專利名稱：清開靈活性組分黃芩苷在制備抗多重耐藥菌的藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及黃芩苷的一種新的醫(yī)藥用途，具體地說是在黃芩苷制備抗多重耐藥菌藥物中的應用。
背景技術：
多重耐藥菌(multiple resistant bacteria)是指有多重耐藥性的病原菌,即一種微生物對三類(比如氨基糖苷類、紅霉素、B —內酰胺類)或三類以上抗生素同時耐藥。其中最為多見的是NDM-1、MDR-TB、MDR-MRSA以及常在I⑶中出現(xiàn)的鮑曼不動桿菌和銅綠假單胞菌。NDM_l(New Delhi metallo-β-lactamase-l,新德里金屬 β -內酸胺酶)，又名 NDM-1細菌，是一種耐碳青霉烯類的酶。NDM-1基因常由質粒攜帶，但也整合在細菌的染色體上， 易于在不同的菌株間傳播和擴散，NDM-1編碼的蛋白單體分子量為28kDa，它的序列和其他MBL的序列相似性很低。NDM-1主要分布在腸桿菌科和鮑曼不動桿菌中，攜帶NDM-1的細菌不但包括條件致病菌，也包括致病菌，如常見的志賀氏菌、霍亂、綠膿假單胞桿菌等。它具有高度耐藥性，幾乎可以水解臨床常用的一線抗菌藥物，包括β_內酰胺類、碳青霉烯類、氟喹諾酮類、氨基糖苷等。長期以來，抗生素藥物的濫用，是催生多重耐藥菌的重要原因。目前，多重耐藥菌感染呈現(xiàn)出增長趨勢，但抗菌藥物選擇方案卻很少，因此重耐藥菌感染已成為全球性棘手問題。黃岑苷(唇形科植物黃岑Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根的提取物，按干燥品計算，含黃芩苷(C21H18011)注射用不得少于90. 0%)為清熱解毒復方中藥清開靈注射液的主要原料藥，具有抑菌、利尿、利膽、抗炎、抗變態(tài)、解痙等作用，臨床用于治療肝炎，對急性黃疸型、急性無黃疸型及慢性肝炎均有明顯療效。開發(fā)和研究黃芩苷更多更好的醫(yī)藥功效，是許多中醫(yī)藥學領域的重要研究課題之一。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的就是要開發(fā)黃芩苷的新醫(yī)藥用途，同時為臨床提供一種可有效拮抗多重耐藥菌的藥物。本發(fā)明的發(fā)明人經(jīng)長期研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷對含NDM-1耐藥基因細菌具有顯著地抑制作用，且與藥物濃度成正比，從而發(fā)明了黃芩苷的一種新的醫(yī)藥用途，即完成了黃芩苷在制備抗多重耐藥菌藥物中的應用。本發(fā)明中所述黃芩苷，可從原料藥商業(yè)銷售渠道購得。黃芩苷原料可按照現(xiàn)有技術所述方法制備成顆粒、沖劑、注射劑、膠囊、片劑等藥物制劑。本發(fā)明中所述的多重耐藥菌是指含有NMD-1基因的多重耐藥菌，包括乙酸鈣不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii,A. baumannii)、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)或含 NDM-1 耐藥基因大腸桿菌(Escherichia coli)。上述含NDM-1耐藥基因檢測菌株為革蘭氏陰性菌，具有較強的致病性和抗生素耐藥性。其中，乙酸鈣不動桿菌和鮑曼不動桿菌可引起肺部感染、傷口及皮膚感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染、菌血癥菌血癥、腦膜炎等，麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌能引起嚴重的呼吸系統(tǒng)感染等，含NDM-1耐藥基因大腸桿菌可引發(fā)對腸道感染且對抗生素具有抗藥性。更進一步地，本發(fā)明還提供了黃芩苷在制備抗乙酸鈣不動桿菌藥物中的應用，SP黃芩苷在制備治療和/或預防乙酸鈣不動桿菌引起的疾病的藥物中的應用。更進一步地，本發(fā)明還提供了黃芩苷在制備抗鮑曼不動桿菌藥物中的應用，即黃芩苷在制備治療和/或預防鮑曼不動桿菌引起的疾病的藥物中的應用。
更進一步地，本發(fā)明還提供了黃芩苷在制備抗嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌藥物中的應用，即黃芩苷在制備治療和/或預防嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌引起的疾病的藥物中的應用。更進一步地，本發(fā)明還提供了黃芩苷在制備抗含NDM-1耐藥基因細菌藥物中的應用，即黃芩苷在制備治療和/或預防含NDM-1耐藥基因大腸桿菌引起的疾病的藥物中的應用。本發(fā)明所述黃芩苷制劑可用于治療上述由含NDM-1耐藥基因多重耐藥細菌引發(fā)的疾病，如含NDM-1耐藥基因多重耐藥細菌引發(fā)的腸道感染、呼吸系統(tǒng)感染、傷口及皮膚感染、泌尿生殖系統(tǒng)感染、菌血癥菌血癥、腦膜炎等，尤其是適用于治療由乙酸鈣不動桿菌、鮑曼不動桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌或含NDM-1耐藥基因大腸桿菌引發(fā)的疾病。本發(fā)明所述藥物制劑在作為本發(fā)明的用途使用時，其具體用量時可根據(jù)臨床實驗以及患者的具體情況確定，也可參照黃芩苷制劑2-5倍的給藥劑量給藥。
具體實施方案以下通過實施例和試驗例來進一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果。效果試驗本藥效學試驗所采用的檢測菌株乙酸I丐不動桿菌(Acinetobactercalcoaceticus, A.calcoaceticus)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii,A.baumannii)和嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia,S. maltophilia),均含有 blaNDM-Ι 耐藥基因；pGEX-4T-NDMl_DH5 α 是含 NDM-1 重組質粒的大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli) ；pGEX-4T-NDM-l-BL21 (在大腸桿菌 BL21 中表達NDM-1)是含NDM-1重組質粒的大腸桿菌(Escherichia coli, E. coli)，其質粒上帶有GST標簽。上述菌株均由中國人民解放軍疾病預防控制所提供。試驗例I黃芩苷提取物對含NDM-1耐藥基因細菌的抑菌效果研究本藥效學試驗所采用的檢測樣品黃芩苷市售，符合中國藥典標準，試驗時需加入適量的注射用水，攪拌使混懸，然后邊攪拌邊緩慢加入5%的氫氧化鈉溶液至黃芩苷全部溶解。配制LB瓊脂培養(yǎng)基，高壓冷卻至60°C時，取黃芩苷提取物，按1:9 (藥物LB，V/V)比例配制不同濃度藥物(0. 005g/ml、0. 01g/ml、0. 015g/ml)平板,瓊脂厚度3_4mm,制備藥物平板，備用。
研究黃芩苷對含NDM-1耐藥基因細菌進行抑菌實驗將4株含NDM-1基因耐藥菌株乙酸鈣不動桿菌、鮑曼不動桿菌、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌及大腸桿菌PGEX-4T-NDM1-DH5 α分別接種于含16 μ g/ml亞胺培南的LB液體培養(yǎng)基中，37°C、200rpm培養(yǎng)過夜，次日菌液用無菌PBS緩沖液稀釋10倍后，分別吸取2 μ I接種于藥物瓊脂平板表面或采用劃線法接種，平板置于37°C孵育24h左右，觀察各菌株生長狀況，得桅子提取物的抑菌性測定結果，見表I。采用瓊脂稀釋法對黃芩苷提取物的最小抑菌濃度(MIC)進行測定，將耐藥菌株接種于不同藥物濃度的瓊脂平板上，37°C孵育24h左右，觀察各菌株生長狀況，抑制菌株不能生長的最小藥物濃度(MIC值)分別為乙酸鈣不動桿菌O. 015g/ml、鮑曼不動桿菌O. 02g/ml、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌 O. 005g/ml、pGEX-4T-NDM-l-BL21>0. 02g/ml。實驗結果表明黃芩苷對耐藥菌株均有抑制作用，隨著藥物濃度的增加，抑制作用明顯增強，說明黃芩苷對含NDM-1耐藥基因耐藥菌都有抑制作用，且抑菌效果明顯；藥物對不同檢測菌株的抗菌能力不同，MIC也有所差異，具有較強的廣譜抗含NDM-1耐藥基因耐藥菌的能力。表I黃芩苷提取物濃度對菌株的影響
權利要求
1.黃芩苷在制備抗多重耐藥菌的藥物中的應用。
2.黃芩苷在制備抗含NDM-1耐藥基因細菌藥物中的應用。
3.黃芩苷在制備抗乙酸鈣不動桿菌藥物中的應用。
4.黃芩苷在制備抗鮑曼不動桿菌藥物中的應用。
5.黃芩苷在制備抗嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌藥物中的應用。
6.黃芩苷在制備抗含NDM-1耐藥基因大腸桿菌藥物中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及清開靈活性組分黃芩苷對乙酸鈣不動桿菌(Acinetobacter calcoaceticus)、鮑曼不動桿菌(Acinetobacter baumannii，A.baumannii)、嗜麥芽寡養(yǎng)窄食單胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)及含NDM-1耐藥基因大腸桿菌(Escherichia coli)具有抑制作用，因此它可用于抑制這些細菌病，用于治療和/或預防這些細菌引起的疾病。
文檔編號A61P31/04GK103006679SQ201210550179
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月17日 優(yōu)先權日2012年12月17日
發(fā)明者劉軍鋒, 袁靜, 張狀年, 黃留玉, 李 東, 王雪松, 姜海 申請人:河北神威藥業(yè)有限公司