專利名稱：薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術，屬 于醫藥技術領域。
背景技術：
近年來由于現代制藥技術對中藥粉炮制工藝的滲透，使得中藥粉的藥效顯著地提高，先后出現了濃縮中藥藥粉、納米中藥粉、中藥超微顆粒等新型粉劑，這些新型粉劑的出現，對于多數的中草藥來說，避免了煎煮麻煩、服用不便的缺點，并使藥物的有效成份得到一定程度的濃縮或者比較充分的釋放，從而較大幅度地提高了藥粉的藥效。但是，磨細、釋放、濃縮僅僅是對藥物的物理加工，不涉及生化反應，只能在一定 程度上提高藥效，而不能改善藥性。對于那些有效成分含量甚微、不溶或難溶于水、熱敏性的中藥來說，還遠遠不能解決問題。例如對于像紫杉醇(抗癌有效成分)這樣含量甚微的紅豆杉粉來說，即便是處方量紅豆杉粉中的紫杉醇充分釋放，也無濟于藥效的提高。另外，把紅豆杉粉經過提取、濃縮做成濃縮中藥藥粉，其中紫杉醇含量也不過O. 6%左右，它不僅距離紫杉醇針劑的純度(99. 5%以上)遙不可及，就是做口服制劑也因含量太低，而且不溶于水，難以被胃腸吸收，很難說能有什么療效。目前最好的紫杉醇抗癌制劑是紫杉醇脂質體的針劑，它使紫杉醇可溶于水、易于被組織細胞吸收。但是，制備紫杉醇脂質體針劑需要純度很高的的紫杉醇(99%以上)為原料，它要經過紫杉醇提純、分離、重結晶等復雜的工藝，因而成本高、價格貴，使廣大癌癥患者難以接受。此外，它不能口服，必須到醫院靜脈滴注，而且容易引起注后過敏反應，給患者的治療帶來不便。在國內外大規模制造紫杉醇脂質體針劑的大背景下，制備紫杉醇脂質體的技術已是轅輕駕熟，加之，近年來我國中醫藥界把難溶于水的中藥有效成分制成口服脂質體方面的成果又為我們把紫杉烷類脂質體化提供了可靠的技術基礎。例如，已制成人參皂苷脂質體、香菇多糖脂質體等。顯然，此類中藥脂質體已經不是某一種提純的化合物的脂質體(如紫杉醇針劑的紫杉醇脂質體)，而是由多種皂苷或多糖組成的同類化合物的復合脂質體。同理，我們可以將紅豆杉中的紫杉醇同類化合物(紫杉烷類)一起脂質體化，然后通過真空濃縮、冷凍干燥，使這些脂質體可控量地富集于紅豆杉的粉狀顆粒之中。另外，紫杉醇口服制劑(飲片、膠囊)迄今未能廣泛應用，一個重要原因是腸道細胞對紫杉醇(烷)的吸收率低(< 6%)。因為小腸、肝、腎的細胞、以及腫瘤的癌細胞對紫杉醇具有外排作用，它們的細胞膜中存在一種跨膜糖蛋白——P-糖蛋白，一種與腫瘤多藥耐藥性有關的蛋白，是一種ATP能量依賴性的外排泵，將進入細胞的藥物(如紫杉醇)泵出細胞夕卜，降低藥物在細胞內的濃度而影響藥效。

發明內容
本發明的目的是克服現有技術中的不足，提供一種把傳統的中草藥炙制方法與先進的紫杉醇(烷)脂質體的制備、富集技術相結合的薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉技術，炮制出富含紫杉醇(烷)脂質體、易于口服吸收、高效抗癌、低毒副作用的紅豆杉粉。為了實現上述目的本發明采用如下技術方案
一種薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術，包括以下步驟
(1)取材
①取紅豆杉浸膏粉以IOOg作為批量單位取紅豆杉浸膏粉，脫脂除雜并磨成細粉，精確測定紅豆杉浸膏粉的紫杉烷含量及紫杉醇含量；
②取處方量蛋黃油以500g作為批量單位取蛋黃粉，采用超聲強化法自制蛋黃油，除去蛋黃油中的蛋白質，精確測定蛋黃油的卵磷脂含量后，按紫杉烷類 卵磷脂膽固醇處方量比1:29:0. 75取處方量蛋黃油；
③取處方量紅豆杉粉以紅豆杉膠囊每粒含紫杉醇4.5mg為參照量計算
紅豆杉粉處方量=紅豆杉浸膏所含紫杉醇總毫克量+4. 5X每個膠囊所含紅豆杉粉重量;
(2)用95%乙醇和處方量蛋黃油作為液體輔料，以紅豆杉浸膏粉和處方量紅豆杉粉為炙制底物，在蒸發器內混合均勻，在60°C水浴，20-30 r · mirT1的條件下，減壓、旋轉、蒸干，直至在蒸發器的的瓶壁上及粉粒表面形成干膜；
(3)在繼續維持瓶內真空度-O.080 -O. 095MPa的情況下，向旋轉瓶內注入適量冷凍保護劑，室溫下緩慢旋轉，待瓶壁上的干膜浸透后，繼續旋轉，直至將瓶壁上的干膜沖洗下來，形成粗制的紫杉醇(烷)脂質體與紅豆杉粉的混懸液；
(4)繼續旋轉水化，并用超聲波對脂質體整粒，縮小粒徑；
(5)然后關閉真空泵，用氮氣封灌加壓至O.8 I. 5MPa，使含有紫杉醇(烷)脂質體及冷凍保護劑的溶液可控量地進入紅豆杉粉粒的組織內部或者直到粉粒拒絕吸收液體為止；
(6)恢復常壓，將瓶內粉粒混懸液倒入不銹鋼離心過濾袋中，低速離心，使固液分離；
(7)將離心后的紅豆杉粉粒連同濃縮后的濾液轉置于冷凍干燥機中，預凍4小時，冷凍干燥24小時，制成干粉；用腸溶膠囊包裝。所述步驟(2)中的蒸發器為薄膜蒸發器。所述步驟(3)中的冷凍保護劑為43%蔗糖溶液。所述步驟(4)中的超聲波功率為80W，頻率為30-40KHZ。 所述步驟(7 )中的冷凍干燥機已經預冷為-35°C。本發明的優點
(I)本發明沿襲中草藥的炙制炮制工藝，把由紅豆杉天然浸出的紫杉醇(烷)，實施脂質體化后，富集于紅豆杉的粉狀顆粒之內，完善地解決了紫杉醇(烷)難溶于水、難于吸收的問題。(2)這種紫杉醇粗制物中的許多紫杉烷類不僅有抗癌作用，而且具有抗多藥耐藥性(抑制P-糖蛋白的活性)，顯著地增加了紫杉醇(烷)類在腸道及腫瘤的吸收，提高了藥效，降低了毒副作用。(3)紅豆杉粉的粉狀顆粒具有最大的吸收表面積與最大的吸收空間，可以讓紫杉醇(烷)脂質體可控量地富集到粉粒之內，使其具有與紫杉醇脂質體針劑可比的效應。
(4)把這些粉狀顆粒裝入腸溶膠囊直接口服，就避免了胃液消化破壞、煎煮失效的問題。(5)這種含有紫杉醇(烷)脂質體的紅豆杉粉的加工程序較紫杉醇脂質體針劑簡單，不需要進行高純度紫杉醇(99%以上)的分離、提純工藝，大幅度地降低了成本，減少了污染，是一種高效、低毒、廉價、服用方便的口服制劑，利于廣大癌癥患者的使用與治療。


圖I為炙制紅豆杉粉工藝流程圖。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步的描述。 實施例(I)取材
①取紅豆杉浸膏粉IOOg(昆明格林楊生物工程有限公司供應，紫杉醇含量為1%)，進行脫脂除雜并磨成細粉，精確測定紅豆杉浸膏的紫杉烷含量及紫杉醇含量；
②取處方量蛋黃油取蛋黃粉500g，按超聲強化法自制蛋黃油，除去蛋黃油中的蛋白質，使含80%左右的卵磷脂及少量膽固醇，精確測定蛋黃油的卵磷脂含量后，按紫杉烷類卵磷脂膽固醇處方量比為I: 29: O. 75取處方量蛋黃油；
③取處方量紅豆杉粉以市售紅豆杉膠囊每粒含紫杉醇4.5mg為參照量計算
紅豆杉粉處方量=IOOg浸膏所含紫杉醇總毫克量+4. 5X每個膠囊所含紅豆杉粉重
量;
(2)工藝方法
用1500-2000ml 95%乙醇和處方量蛋黃油作為液體輔料，以IOOg紅豆杉浸膏粉和處方量紅豆杉粉為炙制底物，全部物料在薄膜蒸發器內混合均勻后，在60°C水浴，20-30r-min-1的條件下，減壓、旋轉、蒸干，直至在旋轉瓶的玻璃壁上及粉粒表面形成干膜。在繼續維持瓶內真空度O. 080 -O. 095MPa的情況下，向旋轉瓶內注入IOOOml 43%蔗糖溶液，室溫(25°C)下緩慢旋轉約1-3 min,待瓶壁上的干膜浸透后，繼續40 !■ mirT1旋轉，直至將瓶壁上的干膜沖洗下來，形成粗制的紫杉醇(烷)脂質體與紅豆杉粉的混懸液。繼續旋轉水化I小時，并用超聲波(80胃，30-401(取，301^11)對脂質體整粒，縮小粒徑。然后關閉真空泵，用氮氣封灌加壓(O. 8 I. 5MPa)，使含有紫杉醇(烷)脂質體及蔗糖的溶液可控量地進入紅豆杉粉粒的組織內部或者直到粉粒拒絕吸收液體為止。恢復常壓，將瓶內粉粒混懸液倒入不銹鋼離心過濾袋(100目)，低速離心(IOOOg左右)，使固液分離。將離心后的紅豆杉粉粒連同濃縮后的濾液轉置于已經預冷為-35°C的冷凍干燥機中，預凍4小時，冷凍干燥24小時，制成干粉。用腸溶膠囊包裝。按康艷敏-梅興國的離心法，測出紫杉烷(含紫杉醇)的包封率為65. 14±1. 63%(RSD=L 82)。紫杉烷定量按金濤方法測定，其中紫杉醇含量占40%左右。(3)動物抑瘤試驗
依Maharaj法，將上述冷凍干燥后的富含紫杉醇(烷)脂質體的紅豆杉干粉過篩(< 50目)，取50g混懸于200ml液體石臘中，以260rpm攪拌分散,加入10% (w/v)鄰苯二甲酸醋酸纖維素的丙酮-乙醇(9:1)溶液20ml，繼續攪拌5min使形成微囊，再加入氯仿75ml繼續高速攪拌使微囊球固化，離心除去混懸介質。將微囊混懸于氯仿中，于室溫下通風干燥即得富含紫杉醇(烷)脂質體的紅豆杉粉腸溶微囊。此種微囊在給小鼠灌胃喂藥后，可避免胃腸消化液對脂質體的破壞。小鼠S18tl肉瘤由中科院北京藥物研究所提供，以腹水型傳代保種，臨用時抽取S18tl肉瘤瘤液腹水，以滅菌生理鹽水I :4稀釋備用。用體重18g-22g的昆明種小鼠50只，每只小鼠前肢腋下注射O. 2ml S180瘤株細胞懸液(細胞濃度2X 107/ml)。24h后按體重隨機分為5組，每組10只，雌雄各半。5個組分別做以下實驗
①灌胃空白對照組(水) ②灌胃紫杉醇組(30mg/Kg)
③灌胃低劑量紫杉醇脂質體腸溶微囊組(15mg/Kg)
④灌胃高劑量紫杉醇脂質體腸溶微囊組(30mg/Kg)
⑤注射紫杉醇脂質體組(15mg/kg;注射給藥途徑為尾靜脈，給藥體積為O.2ml)。各組于接種后l、3、5d分別地按相應劑量給予注射紫杉醇脂質體液或灌胃藥物，并觀察記錄動物服藥后的行為變化。分別于用藥前、和接種后第Iid處死前稱體重，隨即處死動物，解剖剝離腫瘤并稱重。根據以下公式計算抑瘤率
腫瘤抑瘤率=(I 一給藥組平均瘤重/對照組平均瘤重)X 100%
檢測數據以x± S表示，統計方法采用配對t檢驗。結果見下表
組別劑量mg/Kg 動物數死亡數瘤重(g) 抑瘤率(%)
灌胃空白對照組(水)10 O 1·70±0·21
灌胃紫杉醇組30mg/Kg10O 1·65±0·25
灌胃低劑量紫杉醇 15mg/Kg10O 1·39±0·87 15. 23
脂質體腸溶微囊組
灌胃高劑量紫杉醇 30mg/Kg10O 0·95±0·38** 44.69
脂質體腸溶微囊組
注射紫杉醇脂質體組15mg/kg10O O. 92±0. 25** 45.48
注*表示與對照組相比，P〈0. 05; **表示與對照組相比，P〈0. 01。
由上表可見，灌胃高劑量紫杉醇脂質體腸溶微囊組(30mg/Kg)和注射紫杉醇脂質體組(15mg/kg)的抑瘤效應顯著并基本上相同；而灌胃低劑量紫杉醇脂質體腸溶微囊組(15mg/Kg)有比較微弱的抑瘤作用，但與對照組相比，無顯著性差異(P >0.05)。說明小鼠口服紫杉醇脂質體腸溶微囊可以起到與注射紫杉醇脂質體相同的效果；只不過需要前者的劑量是后者的一倍左右。這可能是因為微囊的脂質體的包封率(65%左右)要比注射紫杉醇脂質體的包封率(90%以上)低，以及口服后脂質體要被胃腸消化液破壞掉一部分。這可以通過提高包封率及加強在消化道中的保護來逐步縮小微囊的劑量。給藥后動物行為和小鼠體重變化率均與對照組接近，可見無明顯的毒副反應。
權利要求
1.ー種薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取材 ①取紅豆杉浸膏粉以IOOg作為批量單位取紅豆杉浸膏粉，脫脂除雜并磨成細粉，精確測定紅豆杉浸膏粉的紫杉烷含量及紫杉醇含量； ②取處方量蛋黃油以500g作為批量單位取蛋黃粉，制作蛋黃油，除去蛋黃油中的蛋白質，精確測定蛋黃油的卵磷脂含量后，按紫杉烷類卵磷脂膽固醇處方量比1:29:0. 75取處方量蛋黃油； ③取處方量紅豆杉粉以紅豆杉膠囊每粒含紫杉醇4.5mg為參照量計算 紅豆杉粉處方量=紅豆杉浸膏所含紫杉醇總毫克量+4. 5X每個膠囊所含紅 豆杉粉重量； (2)用95%こ醇和處方量蛋黃油作為液體輔料，以紅豆杉浸膏粉和處方量 紅豆杉粉為炙制底物，在蒸發器內混合均勻，水浴，減壓、旋轉、蒸干，直至在蒸發器的的瓶壁上及粉粒表面形成干膜； (3)在繼續維持瓶內真空度-0.080 -0. 095MPa的情況下，向旋轉瓶內注入 適量冷凍保護劑，室溫下緩慢旋轉，待瓶壁上的干膜浸透后，繼續旋轉，直 至將瓶壁上的干膜沖洗下來，形成粗制的紫杉醇(烷)脂質體與紅豆杉粉的 混懸液； (4)繼續旋轉水化，并用超聲波對脂質體整粒，縮小粒徑； (5)然后關閉真空泵，用氮氣封灌加壓至0.8 I. 5MPa，使含有紫杉醇(烷) 脂質體及冷凍保護劑的溶液可控量地進入紅豆杉粉粒的組織內部或者直到 粉粒拒絕吸收液體為止； (6)恢復常壓，將瓶內粉粒混懸液倒入不銹鋼離心過濾袋中，低速離心，使固液分離； (7)將離心后的紅豆杉粉粒連同濃縮后的濾液轉置于冷凍干燥機中，預凍4小時，冷凍干燥24小時，制成干粉；用腸溶膠囊包裝。
2.根據權利要求I所述的薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術,其特征在于步驟(2)中所述的蒸發器為薄膜蒸發器。
3.根據權利要求I所述的薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術,其特征在于步驟(3)中所述的冷凍保護劑為43%蔗糖溶液。
4.根據權利要求I所述的薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術,其特征在于步驟(4)中所述的超聲波功率為80W，頻率為30-40KHZ。
5.根據權利要求I所述的薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術,其特征在于步驟(7)中所述的冷凍干燥機已經預冷為_35°C。
全文摘要
本發明公開了一種薄膜超聲法炙制富含紫杉醇脂質體的紅豆杉粉的技術，屬于醫藥技術領域。本發明把傳統的中草藥炙制方法與先進的紫杉醇(烷)脂質體的制備、富集技術相結合，炮制出富含紫杉醇(烷)脂質體、易于口服吸收、高效抗癌、低毒副作用的紅豆杉粉。具體包括以下步驟用95%乙醇與蛋黃油作為液體輔料,以紅豆杉粉和紅豆杉浸膏粉作為炙制底物，共同置于薄膜蒸發器中，在恒溫(60℃水浴)、減壓、不斷旋轉的操作下進行炙制，經水化后形成紫杉醇(烷)脂質體，然后使用真空/壓力法將紫杉醇(烷)脂質體富集于紅豆杉粉粒之內，使紅豆杉粉成為一種富含紫杉醇(烷)脂質體的，便于口服吸收、高效低毒副作用的抗癌中草藥。
文檔編號A61K9/127GK102813682SQ20121025386
公開日2012年12月12日 申請日期2012年7月19日 優先權日2012年7月19日
發明者李振剛 申請人:李振剛