專利名稱：負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種長(zhǎng)效安全的抗菌納米材料的制備方法，具體涉及一種負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，屬于醫(yī)藥工程技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
溶菌酶(lysozyme)又稱胞壁質(zhì)酶或N-乙酰胞壁質(zhì)聚糖水解酶，是一種能水解致病菌中粘多糖的堿性酶。主要通過(guò)破壞細(xì)胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之間的β_1，4糖苷鍵，使細(xì)胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，導(dǎo)致細(xì)胞壁破裂，內(nèi)容物溢出而使細(xì)菌溶解。溶菌酶還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，與DNA、RNA、脫輔基蛋白形成復(fù)鹽，使病毒失活。因此，溶菌酶具有抗菌、消炎和抗病毒的作用，并且不產(chǎn)生耐藥性，所以溶菌酶在一定程度上可以代替抗生素，具有較大的應(yīng)用潛力。口服給藥要受到兩種首過(guò)效應(yīng)的影響，即胃腸道上皮細(xì)胞中酶系的降解、代謝及肝中各酶系的生物代謝。許多藥物很大一部分因首過(guò)效應(yīng)而代謝失效，如肽類和蛋白類藥物等。為獲得良好的治療效果，通常不得不將口服給藥改為注射等其它給藥途徑。由于通過(guò)注射途徑的非靶向藥物均勻分布在全身循環(huán)中，到達(dá)病灶之前，要經(jīng)過(guò)同蛋白結(jié)合、排泄、代謝、分解等步驟，所以最終只有少量藥物能達(dá)到病灶。靶向給藥的目的就是提高靶區(qū)的藥物濃度，從而提高藥物的利用率、療效以及降低藥物的副作用，這一直是醫(yī)藥領(lǐng)域一項(xiàng)重要的研究課題。納米藥物載體的研究能有效地解決這些問(wèn)題。

高聚物納米材料作為藥物載體已經(jīng)獲得廣泛研究。其中合成的可生物降解高分子材料，如聚己內(nèi)酯和聚乳酸等，由于其良好的生物相容性頗受關(guān)注。然而用聚己內(nèi)酯和聚乳酸制備的納米材料由于其疏水性，對(duì)于親水性藥物的輸送效果不顯著。因此，對(duì)于親水性藥物容菌酶的包埋，可以選擇殼聚糖和Y-聚谷氨酸(Y-PGA)作為載體材料，通過(guò)殼聚糖和
Y-聚谷氨酸之間發(fā)生離子交聯(lián)，制備納米載體。這種納米載體的優(yōu)點(diǎn)是不使用有毒溶劑，制備條件較緩和。這可以避免有機(jī)溶劑的存在導(dǎo)致溶解酶不穩(wěn)定，因?yàn)橛袡C(jī)溶劑會(huì)使蛋白或肽類物質(zhì)發(fā)生降解。殼聚糖由于其獨(dú)特的性質(zhì)倍受人們關(guān)注。其中，殼聚糖來(lái)源豐富，并且有很好的抗菌性，是其備受關(guān)注的焦點(diǎn)。殼聚糖是甲殼素脫乙酰化的產(chǎn)物，通常脫乙酰度達(dá)到50%-95%之間就可以成為很好的殼聚糖。殼聚糖基本結(jié)構(gòu)單元為殼二糖，殼聚糖是D-氨基葡萄糖通過(guò)β -1，4糖苷鍵結(jié)合而成的多糖，化學(xué)名為聚(2-氨基-2-脫氧-β -D-葡萄糖)，是自然界中唯一存在的帶正電的天然多糖，它無(wú)毒副作用，具有良好的生物相容性、生物可降解性、吸濕性和保濕性，有明顯的抗菌抑菌作用，具有表面多孔結(jié)構(gòu)，是良好的藥物緩釋劑和保水齊U，其形成和結(jié)構(gòu)式可表示為
權(quán)利要求
1.一種負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于所述制備方法是以質(zhì)量比為20 5^16 Γ5 Γ8的殼聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸鈉和溶菌酶為原料，具體包括如下步驟 (1)將O.5^5. Omg/mL的Y -聚谷氨酸水溶液與O. 5^5. Omg/mL的溶菌酶水溶液混合，不斷攪拌至有藍(lán)色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到Y(jié)-聚谷氨酸/溶菌酶復(fù)合納米粒子溶液； (2)取步驟(I)得到的Y-聚谷氨酸/溶菌酶復(fù)合納米粒子溶液滴于O. 5^5. Omg/mL的殼聚糖醋酸水溶液中，所述殼聚糖醋酸水溶液中殼聚糖濃度為O. 5^5. Omg/mL，醋酸體積濃度為1-3% ;再滴加濃度為O. 5^5. Omg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，不斷攪拌至有藍(lán)色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，離心，取沉淀冷凍干燥，即得負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/Y-聚谷氨酸復(fù)合納米粒子。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/Y -聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于所述的殼聚糖的脫乙酰度為85% 95%，分子量15 150萬(wàn)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/Y -聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于所述的Y-聚谷氨酸純度在92.0%與99%之間，分子量100 145萬(wàn)。
4.根據(jù)權(quán)利要求f3之一所述的負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/ Y -聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，其特征在于原料殼聚糖、Y-聚谷氨酸、三聚磷酸鈉和溶菌酶的質(zhì)量比為20 12 16 :3 5 4. 8 8。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復(fù)合納米粒子的制備方法，所述制備方法具體包括如下步驟(1)將0.5~5.0mg/mL的γ-聚谷氨酸水溶液與0.5~5.0mg/mL的溶菌酶水溶液混合，不斷攪拌至有藍(lán)色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，即得到γ-聚谷氨酸/溶菌酶復(fù)合納米粒子溶液；(2)取γ-聚谷氨酸/溶菌酶復(fù)合納米粒子溶液滴于0.5~5.0mg/mL的殼聚糖醋酸水溶液中；再滴加濃度為0.5~5.0mg/mL的三聚磷酸鈉水溶液，不斷攪拌至有藍(lán)色熒光出現(xiàn)并穩(wěn)定存在，得到負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復(fù)合納米粒子。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，制得的負(fù)載溶菌酶的殼聚糖/γ-聚谷氨酸復(fù)合納米粒子可以調(diào)節(jié)溶菌酶釋放速度，具有良好的熱穩(wěn)定性，增加了溶菌酶治療的安全性、高效性和可靠性，是比較優(yōu)良的載藥納米體系。
文檔編號(hào)A61P31/12GK103041377SQ20121035316
公開日2013年4月17日 申請(qǐng)日期2012年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月20日
發(fā)明者孫燕, 柳永, 符思達(dá), 吳駿, 劉學(xué)粉, 余虹 申請(qǐng)人:杭州師范大學(xué), 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院