. Dermatol. Res. 292(2000)583-589.)和逐漸增高濃度的鼠源 SM5-1、Mut-I或PE-NP-S在4 °C孵育I小時，同時以CD25-PE38KDEL、PE-NP-CD25作為陰性對照。細胞通過離心洗滌以后用流式細胞儀進行分析。流式細胞儀結果用FACScan flowcytometer(Becton Dickinson, San Jose, CA)來分析。競爭者的 IC5tl(半數抑制濃度)用四參數算法來計算，結果見圖2，結果表明PE-NP-S和Mut-I都可以競爭性阻斷鼠源SM5-1結合Ch-hep-3細胞，意味著它們都保留了特異性結合SM5-1結合蛋白抗原的能力。PE-NP-S的親和力(平均IC50土SD，n = 3)為0. 40±0. 02 y g/ml，大大高于Mut-I的親和力(16. 47±2. 69iig/ml)，而和鼠源SM5-1的親和力(0. 32±0. 03 y g/ml)相似，意味著把SM5-1的Fab’抗體片段連接到納米顆粒上沒有改變它的結合活性，最大熒光強度定義為在沒有競爭抗體時，FITC標記的鼠源SM5-1對Ch-hep-3細胞進行染色得到的平均熒光強度。
結合和內吞實驗通過共聚焦顯微鏡來測定Ch_h印-3細胞和PE-NP-S在37°C孵育0，I或30分鐘，然后用PBS洗滌兩次，用10毫升的4% PFA (多聚甲醛)固定30分鐘。最后，細胞用 Leica TCS SP2 Confocal Spectral Microscope (UV-VIS)進行拍照，照片用 Leica共聚焦軟件分析，結果見圖3，結果顯示通過I分鐘的孵育，FITC的熒光僅僅在Ch-hep-3細胞表面被檢測到(圖3-1)，在孵育30分鐘以后，FITC熒光可以在Ch-hep-3細胞胞質內可以清楚的被檢測到(圖3-2)。然而，在SM5-1結合蛋白抗原表達陰性的細胞株QGY7701，則沒有檢測到任何FITC熒光(圖3-3)。另外，本發明的發明人利用PE-NP和PE-NP-CD25進行了同樣的實驗，實驗結果表明PE-NP和PE-NP-CD25與PE-NP-S結果相反，表明其均不能結合到細胞表面抗原從而不能被Ch-hep-3細胞內吞。本發明的發明人利用另外一株SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的細胞株Ch-hep-1也得到了與上述實驗相似的結果。實驗例3 :體外細胞毒性實驗三株肝癌細胞在96孔板中以IX IO4/孔的密度在37°C，7. 5% CO2中培養24小時后，和 PE-NP-S、Mut-I 或PE38KDEL I、PE_NP+SM5_lFab’、PE_NP_CD25 在 37°C共孵育兩天，藥物中PE38KDEL I的濃度為I到10，OOOpM。細胞生存率用細胞效價非放射性細胞增殖試劑盒(Cell Titer 96 non-radioactive cell proliferation assay kit,Promega,Madison,WI，USA)來進行測定。簡要地說，20 ill of MTS/PMS溶液加到每個孔中，在37°C孵育兩個小時以后，用全自動定量繪圖酶標儀在490nm波長進行讀數，結果見表I。表I藥物對肝癌細胞株的IC5tl(PM)
權利要求
1.一種內包裹免疫毒素外連接抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒。
2.權利要求I所述的納米顆粒，其中免疫毒素為篦麻毒素、白喉毒素、PE38KDELI型突變體之一，抗體為人源化抗體或人源化抗體的Fab’片段。
3.權利要求2所述的納米顆粒為內包裹PE38KDELI型突變體外連接人源化SM5-1抗體Fab’片段的聚乳酸-羥基乙酸共聚物納米顆粒。
4.權利要求3所述的納米顆粒，其粒徑為70 140nm，包裹效率為35 45%，抗體連接效率為15 25 μ g/mg納米顆粒。
5.一種制備權利要求I至4任一所述的納米顆粒的方法，包括首先制備包裹免疫毒素的納米顆粒，然后在納米顆粒表面連接抗體兩個步驟。
6.權利要求5所述的方法，其中制備包裹免疫毒素的納米顆粒步驟包括 a)將免疫毒素溶解到水性溶液中然后和聚乳酸-羥基乙酸共聚物一起加入到油性溶齊U，超聲得到油包水的初乳； b)利用a)得到的初乳制備復乳； c)復乳再加入到聚乙烯醇溶液中后，攪拌使有機溶劑揮發，溶液經過離心、水洗，低溫凍干即制得成品納米顆粒。
7.權利要求6所述的方法，其中步驟a)中的水性溶液為PBS，油性溶劑為乙酸乙酯。
8.權利要求6所述的方法，其中步驟a)還包括在溶解了免疫毒素的水性溶液中加入海藻糖。
9.權利要求5的方法，其中在納米顆粒表面連接抗體步驟包括將包裹免疫毒素的納米顆粒和EDC、NHS在避光的條件下共同孵育，然后將溶于HEPES (pH 7. 4)的抗體或抗體片段加入到沉淀的納米球中避光反應而得。
10.權利要求1-4任一所述的納米顆粒在制備治療腫瘤藥物中的用途。
11.權利要求10所述的用途，其中腫瘤為SM5-1結合蛋白抗原或Her2表達陽性的腫瘤。
12.權利要求11所述的用途，其中SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤為乳腺癌、黑色素瘤和肝癌。
13.權利要求12所述的用途，其中SM5-1結合蛋白抗原表達陽性的腫瘤為肝癌。
全文摘要
本發明屬于生物醫藥領域，更具體地，本發明公開了一種內包裹毒素外連接抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)納米顆粒、其制備方法及用途。本發明公開的內包裹PE38KDEL I型突變體外連接人源化SM5-1抗體的聚乳酸-羥基乙酸共聚物具有抗腫瘤活性高、非特異毒性和免疫原性小、對抗PE中和性抗體的敏感度低的優點，可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號A61K47/42GK102697733SQ20121016704
公開日2012年10月3日 申請日期2008年11月19日 優先權日2007年12月4日
發明者寇庚, 李博華, 王皓, 郭亞軍, 高潔 申請人:上海抗體藥物國家工程研究中心有限公司