專利名稱：硒環(huán)肽·脂肪酸合劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種“含硒環(huán)肽、脂肪酸的合劑”藥物及其制備方法，具體的說是一種具有抗腫瘤抗氧化功能的硒環(huán)肽·脂肪酸合劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
威脅人類生命健康的重大難治性疾病是腫瘤，人類在腫瘤的治療過程中經(jīng)歷了漫長(zhǎng)的歷史變遷。抗腫瘤藥物是重要的治療手段之一，隨著研究的深入與科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，抗腫瘤藥物隨著新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)而不斷進(jìn)步。 科學(xué)家對(duì)腫瘤的深入研究發(fā)現(xiàn)，盡管腫瘤發(fā)生和發(fā)展的原因十分復(fù)雜，但歸根結(jié)底都與基因表達(dá)及基因表達(dá)產(chǎn)物活性異常密切相關(guān)。同時(shí)，由于基因表達(dá)異常所形成的原發(fā)和繼發(fā)的腫瘤周圍環(huán)境(如血管生成、免疫系統(tǒng)功能變化異常等)的惡化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞惡性表觀的進(jìn)一步發(fā)展，并產(chǎn)生體內(nèi)擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移。而且近年來國(guó)內(nèi)外的研究結(jié)果清晰地表明，表觀遺傳改變?cè)谀[瘤的發(fā)生和發(fā)展中具有普遍的意義。因此，針對(duì)以組蛋白去乙酰化酶(HDAC)這一類影響表觀遺傳的重要分子靶標(biāo)開展的小分子藥物研發(fā)已經(jīng)成為國(guó)際腫瘤靶向治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一。由于HDAC在基因表達(dá)中起著關(guān)鍵作用，所以，它們與許多細(xì)胞功能密切相關(guān)，包括細(xì)胞周期調(diào)控、細(xì)胞增殖、免疫調(diào)控、分化和基因程序化表達(dá)，同時(shí)有與傳統(tǒng)化療藥物對(duì)腫瘤耐藥性基因表達(dá)完全不同的調(diào)節(jié)模式等。試驗(yàn)表明，HDAC抑制劑能夠抑制人體及動(dòng)物體內(nèi)的腫瘤的生長(zhǎng)，包括肺癌、胃癌、乳腺癌、前列腺癌和淋巴瘤等。HDAC抑制劑在作用機(jī)制上既區(qū)別于傳統(tǒng)細(xì)胞毒類藥物(即在對(duì)增殖快速的腫瘤細(xì)胞殺傷的同時(shí)，也累及正常細(xì)胞的傳統(tǒng)化療藥物)，也不同于典型的靶向藥物。但是，現(xiàn)在的研制工作出現(xiàn)了新的問題(一)、現(xiàn)有的植物性抑制劑含量低，效果差；(二)、化學(xué)合成的抑制劑性能單一，效果差；(三)、大部分抑制劑在體內(nèi)易降解、半衰期短，不穩(wěn)定；(四)、對(duì)造血因子GATA-I和10的轉(zhuǎn)錄抑制，可引起血小板減少等不良反應(yīng)；(五)、還有微量元素硒抗腫瘤功能肯定，但是硒離子在小腸的中性和偏堿性環(huán)境中沉淀，嚴(yán)重影響作用效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是要提供一種抗腫瘤、抗氧化的植物性硒環(huán)肽·脂肪酸合劑。本發(fā)明的另一目的是提供該合劑的制備方法。本發(fā)明是根據(jù)中醫(yī)藥學(xué)對(duì)“腫瘤”及其并發(fā)的抗氧化能力降低的發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)以及治療原則，參考現(xiàn)代“硒”、“環(huán)肽”、“短鏈脂肪酸”及“H D A C抑制劑”的藥理研究成果，從我國(guó)衛(wèi)生部審定的可用于保健食品的中藥材中篩選出益氣養(yǎng)陰、活血通脈、抗腫瘤，又能提高血液微循環(huán)和免疫力的藥材，由人參、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子參、桅子及微量元素等組成原材料，用現(xiàn)代生物工程技術(shù)酶法或微生物發(fā)酵法提取出含硒肽及環(huán)肽、短鏈脂肪酸等純天然植物HDAC抑制劑化合物，具有高效協(xié)同抗腫瘤及抗氧化而副作用不疊加的功效。硒環(huán)肽·脂肪酸合劑是具有含硒肽的全新化學(xué)結(jié)構(gòu)的亞型選擇性蛋白去乙酰化酶純天然組合抑制劑，屬于新型抗腫瘤作用機(jī)制的腫瘤表觀遺傳調(diào)控新藥物，與傳統(tǒng)的腫瘤治療藥物不同，它以癌細(xì)胞異常的表觀遺傳作為靶點(diǎn)進(jìn)行飽和攻擊，并通過誘導(dǎo)患者自身的免疫監(jiān)測(cè)和免疫殺傷作用而發(fā)揮整體協(xié)同抗腫瘤作用，純天然無(wú)化學(xué)污染。本發(fā)明的物品是由下列組分制成的(用量為重量):
人參2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份
五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份
太子參8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份.
本發(fā)明物品的最佳重量配比是
人參5份菌草10份枸杞子11份
五味子4份薏該仁15份獲茶8份
太子參12份桅子5份硒O. 0000029份·
本發(fā)明物品上述配方中可添加其它微量元素，如添加鋅、鉻等，生成多肽金屬螯合物，來提高功能效果。將上述各組分組成本發(fā)明物品的生產(chǎn)方法是以上述配方藥材為原料，采用常規(guī)制藥加工方法可生產(chǎn)出含硒肽、脂肪酸中成藥合劑，采用制備肽的常規(guī)方法能生產(chǎn)出含硒肽合劑。現(xiàn)重點(diǎn)說明選用微生物發(fā)酵法制備肽、脂肪酸化合物。具體方法有兩種(一)、將上述配方藥材混合粉碎，用水煎提取方法得到水煎藥液(預(yù)處理)，加入肽菌株，或綜合酶進(jìn)行微生物發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規(guī)方法制成藥物劑型。(二)、(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小時(shí)，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進(jìn)行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時(shí)處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶(谷草桿菌)，在溫度25-28° C、PH6. 5— 7、攪拌條件下進(jìn)行酶解3-5小時(shí)，利用提取的植物體內(nèi)已有的小肽，在植物環(huán)化酶的作用下，選擇性的形成環(huán)肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調(diào)ph值7-10，在溫度20-42° C、每分鐘攪拌60-80次的條件下進(jìn)行厭氧發(fā)酵生產(chǎn)短鏈脂肪酸，時(shí)間7-30天；(5)冷卻，過濾純化，按上述配方比例加硒粉混懸液，強(qiáng)力攪拌2小時(shí)，產(chǎn)生含硒肽，再按常規(guī)方法制成藥物劑型，既得硒環(huán)肽·脂肪酸合劑。本發(fā)明抗腫瘤原理是通過下列機(jī)制(一)由環(huán)肽、短鏈脂肪酸組合成HDAC抑制劑靶向作用，直接殺傷腫瘤細(xì)胞；(二)含硒肽協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞；(三)提升免疫力及抗氧化能力，抑制腫瘤細(xì)胞生存；(四)截?cái)嗄[瘤區(qū)的血液供應(yīng)，阻止腫瘤繼續(xù)擴(kuò)大；(五)分化，能是一部分腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)化為非腫瘤細(xì)胞。本發(fā)明的主要特點(diǎn)是(一)配方中石竹科、茜草科、五味子科、五加科藥材含環(huán)肽量高，環(huán)肽生產(chǎn)量多；(二)合劑含有黏附劑(多糖)、果膠、脂肪酸、氨基酸衍生物、植物多糖、多元醇等，均為肽吸收促進(jìn)劑、修飾劑和穩(wěn)定劑，所以本發(fā)明性能較穩(wěn)定，對(duì)人體更安全，藥理活性更強(qiáng)；(三)活性肽結(jié)合硒離子(含硒肽)，由小腸腸壁細(xì)胞吸收后再釋放進(jìn)入血液，從而避免了硒離子在小腸的中性和偏堿性環(huán)境中沉淀，提高抗腫瘤的協(xié)同效果；(四)所含的中藥及多肽具有活化血小板間黏附作用。為了證實(shí)本發(fā)明對(duì)抗腫瘤及抗氧化抗缺氧作用的效果，我們分別做了以下試驗(yàn)。(一)抗腫瘤藥效學(xué)試驗(yàn)
(I)、藥物來源與配制硒環(huán)肽 脂肪酸合劑，20毫升口服液，按生藥I :1提取。用前以蒸餾水配制成試驗(yàn)所需濃度的混懸液。(2)、試驗(yàn)動(dòng)物試驗(yàn)采用體重18_22g昆明小鼠，雌雄兼用，但每批試驗(yàn)性別相同，由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物中心提供。(3)、試驗(yàn)方法取生長(zhǎng)良好的小鼠可移植腫瘤Lewis肺癌、肝癌H22及肉瘤S180，按抗癌藥藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求常規(guī)接種小鼠，于接種后24小時(shí)分組給藥。試驗(yàn)共分五組， 每組10只鼠，設(shè)對(duì)照組，環(huán)磷酰胺陽(yáng)性藥組(常規(guī)方法)，硒環(huán)肽·脂肪酸合劑I. 25,2. 5、
3.75g/kg三劑量組。環(huán)磷酰胺60mg/kg腹腔注射一次,硒環(huán)肽·脂肪酸合劑灌胃給藥連續(xù)9次。停藥后24小時(shí)處死動(dòng)物，剝瘤稱重，計(jì)算抑瘤率，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。(4)、試驗(yàn)結(jié)果
I、對(duì)小鼠Lewis肺癌的療效試驗(yàn)
三批試驗(yàn)結(jié)果，硒環(huán)肽 脂肪酸合劑I. 25g/kg組的抑瘤率分別為31. 0%、26. 3%,25. 2%(P < O. OUp < O. 05,P < O. 05)；2. 5g/kg組的抑瘤率分別為 36. 3%、31· 6%,41. 0%(p < O. 01、P < O. 01、P < O. 001) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 51. 0%、38· 3%,41. 2% (p < O. 001、p
<O. OUp < O. 001)。2、硒環(huán)肽·脂肪酸合劑對(duì)小鼠肝癌H22的療效試驗(yàn)
三批試驗(yàn)結(jié)果，I. 25g/kg 組的抑率分別為 16. 7%,36. 1%、23· 9% (p < O. 05、p < O. 001、P < O. 01) ；2. 5g/kg 組的抑瘤率分別為 22. 5%,35. 6%,22. 4%( p < O. 05、p < O. 001、p
<O. 05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 29. 6%,41. 4%,34. 2%( p < O. 01、p < O. 001、p
<O. 001)。3、硒環(huán)肽 脂肪酸合劑對(duì)小鼠肉瘤S180的療效試驗(yàn)三批試驗(yàn)結(jié)果，硒環(huán)肽 月旨肪酸合劑I. 25g/kg組的抑瘤率分別為33. 7%,24. 1%、29· 7%( p均〈O. 05) ；2. 5g/kg組的抑瘤率分別為 35. 2%,32. 7%、21· 8%( p 均〈O. 05) ；3. 75g/kg 組的抑瘤率分別為 45. 9%,40. 6%、33. 6%( ρ〈0· 05、P < O. 01、ρ〈0· 05)。(5)、試驗(yàn)結(jié)論硒環(huán)肽·脂肪酸合劑I. 25,2. 5,3. 75g/kg三劑量組對(duì)小鼠肉瘤S180有明顯抑瘤作用，對(duì)小鼠Lewis肺癌、肝癌H22均表現(xiàn)了明顯抑瘤作用，且呈劑量關(guān)系。其中對(duì)小鼠Lewis肺癌療效更明顯，硒環(huán)肽 脂肪酸合劑大劑量4. 74g/kg組平均抑瘤率達(dá)63. 8%。(二)抗氧化試驗(yàn)
硒環(huán)肽 脂肪酸合劑有總黃酮中藥成分，具有抗氧化功效。對(duì)此我們進(jìn)行了試驗(yàn)。方法如下以硒環(huán)肽·脂肪酸合劑(20毫升口服液一I 1原藥材提取)、給以老齡BAL B/C小鼠灌胃45 d后測(cè)定與抗氧化延緩衰老有關(guān)的生化指標(biāo)。結(jié)果硒環(huán)肽 脂肪酸合劑能使肝超氧化物歧化酶(S0D)活性顯著增強(qiáng)；全血谷胱甘肽過氧化物酶(GSH- Px)和過氧化氫酶(CAT)活性顯著提高。結(jié)論硒環(huán)肽 脂肪酸合劑具有較明顯的抗氧化作用。實(shí)施例按下述配方比稱取原料
人參5份菌草10份枸杞子11份五味子4份薏該仁15份獲茶8份
太子參12份桅子5份硒O. 0000029份。
實(shí)施例生產(chǎn)方法
(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I. 5小時(shí)，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進(jìn)行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時(shí)處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶(谷草桿菌)，在溫度25-28° C、PH6. 5—7、攪拌200rpm條件下進(jìn)行酶解4小時(shí)，產(chǎn)生環(huán)肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調(diào)ph值7-10，在溫度40° C、每分鐘攪拌80次的條件下進(jìn)行厭氧發(fā)酵產(chǎn)酸(短鏈脂肪酸)，時(shí)
間10天；(5)過濾純化，將藥液濃縮到每人每天服用3次、每次20毫升的濃度(藥材水為1:0. 86)，再按上述配方比例加硒粉混懸液，強(qiáng)力攪拌2小時(shí)，產(chǎn)生含硒肽，及時(shí)灌裝扎封，105° C流通蒸汽滅菌30分鐘，既得硒環(huán)肽·脂肪酸合劑。
權(quán)利要求
1.一種抗腫瘤抗氧化的硒環(huán)肽·脂肪酸合劑，其特征在于它是由下述重量配比的原料和方法制成的合劑 人參2-15份茜草3-20份枸杞子5-25份 五味子2-10份薏苡仁7-30份茯苓5-20份 太子參8-30份桅子4-20份硒O. 000001-0. 002份 將上述配比的原料混合后粉碎制成粗粉，用常規(guī)提取方法得到水煎藥液，加入酶進(jìn)行微生物發(fā)酵培養(yǎng)，調(diào)PH值，加熱滅酶，冷卻，過濾純化，既得，再按常規(guī)方法制成藥物劑型。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的合劑，其特征在于所說的制備方法包括以下步驟(I)將人參、茜草、五味子、茯苓、太子參按上述配方比例混合粉碎，用75%乙醇(6倍量)回流提取I.5小時(shí)，濾過醇提液備用，藥渣分別保存；(2)將枸杞子、薏苡仁、桅子按上述配方比例混合粉碎，加入醇提后的藥渣，進(jìn)行水煎2次(8倍水)，每次I. 5小時(shí)處理，藥液過濾；(3)把醇提藥液、水提藥液混合后接入微生物蛋白酶，在溫度25-28° C、pH6. 5— 7、攪拌條件下進(jìn)行酶解3-5小時(shí)，產(chǎn)生肽，滅酶；(4)將上述藥液濃縮，調(diào)ph值7-10，在溫度20-42° C、每分鐘攪拌60-80次的條件下進(jìn)行厭氧發(fā)酵生產(chǎn)短鏈脂肪酸，時(shí)間7-30天；(5)冷卻，過濾純化，按上述配方比例加硒，再按常規(guī)方法制成藥物劑型，既得硒環(huán)肽·脂肪酸合劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的合劑，其特征在于所說的合劑可加工成保健食品。
全文摘要
“硒環(huán)肽·脂肪酸合劑”是以中藥人參、茜草、枸杞子、五味子、薏苡仁、茯苓、太子參、梔子、硒等為基原，利用現(xiàn)代微生物發(fā)酵技術(shù)制備的，具有全新化學(xué)結(jié)構(gòu)的組蛋白去乙酰化酶純天然增效性組合抑制劑，包括含硒肽、環(huán)肽、短鏈脂肪酸等組合化合物，屬于新型抗腫瘤作用機(jī)制的腫瘤表觀遺傳調(diào)控藥物，與傳統(tǒng)的腫瘤治療藥物不同，它以癌細(xì)胞異常的表觀遺傳作為靶點(diǎn)進(jìn)行飽和攻擊，并通過誘導(dǎo)患者自身的免疫監(jiān)測(cè)和免疫殺傷作用而發(fā)揮整體協(xié)同抗腫瘤作用，并且抗氧化，純天然無(wú)化學(xué)污染。
文檔編號(hào)A61K36/8994GK102772696SQ20121018833
公開日2012年11月14日 申請(qǐng)日期2012年6月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年6月9日
發(fā)明者楊京潤(rùn), 楊吉星 申請(qǐng)人:北京港生藥業(yè)科技有限公司