專利名稱：一種野菊花提取物的制備方法
技術領域：
本發明涉及一種提取物的制備方法。
背景技術：
野菊花為菊科植物野菊(Chrysanthemum indicumL.)的干燥頭狀花序,收載于《中國藥典2010年版一部》295頁。具清熱解毒、瀉火平肝之功效。用于丁瘡癰腫、目赤腫痛、 頭痛眩暈。近年來，隨著現代提取分離和波譜學技術以及現代藥理學的飛速發展，對野菊花屬植物的化學成分和生物活性的研究越來越深入。經化學分析，其主要成份為黃酮類、酚酸類及萜類等物質，是其發揮藥理活性的物質基礎。現代藥理研究證實，野菊花提取物藥理作用較為廣泛(I)心、腦血管保護作用；具有增加冠脈流量，降低氧代謝，提高耐缺氧能力,對實驗性心肌梗死的治療作用,增加腦血流量,改善微循環,收縮血管作用。(2)對血液系統的作用；具有抗血小板聚集，增強纖維蛋白酶活性，降血脂、活血化瘀、抗動脈粥樣硬化作用。(3)降壓作用；(4)抗病原微生物作用；(5)促進白細胞吞噬功能；(6)其他作用。因此，現在研究較多的野菊花總黃酮作為藥用活性部位具有極大的臨床應用價值和市場開發價值。
目前，野菊花提取物的制備方法很多，但應用于工業生產的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業化生產的要求。發明內容
本發明是要解決現有野菊花提取物的制備方法制備的野菊花提取物用于工業生產的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業化生產的要求的問題，而提供了一種野菊花提取物的制備方法。
一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計相對密度為 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質量比為2L Ikg,再用質量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調節pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液，再用鹽酸溶液調節pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質量比為I :2. 5，再用去離子水進行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個柱體積,收集乙醇洗脫液；
四、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調pH值6. (Γ7.0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本發明的有益效果是采用酸處理提取液的方法去除分子量較大的鞣質類物質， 運用聚酰胺樹脂處理，采用體積濃度為80%乙醇洗脫，該工藝進一步去除大分子的蛋白、鞣質及樹脂類物質，使得富集分子量較小的黃酮類物質。該發明的關鍵點是采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機酸均已非成鹽狀態下進入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對性較好。同時采用體積濃度為80%乙醇能夠較完全的解吸黃酮。該工藝除乙醇外，不使用其他有機溶劑，使得工藝流程簡單，生產設備要求較低，制造成本降低，同時該方法的的提取物收率較高超過2. 5%，該提取物總黃酮含量超過80%，達到國家中藥注射劑原料的技術要求。該方法主要針對于黃酮類成分，使黃酮類成分富集且適用于工業化生產。
本發明方法獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，超過 80% ;單體成分蒙花苷(C28H32O14)含量超過15%。
本發明用于制備野菊花提取物，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。
具體實施方式
本發明技術方案不局限于以下所列舉的具體實施方式
，還包括各具體實施方式
之間的任意組合。
具體實施方式
一本實施方式一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計相對密度為 I. 10 I. 14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質量比為2L Ikg,再用質量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調節pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液，再用鹽酸溶液調節pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質量比為I :2. 5，再用去離子水進行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個柱體積,收集乙醇洗脫液；
四、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調pH值6. (Γ7.0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本實施方式采用酸處理提取液的方法去除分子量較大的鞣質類物質，運用聚酰胺樹脂處理，采用體積濃度為80%乙醇洗脫，該工藝進一步去除大分子的蛋白、鞣質及樹脂類物質，使得富集分子量較小的黃酮類物質。該發明的關鍵點是采用聚酰胺樹脂處理之前，先采用酸處理提取液，使提取液中的黃酮及有機酸均已非成鹽狀態下進入樹脂柱中，并且能夠較完全的被樹脂吸附，并且針對性較好。同時采用體積濃度為80%乙醇能夠較完全的解吸黃酮。該工藝除乙醇外，不使用其他有機溶劑，使得工藝流程簡單，生產設備要求較低，制造成本降低，同時該方法的的提取物收率較高超過2. 5%，該提取物總黃酮含量超過80%，達到國家中藥注射劑原料的技術要求。該方法主要針對于黃酮類成分,使黃酮類成分富集且適用于工業化生產。
本實施方式獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，超過 80% ;單體成分蒙花苷(C28H32O14)含量超過15%。
具體實施方式
二 本實施方式與具體實施方式
一不同的是第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的If 19倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的1Γ15倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的1Γ15倍。其它與具體實施方式
一相同。
具體實施方式
三本實施方式與具體實施方式
一或二不同的是步驟二所述鹽酸溶液的質量濃度為5%。其它與具體實施方式
一或二相同。
具體實施方式
四本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為70°/Γ80%。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
五本實施方式與具體實施方式
一至三之一不同的是步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為75%。其它與具體實施方式
一至三之一相同。
具體實施方式
六本實施方式與具體實施方式
一至五之一不同的是步驟四所述氫氧化鈉溶液的質量濃度為10%。其它與具體實施方式
一至五之一相同。
具體實施方式
七本實施方式與具體實施方式
一至六之一不同的是步驟四中調 pH值6. 5飛.8。其它與具體實施方式
一至六之一相同。
具體實施方式
八本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是步驟四所述減壓干燥溫度為60°C 80°C，減壓干燥時間為6tTl0h。其它與具體實施方式
一至七之一相同。
具體實施方式
九本實施方式與具體實施方式
一至七之一不同的是步驟四所述減壓干燥溫度為65°C 75°C，減壓干燥時間為7tT9h。其它與具體實施方式
一至七之一相同。
采用以下實施例驗證本發明的有益效果
實施例一
本實施例一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的
一、取IOOkg野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的20倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的16倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計相對密度為I. 10 I.14的清膏；
二、向步驟一獲得的清膏內加水，加水后的體積為200L，再用質量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調節PH值至6. 5，靜置24h，收集上清液，再用質量濃度為5%的鹽酸溶液調節pH 值至2. 0，再靜置24h，收集上層液體；
三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質量比為I :2. 5，再用去離子水進行洗脫，洗脫用的去離子水體積為8個柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為80%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個柱體積，收集乙醇洗脫液；
四、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用質量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調 pH值6. 5，濃縮，減壓干燥，減壓干燥溫度為80°C，減壓干燥時間為9h，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
本實施例的提取物收率不少于2. 5%，主要成分為黃酮。該提取物組分情況的研究結果提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H3tlO16)計，不少于80% ;單體成分蒙花苷 (C28H32O14)含量不少于15%。
主要成分的探索性研究
I材料、試驗與試劑
高效液相色譜儀安捷倫1100系列液相色譜儀，配有在線脫氣機；四元梯度洗脫泵；柱溫箱。
蒙花苷化學對照品批號111528-200605
蘆丁化學對照品批號110080-200707
由中國藥品生物制品檢定所提供
色譜柱 C18250X4. 6mm 5ym
試劑甲醇、乙腈色譜純(DIKMA)
試藥實施例一制備的野菊花提取物
批號:110601、110901、120401
2試驗方法與結果
2. I試驗方法
野菊花提取物質量控制采用紫外分光光度法測定總黃酮，高效液相法測定蒙花苷。
野菊花提取物中的大類成分主要是黃酮類成份，通過文獻和標準品定位，初步認為野菊花提取物中含有蒙花苷等黃酮類成分，采用高效液相色譜法(中國藥典2010年版一部附錄VI D)進行含量測定。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水-磷酸系統為流動相；檢測波長為334nm。
2. 2試驗結果
通過對部分已知成份進行含量測定，其含量結果見表2-1
2-1野菊花提取物質量控制含量測定結果
權利要求
1.一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于一種野菊花提取物的制備方法，具體是按照以下步驟制備的一、取野菊花中藥材，用去離子水煎煮3次，每次lh，第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的16 20倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的12 16倍，合并3次煎煮液，再濃縮至以70°C計相對密度為I. 10 I. 14的清膏；二、向步驟一獲得的清膏內加水，加水后的體積與野菊花中藥材的質量比為2L:1kg， 再用質量濃度為10%的氫氧化鈉溶液調節pH值至6. 5 7. 0，靜置12tT24h，收集上清液， 再用鹽酸溶液調節pH值至2. O 3. 0，再靜置12tT24h，收集上層液體；三、將步驟二收集的上層液體過聚酰胺樹脂柱，聚酰胺樹脂與野菊花中藥材的質量比為I :2. 5，再用去離子水進行洗脫，洗脫用的去離子水體積為6 10個柱體積，水洗液棄去后使用體積濃度為65°/Γ85%的乙醇溶液洗脫樹脂柱，洗脫用的乙醇溶液體積是5個柱體積，收集乙醇洗脫液；四、對乙醇洗脫液進行減壓蒸餾回收乙醇，用氫氧化鈉溶液調PH值6.(Γ7. 0，濃縮，減壓干燥，即得到野菊花提取物，完成野菊花提取物的制備方法。
2.根據權利要求I所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于第一次去離子水的質量是野菊花中藥材的If 19倍，第二次去離子水的質量是野菊花中藥材的1Γ15倍，第三次去離子水的質量是野菊花中藥材的1Γ15倍。
3.根據權利要求2所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟二所述鹽酸溶液的質量濃度為5%。
4.根據權利要求3所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為70°/Γ80%。
5.根據權利要求3所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟三所述乙醇溶液的體積濃度為75%。
6.根據權利要求5所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述氫氧化鈉溶液的質量濃度為10%。
7.根據權利要求6所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四中調pH值 6. 5^6. 8。
8.根據權利要求7所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述減壓干燥溫度為60°C 80°C，減壓干燥時間為6tTl0h。
9.根據權利要求7所述的一種野菊花提取物的制備方法，其特征在于步驟四所述減壓干燥溫度為65°C 75°C，減壓干燥時間為7h 9h。
全文摘要
一種野菊花提取物的制備方法，本發明涉及一種提取物的制備方法。本發明是要解決現有野菊花提取物的制備方法制備的野菊花提取物用于工業生產的多為粗提物，提取物中總黃酮含量低，不能滿足工業化生產的要求的問題。方法如下一、去離子水煎煮野菊花中藥材，濃縮清膏；二、清膏內加水，調pH值，收集上層液體；三、收集乙醇洗脫液；四、回收乙醇，調pH值，濃縮，減壓干燥，得到野菊花提取物。本發明方法的提取物收率較高超過2.5％，獲得的野菊花提取物中總黃酮含量以無水蘆丁(C27H30O16)計，超過80％。本發明用于制備野菊花提取物，該提取物可作為中藥注射劑原料或口服制劑的原料。
文檔編號A61P7/02GK102920767SQ20121048281
公開日2013年2月13日 申請日期2012年11月23日 優先權日2012年11月23日
發明者劉文亮, 賽春梅, 秦緒江, 曲林, 凌雪宇, 單鈺毓, 李殿明, 王英新 申請人:哈藥集團中藥二廠