專利名稱：一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法
技術領域：
本發明涉及一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法。
背景技術：
飼料用非淀粉多糖酶是目前飼料工業中應用最廣的飼料酶，主要包括木聚糖酶、 纖維素酶、葡聚糖酶、果膠酶和甘露聚糖酶，它們少部分以單體酶形式使用，大部分以復合酶形式使用。在我國，非淀粉多糖酶占飼料酶市場總量的65%左右。在歐洲和北美，非淀粉多糖酶占飼料酶市場總量的70%左右。對于非淀粉多糖酶的分析測定，無論是單體酶還是復合酶，都很繁瑣，而且分析數據的實用性和重復性也不理想。目前，實驗室的分析底物都是純度比較高而且容易溶于水的聚合物，但是它們實際的天然底物都是不溶于水的聚合物，而且這些聚合物往往相互交聯在一起，組成成分也比較復雜。非淀粉多糖酶對天然底物的降解效率很差，往往只有可溶性底物的5 10%左右，而且很難準確定量。動物飼養試驗雖然直觀，可靠性也比較好，但是試驗的時間太長(至少需要2個月)，成本也很高，在實際生產過程中很難推廣，對于科研過程中要求的快速分析要求甚遠。

發明內容
本發明的目的是提供一種快速檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法。本發明提供的檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法，包括如下步驟以本發明提供的不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進行酶解反應，反應完畢后測定剩余所述底物的干重，按照如下公式計算得到降解效率，根據所得降解效率評價所述待測非淀粉多糖酶的效價
^酶解反應前的底物干重-酶解反應后的乘1J余底物干重ιηηο/
降解效率=-祐如匕認十& 丁去-X100% ο
酶解反應目ij的底物干重該方法所述酶解反應步驟中，酶解溫度選擇飼養動物消化道的溫度。本發明提供的麥麩制備方法，包括如下步驟將麥麩原料浸泡、洗凈后，剔除其中完整的麥粒，再與水混勻后進行糊化反應，加入α -淀粉酶進行反應，反應完畢后再與糖化酶進行反應，反應完畢后得到所述不含淀粉的麥麩。上述方法的所述糊化反應步驟中，溫度為95 100°C，時間為10 15分鐘；所述加入α -淀粉酶進行反應步驟中，溫度為65 70°C ;時間為25 30分鐘；所述與糖化酶進行反應步驟中，溫度為95 100°C，時間為60分鐘。所述α -淀粉酶的酶活為4000u/g ;所述糖化酶的酶活為80000u/g。所述制備不含淀粉的麥麩的方法，還包括如下步驟在所述與糖化酶進行反應完畢后，將產物自然冷卻至室溫后水洗并常溫干燥，得到所述不含淀粉的麥麩。所述水洗次數為3 4次，所述干燥步驟中，時間為20 24小時。
按照上述方法制備得到的不含淀粉的麥麩，也屬于本發明的保護范圍。所述不含淀粉的麥麩中，淀粉的質量百分含量不超過O. 01 %，含水量為8. 0%。本發明提供的快速檢驗飼料用非淀粉多糖酶效價的方法，以消除淀粉的麥麩為分析底物，在設定的溫度和溶液中加入需要分析的飼料用非淀粉多糖酶。這種飼料酶可以是單體酶，也可以是復合酶。經過設定的反應時間以后，經過濾洗滌、干燥，測定殘留底物的干重，計算降解效率，以此作為主要指標評價比較所分析酶的效價。這種試驗方法不僅可以快速檢測單酶在實驗室配制緩沖液中的效價，也可以快速檢測復合酶在實驗室配制的緩沖液中的效價。不僅可以快速檢測單酶在動物消化液中的效價，也可以快速檢測復合酶在動物消化液中的效價。該方法直觀、簡便，不需要很精密的分析儀器，而且能同時檢驗動物消化道的環境對酶蛋白作用效果的影響，從而能更客觀全面地反映這些飼料酶的實際效價。飼料生產企業和養殖戶可以參照上述方法對非淀粉多糖酶的效價進行分析和比較，適用于飼料用非淀粉多糖酶的研究、生產和應用，特別適用于畜禽和水產飼料中非淀粉多糖酶效價的快速檢測。


圖I為緩沖液中的麥麩降解效果。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但本發明并不限于以下實施例。所述方法如無特別說明均為常規方法。所述原料如無特別說明均能從公開商業途徑而得。實施例I :稱取IOkg普通商品麥麩，用60kg清水在常溫(20 30°C )浸泡24小時，清洗其中的泥渣和其它可溶性雜物，撇除漂浮的皮殼和麥秸等粗纖維。用清水反復清洗3次，然后再過濾、擠壓，獲得潔凈的麥麩，其含水量為65%，總重量為25kg。將所得麥麩分批平攤在托盤上，挑除其中沒有破碎的麥粒。這部分沒有破碎的麥粒雖然很少，但是對后期實驗結果的精度有影響，所以必須剔除。在容量為100升的不銹鋼容器中，加入上述獲得的清潔麥麩， 再加入45kg蒸餾水，然后通蒸汽加熱升溫至98°C，保持12分鐘，充分糊化麥麩中殘留的淀粉。然后冷卻至65°C，加入10克淀粉液化酶(α -淀粉酶，酶活為4000u/g，購自北京東華強盛生物工程有限公司，產品目錄號為107658305。)，保持30分鐘。然后逐步加熱至95°C， 再加入20克糖化酶(酶活為80000u/g，購自北京東華強盛生物工程有限公司，產品目錄號為1003301)，保溫60分鐘，以充分糖化殘留的淀粉成為溶解于水的葡糖糖和麥芽糖。自然冷卻至室溫，過濾，擠壓，獲得渣濾，再用蒸餾水清洗濾渣3次，以充分濾除殘留的葡萄糖和麥芽糖，獲得純凈的麥麩，其含水量為65%，重量為22kg。把含水量為65%的22kg麥麩分批平攤在托盤上進行常溫氣流干燥，24小時以后基本達到恒重，得到純麥麩7. 6kg，含水量為8. 0%，殘余淀粉含量不超過O. 01 %，分裝在密封在容器中，于4°C冰箱中保存。實施例2取12個500ml的三角瓶，在每個三角瓶中加入250ml緩沖液(pH值為5. 5，在 5000ml蒸餾水中加入4. 5ml冰醋酸和34. 85克無水醋酸鈉，徹底溶解，醋酸根離子的濃度為
O.lmol/L)，接著再各加入10克實施例I制備所得的麥麩，其含水量為8. O %、淀粉含量不超過O. 01 %，在37°C恒溫放置在水浴中，然后在這12個三角瓶中加入等量的待分析飼料酶 A。每隔30分鐘抽取一個三角瓶，用8層醫用紗布進行過濾，時間不超過2分鐘。過濾結束后，用250ml蒸餾水清洗，3次過后取過濾渣，平攤在不銹鋼托盤上，80°C氣流干燥8小時至恒重，再常溫冷卻2小時，然后稱重，按照如下公式計算得到降解效率，根據所得降解效率評價待分析飼料酶A的效價
權利要求
1.一種檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法，包括如下步驟以權利要求7或8所述不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進行酶解反應，反應完畢后測定剩余所述底物的干重，按照如下公式計算得到降解效率，根據所得降解效率評價所述待測非淀粉多糖酶的效價攸礎袖去—酶解反應前的底物干重-酶解反應后的剩余底物干重I ΛΛ0/酶解反應前的底物干重Χ O。
2.一種制備不含淀粉的麥麩的方法，包括如下步驟將麥麩原料浸泡、洗凈后，剔除其中完整的麥粒，再與水混勻后進行糊化反應，加入α -淀粉酶進行反應，反應完畢后再與糖化酶進行反應，反應完畢后得到所述不含淀粉的麥麩。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于所述糊化反應步驟中，溫度為95 100°C，時間為10 15分鐘；所述加入α -淀粉酶進行反應步驟中，溫度為65 70°C ;時間為25 30分鐘；所述與糖化酶進行反應步驟中，溫度為95 100°C，時間為60分鐘。
4.根據權利要求2或3所述的方法，其特征在于所述α-淀粉酶的酶活為4000u/g ； 所述糖化酶的酶活為80000u/g。
5.根據權利要求2-4任一所述的方法，其特征在于所述制備不含淀粉的麥麩的方法， 還包括如下步驟在所述與糖化酶進行反應完畢后，將產物自然冷卻至室溫后水洗并常溫氣流干燥，得到所述不含淀粉的麥麩。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于所述水洗次數為3 4次，所述干燥步驟中，時間為20 24小時。
7.權利要求2-6任一所述方法制備得到的不含淀粉的麥麩。
8.根據權利要求7所述的麥麩，其特征在于所述不含淀粉的麥麩中，淀粉的質量百分含量不超過O. 01 %。
全文摘要
本發明公開了一種檢測飼料用非淀粉多糖酶效價的方法。該方法，包括如下步驟以本發明提供的不含淀粉的麥麩為底物，將其與待測飼料用非淀粉多糖酶混勻進行酶解反應，反應完畢后測定剩余所述底物的干重，計算降解效率，根據所得降解效率評價所述待測非淀粉多糖酶的效價。該方法不僅可以快速檢測單酶在實驗室配制緩沖液中的效價，也可以快速檢測復合酶在實驗室配制的緩沖液中的效價。不僅可以快速檢測單酶在動物消化液中的效價，也可以快速檢測復合酶在動物消化液中的效價。
文檔編號G01N5/04GK102590013SQ20121000852
公開日2012年7月18日 申請日期2012年1月12日 優先權日2012年1月12日
發明者劉緒同, 曹云鶴, 王園, 王春林, 陸文清 申請人:中國農業大學