一種分步酶解提取滸苔多糖的方法
【專利摘要】本發明提供了一種分步酶解提取滸苔多糖的方法，所述方法包括：以滸苔為原料，在除雜粉碎后對滸苔粉末用水進行浸泡，再分別采用果膠酶、纖維素酶和木瓜蛋白酶對滸苔的水浸提液進行分步酶解處理，然后將酶滅活，離心濃縮、乙醇沉淀，最后進行真空干燥，得到滸苔多糖。本發明產率高、產品純度高、耗能低、無污染且保留了較高的生物學活性，適合于滸苔多糖的大規模生產，有益于滸苔資源的開發利用，經濟和社會價值顯著。
【專利說明】一種分步酶解提取滸苔多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種滸苔多糖的提取方法，尤其是涉及一種分步酶解提取滸苔多糖的方法。
【背景技術】
[0002]將苔(Enteromorpha)是一種大型綠藻,俗稱苔條、青海苔等，為綠藻門石藥目石莼科滸苔屬的藻類植物，生長在潮間帶。在中國，滸苔產量很高，尤其是東部沿海。近年來，滸苔的快速繁殖對我國沿海造成污染，為治理滸苔過度繁殖造成的污染，需要耗費大量的人力物力，因此如能對滸苔進行開發利用，不但可治理滸苔污染，同時還能夠變廢為寶。
[0003]自古以來滸苔即為食用和藥用藻類，在《本草綱目》中記載滸苔可“燒末吹鼻止衄血；湯浸搗敷手背腫痛”；《隱身居飲食譜》記載:“清膽，消瘰疬癭瘤，瀉脹、化痰，治水土不月艮。滸苔富含糖類、蛋白質、粗纖維及礦物質，同時還含有脂肪和維生素。近年來的研究證實，滸苔的主要成分水溶性多糖是藥理活性很強的成分，具有顯著的降血脂、抗疲勞、抗菌、抗腫瘤及增強免疫力等多種生物學活性(林文庭.淺談滸苔的開發與利用.中國食物與營#,2007,9:23 ~25)
[0004]目前滸苔多糖的提取最常用的是熱水浸提法(呂玲玲.滸苔水溶性多糖提取工藝的優化研究?安徽農業科學，2009，37 (24):717，756.)，如申請號為201010224578.7的專利申請所述。但是采用熱水浸提法從滸苔中提取多糖的收率較低、雜質含量高，耗能高，活性低。

【發明內容】

[0005]本發明就是針對上述問題，提供了一種產率高、產品純度高、耗能低、無污染且保留較高生物學活性的滸苔多糖的提取方法。
[0006]本發明技術方案所采用的生產工藝過程為:滸苔藻體的除雜、干燥、粉碎——分步酶解一酶的滅活一離心、濃縮、乙醇沉淀一真空干燥。
[0007]具體步驟如下:
[0008]步驟1:將滸苔清洗干凈，60~80°C烘干后粉碎、過篩(20~60目)。稱取所得滸苔粉末，按料液比1: 20~60(w/v，g/ml)加入蒸餾水，充分攪拌，浸泡10~15h，得滸苔
第一浸提液。
[0009]步驟2:向所述滸苔第一浸提液加入酸調節pH值為3.5~4.5，將溫度加熱至40~50°C，加入果膠酶，充分攪拌，酶解I~2h，得滸苔第二浸提液。
[0010]步驟3:向所述滸苔第二浸提液加入堿調節pH值為4.5~5.5，將溫度加熱至50~60°C，加入纖維素酶，充分攪拌，酶解2~4h，得滸苔第三浸提液。
[0011]步驟4:向所述滸苔第三浸提液中加入木瓜蛋白酶，在溫度50~60°C、pH值為
5.0~6.0條件下酶解1~2h，得滸苔第四浸提液。
[0012]步驟5:將上述完成分步酶解后得到的產物加熱至90~100°C，對殘留酶進行滅活，充分攪拌浸泡，處理20~50min，得滸苔第五浸提液。
[0013]步驟6:將滸苔第五浸提液在1000Orpm離心10~15min，上清液過濾后真空濃縮；向濃縮物中加入乙醇，離心沉淀，沉淀物真空干燥，得到滸苔多糖。
[0014]本發明的有益效果:
[0015]本發明采用分步酶解法提取滸苔多糖，在多糖浸提過程中分步加入果膠酶、纖維素酶和木瓜蛋白酶，使其分別在各自酶活力最高的操作環境下處理滸苔浸提液。果膠酶、纖維素酶可水解果膠質和纖維素，有效的溶解細胞壁，使多糖更容易從細胞內釋放出來；木瓜蛋白酶不僅能破壞游離的蛋白質，而且能使多糖結合的蛋白質降解，從而使得多糖更充分溶入水中，因此多糖的提取效率和純度大大提高，并且保留了較高的生物活性。
[0016]利用本發明的提取方法所得成品色澤灰白，多糖得率15.92±1.46%，多糖含量為68.35±4.46%。方法穩定、可靠。體外抗氧化實驗證實，所制備的滸苔多糖對超氧陰離子自由基的清除能力為73.1 %~83.7%，清除能力和Vc相當，且具有劑量效應，說明其具備較強的體外抗氧化活性。
[0017]本發明的整個工藝過程中無污染物排放，適合于大規模生產，有益于滸苔資源的開發利用。
【具體實施方式】
[0018]實施例1
[0019]步驟1:將滸苔清洗干凈，60°C烘干后粉碎、過40目篩。稱取Ikg滸苔粉末，加入20L蒸餾水，充分攪拌，浸泡15h。得滸苔第一浸提液。
`[0020]步驟2:向所述滸苔第一浸提液加入檸檬酸調節pH值為4.0，將溫度加熱至45°C，加入15g果膠酶，充分攪拌，酶解lh，得滸苔第二浸提液。
[0021]步驟3:向所述滸苔第二浸提液加入0.1M氫氧化鈉調節pH值為5.0，將溫度加熱至55°C，加入IOg纖維素酶，充分攪拌，酶解2h，得滸苔第三浸提液。
[0022]步驟4:向所述滸苔第三浸提液中加入30g木瓜蛋白酶，用0.1M氫氧化鈉調節pH值為5.5，在溫度55°C酶解2h，得滸苔第四浸提液。
[0023]步驟5:將上述完成分步酶解后得到的產物加熱至100°C，對殘留酶進行滅活，充分攪拌浸泡，處理30min。得滸苔第五浸提液
[0024]步驟6:將滸苔第五浸提液在1000Orpm離心lOmin，上清液過濾后真空濃縮；向濃縮物中加入濃縮物3倍體積的乙醇，4000rpm離心lOmin，沉淀物真空干燥，得到滸苔多糖156.Sg;多糖含量為68.1 % (采用苯酚-硫酸法測定)；體外抗氧化實驗結果顯示，當滸苔多糖濃度為0.25mg/mL時，對超氧陰離子自由基的清除能力達到76.4%。
[0025]實施例2
[0026]步驟1:將滸苔清洗干凈，60°C烘干后粉碎、過40目篩。稱取Ikg滸苔粉末，加入20L蒸餾水，充分攪拌，浸泡IOh。得滸苔第一浸提液。
[0027]步驟2:向所述滸苔第一浸提液加入檸檬酸調節pH值為4.0，將溫度加熱至40°C，加入IOg果膠酶，充分攪拌，酶解lh，得滸苔第二浸提液。
[0028]步驟3:向所述滸苔第二浸提液加入0.1M氫氧化鈉調節pH值為5.0，將溫度加熱至50°C，加入Sg纖維素酶，充分攪拌，酶解2h，得滸苔第三浸提液。[0029]步驟4:向所述滸苔第三浸提液中加入30g木瓜蛋白酶，用0.1M氫氧化鈉調節pH值為5.5，在溫度55°C酶解2h，得滸苔第四浸提液。
[0030]步驟5:將上述完成分步酶解后得到的產物加熱至100°C，對殘留酶進行滅活，充分攪拌浸泡，處理30min。得滸苔第五浸提液。
[0031]步驟6:將滸苔第五浸提液在1000Orpm離心lOmin，上清液過濾后真空濃縮；向濃縮物中加入濃縮物3倍體積的乙醇，4000rpm離心lOmin，沉淀物真空干燥，得到滸苔多糖150.2g;多糖含量為70.6% (采用苯酚-硫酸法測定)；體外抗氧化實驗結果顯示，當滸苔多糖濃度為0.25mg/mL時，對超氧陰離子自由基的清除能力達到80.7%。
【權利要求】
1.一種分步酶解提取滸苔多糖的方法，其特征在于，包括: 步驟1:將滸苔清洗干凈，60~80°C烘干后粉碎、過篩(20~60目)。稱取所得滸苔粉末，按料液比1: 20~60(w/v, g/ml)加入蒸懼水,充分攪拌,浸泡10~15h,得將苔第一浸提液。 步驟2:向所述滸苔第一浸提液加入酸調節pH值為3.5~4.5，將溫度加熱至40~50°C，加入果膠酶，充分攪拌，酶解I~2h，得滸苔第二浸提液。 步驟3:向所述滸苔第二浸提液加入堿調節pH值為4.5~5.5，將溫度加熱至50~60°C，加入纖維素酶，充分攪拌，酶解2~4h，得滸苔第三浸提液。 步驟4:向所述滸苔第三浸提液中加入木瓜蛋白酶，在溫度50~60°C，pH = 5.0~6.0條件下酶解I~2h，得滸苔第四浸提液。 步驟5:將上述完成分步酶解后得到的產物加熱至90~100°C，對殘留酶進行滅活，充分攪拌浸泡，處理20~50min。得滸苔第五浸提液 步驟6:將將苔第五浸提液在1000Orpm離心10~15min,上清液過濾后真空濃縮；向濃縮物中加入乙醇，離心沉淀，沉淀物真空干燥。
2.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的酸為檸檬酸、鹽酸或磷酸中的一種。
3.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入果膠酶的量相當于滸苔粉末重量體積的1%~3%。
4.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述的堿為氫氧化鈉、氫氧化鉀或氨水中的一種。
5.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入纖維素酶的量相當于滸苔粉末重量體積的0.5%~2%。
6.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，加入木瓜蛋白酶的量相當于滸苔粉末重量體積的3 %~5 %。
7.根據權利要求1所述的提取方法，其特征在于，步驟6中加入濃縮液2~3倍體積的乙醇，于4°C靜置3~4h后離心。
【文檔編號】A61P39/06GK103804503SQ201210486512
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2012年11月13日 優先權日:2012年11月13日
【發明者】唐志紅, 鞠寶, 任育紅, 呂家森, 溫少紅 申請人:煙臺大學