專利名稱：轉移因子膠囊的制作方法
轉移因子膠囊技術領域
本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種轉移因子膠囊及其制備方法。
背景技術：
轉移因子(Transfer Factor，簡稱TF)是人或動物致敏白細胞釋放的多種因子中的一種能夠轉移致敏信息的低分子物質。轉移因子具可透析性，能與抗原結合而本身卻無抗原性。轉移因子帶有致敏淋巴細胞的特異性免疫信息，能夠特異的將供者所具有的抗原性及其敏銳的特異性轉移給一個免疫反應陰性的受者，同時受者產生一種遲發型超敏反應能力。轉移因子具有傳遞免疫信息、激發免疫細胞活性、調節免疫機能、增強機體非特異性免疫功能等作用，被譽為T細胞活性的觸發劑，細胞免疫的增強劑、細胞免疫調節劑及干擾素產生啟動劑。
轉移因子自20世紀50年代被發現以來，國內外學者對其研究也從基礎理論研究深入到臨床應用方面。近30多年來廣泛用于治療陰道念珠菌病、球孢子菌病、血吸蟲病、水痘、帶狀皰疹、麻疹、乙型肝炎、多發性硬化癥、急性硬化性全腦炎、巨細胞病毒視網膜炎、麻風病、結核病、細菌性疾病等細胞內感染性疾病和Wiskott-Aldrich綜合征、共濟失調、毛細血管擴張綜合征、慢性皮膚念珠菌病、結節病等自身免疫性疾病，轉移因子還可用于其他如腎病綜合征、類風濕性關節炎、過敏性紫癜、硬皮病、紅斑狼瘡、潰瘍病等，惡性腫瘤、腫瘤病人放化療后的輔助治療。
轉移因子應用于細胞內感染性疾病和自身免疫性疾病的治療具有作用安全、迅速、效果顯著、無藥物殘留、無抗原性、無毒副作用的特點，且來源廣、價格便宜，因此具有廣闊的前景。
從發現轉移因子至今，轉移因子多采用注射給藥，劑型主要是注射液及凍干粉針劑，但以注射給藥方式的患者，特別是老人和兒童，順應性差，使用十分不便。國內外學者的研究證明口服給藥能同樣達到注射給藥的效果，于是自20世紀90年代末開始出現了口服轉移因子劑型，即轉移因子口服液及轉移因子膠囊。但目前市售的轉移因子口服劑型大多處方復雜，含有較多輔料，制劑穩定性差，造成患者服藥后療效不顯著、服藥療程長、治愈率低的問題。發明內容
有鑒于此，本發明的目的在于提供一種處方簡單、穩定性好的轉移因子膠囊及其制備方法。
為實現本發明的目的，本發明采用如下技術方案
一種轉移因子膠囊，由轉移因子干粉、甘露醇和淀粉制成，其中每100重量份含有
轉移因子干粉以多肽計I. 1-1. 6重量份
甘露醇10-40重量份
余量為淀粉。
轉移因子干粉主要是從動物脾臟中分離提取的轉移因子溶液，通過分離純化、濃縮、冷凍干燥得到，具有較高的生物活性，但是較易吸濕。
本發明所述轉移因子膠囊以轉移因子干粉、甘露醇和淀粉為原料制成。甘露醇又稱D-甘露醇，分子量182. 17，是一種人們熟悉的六元醇，與山梨醇為同分異構體。甘露醇是一種不易吸濕、無臭、白色或無色的結晶粉末，具有令人愉快的甜味，甜度約為蔗糖的O. 4 倍，具有多元糖醇的通性，同時具有甜度適宜、熱量低、無毒副作用等特點，在人體生理代謝中，它與其他功能糖醇一樣，與胰島素無關，不提高血糖值，且不致齲齒。作為輔料，在硬膠囊劑中，甘露醇常作為填充劑，流動性好，尤其適用于易于吸濕的物料。淀粉無味、無臭，白色粉末，吸濕性不強，不溶于冷水、乙醇和乙醚，溶于55 60°C熱水中成淀粉糊。是膳食中主要的碳水化合物，是人類和動物能量的主要來源。在制藥工業中用作為藥品的賦形劑、增稠劑、稀釋劑、崩解劑等。通過實驗研究證實，本發明所述轉移因子膠囊中甘露醇、淀粉與轉移因子干粉不發生相互作用，穩定性好，混合后粉末流動性好、吸濕率低，具有較高的生物活性。
進一步的，所述轉移因子膠囊，每100重量份含有
轉移因子干粉以多肽計 I. 4重量份
甘露醇10-30重量份
余量為淀粉。
進一步的，所述轉移因子中含有按重量配比計不得少于O. 037份的核糖。
進一步的,所述膠囊規格為3mg多肽100 μ g核糖。
進一步的，本發明所述轉移因子干粉的制備方法為取轉移因子溶液，通過凝膠色譜層析柱分離純化，收集活力大于10%峰的洗脫液，濃縮、冷凍干燥即得。
其中，所述轉移因子溶液是從豬、牛或雞脾臟中分離提取的。
由于經過粗提的轉移因子溶液含有多種多肽、核苷酸、氨基酸等物質，為確保藥品的安全性，本發明采用凝膠色譜層析法分離純化提取的轉移因子溶液。
轉移因子溶液的濃度對凝膠色譜層析的分離效果影響較大，如果轉移因子溶液的濃度太低，柱層析分析效果好，但是耗時太多，生產周期拉長，成本升高；如果轉移因子溶液的濃度太高，柱子過載，分離效果下降。因此，本發明所述轉移因子濃度優選為IOmg/ mL-20mg/mLo
作為優選，本發明所述凝膠色譜層析柱分離純化過程為
i、裝柱將25%乙醇保存的瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質超聲波脫氣后濕態裝柱；裝柱要求無氣泡、無裂紋、填料分布均勻；柱的徑高比為1:20-5:20，用1-10個柱體積純水平衡層析柱；
U、系統連接將裝好的層析柱下端出液口與紫外檢測器進口連接；層析柱上端進液口與泵系統連接；
iii、加樣取轉移因子溶液小心加于該層析柱的上表面，上樣體積為柱床體積的 5% 35% ;打開柱下端出口，使轉移因子溶液進入凝膠內；
iv、洗脫在層析柱的上表面上加入水，保持液位高度為3cm-5cm，調節洗脫速度為 20mL/min-40mL/min ；
V、收集在214nm紫外檢測器下在線監測，分段收集活力大于10%峰的洗脫液。
本發明所述凝膠色譜層析柱分離純化采用瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質根據以氫鍵相互作用為特征的氫鍵吸附色譜原理，從生物組織提取物、多肽混合物中一步分離純化得到高純度的多肽、氨基酸、核苷酸等物質，克服了傳統純化方法步驟復雜、介質重復利用度低、樣品載量低、生物相容性差、難于規模化等缺點，具有純化工藝簡單、選擇性高、樣品載量聞、介質重復利用度聞等優點。
本發明所述瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質可以為沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質、槲皮素配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質、β -環糊精配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質。
作為優選，本發明所述瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質為沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質。
進一步的，所述沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質為以沒食子酸為配基，以10 μ m-30 μ m粒徑、12%濃度的高交聯度瓊脂糖凝膠為基質的分離介質。本發明所述沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質可以通過商業渠道購買得到，或者按照文獻 或專利公開的制備方法制備得到。
進一步的，步驟iv中，在轉移因子溶液恰好流至與凝膠上表面平齊時，關閉層析柱的下端出口 ；用水清洗加樣區，共洗滌三次；待上次清洗液應完全進入凝膠柱內后，再進行下一次洗滌。
經過凝膠色譜層析法處理前后的轉移因子溶液，通過紫外檢測器進行檢測發現， 處理后的產品中雜質減少，如附圖中的圖I (處理前產品檢測)和圖2 (處理后的產品檢測) 所示，圖2中雜質峰明顯減少，因此轉移因子溶液純度提高。
本發明還提供了所述轉移因子膠囊的制備方法，為按重量配比取轉移因子干粉、 甘露醇和淀粉，將轉移因子干粉、甘露醇與淀粉混合均勻，充填膠囊，即得。本發明采用T細胞活性測定法即脫E受體法對得到的轉移因子膠囊進行活性檢測，測定結果顯示本發明所述制備方法制備得到的轉移因子膠囊的活性明顯較市售的轉移因子產品高，轉移因子膠囊得率為85%，雜質含量低，生物活性穩定在15. 0%以上，均高于國家標準規定。
本發明還提供了所述轉移因子膠囊在制備預防和治療細胞內感染性疾病和自身免疫性疾病藥物中的應用。
本發明提供了一種轉移因子膠囊及其制備方法，本發明所述轉移因子膠囊，由轉移因子干粉、甘露醇和淀粉制成，其中每100重量份含有轉移因子干粉以多肽計I. 1-1. 6 重量份，甘露醇10-40重量份，余量為淀粉。本發明所述轉移因子膠囊中甘露醇、淀粉與轉移因子干粉不發生相互作用，穩定性好，混合后粉末流動性好、吸濕率低，具有較高的生物活性。本發明所述轉移因子膠囊的制備方法為按重量配比取轉移因子干粉、甘露醇和淀粉， 將轉移因子干粉、甘露醇與淀粉混合均勻，充填膠囊，即得。本發明所述制備方法制得轉移因子膠囊雜質減少，產品純度提高，活性明顯較市售的轉移因子產品高。


圖I示常規轉移因子溶液的紫外光譜圖2示經過凝膠色譜層析柱處理后的轉移因子溶液的紫外光譜圖。
具體實施方式
本發明實施例公開了一種轉移因子膠囊及其制備方法。本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
實施例I :
從新鮮豬脾臟分離提取轉移因子溶液，配置成10mg/mL-20mg/mL備用。
裝柱將25%乙醇保存的沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質超聲波脫氣后濕態裝柱；裝柱要求無氣泡、無裂紋、填料分布均勻；柱的徑高比為1:20-5:20，用1-10個柱體積純水平衡層析柱；
系統連接將裝好的層析柱下端出液口與紫外檢測器進口連接；層析柱上端進液口與泵系統連接；
加樣取上述轉移因子溶液小心加于該層析柱的上表面，上樣體積為柱床體積的 5% 35% ;打開柱下端出口，使轉移因子溶液進入凝膠內；
洗脫在層析柱的上表面上加入水，保持液位高度為3cm-5cm，調節洗脫速度為 20mL/min-40mL/min ；
收集在214nm紫外檢測器下在線監測，分段收集不同活性峰的洗脫液。
用T細胞活性測定法一脫E受體法檢測不同活性峰的活力，結果見表I。
表I不同活性峰的活力
權利要求
1.一種轉移因子膠囊，其特征在于，由轉移因子干粉、甘露醇和淀粉制成，其中每100重量份含有 轉移因子干粉以多肽計I. 1-1. 6重量份 甘露醇10-40重量份 余量為淀粉。
2.根據權利要求I所述轉移因子膠囊，其特征在于，每100重量份含有 轉移因子干粉以多肽計I. 4重量份 甘露醇10-30重量份 余量為淀粉。
3.根據權利要求I所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述轉移因子中含有按重量配比計不得少于0. 037份的核糖。
4.根據權利要求I所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述膠囊規格為3mg多肽100i!g核糖。
5.根據權利要求I所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述轉移因子干粉的制備方法為取轉移因子溶液，通過凝膠色譜層析柱分離純化，收集活力大于10%峰的洗脫液，濃縮、冷凍干燥即得。
6.根據權利要求5所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述轉移因子溶液的濃度為IOmg/mL-20mg/mLo
7.根據權利要求5所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述凝膠色譜層析柱分離純化過程為 i、裝柱將25%乙醇保存的瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質超聲波脫氣后濕態裝柱；裝柱要求無氣泡、無裂紋、填料分布均勻；柱的徑高比為1:20-5:20，用1-10個柱體積純水平衡層析柱； ii、系統連接將裝好的層析柱下端出液口與紫外檢測器進口連接；層析柱上端進液口與泵系統連接； iii、加樣取轉移因子溶液小心加于該層析柱的上表面，上樣體積為柱床體積的5% 35%;打開柱下端出口，使轉移因子溶液進入凝膠內； iv、洗脫在層析柱的上表面上加入水，保持液位高度為3cm-5cm，調節洗脫速度為20mL/min-40mL/min ； V、收集在214nm紫外檢測器下在線監測，分段收集活力大于10%峰的洗脫液。
8.根據權利要求7所述轉移因子膠囊，其特征在于，所述瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質為沒食子酸配基瓊脂糖凝膠氫鍵吸附色譜介質。
9.一種權利要求I所述轉移因子膠囊的制備方法，其特征在于，按重量配比取轉移因子干粉、甘露醇和淀粉，將轉移因子干粉、甘露醇與淀粉混合均勻，充填膠囊，即得。
10.權利要求I所述轉移因子膠囊在制備預防和治療細胞內感染性疾病和自身免疫性疾病藥物中的應用。
全文摘要
本發明屬于醫藥領域，公開了一種轉移因子膠囊及其制備方法。本發明所述轉移因子膠囊，由轉移因子干粉、甘露醇和淀粉制成，每100重量份含有轉移因子干粉以多肽計1.1-1.6重量份，甘露醇10-40重量份，余量為淀粉，穩定性好，混合后粉末流動性好、吸濕率低，具有較高的生物活性。本發明所述轉移因子膠囊的制備方法為按重量配比取轉移因子干粉、甘露醇和淀粉，混合均勻，充填膠囊，即得。本發明所述制備方法制得轉移因子膠囊雜質減少，產品純度提高，活性明顯較市售的轉移因子產品高。
文檔編號A61P31/00GK102973603SQ20121055338
公開日2013年3月20日 申請日期2012年12月18日 優先權日2012年12月18日
發明者周天瓊, 周正兵, 俞保彬, 劉顯東, 姚小飛 申請人:杭州華津藥業股份有限公司