阿爾茨海默病中的tau蛋白介導病變的基于蛋白質的療法和診斷的制作方法
【專利摘要】本發明提供結合tau蛋白的有助于啟始和擴散病理性tau蛋白-tau蛋白相互作用的區域的獨特治療和診斷抗體以及它們的片段、部分、衍生物及其變體以及制備它們的方法。本發明也涉及使用那些抗體診斷、預防和治療阿爾茨海默病和相關tau蛋白病變的方法。本發明也提供一種用于防治性和治療性治療阿爾茨海默病和其它神經變性tau蛋白病變的方法。這個方法需要注射會引發針對患者的腦中的病理性tau蛋白和tau蛋白沉積物的免疫反應的抗體和/或肽疫苗。適合疫苗代表攜帶本文提供的一種或多種tau蛋白治療表位的tau肽。
【專利說明】阿爾茨海默病中的TAU蛋白介導病變的基于蛋白質的療法和診斷
[0001]本發明要求2011年9月19日提交的美國臨時申請61/536，339和2012年5月30日提交的美國臨時申請61/653，115的優先權益，所述申請的內容均以引用的方式并入本文。
[0002]序列表
[0003]本申請含有已通過EFS網以ASCII格式提交且據此以引用的方式整體并入本文的序列表。2012年9月13日創建的所述ASCII拷貝名為SEQUENCE_LISTING.txt且大小為155,400 字節。
[0004]領域
[0005]本發明的特征在于用于干擾某些形式的tau蛋白的產生和清除的基于蛋白質(例如抗體、肽)方法和手段，所述某些形式的tau蛋白涉及阿爾茨海默病(Alzheimer’sdisease)中的病理性tau蛋白-tau蛋白聚集體的促成和/或進展；以及用于產生適用于診斷和治療阿爾茨海默病的抗tau蛋白抗體的方法。本發明進一步涉及用于診斷阿爾茨海默病的方法和手段，包括用于分級和評估治療進展的方法。
[0006]背景
[0007]阿爾茨海默病( AD)是一種破壞高級腦結構，如涉及于記憶和認知中的那些腦結構的進行性神經變性病癥。所述疾病導致認知功能缺陷和記憶、學習、語言衰退以及進行有意和有目的活動的能力衰退。AD也伴隨相伴行為性、情緒性、人際性和社會性退化。這些認知和行為缺陷致使生活困難(Burns等，2002)。晚期AD患者常不能說話、理解語言和處理他們自己的基本個人護理，最終需要專職護理和監視，且常依賴于家庭成員和療養院。AD是老年性癡呆的主要病因，且預測隨著人口中的年長人士的比例增長，發病率會增加。預測患有AD的人士的總數僅在2000年與2050年之間即會增加至少三倍，從而致使AD成為世界范圍內的公共健康問題(Sloane等，2002)。臨床管理AD仍主要是支援性的。也就是說，治療患者的目的是預防、控制或減輕來自AD的并發癥和副作用，以及提高他們的生活舒適性和質量。對直接靶向疾病過程且具有疾病改善作用的治療仍然存在未滿足的需要。
[0008]AD的組織學特征在于在腦中存在神經元外斑塊以及細胞內和細胞外神經原纖維纏結。斑塊主要由β淀粉狀蛋白(Αβ)組成，而纏結包含病理性形式的tau蛋白，如病理性tau蛋白構象異構體及其聚集體。斑塊和纏結與疾病過程之間的關系仍不清楚，但研究表明淀粉狀蛋白與tau蛋白發病機制之間存在關聯(Hardy等，1998 ；0ddo等，2004 ；Rapoport 等，2002 ;Roberson 等，2007 ;Shipton 等，2011)。Αβ 在 AD 病變中的主要作用初始是在稱為“ A β級聯”的假設中提出，其中在A β沉積之后是tau蛋白磷酸化和纏結形成，且接著神經元死亡(Hardy和Allsop, 1991 ；Hardy和Selkoe, 2002 ;對于綜述，參見Walsh和Selkoe, 2004 ;也參見Seabrook等2007)。因此，針對AD的初始治療方法主要集中在靶向A β。然而，有文件證明在AD患者的腦A β病變程度與疾病臨床進展之間缺乏關聯(Braak和Braak，1991)。此外，無癥狀個體在尸體解剖時已顯示廣泛性，常常彌漫性淀粉狀蛋白沉積(Braak和Braak, 1991),且至少在早期AD中，神經元損失和淀粉狀蛋白沉積發生在不同腦區域中(Carter和Lippa, 2001)。因此,單獨祀向Αβ不足以改變任何或所有患者中的疾病過程。然而，正經歷在AD患者中進行的臨床試驗的最先進疾病靶向療法仍是旨在A β的產生和清除的那些療法。這些療法包括被動免疫療法，例如巴品珠單抗(BAPINEUZUMAB)、蘇蘭珠單抗(SOLANEUZUMAB)和波恩珠單抗(PONEZUMAB);以及小分子Y -分泌酶抑制劑司馬西特(SEMAGACESTAT)(對于綜述，參見Citron等，2010)。
[0009]已在眾多研究中證明tau蛋白在AD病變中的一公認作用。舉例而言，Braak顯示AD神經變性的最密切關聯是存在tau蛋白纏結而非淀粉狀蛋白斑塊(Braak和Braak, 1991)。在另一研究中，培養的神經元中的A β神經毒性似乎取決于tau蛋白(Rapoport等，2002)。近來,降低內源性tau蛋白防止了表達人淀粉狀蛋白前體蛋白的轉基因小鼠的行為缺陷而不改變它們的高A β水平(Roberson等，2007)。Tau蛋白降低也保護轉基因小鼠與非轉基因小鼠兩者免遭興奮性毒性。同上。Santacruz等在tau蛋白病變模型中證明降低tau蛋白的量恢復了記憶功能(Santacruz等，2005)。因此，旨在降低tau蛋白的療法可代表一種用于治療AD和其它tau蛋白相關疾病狀況的有效策略。
[0010]Tau蛋白屬于固有無序蛋白質家族，所述固有無序蛋白質的特征在于在它們的生理環境中不存在剛性三維結構(Zilka等，2008)。然而，tau蛋白截短和過度磷酸化可導致自固有無序狀態向多種可溶性及不溶性錯誤無序結構(包括成對螺旋纖維(PHF)和其它聚集體)的病理性轉化(Wischik 等,1988a ；ffischik 等,1988b ；Novak 等,1993 ；Skrabana等,2006 ；Zilka等,2008 ；Kovacech等,2010)。這些結構變化導致獲得毒性功能、損失天然蛋白質的生理功能，或兩者(Zilka等,2008 ；Kovacech等,2010)。
[0011]Tau蛋白的生理功能在于介導微管蛋白單體裝配成構成神經元微管網狀結構的微管(Buee等，2000)。Tau蛋白通過位于蛋白質的C末端部分中的重復區域結合微管。同上。這些重復結構域(R1-R4)彼此不相同，但包含高度保守的31-32個氨基酸(Taniguchi等，2005b)。在人腦中，存在因在tau蛋白的N末端部分中存在或不存在某些氨基酸以及在蛋白質的C末端處的3種(R1、R3和R4)或4種(R1-R4)重復結構域而彼此不同的6種獨特tau蛋白亞型。也參見圖1，其顯示6種人亞型(2N4R、1N4R、2N3R、0N4R、1N3I^P0N3R)。已提出tau蛋白用以誘導微管聚合的最強力部分是覆蓋R1-R2的274-KVQIINKK-281區域(SEQID NO: 113) 0同上。此外，tau蛋白的病理和生理功能似乎受由全長蛋白質亞型及其片段所采用的特定結構構象和固有無序結構影響。舉例而言，Kontsekova等描述某些截短tau蛋白分子內與那些截短tau蛋白分子關于微管裝配的功能具有重大關系的構象區域(涵蓋殘基 297-1KHVPGGGSVQIVYKPVDLSKVTSKCGSL-325 (SEQ ID NO: 114)) (W02004/007547)。
[0012]除它們的生理作用之外，tau蛋白重復序列被認為參與形成病理性tau蛋白聚集體和其它結構。因此，對能夠區分生理性重復序列介導活性與病理性重復序列介導活性的tau蛋白靶向治療和診斷方法存在需要。舉例而言，病理性成對螺旋纖維(PHF)的鏈霉蛋白酶(pronase)抗性核心由3重復tau蛋白亞型和4重復tau蛋白亞型的微管結合區組成(Jakes 等,1991 ；ffischik 等 1988a ；ffischik 等 1988b)。此外，Novak 等顯不 PHF 的長度為93-95個氨基酸的蛋白酶抗性核心限于3個串聯重復序列(Novak等，1993)。Von Bergen等確定最小tau肽/相互作用基元(306-VQIVYK-311 ;SEQ ID NO: 115)以及tau蛋白上的第二位點(275-VQIINK-280) (SEQ ID NO: 116)，所述基元和所述第二位點形成β折疊且被描述為潛在負責啟始病理性tau蛋白聚集體PHF的形成(Von Bergen等，2000 ；EP1214598 ；W02001/18546)。對于tau蛋白的功能圖譜，參見圖2。因此，當前策略旨在產生不破壞tau蛋白在微管穩定化方面的細胞內作用的抗聚集藥物。
[0013]此外，盡管在生理情況下，tau蛋白被視為細胞內細胞質蛋白，但細胞內tau蛋白可被釋放至細胞外間隙中且促進神經變性(G0meZ-RamOS等，2006)。實際上，神經元損失已與神經原纖維纏結(由tau蛋白組成)在AD腦中的局部解剖分布相關聯(West等，1994 ；Gomez-1sla等，1996，1997)。此外，總tau蛋白和磷酸化tau蛋白的水平在AD患者的腦脊髓液(CSF)中增加(Hampel等，2010)，且細胞外tau蛋白已被描述為腦中指示細胞內tau蛋白釋放至細胞外間隙中的“鬼影纏結(ghost tangle) ”(Frost和Diamond, 2009)。此外,細胞外tau蛋白聚集體可進入細胞且刺激細胞內tau蛋白纖維化,從而進一步播種(seeding)用于產生病理性tau蛋白聚集體的tau蛋白單體(Frost等，2009)。所述研究已強調細胞外不溶性tau蛋白可充當可傳播劑來以朊病毒樣方式遍及腦散布tau蛋白病變(Frost等，2009 ；Frost和Diamond, 2009)。清除細胞外tau蛋白纏結可減輕tau蛋白相關細胞外和細胞內病變。參見例如Asuni等，2007。因此，對能夠通過阻礙細胞外tau蛋白的形成、促進其清除，或兩者來降低細胞外tau蛋白的治療以及對降低細胞內疾病tau蛋白的治療存在需要。
[0014]總而言之，盡管tau蛋白似乎在AD的臨床顯現方面起病理性作用,但針對tau蛋白起作用的藥物的開發已落后，此部分歸因于tau蛋白在生理性微管動力學中的重要性和其復雜生物學(Dickey和Petrucelli, 2006)。然而,對潛伏在病理性tau蛋白轉化以下的分子機制的了解增加已開啟出于治療目的特異性靶向病理性tau蛋白修飾的可能性。因此，已出現直接或間接祀向tau蛋白級聯的許多治療方法(對于綜述文章,參見例如Dickey和 Petrucelli, 2006 ；Schneider 和 Mandelkow, 2008 ；Zilka 等,2008)，包括預防或逆轉 tau蛋白聚集的化合物(Wischik 等,1996 ；Necula 等 2005 ；Pickhardt 等,2005 ；Taniguchi等，2005a ；Larbig等，2007)、抑制tau蛋白激酶或活化tau蛋白磷酸酶的小分子型藥物(Iqbal 和 Grundke-1qbal, 2004 ；Noble 等,2005 ；Iqbal 和 Grundke-1qbal, 2007)、微管穩定化藥物(Zhang等，2005)、有助于錯誤折疊tau蛋白的蛋白水解降解的藥物(Dickey等,2005 ；Dickey 等 2006 ；Dickey 和 Petrucelli, 2006)和免疫抑制藥物(Zilka 等,2008)以及包括主動和被動免疫的免疫治療策略(Schneider和Mandelkow等，2008 ；Zilka等，2008 ;Tabira, Τ.Immunizat1n Therapy for Alzheimer disease:A ComprehensiveReview of Active Immunizat1n Strategies.Tohoku J.Exp.Med.，220:95-106(2010))。
[0015]更一般而言，自2007年以來，新型單克隆抗體(mAb)已以每年超過40種的速率進入臨床研究。在2010年結束時，在美國有至少25種mAb和5種Fe融合蛋白處于2/3期或3期臨床研究中(Reichert，2011)。這個趨勢說明被動免疫療法是治療包括AD的人病癥中的一種發展方法。參見例如Citron等，2010。實際上，盡管AD治療面對克服血腦屏障(BBB)的障礙，但日益增長數目的臨床前和臨床研究報道抗體介導的療法可自腦清除AD聚集體，且提出多種作用機制，如(i)抗體通過在AD中改變的BBB滲透性或BBB泄漏而攝取至腦中；(ii)抗體充當可溶性斑塊形成性淀粉狀蛋白物質的“外周血沉槽(peripheralsink)”;(iii)抗體分泌性細胞自外周進入腦中，從而局部遞送抗體；以及(iv)在細胞內和跨越細胞轉運IgG。對于綜述,參見例如Citron等，2010以及Asuni等，2007。因此,革巴向疾病形式的tau蛋白的治療抗體代表一種治療和/或診斷AD和其它tau蛋白病變的有希望方法(W02004/007547、US2008/0050383)。
[0016]一種用以靶向tau蛋白病變的免疫療法方法基于抗tau蛋白抗體可防止tau蛋白聚集、清除tau蛋白聚集體，或兩者的見解。盡管研究已描述結合tau蛋白序列的抗體，且那些抗體中的一些據報道會干擾tau蛋白聚集和清除(Asuni等，2007),但尚無單克隆抗tau蛋白抗體據報道正經歷AD的體內臨床前或臨床試驗。實際上，預測一種mAb在鼠類tau蛋白的微管結合結構域內具有3個結合位點(即在R3、R4和可能Rl處)，但其不阻斷微管結合。(Dingus等，1991)。Dingus未描述這個抗體對tau蛋白聚集的作用，且因此沒有理由相信Dingus將阻斷tau蛋白聚集。在其它報道中，產生區分tau蛋白亞型的mAb,但又未暗示這些mAb將對tau蛋白聚集具有任何影響(DeSilva等，2003 ;Ueno等，2007)。Taniguchi等證明某些針對Rl或R2的抗tau蛋白mAb在體外抑制tau蛋白聚集成PHF,同時促進tau蛋白誘導的微管蛋白裝配(Taniguchi等，2005b)。Taniguchi的RTA-1和RTA-2抗體分別特異性結合Rl和R2。兩種抗體皆不結合一個以上tau蛋白重復序列且兩種抗體皆未被報道針對對tau蛋白聚集或清除的體內影響加以測試。盡管在AD的基于被動免疫療法(即向患者施用抗體的療法)的臨床試驗中存在至少3種抗淀粉狀蛋白抗體，但尚無用于AD的基于被動tau蛋白免疫療法的臨床測試報告可用。
[0017]在AD的若干APP轉基因小鼠研究中發現一種主動免疫方法(即患者的身體自身產生針對靶標的免疫性的方法)有效清除A β沉積物且逆轉神經病理性病變(參見例如Schenk 等，1999 ；Janus 等，2000 ；Morgan 等，2000 ；Sigurdsson 等，2001)。近來，在 tau 蛋白纏結病變的小鼠模型中，采用磷酸化tau表位(Tau蛋白379-408[P-Ser396、404])的主動免疫療法降低了聚集tau蛋白在腦中的程度且減緩了行為表型的進展(Asuni等，2007 ；Boutajangout 等 2010 ；US2008/0050383 ；US/2010/00316564)。所治療的動物產生在腦中檢測到且與識別病理性tau蛋白的抗體共定位的抗tau蛋白抗體(Asuni等，2007)。這個免疫治療方法在動物中的功能性損傷的早期階段(5個月)實質上比后期階段(8個月)更有效，表明清除早期階段病理性tau蛋白可具有治療益處(Asuni等，2007 ；Zilka等，2008)。實際上，了解到并非所有tau蛋白都易受影響或可能甚至適于破環和清除。一些研究者已表明破壞tau蛋白聚集體可增加毒性中間體物質的豐度，而其它研究者已表明可檢測tau蛋白聚集體不必定有毒且可甚至起保護作用(Lee等，2005)。因此，盡管用以靶向tau蛋白的免疫治療方法已顯示臨床前希望，但對特異性靶向消除其會產生提高的持續益處的早期異常形式的tau蛋白的治療劑仍然存在需要。然而，也仍然需要鑒定作為免疫療法的適合靶標的那些tau蛋白種類。
[0018]為此,開發針對tau蛋白的mAb的另一考慮是鑒定和表征各種結構形式的tau蛋白(生理性、早期疾病性、晚期疾病性)和tau蛋白病變的所靶向階段。Oddo等觀察到在AD的轉基因小鼠模型中，盡管A β免疫療法清除A β斑塊和早期tau蛋白病變，但成熟tau蛋白聚集體保持完整(Oddo等，2004)。類似地，盡管神經原纖維纏結繼續積累，但在tau蛋白病變的P301L tau蛋白模型中，tau蛋白表達的遺傳性(非免疫治療性)降低改善了記憶力(Santacruz 等，2005)。
[0019] 盡管AD盛行，但其仍是神經學中的最大未滿足醫學需要(Citi*On，2010)。最普遍醫學方法在于提供甚至在治療數年之后也不有效的對癥療法。用于AD的新型治療方法和策略需要超越針對癥狀的治療以預防認知衰退且抵抗疾病的基礎病理性過程。具體來說，需要開發單獨或與其它AD靶向藥物組合干擾疾病的至少一些最早期階段的分子。所述分子將提供早期診斷(此可自身提高治療結果)、預防和治療AD的新型有利選項。
[0020]發明概述
[0021]在一個實施方案中，本發明提供一種分離的抗體，其中所述抗體結合一種或多種tau表位且能夠展現兩種或更多種以下性質:
[0022]a)顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力；
[0023]b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及
[0024]c)介導由小神經膠質細胞對病理性tau蛋白的攝取和降解；
[0025]且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促進區。
[0026]在一實施方案中，這個分離的抗體是如此以致一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0027]1.相對于 tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0028]i1.相對于 tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0029]ii1.相對于 tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0030]iv.相對于 tau 441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
[0031]在某些實施方案中，具有先前段落的實施方案中所述的性質的分離的抗體能夠結合選自以下的一種或多種形式的病理性tau蛋白:人阿爾茨海默病患者的腦活檢中、來自阿爾茨海默病的動物模型的腦樣本中、或兩者中的錯序tau蛋白、錯誤無序tau蛋白、肌氨酰(sarkosyl)不溶性tau蛋白、神經原纖維纏結、神經原纖維網線和神經炎斑塊。在某些實施方案中，分離的抗體是如此以致至少一種其識別的表位是構象表位。
[0032]在一個實施方案中，本發明提供一種分離的抗體，其中所述抗體結合一種或多種tau表位且能夠展現兩種或更多種以下性質:
[0033]a)顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力；
[0034]b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及
[0035]c)介導由小神經膠質細胞對病理性tau蛋白的攝取和降解；
[0036]且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促進區。
[0037]在一實施方案中，這個分離的抗體是如此以致一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0038]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0039]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0040]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0041]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0042]在一實施方案中，這個分離的抗體是如此以致一種或多種其結合的表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0043]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0044]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0045]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0046]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)；
[0047]且所述抗體包含:
[0048]a)抗體輕鏈可變區，所述抗體輕鏈可變區包含:
[0049]1.用于 CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)或 SEQ ID NO: 247 ；
[0050]i1.用于 CDR2 的 WAS (SEQ ID NO: 118)或 SEQ ID NO: 253 ;和
[0051]ii1.用于 CDR3 的 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)或 SEQ ID NO: 255、257、258、259 和260的任一者；以及
[0052]b)抗體重鏈可變區，所述抗體重鏈可變區包含:
[0053]iv.用于CDRl 的GYIFTDYVIS(SEQ ID NO:120),SEQ ID NO:261 或SEQ ID NO:262 ；
[0054]V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121),SEQ ID N0:264 或 SEQ ID NO:265 -M
[0055]v1.用于 CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO:122), SEQ ID NO: 266, SEQ ID NO:267或 SEQ ID NO:269。
[0056]本發明也提供一種以構象特異性方式結合tau蛋白上的一種或多種表位的分離的抗體，其中:
[0057]a)所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0058]1.相對于 tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0059]i1.相對于 tau44 1 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0060]ii1.相對于 tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0061]iv.相對于 tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)；
[0062]b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；以及
[0063]c)所述表位的零者、兩者、三者或四者是構象表位。
[0064]本發明也提供一種以構象特異性方式結合tau蛋白上的一種或多種表位的分離的抗體，其中:
[0065]a)所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0066]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0067]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0068]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0069]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0070]b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；以及
[0071]c)所述表位的零者、兩者、三者或四者是構象表位。
[0072]在一個實施方案中，這個抗體是DC8E8，其中DC8E8是一種由在美國典型培養物保藏中心(American Type Culture Collect1n)專利保藏號PTA-11994下保藏的雜交瘤產生的抗體。
[0073]在某些實施方案中，分離的抗體結合tau蛋白上與由DC8E8結合的那些表位相同的表位的一者或多者。在一實施方案中，分離的抗體與單克隆抗體DC8E8競爭結合tau蛋白。
[0074]本發明也提供一種分離的抗體，所述分離的抗體在其表位結合結構域中包含一種或多種選自以下的互補決定區(CDR)序列:
[0075]1.QSLLNSRTRKNY(SEQ ID NO:117)
[0076]i1.WAS (SEQ ID NO: 118)
[0077]ii1.KQSFYLRT(SEQ ID NO:119)
[0078]iv.GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
[0079]v.1FPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
[0080]v1.ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO:122)。
[0081]本發明也規定先前段落中所述的任何實施方案中所述的任何抗體都可是如此以致分離的抗體包含:
[0082]a)抗體輕鏈可變區，所述抗體輕鏈可變區包含:
[0083]1.用于 CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)；
[0084]i1.用于 CDR2 的 WAS(SEQ ID NO: 118);和
[0085]ii1.用于 CDR3 的 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119);以及
[0086]b)抗體重鏈可變區，所述抗體重鏈可變區包含:
[0087]iv.用于 CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
[0088]V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
[0089]v1.用于 CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)。
[0090]本發明也規定先前實施方案中所述的任何抗體都可是如此以致分離的抗體包含:
[0091]a) 一種或多種來自單克隆抗體DC8E8的輕鏈⑶R序列或一種或多種在與這些輕鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%、90%或95%同一性的序列；和
[0092]b) 一種或多種來自單克隆抗體DC8E8的重鏈⑶R序列或一種或多種在與這些重鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%、90%或95%同一性的序列；
[0093]且其中:
[0094]1.所述輕鏈 CDR 包含選自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118)和 KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)的序列；以及
[0095]i1.所述重鏈 CDR 包含選自 GYIFTDYVIS (SEQ ID NO: 120)、IFPRSGST (SEQ IDNO: 121)和 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)的序列。
[0096] 本發明也規定先前實施方案中所述的任何抗體都可由以下組成或包含以下:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、任何其它抗原結合片段；或其抗原結合抗體部分；具有一種或多種以下免疫結合特征:
[0097]1.抗體以構象特異性方式結合一種或多種tau表位，其中:
[0098]a)所述一種或多種tau表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0099]1.相對于 tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)；
[0100]i1.相對于 tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99)
[0101]ii1.相對于 tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0102]iv.相對于 tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)；
[0103]b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；
[0104]c)所述表位的一者、兩者、三者或四者是構象表位；
[0105]2.抗體結合兩種或更多種tau表位且能夠顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力,其中所述兩種tau表位選自以下位置內的表位:
[0106]V.相對于 tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO:98)；
[0107]v1.相對于 tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO:99)
[0108]Vi1.相對于 tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和
[0109]vii1.相對于 tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
[0110]本發明也規定先前實施方案中所述的任何抗體都可由以下組成或包含以下:Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、任何其它抗原結合片段；或其抗原結合抗體部分；具有一種或多種以下免疫結合特征:
[0111]1.抗體以構象特異性方式結合一種或多種tau表位，其中:
[0112]a)所述一種或多種tau表位各自獨立地選自以下位置內的表位:
[0113]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0114]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0115]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0116]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0117]b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；
[0118]c)所述表位的一者、兩者、三者或四者是構象表位；
[0119]2.抗體結合兩種或更多種tau表位且能夠顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力,其中所述兩種tau表位選自以下位置內的表位:
[0120]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0121]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0122]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0123]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0124]本發明也涉及與先前實施方案中所述的任何分離的抗體競爭結合tau蛋白的任何分離的抗體。在一個實施方案中，當相對于分離的DC8E8測試與tau蛋白的結合時，分離的抗體競爭結合tau蛋白。
[0125]在一些實施方案中，抗體包含包括SEQ ID N0.:141的輕鏈。在一些實施方案中，抗體包含包括SEQ ID N0.: 138的輕鏈。在一些實施方案中，抗體包含包括SEQ ID N0.: 141的輕鏈和包括SEQ ID N0.:138的輕鏈。
[0126]本發明規定由本發明提供的抗體可選自:
[0127]a)單克隆抗體；
[0128]b)多克隆抗體；
[0129]c)重組抗體；
[0130]d)嵌合抗體；
[0131]e)人源化抗體；
[0132]f)人抗體；和
[0133]g) (a)至(f)的任一者的抗原結合片段或抗原結合部分。
[0134]由本發明提供的任何分離的抗體都可在哺乳動物中產生。在某些實施方案中，分離的抗體是由重組動物或由重組宿主細胞產生。
[0135]本發明規定本文提供的任何分離的抗tau蛋白抗體都可是如此以致其用一種或多種標記劑可檢測地標記。在某些實施方案中，至少一種標記劑選自酶、放射性同位素、熒光團、核磁共振標記物和重金屬。
[0136]在一些實施方案中，抗體包含至少一種連接于抗體分子的藥物(組合藥劑)。
[0137]本發明也提供編碼先前實施方案中所述的任何抗tau蛋白抗體的免疫球蛋白鏈的至少一種CDR或至少結合結構域或可變區的分離的核酸。也提供包含那些核酸的任一者的分離的載體。在一些實施方案中，本發明提供一種包含這些分離的核酸和載體的一者或多者的分離的宿主細胞。
[0138]在某些實施方案中，本發明提供一種表達先前實施方案中所述的任何抗tau蛋白抗體的分離的細胞系。在一個實施方案中，分離的細胞系是雜交瘤。在一個實施方案中，分離的細胞系是自其產生單克隆抗體DC8E8的雜交瘤，且所述細胞系已于2011年7月13日以ATCC專利保藏編號PTA-11994保藏在美國典型培養物保藏中心(Manassas, VA, USA)。
[0139]本發明提供本文提供的任何抗tau蛋白抗體、核酸和細胞作為藥物或制造用于診斷、預防或治療阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的藥劑的用途。
[0140]在一些實施方案中，抗體包含在醫藥組合物中，所述醫藥組合物進一步包含藥學上可接受的載體和/或稀釋劑。在一個實施方案中，醫藥組合物包含抗體與藥學上可接受的載體和/或稀釋劑的組合，其中所述組合包含至少兩種不同抗體，且其中所述抗體各自獨立地選自先前實施方案中所述的抗體。在一個實施方案中，至少一種抗體是DC8E8或人形式的DC8E8或人源化形式的DC8E8。
[0141]在一些實施方案中，抗體包含在組合物中，所述組合物進一步包含稀釋劑和/或載體。組合物可為醫藥組合物、診斷組合物或任何其它組合物。在一些實施方案中，組合物可進一步包含至少一種選自以下的化合物或試劑:可檢測標記、匙孔血藍蛋白(keyholelimpet hemocyanin)、破傷風類毒素或源于其它病原細菌的類毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲狀腺球蛋白、卵球蛋白、通用T細胞表位、細胞因子、趨化因子、白介素1- a (IL-1 α )、IL-1 β、IL_2、IL_10、干擾素-Y (IFN_ y )、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞炎性蛋白I α (M I F I a )、M I F I β和RANTES (在活化后受調控，由正常T細胞表達和分泌)。
[0142]本發明也提供一種供醫藥或診斷使用的制品(例如試劑盒)，所述制品包括包裝材料和容器，所述容器包括凍干形式的任何一種或多種本文提供的抗tau蛋白抗體的溶液。在某些實施方案中，容器是用于向受試者遞送抗體的裝置或系統的組成部分。
[0143]在一些實施方案中，本發明提供一種包括如本文提供的抗tau蛋白抗體(參見上文)的醫學裝置，其中所述裝置適于通過至少一種選自以下的模式接觸或施用所述抗體:胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、鞘內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內和經皮。
[0144]在一個實施方案中，本發明涉及一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種本文提供的抗tau蛋白抗體。在一些實施方案中，所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
[0145] 在某些實施方案中，本發明涉及一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種本文提供的抗tau蛋白抗體。
[0146]在另一實施方案中，本發明提供一種針對受試者中存在阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變，或針對確定受試者顯現阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的風險來診斷或篩選受試者的方法，所述方法包括:
[0147]a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如本文提供的抗tau蛋白抗體接觸；以及
[0148]b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
[0149]在一相關實施方案中，本發明提供一種針對受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的存在、進展、消退或穩定化，或針對確定受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的階段來監測受試者的方法，所述方法包括:
[0150]a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種本文提供的抗tau蛋白抗體接觸；以及
[0151]b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在和/或特征，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
[0152]在一些實施方案中，抗體是靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鼻內、腦室內、鞘內或以氣霧劑形式施用。
[0153] 在治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法和改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法的一些實施方案中，各抗體的每劑有效量是所述受試者的每kg體重對應至少Img。在一些實施方案中,各抗體的每劑有效量是每kg受試者體重對應至少10mg。在一些實施方案中，歷經至少6個月的時期以多次劑量施用至少一種抗體。在一些實施方案中，向人受試者外周施用抗體以施加其有益作用。在一些實施方案中，在向人受試者外周施用時，抗體結合可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白或兩者。在一些實施方案中，在向人受試者外周施用時，抗體結合tau蛋白，其中tau蛋白呈一種或多種選自以下的病理性形式:人阿爾茨海默病患者的腦活檢中、來自阿爾茨海默病的動物模型的腦樣本中的錯序tau蛋白、錯誤無序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神經原纖維纏結、神經原纖維網線和神經炎斑塊。在一些實施方案中，在向人受試者外周施用時，抗體施加一種或多種效應子功能介導的對受試者的有益作用。在一些實施方案中，通過將抗體表達性細胞注射/植入至受試者的腦中來將抗體遞送至外周中。在一些實施方案中，抗體表達性細胞是雜交瘤細胞。在一些實施方案中，雜交瘤細胞是表達DC8E8的雜交瘤。
[0154]在某些相關實施方案中，本發明提供一種分離的肽，其中:
[0155]a)所述分離的肽是tau蛋白的長度是至少6個氨基酸殘基、長度是至少7個氨基酸殘基、長度是至少9個氨基酸殘基、長度是至少10個氨基酸殘基、長度是至少12個氨基酸殘基或長度是30個氨基酸殘基的片段；以及
[0156]b)所述分離的肽包含tau蛋白治療表位。
[0157]在一些相關實施方案中，治療表位包括選自以下位置內的那些的治療表位:
[0158]1.相對于 tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG(SEQ ID NO:98)；
[0159]i1.相對于 tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG(SEQ ID NO:99)
[0160]ii1.相對于 tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG(SEQ ID NO: 100);和
[0161]iv.相對于 tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG(SEQ ID NO: 101)。
[0162]在某些相關實施方案中，本發明提供一種分離的肽，其中:
[0163]a)所述分離的肽是tau蛋白的長度是至少6個氨基酸殘基、長度是至少7個氨基酸殘基、長度是至少9個氨基酸殘基、長度是至少10個氨基酸殘基、長度是至少12個氨基酸殘基或長度是30個氨基酸殘基的片段；以及
[0164]b)所述分離的肽包含tau蛋白治療表位。
[0165]在一些相關實施方案中，治療表位包括選自以下位置內的那些的治療表位:
[0166]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0167]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0168]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0169]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0170]在一些相關實施方案中，治療表位選自:
[0171]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)；
[0172]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0173]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和
[0174]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0175]在其它實施方案中，分離的肽是選自以下的序列:SEQ ID NO: 1-4, SEQ IDN0:9-101 和 SEQ ID NO: 108-112、NIKAVPGGGS(SEQ ID NO: 200)、NIKHVPGGGS(SEQ IDNO:201), IKHVPGGGS(SEQ ID NO:202)、KHVPGGGSV(SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ(SEQ IDNO:204), VPGGGSVQ(SEQ ID NO:205), GffSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC(SEQID NO:251)、ANIKHVPGGGS(SEQ ID NO:144)、DAIKHVPGGGS(SEQ ID NO:146)、DNAKHVPGGGS (SEQ ID NO: 149)、DNIAHVPGGGS (SEQ ID NO: 151)、DNIKAVPGGGS (SEQ IDNO: 159), DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及 DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171)。
[0176]在其它實施方案中，分離的肽是選自以下的序列:SEQ IDN0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO:271(KHQPGGG)、SEQ IDNO:272(HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、 SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、 SEQ IDNO:277 (HVPGGG)、SEQ ID NO: 280 (DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO: 281 (HHKPGGG)、SEQID NO:282(HKPGGG)和 SEQ ID NO:283(THVPGGG)。
[0177]在其它實施方案中，分離的肽是選自以下的序列:SEQ IDN0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO: 271 (KHQPGGG)、SEQ ID NO: 272 (HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、SEQ IDNO:277 (HVPGGG)、SEQ ID NO: 280 (DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO: 281 (HHKPGGG)、SEQID NO:282 (HKPGGG)和 SEQ ID NO: 283 (THVPGGG);且治療表位選自:
[0178]1.相對于 tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG (SEQ ID NO:223)；
[0179]i1.相對于 tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)
[0180]ii1.相對于 tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO:224);和
[0181]iv.相對于 tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
[0182]在其它實施方案中，分離的肽是選自以下的序列:SEQ ID NO: 272 (HQPGGG)和SEQID NO:277(HVPGGG)?
[0183]在某些實施方案中，分離的肽在至少一種選自測量肽的以下能力的測定的測定中具有活性:
[0184]a)與tau蛋白競爭結合單克隆抗體DC8E8的能力；
[0185]b)體內降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力；
[0186]c)體內促進tau蛋白自腦清除的能力；
[0187]d)體內降低AD的至少一種生物化學標記物的水平的能力；
[0188]e)體內降低神經原纖維纏結(NFT)載荷的能力；
[0189]f)體內提高至少一種神經行為參數的能力；
[0190]g)有益改進受試者的AD的過程的能力；
[0191]h)降低腦中、腦脊髓液中或兩者中的tau蛋白的水平的能力；和/或
[0192]i)在制備能夠與單克隆DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體中充當免疫原的能力。
[0193]本發明也涉及包含本文提供的任何分離的肽和部分的化合物。在某些實施方案中，所述部分在肽的N末端、C末端或連接于內部氨基酸，且其中所述部分選自以下一者或多者:半胱氨酸殘基、磷酸基團、匙孔血藍蛋白、破傷風類毒素或源于其它病原細菌的類毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲狀腺球蛋白、卵球蛋白、通用T細胞表位、細胞因子、趨化因子、白介素l-α (IL-Ια)、IL-1 β , IL_2、IL-10、干擾素-gamma (IFN-gamma)、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬細胞炎性蛋白1α(ΜΙΡ1α)、ΜΙΡ1β和RANTES (在活化后受調控，由正常T細胞表達和分泌)。
[0194]也提供包含一種或多種由本發明提供的分離的肽和/或化合物以及藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑的醫藥組合物。在一些實施方案中，醫藥組合物適合于提供劑量在Ing與1mg之間的肽或化合物。在某些實施方案中，醫藥組合物適合于提供劑量大于10微克的肽或化合物。
[0195]本發明也涉及一種供醫藥或診斷使用的制品(例如試劑盒)，所述制品包括包裝材料和容器，所述容器包括由本發明提供的凍干形式的肽和/或化合物的溶液。在一些實施方案中，容器是用于向受試者遞送肽或化合物的裝置或系統的組成部分。
[0196]也提供包括如由本發明提供的肽、化合物和/或肽/化合物組合物的醫學裝置，其中所述裝置適于通過至少一種選自以下的模式接觸或施用所述抗體:胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、鞘內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內和經皮。
[0197]在相關實施方案中，本發明提供一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的如由本發明提供的至少一種肽和/或至少一種化合物。在一些實施方案中，所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
[0198]在相關實施方案中，本發明提供一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的如由本發明提供的至少一種肽和/或至少一種化合物。
[0199]在這些治療、預防或改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法的一些中，包括一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向人患者施用如由本發明提供的肽和/或化合物和/或增大免疫反應的佐劑，所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的AD相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
[0200]本發明也提供一種產生能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括用如由本發明提供的至少一種肽和/或至少一種化合物使受試者免疫。在一些實施方案中，至少一種肽是選自以下任一者的肽:SEQ ID NO: 1-4、SEQ ID N0:9-101和 SEQ ID NO: 108-112、NIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 201)、IKHVPGGGS (SEQ ID NO:202),KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ (SEQ ID NO: 204)、VPGGGSVQ (SEQ ID NO: 205)、GffSIHSPGGGSC (SEQ ID NO: 250)、SVFQHLPGGGSC (SEQ ID NO: 251)、ANIKHVPGGGS (SEQ IDNO:144)、DAIKHVPGGGS(SEQ ID NO:146)、DNAKHVPGGGS(SEQ ID NO:149)、DNIAHVPGGGS(SEQID NO: 151)、DNIKAVPGGGS (SEQ ID NO: 159)、DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171) ?在一個實施方案中，肽選自SEQ ID N0:l_4。在另一實施方案中，肽是SEQ ID N0.108。在一個實施方案中，肽是GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250) ?在某些實施方案中，肽是SVFQHLPGGGSC (SEQ ID N0:251)。在某些實施方案中，肽選自SEQID N0:270(TENLKHQPGGGK) ；SEQ ID NO:271(KHQPGGG)、SEQ ID NO:272(HQPGGG) ；SEQ ID N0:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS), SEQ ID NO:276(KHVPGGG)、 SEQID NO:277(HVPGGG)、SEQ ID NO:280(DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO:281(HHKPGGG)、SEQ ID NO:282 (HKPGGG)和 SEQ ID NO: 283 (THVPGGG)。在其它實施方案中，肽選自 SEQ IDNO:272(HQPGGG)和 SEQ ID NO:277(HVPGGG)。
[0201]也提供一種分離DC8E8或分離能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗體與如由本發明提供的肽和/或化合物接觸。
[0202]在相關實施方案中，本發明提供一種針對受試者中存在阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變，或針對確定受試者顯現阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的風險來診斷或篩選受試者的方法，所述方法包括:
[0203]a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如由本發明提供的抗體接觸；以及
[0204] b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
[0205]在某些實施方案中，本發明提供一種針對阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的存在、進展、消退或穩定化，或針對確定受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的階段來監測受試者的方法，所述方法包括:
[0206]a)使所述受試者、或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如由本發明的至少一個實施方案提供的抗體接觸(例如施用)；以及
[0207]b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在和/或特征，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
[0208]在針對阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的存在、進展、消退或穩定化，或針對確定受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的階段來監測受試者的方法的一些實施方案中，抗體、肽和/或化合物是靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鼻內、腦室內、鞘內或以氣霧劑形式施用。在一些實施方案中，各肽和/或化合物的有效量是每劑至少I μ g、每劑至少?ο μ g、每劑至少100 μ g。在一些實施方案中，各肽和/或化合物的有效量是在佐劑存在下每劑至少10 μ g,以及在不存在佐劑下每劑至少100 μ g。在一些實施方案中，歷經至少6個月的時期以多次劑量施用至少一種肽或化合物。
[0209]根據一相關實施方案，本發明提供一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的如由本發明提供的至少一種抗體和/或至少一種肽和/或至少一種化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和王動免疫劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。在一些實施方案中，所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
[0210]在一相關實施方案中，本發明提供一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的如由本發明提供的至少一種抗體、至少一種肽和/或至少一種化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
[0211]在治療、預防或改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法的一些實施方案中，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向人患者施用有效量的如由本發明提供的至少一種抗體、至少一種肽和/或至少一種化合物和/或增大免疫反應的佐劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和王動免疫劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑；其中所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的AD相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
[0212]在治療、預防或改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法的一些實施方案中，在施用如由本發明提供的抗體、肽和/或化合物之前、與之同時、或之后施用組合藥劑。
[0213]在一相關實施方案中，本發明也提供一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含藥學上可接受的載體和/或稀釋劑；和
[0214]a)如由本發明提供的抗體；和/或
[0215]b)如由本發明提供的肽；和/或
[0216]c)如由本發明提供的化合物；
[0217]以及至少一種選自以下的組合藥劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性憐Ife酷酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。在一些實施方案中，抗體是DC8E8。在某些實施方案中，抗體包含至少一個來自DC8E8的⑶R。在一些實施方案中，抗體包含至少一個來自DC8E8的可變鏈(輕鏈或重鏈)。在某些實施方案中，可使用人源化或人形式的DC8E8。在一些實施方案中，至少一種肽選自以下任一者:SEQ ID NO: 1-4、SEQ ID NO:9-101 和 SEQ ID NO: 108-112、NIKHVPGGGS (SEQ ID N0:201)、IKHVPGGGS (SEQ ID NO: 202)、KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203),HVPGGGSVQ(SEQ ID NO:204)、VPGGGSVQ(SEQ ID NO:205)、GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC (SEQ ID NO: 251)、ANIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 144)、DAIKHVPGGGS (SEQ IDNO:146)、DNAKHVPGGGS(SEQ ID NO:149)、DNIAHVPGGGS(SEQ ID NO:151)、DNIKAVPGGGS(SEQID NO: 159)、DNIKHAPGGGS (SEQ ID NO: 161)以及 DNIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 171)。在一個實施方案中，肽選自SEQ ID NO: 1-4。在另一實施方案中，肽是SEQ ID N0.:108。在一個實施方案中，肽是GWSIHSPGGGSC (SEQ ID NO:250) ?在某些實施方案中，肽是SVFQHLPGGGSC (SEQID NO: 251)。在某些實施方案中，肽選自 SEQ ID NO: 270 (TENLKHQPGGGK) ；SEQ IDNO:271(KHQPGGG)、SEQ ID NO:272(HQPGGG) ；SEQ ID NO:275(ENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGGS)、SEQ ID NO: 276 (KHVPGGG)、SEQ ID NO: 277 (HVPGGG)、SEQ IDNO:280(DNIKHVPGGGSVQIVYKPV), SEQ ID NO:281(HHKPGGG)、 SEQ ID NO:282(HKPGGG)和SEQ ID NO:283 (THVPGGG)。在其它實施方案中，肽選自 SEQ ID NO: 272 (HQPGGG)和 SEQ IDNO:277(HVPGGG)。
[0218]實施方案的其它目標和優勢將部分地闡述于隨后描述中，且部分地將根據描述顯而易知，或可通過實施實施方案加以認識。實施方案的目標和優勢將借助于隨附權利要求中特別指出的要素和組合來實現和獲得。
[0219]應了解上文一般性描述與下文詳述兩者均僅具有示例性和說明性且不限制如所要求的實施方案。
[0220]并入本說明書中且構成本說明書的一部分的【專利附圖】

【附圖說明】若干實施方案且連同描述一起用于說明實施方案的原理。本文論述的公布僅因其公開內容在本申請的提交日期之前而提供。它們都出于所有目的以引用的方式整體并入本文。本文中沒有內容應解釋為承認本發明由于先前發明而無權先于所述公布。此外，提供的公布日期可不同于可需要獨立確認的實際公布日期。
[0221]附圖簡述
[0222]圖1:人tau蛋白的六種亞型的示意圖。
[0223]圖2:人tau蛋白(2N4R)的示意性功能圖。圖2將“VQIINK”和“VQIVYK”分別公開為 SEQ ID NOl 16 和 115。
[0224]圖3:DC8E8可變區的核苷酸和氨基酸序列及其與最密切小鼠生殖系序列的比對。所述圖顯示核苷酸(SEQ ID NO: 165) (A)和氨基酸(按照出現順序分別是SEQ ID N0141(用于可變輕鏈)和117-119 (用于其CDR的各者，根據IMGT) ; (B) DC8E8的可變輕(VL)鏈區域的序列(比對按照出現順序分別公開SEQ ID N0166和168);和(C)DC8E8的可變輕鏈V基因與最密切小鼠生殖系序列IGKV8-2f01的比對(比對按照出現順序分別公開SEQ ID NO 166和167 ;隨后是DC8E8的VL J基因(SEQ ID NO: 168)與最密切小鼠J基因IGKJ1*01 (SEQ IDNO: 169)的比對)。所述圖顯示DC8E8的可變重鏈的核苷酸(SEQ ID NO: 170)(在D中)和氨基酸序列及其三個CRD (按照出現順序分別是SEQ ID N0171和120-122)序列。在(F)中顯示DC8E8的以下比對:首先，DC8E8的可變重(VH)鏈V基因(SEQ ID N0172)與最密切小鼠生殖系序列IGHV1-81*01(SEQ ID N0172);其次，DC8E8的可變重(VH)鏈D基因(SEQ IDN0174)與最密切小鼠生殖系序列IGHD2-14*01(SEQ ID N0175);以及最后，DC8E8的可變重(VH)鏈J基因(SEQ ID N0176)與最密切小鼠生殖系序列IGHJ4*01 (SEQ ID N0177)。也顯示DC8E8K輕鏈恒定區的序列(SEQ ID NO: 178) (G)和重鏈恒定區的序列(SEQ ID NO: 179)(H)。在蛋白質序列(B)和(E)中對互補決定區(CDR)加下劃線且根據MGT編號系統加以鑒定。
[0225]圖4:DC8E8可變輕(VL)鏈序列(分別是SEQ ID NO 166 (V基因)和168 (J基因))與最密切人生殖系VL基因(按照出現順序分別是SEQ ID N0180-181)的比對。
[0226]圖5:DC8E8可變重(V H)鏈序列(分別是用于V、D和J基因的SEQ ID N0172U74和176)與最密切人生殖系VH基因(按照出現順序分別是SEQ ID N0182-183和185)的比對。
[0227]圖6:使用ELISA通過tau蛋白缺失突變體對DC8E8的表位定位。(A)用于DC8E8表位定位的tau蛋白的示意圖，和(B)它們的氨基酸序列(按照出現順序分別是SEQ IDN0186-197、102、104 和 198-199)。(C)ELISA 讀數。DC8E8 識別以下 tau 蛋白:Δ 358-441,Λ 421-441、Λ 134-168、Λ 1-220、Λ1_126、2N4R、2N3R、Δ (1-296 ；392-441)和 Δ (1-150 ；392-441)/4R。DC8E8 不識別以下 tau 蛋白:Λ 222-427、Λ 306-400、Λ 228-441、Λ 300-312、Λ 257-400、Λ 137-441、Λ 283-441。
[0228]圖7:㈧和⑶分別是用于表位定位的合成肽(按照出現順序分別是SEQ IDΝ0206、207、208、2、210、211、212、3、214、215、4、217、26、219、36、221、222、109 和 88)及其序列的示意圖。(C)通過ELISA用合成肽對DC8E8的表位定位。⑶tau蛋白內DC8E8能夠結合的表位的示意圖。DC8E8能夠結合四個單獨結合區的的任一者，其中所述結合區各自是名為表位I至4的單獨表位。四個表位各自分別位于tau蛋白的第I (I號表位)、第2 (2號表位)、第3 (3號表位)和第4 (4號表位)重復結構域內。如所不，四個DC8E8表位各自分別涵蓋在以下氨基酸序列的各者之一內:分別是267-KHQPGGG-273(SEQ ID N0:98)(在tau蛋白的第I重復結構域內)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99)(在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重復結構域內)和
361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101)(在 tau 蛋白的第 4 重復結構域內)。
[0229]圖8: (A)人tau蛋白氨基酸序列(SEQ ID NO: 225)與來自其它物種的tau蛋白序列(按照出現順序分別是SEQ ID N0226-245)的比對。全長人tau蛋白用于比對；僅顯示來自比對的人tau蛋白的氨基酸265-368。對包含人tau蛋白和所比對序列上的四個單獨DC8E8表位的區域加框且用粗體顯示。(B)顯示6種tau肽(按照出現順序分別是SEQ ID N0201-205 和 200)與 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R(SEQ ID NO: 199)競爭結合抗體DC8E8的能力的競爭ELISA，所述抗體DC8E8能夠識別tau蛋白-tau蛋白聚集中涉及的至少一種 tau 表位，(C)顯示 7 種 tau 肽(SEQ ID N0144、146、149、151、159、161 和 171)與tau Λ (1-150 ;392-441)/4R競爭結合抗體DC8E8的能力競爭ELISA，所述抗體DC8E8能夠識別tau蛋白-tau蛋白聚集中涉及的至少一種tau表位。
[0230]圖9:(A).用以表征DC8E8與tauΛ (1-150 ;392_441)/4R 和 2N4R 的結合的表面等離子體共振(SPR)。(B).用以表征DC8E8與tau Δ (1-150 ;392_441) /3R和2N3R的結合的表面等離子體共振(SPR)。
[0231]圖10: (A).DC8E8 結合 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R 和 tau 蛋白 2N4R 的締合和解離速率，如通過 SPR 所測定。(B).DC8E8 結合 tau Λ (1-150 ;392_441)/3R 和 tau 蛋白 2N3R 的締合和解離速率，如通過SPR所測定。用于測量中的濃度指示在圖中，虛線是通過電腦程序BIA評估軟件4.1 (Biacore AB)根據用于動力學參數計算的測量數據加以內插。
[0232]圖11:單克隆抗體DC8E8能夠區分臨床前AD、臨床初期AD和充分發展的末期AD。DC8E8顯示對處于人臨床前AD布拉克氏第I階段的早期階段(tau蛋白單體、二聚體)的病理性tau蛋白的染色。(A).抗體識別以下階段:病理性tau蛋白寡聚物(箭號)和病理性tau蛋白聚合物(纏結)(箭頭)。(B).在充分發展的阿爾茨海默病(末期-布拉克氏第VI階段)中，DC8E8主要識別呈神經原纖維纏結(箭頭)、神經炎斑塊(在圓圈內部)和神經炎線(在五邊形內部)形式的病理性tau蛋白聚合物(C).標尺:100 μ m。單克隆抗體DC8E8識別阿爾茨海默病中的所有發展階段的纏結構造(D).DC8E8識別早期發展階段的纏結構造-單體、二聚體和早期寡聚階段(Dl)、和晚期寡聚纏結前階段(D2)以及晚期發展階段的病理性tau蛋白聚合物-細胞內(D3)和細胞外神經原纖維纏結(D4)。箭頭指示在金字塔形海馬神經元內部的小寡聚tau蛋白聚集體(Dl)。標尺:10μπι
[0233]圖12: (A)單克隆抗體DC8E8識別轉基因大鼠SHR72中的神經原纖維變性。DC8E8識別tau蛋白寡聚階段(箭號)和纏結階段(箭頭)的tau蛋白神經變性。此外，抗體與位于軸索纖維中的錯誤折疊tau蛋白(在矩形內部)反應。(B)在年齡匹配的對照大鼠腦中，抗體不顯示神經元內染色。標尺:20μπι。與人阿爾茨海默病中一樣，DC8E8也識別轉基因大鼠腦(SHR72)中的所有發展階段的纏結構造。DC8E8識別早期發展階段的纏結構造-單體、二聚體和早期寡聚階段(C)、和晚期寡聚纏結前階段(D)以及晚期發展階段的病理性tau蛋白聚合物-細胞內(E)和細胞外神經原纖維纏結(丟失核)(F)。(C)中的箭頭指示在神經元內部的小寡聚tau蛋白聚集體(A)。標尺:10μπι
[0234]圖13: (A)DC8E8 對表達 tau Λ (1-150 ;392_441)/3R 的 SHR24轉基因大鼠的皮質中的神經原纖維纏結的染色。(B)DC8E8識別表達tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的轉基因大鼠SHR72的腦干中的神經原纖維纏結。用甲基綠對組織切片進行對比染色。箭號-神經原纖維纏結。標尺:50μηι
[0235]圖14:單克隆抗體DC8E8識別自轉基因大鼠模型SHR24(同型皮質)和阿爾茨海默病患者(包括海馬、內嗅和顳葉皮質的異型皮質組織)分離的腦樣本中的可溶性tau蛋白⑷與不溶性tau蛋白⑶兩者。箭頭-人截短tau蛋白，箭號-大鼠內源性tau蛋白。對于可溶性tau蛋白部分,每個泳道裝載15 μ g蛋白質。對于不溶性tau蛋白部分,將團塊溶解于體積是IS的1/50的Ix十二烷基硫酸鈉(SDS)樣本裝載緩沖液中，裝載與在可溶性部分的情況下相同的體積。單克隆抗體DC8E8識別自阿爾茨海默病患者(包括海馬、內嗅和顳葉皮質的異型皮質組織)(C)和自轉基因大鼠模型SHR72(腦干)(D)分離的腦樣本中的可溶性tau蛋白㈧與不溶性tau蛋白⑶兩者。箭號-生理性人tau蛋白㈧和大鼠內源性ta u蛋白(B)，箭頭-在SHR72大鼠的神經元中以轉基因形式表達的人截短tau蛋白(tau Λ (1-150 ；392-441)/4R) (D)。對于可溶性tau蛋白部分，每個泳道裝載15 μ g總蛋白。對于不溶性tau蛋白部分，將團塊溶解于體積是IS的1/50的Ix十二烷基硫酸鈉(SDS)樣本裝載緩沖液中，裝載與在可溶性部分的情況下相同的體積
[0236]圖15:DC8E8在基于熒光的tau蛋白纖維化測定中抑制病理性tau蛋白_tau蛋白相互作用。TauA (1-150 ;392_441)/4R(圖 15A)或 tau Λ (1-296 ;392_441)/4R(圖 15B)由肝素誘導來經受構象變化和纖維化，如通過硫代黃素T熒光所測量JHSmAb DC8E8、Rab50和DCll阻止病理性構象變化的能力。
[0237]圖16:通過使用HRP綴合的mAb DC25進行免疫印跡來分析DC8E8阻止由截短tau蛋白tau Λ (1-296 ;392_441)/4R形成tau蛋白二聚體、三聚體和寡聚物的抑制潛力。
[0238]圖17:由小神經膠質細胞BV2細胞對Tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的攝取和降解。單獨(I μ Μ)或與單克隆抗體 DC8E8(ly MtauA (1-150 ;392_441)/4R+1 μ MDC8E8)復合添加Tau Λ (1-150 ;392_441)/4R至小鼠BV2細胞中。在孵育各種時長(2、4、6和12小時)之后，用酸洗滌BV2細胞，提取細胞蛋白質且通過用全tau蛋白抗體DC25進行蛋白質印跡來分析內化tau蛋白的水平。對細胞溶解產物中(細胞內tau蛋白)(A)和細胞培養基中(細胞外tau蛋白)(B)的TauA (1-150 ;392_441)/4R進行免疫標記。用抗小鼠HRP綴合的抗體觀察DC8E8抗體。每個泳道裝載20 μ g蛋白質。
[0239]圖18:如通過ELISA測試的DC8E8在37°C下的穩定性(保存期限)。在儲存數月(1、2、3和4個月)之后，抗體識別tau Λ (1-150 ;392_441)/4R。棒條代表如所指示的抗體連續稀釋度。一式三份進行測量。
[0240]圖19:DC8E8識別且靶向人阿爾茨海默病的腦組織中的錯誤折疊(患病)tau蛋白。(A)用全tau蛋白DC25抗體進行的蛋白質印跡分析:
[0241]I)自人阿爾茨海默病的腦組織生物化學提取病理性tau蛋白(Greenberg和Davies, 1989)；
[0242]2)模擬抗體(Rab50)不識別tau蛋白；
[0243]3)DC8E8識別且靶向人阿爾茨海默病的腦組織中的錯誤折疊(患病)tau蛋白；以及
[0244](B)麗春紅S染色:2)、3)用于實驗中的抗體量(Rab50和DC8E8)的控制。
[0245]圖20:DC8E8識別且靶向AD的SHR72大鼠模型的腦組織中的錯誤折疊(患病)tau蛋白。(A)用全tau蛋白DC25抗體進行的蛋白質印跡分析:
[0246]4)自人阿爾茨海默病的腦組織生物化學提取病理性tau蛋白(Greenberg和Davies, 1989)；
[0247]5)模擬抗體(Rab50)不識別tau蛋白；
[0248]6)DC8E8識別且靶向人阿爾茨海默病的腦組織中的錯誤折疊(患病)tau蛋白；以及
[0249](B)麗春紅S染色:2)、3)用于實驗中的抗體量(Rab50和DC8E8)的控制。
[0250] 圖21:在體內，DC8E8靶向轉基因大鼠(SHR72)的腦中的病理性形式的tau蛋白且將病理性tau蛋白自腦轉運至外周血液中。(A)DC8E8處理的動物的血清中的DC8E8抗體的濃度分別達到466、200和273 μ g/ml。(B)觀察到DC8E8_tau蛋白復合物自腦體內轉運至外周血液中。病理性tau蛋白達到平均血清濃度350pg/ml。由DC8E8達成的tau蛋白主動轉運消除來自腦的病理性tau蛋白。另一方面，在用識別狂犬病病毒的模擬抗體(Rab50) (Macikova等，1992)處理的動物的血清中未檢測到tau蛋白。通過Innotest hTAUELISA (Innogenetics, Belgium)測定處理的動物的血清中的tau蛋白的濃度。圖顯示連同標準平均誤差(SEM)的平均值。大鼠A-C的8個棒條各自指示不同連續血清稀釋度(從左至右，自100倍至12，800倍)。
[0251]圖22:DC8E8單克隆抗體自轉基因大鼠(SHR72)的腦移除病理性tau蛋白。(A)相較于模擬處理的動物(右側版面)，腦內施用DC8E8(左側版面)自神經元移除(箭號)病理性tau蛋白。(B)對模擬處理的動物和DC8E8處理的動物的神經元中的病理性tau蛋白的量的定量顯示用DC8E8處理的動物中的病理性tau蛋白的量根本性降低(p〈0.0001)。
[0252]圖23:在細菌中表達的單克隆抗體DC8E8的重組scFv片段(scDC8E8v)識別病理性錯誤無序tau Λ (1-150 ;392-441)/4R。(A)對對照BL21細菌和具有scDC8E8v表達質粒的細菌的通過10% SDS-PAGE加以分離的粗溶解產物的考馬斯亮藍染色:泳道1，對照BL21細菌的粗溶解產物；泳道2，表達scDC8E8v的BL21細菌的粗溶解產物；和泳道M，蛋白質分子量標記物(Page Ruller預先染色蛋白質階梯#SM0672, Fermentas)。(B)麗春紅S染色的含有tau蛋白的硝酸纖維素膜:泳道1，tauA (1-150 ;392_441)/4R，500ng ;泳道 2，tau Λ (1-150 ;392_441)/4R，250ng ;泳道 3，tau Δ (1-150 ;392_441)/4R，125ng ;泳道4tau Δ 228-441, 50ng ;和泳道M,蛋白質分子量標記物。(C)蛋白質印跡/含有tau蛋白的硝酸纖維素膜，所述tau蛋白如B)中加以裝載，用來自表達scDC8E8v的細菌的溶解產物檢測。⑶蛋白質印跡/含有tau蛋白的硝酸纖維素膜，所述tau蛋白如B)中加以裝載，用陰性對照細菌溶解產物顯色。
[0253]圖24:單克隆抗體DC8E8的重組scFv片段(scDC8E8v)展現與DC8E8抗體-選擇性識別tau Λ (1-150 ;392-441)/4R類似的tau蛋白結合性質。(A)通過SPR測定scDC8E8v結合AD tau Λ (1-150 ;392_441)/4R的動力學親和力。⑶通過SPR測定scDCSESv結合tau蛋白2N4R的動力學親和力。(C) scDC8E8v結合的速率常數(k締合和k解離)和締合平衡常數。
[0254] 圖25:鑒定scDC8E8v結合位點中影響scDC8E8v/DC8E8識別錯誤無序tau蛋白的殘基。(A)在自具有scDC8E8v表達質粒(wt)及其突變形式的BL21細菌的粗溶解產物分離蛋白質之后，聚丙烯酰胺凝膠的考馬斯亮藍染色。各編號泳道對應于相應克隆編號(例如泳道2對應于2-VL-R33A)。表達的單鏈蛋白質由星號指示。對照細菌培養物不表達單鏈蛋白質。(B)麗春紅S染色的含有tau蛋白的硝酸纖維素膜:泳道I, tau Δ (1-150 ；392-441)/4R，500ng ；泳道 2，tauΔ (1-150 ;392_441)/4R，250ng ；泳道 3，tauΔ (1-150 ；392-441)/4R, 125ng。(C)對含有tau蛋白的硝酸纖維素膜的蛋白質印跡,所述tau蛋白如B)中加以裝載，用來自表達scDC8E8v(wt凝膠)或其一種突變形式(印跡1-VL-N31A至22-VH-G102A)的細菌的溶解產物檢測。
[0255]圖26: (A)在殘基261與373之間的放大區域(SEQ ID N0.246)內具有陰影框中所示的分別為SEQ ID N098-101的四個DC8E8表位的tau蛋白2N4R(SEQ ID NO: 102)的示意圖。(I)用作主動疫苗或用于純化DC8E8抗體等的重疊tau蛋白源性肽免疫原的示意圖，所述免疫原包含由DC8E8抗體識別的tau蛋白的四個區域的至少一者；(2)具有任選部分的其它修飾和設計肽和化合物的一般可能性。⑶對自用肽SEQ ID N01-8和108處理的轉基因大鼠(3冊72，表達七&11八(1-150 ；392-441)/4R)的腦干制備的不溶性tau蛋白的免疫印跡分析的概述。用各種mAb進行免疫印跡分析以確定具有以下AD相關表位的不溶性tau蛋白的降低:mAb DC25 (tau 蛋白 347-353)、mAb DC217 (tau 蛋白 pThr217)、mAb DC209 (tau 蛋白 pThr231)、mAb AT8 (tau 蛋白 pSer202/pThr205)和 mAb AT270 (tau 蛋白 pThrl81)。(C)對自用與佐劑組合的 tau 蛋白 251-PDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINK-280(SEQ ID NO:1)處理的大鼠和自用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的密度計量免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0256]圖 27:對用 tau 蛋白 251-PDLKNVKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINK-280 (SEQ ID NO:1)處理的模擬AD的轉基因大鼠(SHR72)的神經行為評估。在第5劑免疫原之后10天，轉基因大鼠用于行為測試。圖代表平均值土SEM。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0257]圖28:用tau肽SEQ ID NO:1對轉基因大鼠SHR72疫苗接種導致神經原纖維纏結(NFT)載荷降低49%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0258]圖 29:對自用 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ IDNO:2)連同佐劑處理的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的定量免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0259]圖 30:對用 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ ID NO: 2)處理的轉基因大鼠(SHR72)的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0260]圖31:用tau肽SEQ ID NO: 2對轉基因大鼠SHR72疫苗接種導致神經原纖維纏結(NFT)載荷降低60%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0261]圖 32:對自用具有磷酸化 Ser262 的 tau 蛋白 256-VKSKIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLS-285 (SEQ ID NO: 2)連同佐劑處理的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的定量免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0262]圖33:用tau肽SEQ ID NO:2/磷酸基對轉基因大鼠SHR72疫苗接種導致神經原纖維纏結(NFT)載荷降低77%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0263]圖 34:對自用 tau 蛋白 259-KIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQ-288 (SEQ IDNO:3)連同佐劑處理的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的定量免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0264]圖 35:對用 tau 蛋白 259-KIGSTENLKHQPGGGKVQIINKKLDLSNVQ-288 (SEQ ID NO: 3)處理的轉基因大鼠(SHR72)的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0265]圖36:用tau肽SEQ ID NO: 3對轉基因大鼠SHR72疫苗接種導致神經原纖維纏結(NFT)載荷降低58%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0266]圖 37:對自用 tau 蛋白 275-VQIINKKLDL SNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304(SEQ IDNO:4)處理的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的定量免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0267]圖38.用tau肽SEQ ID N0:4對轉基因大鼠SHR72疫苗接種顯示神經行為參數中度提高。(A)橫桿行走測試(3.5cm橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5cm橫桿)。(C)神經量表。數據是以平均值連同標準平均誤差一起的形式呈現。
[0268]圖39:用tau肽SEQ ID N0:4對轉基因大鼠SHR72疫苗接種導致神經原纖維纏結(NFT)載荷降低66%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0269]圖 40:對自用 tau 蛋白 201-GSPGTPGSRSRTPSLPTPPT REPKKVAVVR-230/ 在位置 217處攜帶磷酸化蘇氨酸(SEQ ID NO:5)連同佐劑免疫的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0270]圖 41:對用 tau 蛋白 201-GSPGTPGSRSRTPSLPTPPT REPKKVAVVR-230/在位置 217 處攜帶磷酸化蘇氨酸(SEQ ID NO:5)處理的轉基因大鼠(SHR72)的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0271]圖42:用tau肽SEQ ID NO: 5對轉基因大鼠SHR72疫苗接種顯示對神經原纖維纏結(NFT)載荷無影響。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0272]圖43:對自用在位置396和404處攜帶磷酸化絲氨酸殘基的tau蛋白379-RENAKAKTDHGAEIVYKSPff S⑶TSPRHL-408 (SEQ ID NO: 6)和佐劑免疫的轉基因大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0273]圖44:對用在Ser396/Ser404處磷酸化的tau蛋白SEQ ID NO:6處理的轉基因大鼠(SHR72)的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0274]圖45:用tau肽SEQ ID N0:6對轉基因大鼠SHR72疫苗接種顯示神經原纖維纏結(NFT)載荷不降低。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0275]圖46:對自用攜帶在位置202處的磷酸化絲氨酸殘基和在205處的磷酸化蘇氨酸殘基的 tau 蛋白 181-TPPSSGEPPKS⑶RSGYSSPGSPGTPGSRS-210(SEQ ID NO: 7)連同佐劑免疫的大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0276]圖47:對用攜帶在位置202處的磷酸化絲氨酸殘基和在205處的磷酸化蘇氨酸殘基的 tau 蛋白 181-TPPSSGEPPKS⑶RSGYSSPGSPGTPGSRS-210(SEQ ID NO:7)處理的 SHR72 大鼠的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0277]圖48:用tau肽SEQ ID NO: 7對轉基因大鼠SHR72疫苗接種顯示對神經原纖維纏結(NFT)載荷無影響。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0278]圖 49:對自用 tau 蛋白 300_VPGGGSVQIVYKPVDLSK_317 (SEQ ID NO:8)連同佐劑免疫的大鼠(SHR72)或用單獨佐劑處理的對照大鼠的腦干制備的不溶性tau蛋白的免疫印跡分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0279]圖 50:對用 tau 蛋白 300_VPGGGSVQIVYKPVDLSK_317 (SEQ ID NO:8)處理的轉基因AD大鼠(SHR72)的神經行為評估。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。(A)橫桿行走測試(3.5橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5橫桿)。(C)神經量表。
[0280]圖51:用tau肽SEQ ID N0:8對轉基因大鼠SHR72疫苗接種顯示神經原纖維纏結(NFT)載荷不降低。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0281]圖52:用tau肽(SEQ ID NO: 108)對轉基因大鼠SHR72疫苗接種統計顯著降低不溶性病理性tau蛋白(p〈0.001)。自用tau肽免疫的轉基因大鼠SHR72的腦提取病理性不溶性tau蛋白且通過免疫印跡加以分析。平均值與標準平均誤差一起呈現。
[0282]圖53:用tau肽(SEQ ID NO: 108)對轉基因大鼠SHR72疫苗接種統計顯著提高神經行為參數(P〈0.05)。(A)橫桿行走測試(3.5cm橫桿)。(B)后肢滑動的次數(3.5cm橫桿)。(C)神經量表。數據是以平均值連同標準平均誤差一起的形式呈現。
[0283]圖54:用tau肽(SEQ ID NO: 108)對轉基因大鼠SHR72疫苗接種使神經原纖維纏結(NFT)載荷降低60%。抗體AT8用于評估轉基因大鼠SHR72的腦組織中的NFT。
[0284]圖 55:由用肽 tau 蛋白 275-VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304(SEQ IDNO: 4)免疫轉基因大鼠(SHR72)產生的抗血清的ELISA顯示在抗血清結合人病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R和人生理性tau蛋白2N4R方面存在差異。
[0285]圖56:用tau肽SEQ ID NO: 108對轉基因大鼠SHR72疫苗接種誘導形成優先結合病理性tau蛋白的抗體。用ELISA測量的幾何平均抗體效價顯示由用tau肽SEQ IDNO: 108疫苗接種引發的抗體展現對免疫原(SEQ ID NO: 108肽)和對病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的最高結合活性。用作對照的生理性tau蛋白(tau2N4R)更微弱地被識別。
[0286]圖57:用tau肽SEQ ID NO: 108對轉基因大鼠SHR72疫苗接種優先誘導形成對病理性tau蛋白具有特異性的IgG抗體同種型。顯示由tau肽SEQ ID N0:108誘導的抗體的同種型分布。1:800 稀釋來自個別大鼠的血清且通過ELISA分析對病理性tauA (1-150 ；392-441)/4R的結合活性。
[0287]圖 58:對由用肽 tau 蛋白 275-VQIINKKLDLSNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304 (SEQ IDNO: 4)免疫SHR72大鼠產生的抗血清結合人tau Λ (1-150 ;392_441)/4R和人tau蛋白2N4R的SPR親和力測定。
[0288]圖 59:用由用 tau 蛋白 275-VQIINKKLDL SNVQSKCGSKDNIKHVPGGG-304 (SEQ IDNO:4)免疫轉基因大鼠(SHR72)產生的大鼠抗體對來自人AD患者的腦的免疫組織化學染色。(A)抗血清識別阿爾茨海默病腦海馬中的神經原纖維病變。(B)較大放大倍數顯示神經原纖維纏結。標尺:100 μ m(A)、10 μ m(B)。
[0289]圖60:用tau肽SEQ ID NO: 108對轉基因大鼠SHR72疫苗接種誘導識別來自人阿爾茨海默病腦組織的切片中的病理性tau蛋白的抗體。對3號(A)、5號(B)、6號(C)、7號(D)和8號(E)大鼠血清的代表性免疫染色顯示所有測試的大鼠血清抗體都識別阿爾茨海默病患者的內嗅皮質的前α層中的神經原纖維纏結。來自僅用佐劑免疫的大鼠的匯合血清用作陰性對照(F)。使用來自內嗅皮質的連續腦組織切片。標尺:50μπι。
[0290]圖61:用tau肽SEQ ID NO: 108對轉基因大鼠SHR72疫苗接種誘導識別人阿爾茨海默病腦中以及轉基因大鼠SHR72的腦中的病理性tau蛋白的特異性抗體。自人和大鼠腦組織提取病理性tau蛋白且通過用來自肽SEQ ID NO: 108免疫的轉基因大鼠SHR72的匯合血清進行免疫印跡加以分析。血清抗體識別單體(I號、2號和3號泳道)和寡聚(2號和3號泳道)病理性tau蛋白，包括AD特征性A68病理性tau蛋白。
[0291]圖62:用tau肽SEQ ID NO: 109免疫小鼠誘導對病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的結合活性統計顯著高于對生理性tau蛋白2N4R的結合活性的抗體(P =0.0115)。圖代表對在1:800下稀釋的個別血清的ELISA結果的統計評估。平均值與標準平均誤差一起顯示。
[0292]圖63:用tau肽SEQ ID NO: 110免疫小鼠誘導展現對病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R的結合活性統計顯著高于對生理性tau蛋白2N4R的結合活性的抗體(P =0.0029)。圖代表對在1:800下稀釋的個別血清的ELISA結果的統計評估。平均值與標準平均誤差一起顯示。
[0293]圖64:用tau肽SEQ ID NO: 111免疫小鼠誘導展現對病理性tau Δ (1-150 ；392-441)/4R的結合活性統計顯著高于對生理性 tau蛋白2N4R的結合活性的抗體(P =0.0007)。圖代表對在1:800下稀釋的個別血清的ELISA結果的統計評估。平均值與標準平均誤差一起顯示。
[0294]圖65:用tau肽SEQ ID NO: 112免疫小鼠誘導展現對病理性tau Λ (1-150 ;392-441) /4R的結合活性統計顯著高于對生理性tau蛋白2N4R的結合活性的抗體(p〈0.001)。圖代表對在1:800下稀釋的個別血清的ELISA結果的統計評估。平均值與標準平均誤差一起顯示。
[0295]圖 66:設計治療表位 GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDN0:251)與病理性 tauA (1-150 ;392_441) 4R 競爭結合抗體 DC8E8。
[0296]圖 67:設計治療表位 GWSIHSPGGGSC(SEQ ID NO: 250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDNO: 251)誘導產生統計顯著區分病理性tau Λ (1-150 ;392_441) 4R與生理性tau蛋白2N4R的抗體，如通過ELISA所測定。通過ELISA測試來自用肽250和251之一免疫的小鼠的血清(在1:3200稀釋度下)中對tau蛋白:病理性tauA (1-150 ;392-441)4R和生理性tau蛋白2N4R具有特異性的抗體。
[0297]圖 68:用設計治療表位 GWSIHSPGGGSC (SEQ ID NO:250)和 SVFQHLPGGGSC (SEQ IDNO:251)免疫誘導最強健產生IgGl同種型抗體。
[0298]圖69:定量SPR (表面等離子體共振)測量結果顯示由設計治療表位
1(GWSIHSPGGGSC, SEQ ID NO: 250)(圖 69A)和設計治療表位 2 (SVFQHLPGGGSC, SEQID NO: 251)(圖69B)誘導的抗體統計顯著(分別p〈0.001和ρ〈0.01)區分病理性tau Λ (1-150 ;392-441)/4R 與生理性 2N4R tau 蛋白。
[0299]圖70:用針對設計治療表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO:250)和設計治療表位
2(SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)產生的血清對人AD患病腦組織的免疫組織化學染色。(A)針對設計治療表位I的抗血清識別AD患者的腦中的神經原纖維病變。(C)神經原纖維纏結和神經原纖維網線(箭號)的高倍放大。(B)針對設計治療表位2的抗血清識別AD患者的腦中的神經原纖維病變。(D)染色的神經原纖維纏結和神經原纖維網線(箭號)的高倍放大。針對設計治療表位I和設計治療表位2的抗血清不識別對照人腦中的正常tau蛋白(E、F)。標尺:50ym(A、B、E、F)，20ym(C、D)。(G)針對設計治療表位 2 (SVFQHLPGGGSC，SEQ ID N0:251)產生的血清識別轉基因大鼠SHR72中的神經原纖維病變。(H)在年齡匹配的對照大鼠腦中，抗體不顯示神經元內染色。血清識別寡聚纏結前階段(I)以及細胞內階段(J)。標尺:20ym(A、B)，10ym(C、D)。
[0300]圖71:由設計治療表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO: 250)和設計治療表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)誘導的抗體識別自人阿爾茨海默病腦組織分離的可溶性和肌氨酰不溶性病理性tau蛋白。
[0301 ] 圖72:由設計治療表位I (GWSIHSPGGGSC，SEQ ID NO: 250)和設計治療表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)誘導的抗體識別自阿爾茨海默病大鼠模型(SHR72)的腦分離的可溶性(泳道1、3、5)和不溶性(泳道2、4、6)病理性tau蛋白。
[0302]圖73:用設計治療表位2 (SVFQHLPGGGSC，SEQ ID NO: 251)的免疫療法顯示處理的SHR72大鼠的神經行為參數(神經量表)顯著提高。(A)橫桿行走測試。(B)后肢滑動的次數(p〈0.05)。(C)神經量表。用設計治療表位2(SEQ ID N0:251)處理的大鼠相較于接受單獨佐劑的轉基因對照大鼠顯示:a)橫桿行走測試中的逃逸潛伏時間降低27%，b)后肢滑動的次數降低44% (p〈0.05)dPc)神經量表評分降低26%。所有統計數據都是使用非參數曼-惠特尼U檢驗獲得。
[0303]圖74:用設計治療表位2 (SVFQHLPGGGSC, SEQ ID NO: 251)的免疫療法顯示免疫的阿茲海默轉基因SHR72大鼠的腦中的病理性tau蛋白統計顯著降低。相較于接受單獨佐劑的對照轉基因大鼠，免疫療法統計顯著(P〈0.05)降低免疫的動物中的病理性不溶性tau蛋白的量。在所有分析的tau表位下都觀察到病理性不溶性tau蛋白降低(P〈0.05)。
[0304]圖75: (A)用于進一步評估DC8E8的最小表位(治療性核心單元)和免疫原性效能測定的合成肽的示意圖和⑶它們的氨基酸序列。
[0305]圖76:通過競爭性ELISA，使用合成肽測定DC8E8最小表位(治療性核心單元)。10種含有DC8E8識別序列的至少6個氨基酸的tau肽(SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281、282 和 283)能夠與病理性 tau Λ (1-150 ;392_441)/4R 競爭結合抗體 DC8E8。僅含有DC8E8識別序列的5個氨基酸的Tau肽(SEQ ID NO:273、274、278和279)不與tauA (1-150 ；392-441)/4R(SEQ ID NO: 199)競爭結合抗體 DC8E8。
[0306]圖77:在用tau肽免疫C57BL小鼠之后，tau蛋白特異性抗體的誘導。(A) 12聚體、7聚體和6聚體肽(分別為SEQ ID N0:270、271和272)具有免疫原性。由免疫誘導的抗體展現對病理性tau Δ (1-150 ；392-441)/4R的結合活性統計顯著高于對生理性tau蛋白2N4R 的結合活性(分別 ρ〈0.0079 ;ρ〈0.0052 ;ρ〈0.0079)。5 聚體肽 SEQ ID NO:273 和 274不具有免疫原性。(B) 42聚體、19聚體、7聚體和6聚體肽(分別SEQ ID NO: 275、280、276和277)具有免疫原性。由這些肽誘導的抗體統計顯著(分別p〈0.0079、p〈0.0159、p〈0.0079和ρ〈0.0379)區分病理性tau Λ (1-150 ;392_441)/4R與生理性tau蛋白2N4R。5聚體肽SEQ ID NO:278和279不具有免疫原性。(C)7聚體肽(SEQ ID N0:281和283)具有免疫原性。針對這些肽的抗血清統計顯著(分別P〈0.0379和p〈0.0286)區分病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R與生理性tau蛋白2N4R。由6聚體肽SEQ ID NO:282誘導的針對病理性tau蛋白和生理性tau蛋白的抗體的水平極低。圖代表對在1:800下稀釋的個別血清的ELISA結果的統計評估。平均值與標準平均誤差一起顯示。
[0307] 圖78:在用tau肽免疫C57BL小鼠之后，tau蛋白特異性抗體的幾何平均抗體效價。用 tau 肽 SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 對 C57BL 小鼠疫苗接種誘導形成tau蛋白特異性抗體。用ELISA測量的幾何平均抗體效價顯示通過用tau肽SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281和283疫苗接種引發的抗體展現對病理性tauA (1-150 ;392-441)/4R的結合活性高于對生理性tau蛋白(tau2N4R)的結合活性。在用tau肽SEQ ID NO: 273、274、278、279和282免疫小鼠之后檢測到tau蛋白特異性抗體的效價較低。
[0308]圖79A和79B:顯示由tau肽誘導的抗體的同種型分布。用攜帶最小DC8E8表位的tau肽免疫C57/BL小鼠優先誘導形成對病理性tau蛋白具有特異性的IgGl和IgG2b抗體同種型。1:800稀釋來自個別小鼠的匯合血清且通過ELISA分析對病理性tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的結合活性。
[0309]圖80:對在用tau肽免疫的小鼠C75BL中誘導的抗體對tau Δ (1-150 ；392-441)/4R和2N4R的結合能力的定量評估。表面等離子體共振(SPR)測量結果顯示針對 tau 肽 SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 的抗體統計顯著(**...p〈0.001 和 *...ρ〈0.01)區分病理性 tau Δ (1-150 ;392_441) /4R 與生理性 2N4R tau蛋白。KA-締合平衡結合常數。
[0310]圖81:在蛋白質印跡中，在用tau肽免疫的小鼠中誘導的抗體識別病理性形式的tau 蛋白。用 tau 肽 SEQ ID NO: 270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 對 C57BL 小鼠疫苗接種誘導識別自人阿爾茨海默病腦組織以及自轉基因大鼠SHR72的腦干分離的病理性tau蛋白的特異性抗體。在用肽SEQ ID NO:273、274、278、279和282免疫小鼠之后的抗血清不識別病理性tau蛋白形式。
[0311]圖82A-C:人AD腦組織中由tau肽誘導的抗體識別的神經原纖維纏結。用tau肽SEQ ID NO:270、271、272、275、276、277、280、281 和 283 對 C57BL 小鼠疫苗接種誘導識別阿爾茨海默病腦的海馬中的神經原纖維病變的抗體。來自僅用佐劑免疫的小鼠的血清用作陰性對照。使用來自海馬CA l的腦組織切片。標尺:100μπι。
[0312]圖 83:用由用 tau 肽 SEQ ID NO:270、271、272、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282和283免疫C57BL小鼠產生的血清抗體對來自人AD患者的腦組織的免疫組織化學染色(和相應相對強度)的概述。
[0313]發明詳述
[0314]術語“抗體”是指遺傳工程改造、天然或完全或部分合成或重組產生的免疫球蛋白。其維持抗原結合性質和至少一種根據本發明的tau蛋白相關特征性質的所有衍生物、部分及片段也包括在所述術語中。所述術語也涵蓋具有與免疫球蛋白結合結構域同源或基本上同源的結合結構域的任何蛋白質。這些蛋白質可源于天然來源或部分或完全合成或重組產生。抗體可為單克隆或多克隆的。抗體可為包括任何人類別:IgG、IgM、IgA、IgD和IgE的任何免疫球蛋白類別的成員。在本發明的一些實施方案中，IgG類別的衍生物是優選的。
[0315]術語“分離的抗體”和“分離的肽”是指由cDNA來源、重組RNA來源或任何其它合成來源或其某一組合產生的蛋白質或肽；也指以下蛋白質和肽:根據它們的來源或衍生來源，(I)不與在自然界中所見的蛋白質締合，(2)不含來自相同來源的其它蛋白質，例如不含鼠類蛋白質，(3)由來自不同物種的細胞表達，或(4)不存在于自然界中。
[0316]此外，根據本發明的抗體也包括具有不影響或改變根據本發明的抗體的以上提及的特征的“保守性序列修飾”，即核苷酸和氨基酸序列修飾的所述抗體。可通過本領域中已知的標準技術，如定點突變誘發和PCR介導的突變誘發引入修飾。保守性氨基酸取代包括氨基酸殘基經具有類似側鏈的氨基酸殘基置換的取代。具有類似側鏈的氨基酸殘基的家族已在本領域中加以定義。這些家族包括具有堿性側鏈(例如賴氨酸、精氨酸、組氨酸)、酸性側鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷極性側鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β-分支側鏈(例如蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)及芳族側鏈(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。因此，抗tau蛋白抗體中的預測非必需氨基酸殘基可例如經來自同一側鏈家族的另一氨基酸殘基置換。
[0317]“抗體片段”和“抗體部分”包含全長抗體的一部分，通常至少是其抗原結合部分/結構域或可變區。抗體片段的實例包括雙鏈抗體(diabody)、單鏈抗體分子、免疫毒素和由抗體片段形成的多特異性抗體。此外，抗體片段包括具有結合病理性tau蛋白的VH鏈的特征(即能夠連同VL鏈一起裝配)或結合病理性tau蛋白的VL鏈的特征(即能夠連同VH鏈一起裝配)以形成功能性抗原結合袋且由此提供結合病理性tau蛋白的性質的單鏈多肽。所述術語也包括本身不能提供效應子功能(例如ADCC/⑶C)，但在與適當抗體恒定結構域組合之后提供這個功能的片段。
[0318]術語“嵌合抗體”是指通常通過重組DNA技術制備的包含來自一種來源或物種的可變區(即結合區)和至少一部分源于不同來源或物種的恒定區的單克隆抗體。包含鼠類可變區和人恒定區的嵌合抗體是尤其優選的。所述鼠類/人嵌合抗體是表達的免疫球蛋白基因的產物，所述基因包含編碼鼠類免疫球蛋白可變區的DNA區段和編碼人免疫球蛋白恒定區的DNA區段。由本發明涵蓋的其它形式的“嵌合抗體”是類別或子類已自原始抗體的類別或子類修改或改變的那些。所述“嵌合”抗體也稱為“類別轉變抗體”。用于產生嵌合抗體的方法涉及目前本領域中已知的常規重組DNA和基因轉染技術。參見例如Morrison, S.L.等，Proc.Natl.Acad Sc1.USA81 (1984) 6851-6855 ;美國專利號 5，202，238和 5，204，244。
[0319]術語“人源化抗體”是指框架區(FR)和/或互補決定區(CDR)已被修飾來包含相較于親本免疫球蛋白的特異性，具有不同特異性的免疫球蛋白的CDR的抗體。在一個實施方案中，鼠類CDR移植入人抗體的框架區中以制備“人源化抗體”。參見例如Riechmann, L.等，Nature332 (1988) 323-327 ;和 Neuberger, Μ.S.等，Nature314 (1985) 268-270。特別優選CDR對應于表不識別抗原和在本文中描述為tau蛋白上的“治療表位”的表位的序列的那些。
[0320]如本文所用的術語“人抗體”意圖包括具有源于人生殖系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區的抗體。抗體的恒定區可為例如人IgGl類型的恒定區。所述區域可為異型的并由例如 Johnson, G.ffu, T.T., Nucleic Acids Res.28 (2000) 214-218 和其中提及的數據庫所描述，且優先適用于一些實施方案，只要根據本發明的誘導ADCC和例如CDC的性質得以保留即可。
[0321]如本文所用的術語“重組人抗體”意圖包括通過重組手段制備、表達、產生或分離的所有人抗體，如自如NSO或CHO細胞的宿主細胞或自轉殖人免疫球蛋白基因的動物(例如小鼠，如XEN0M0USE，其為一種產生具有人抗體的氨基酸序列(例如人框架(FR)和人恒定區氨基酸序列)的抗體的遺傳修飾小鼠)分離的抗體或使用轉染至宿主細胞中的重組表達載體表達的抗體。所述重組人抗體具有呈重排形式的源于人生殖系免疫球蛋白序列的可變區和恒定區。根據本發明的重組人抗體已經受體內體細胞高度突變。因此，重組抗體的VH區和VL區的氨基酸序列是盡管源于且相關于人生殖系VH和VL序列，但不能天然體內存在于人抗體生殖系譜系內的序列。
[0322]術語“效應子功能”包括但不限于Clq結合；補體依賴性細胞毒性(CDC) ；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC);吞噬作用；和細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)的下調。
[0323]術語“表位”在此處用于指代由結合蛋白或抗體識別的結合位點。表位可為任何分子或其集合，包括但不限于氨基酸、氨基酸側鏈、糖和脂質，且可具有特定三維結構或構象。因此，表位可包含tau肽/蛋白質分子的包括一級、二級、三級或四級結構的任何部分，因為那些術語通常在本領域中是已知的。“線性表位”由連續氨基酸殘基序列構成。線性表位是存在于生理性tau蛋白上(例如存在于tau蛋白2N/4R中)的表位。“構象表位”是抗體或結合蛋白以構象特異性方式結合的表位。在基于蛋白質的表位的情況下，結合可取決于攜帶表位的蛋白質的二級、三級或四級結構。換句話說，抗體以結構特異性方式、三級結構特異性方式或四級結構特異性方式進行結合。構象表位是存在于病理性tau蛋白中(例如存在于 tau Λ (1-150 ；392-441)/4R 中)的表位。
[0324]術語“治療表位”是指tau蛋白內在本文中鑒定且發現當呈某些構象(由DC8E8抗體識別)時會促進tau蛋白-tau蛋白聚集的區域。結合這些區域的一者或多者的抗體(和其它結合蛋白)抑制早期和晚期階段的tau蛋白聚集，包括tau蛋白單體轉化成二聚體以及轉化成高等聚集體形式；亦即抗體抑制自生理性tau蛋白轉化成病理性tau蛋白。tau蛋白內的這些區域可涉及于通過促進在tau蛋白的鄰近區域內形成β折疊來促進tau蛋白纖維化成成對螺旋纖維(PHF)。治療表位包含在267-KHQPGGG-273 (在tau蛋白的第I重復結構域內)、298-KHVPGGG-304 (在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335 (在tau蛋白的第3重復結構域內)和361-THVPGGG-367 (在tau蛋白的第4重復結構域內)內。在一些實施方案中，治療表位各自分別包含在268-HQPGGG-273 (在tau蛋白的第I重復結構域內)、299-HVPGGG-304(在tau蛋白的第2重復結構域內)、330_HKPGGG_335 (在tau蛋白的第3重復結構域內)和362-HVPGGG-367內。
[0325] 術語“顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力”是指抗體與至少一種形式的病理性tau蛋白之間的相互作用程度高于抗體與至少一種形式的生理性tau蛋白之間的相互作用程度。相互作用可通過例如如以下實施例中所述的ELISA或表面等離子體共振(SPR)來測量。
[0326]術語“特異性結合”與“對…具有特異性”可互換且意味抗體或其抗原結合片段(或其它結合蛋白)與在生理條件下相對穩定的抗原或表位形成復合物。特異性結合的特征可在于解離常數為約I Χ10-6Μ或更小，例如小于約ΙΟΟηΜ，且主要例如小于ΙΟηΜ。用于確定兩個分子是否特異性結合的方法在本領域中是已知的且包括例如平衡透析、表面等離子體共振等。通常，由本發明提供的抗體或其抗原結合片段是結合抗原或表位的所述解離常數至少約I X KT6M或更小，但結合其它分子的解離常數不為所述解離常數的分子。
[0327]“優先結合”是指對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力的結合，例如對tau Λ (1-150 ；392-441)/4R的親和力高于對2N4R的親和力的結合。
[0328]“通用T細胞表位”是選自流感血球凝集素:HA307-319 (PKYVKQNTLKLAT) (SEQ IDNO: 123) ；PADRE(AKXVAAffTLKAAA) (SEQ ID NO: 124);瘧疾 CS:T3 表位(EKKIAKMEKASSVFNV)(SEQ ID NO: 125);乙型肝炎表面抗原:HBsA919_28 (FFLLTRILTI) (SEQ ID NO: 126)；熱休克蛋白 65:hsp65153_171(DQSI⑶LIAEAMDKVGNEG)(SEQ ID NO:127);卡介苗(QVHFQPLPPAffKL) (SEQ ID NO: 128);破傷風類毒素:TI830_844(QYIKANSKFIGITEL) (SEQ IDNO: 129);破傷風類毒素:TI947-967(FNNFTVSFWLRVPKVSASHLE) (SEQ ID NO: 130) JPHIVgpl20Tl (KQIINMWQEVGKAMYA) (SEQ ID NO: 131)的序列。
[0329]術語“固有無序tau蛋白”是指缺乏任何確定3D結構的正常/生理形式的tau蛋白O其存在于健康腦中(Kovacech等,2010)。
[0330]“錯誤無序tau蛋白”是指構象不同于正常/生理性固有無序tau蛋白，且不具有牢固/確定3D結構的tau蛋白形式。錯誤無序截短tau蛋白能夠體內誘導神經原纖維變性。其不存在于健康腦中(Kovacech等，2010)。“錯序tau蛋白”是指裝配成形成NFT的PHF的聚合物的結構化病理性形式的tau蛋白。錯序tau蛋白不存在于健康腦中(Kovacech等，2010)。
[0331]“SHR24”是指表達IIB型tau蛋白(151-391/R3)的轉基因大鼠品系。轉基因大鼠在皮質腦區域中顯現進行性年齡依賴性神經原纖維變性。SHR24大鼠中的神經原纖維纏結(NFT)滿足用于鑒定人阿爾茨海默病中的神經原纖維變性的若干關鍵組織學準則，包括嗜銀性、剛果紅雙折射和硫代黃素S反應性。這些準則可用于分析接受本發明的任何實施方案的受試者中的神經原纖維變性。也用用于檢測人腦中的病理性tau蛋白的抗體(包括識別異常tau蛋白構象的DC11)和對過度磷酸化形式的tau蛋白具有特異性的抗體鑒定神經原纖維纏結。此外，神經原纖維變性的特征在于廣泛形成由大鼠內源性和截短tau蛋白種類組成的肌氨酰不溶性tau蛋白復合物(Filipcik等，2010)。
[0332]“SHR72”是指在若干腦區域和脊髓中表達根據國際專利申請PCT W02004/007547)的人截短tau Λ (1-150 ;392-441)/4R的轉基因大鼠。這個大鼠品系的產生由Zilka等，2006加以描述,且tau蛋白病理學描述于Koson等，2008中。
[0333]“IA型Tau蛋白 ”是指N末端和C末端雙重截短的tau蛋白，其截短含有4個重復序列的tau43的至少前236個N末端氨基酸和至少最后45個C末端氨基酸。所述分子可在阿爾茨海默病患病腦組織中檢測而所述分子不可在正常健康腦組織中檢測(W02004/007547A2)。
[0334]“IB型Tau蛋白”是指N末端和C末端雙重截短的tau蛋白，其截短含有3個重復序列的tau44的至少前236個N末端氨基酸和至少最后45個C末端氨基酸。所述分子可在阿爾茨海默病患病腦組織中檢測而所述分子不可在正常健康腦組織中檢測(W02004/007547A2)。
[0335]“ IIA型Tau蛋白”是指N末端和C末端雙重截短的tau蛋白，其截短含有4個重復序列的tau43的至少前68個N末端氨基酸和至少最后40個C末端氨基酸。所述分子可在阿爾茨海默病患病腦組織中檢測而所述分子不可在正常健康腦組織中檢測(W02004/007547A2)。
[0336]“IIB型Tau蛋白”是指N末端和C末端雙重截短的tau蛋白，其截短含有3個重復序列的tau44的至少前68個N末端氨基酸和至少最后20個C末端氨基酸。所述分子可在阿爾茨海默病患病腦組織中檢測而所述分子不可在正常健康腦組織中檢測(W02004/007547A2)。
[0337]如本文所用，術語“治療”等是指獲得所需藥理學和/或生理學作用。所述作用就完全或部分預防疾病或其癥狀而言可為防治性的和/或就部分或完全治愈疾病和/或可歸因于所述疾病的不利影響而言可為治療性的。如本文所用的“治療”也涵蓋對哺乳動物，特別是人的AD或相關tau蛋白病變的任何治療,且包括:(a)預防疾病在可易患疾病或處于獲得疾病的風險下但尚未診斷為患有所述疾病的受試者中發生；(b)抑制疾病，即遏止其發展；以及(C)減輕疾病，即導致疾病消退。以下進一步論述“治療”的優選實施方案。在一些實施方案中，“治療”是指向懷疑罹患或已罹患AD或另一 tau蛋白病變的患者施用治療劑。其也可指減輕、消除或至少部分遏止疾病和/或與疾病和/或其并發癥相關的一種或多種癥狀，也指對所述一種或多種癥狀施加任何有益作用。
[0338]“預防”是指向易感特定疾病或另外處于特定疾病的風險下的患者施用。總人口中的任何人都處于AD的風險下。一些個體具有增加的AD遺傳風險。預防可消除或降低風險或延遲疾病發作。延遲發作或進展可基于類似群體或個體中的標準疾病進展時間加以測量。
[0339]“Tau蛋白病變”是指與形成病理性tau蛋白相關的疾病。
[0340]“生理性tau蛋白”是指正常人tau蛋白的6種亞型的任一者，即:
[0341]2N4R(SEQ ID NO: 102)
[0342]1N4R(SEQ ID NO: 103)
[0343]2N3R(SEQ ID NO: 104)
[0344]0N4R(SEQ ID NO: 105)
[0345]1N3R(SEQ ID NO: 106)
[0346]0N3R(SEQ ID NO: 107)
[0347]自這個定義排除攜帶與阿爾茨海默病和其它tau蛋白病變相關的任一磷酸化的那些tau蛋白。
[0348]“病理性tau蛋白”包括病理性tau蛋白構象異構體和結構且涵蓋以下全部:IA、IB、IIA和IIB型Tau蛋白、錯序tau蛋白、錯誤無序tau蛋白(單體、二聚體、三聚體、寡聚物)、錯誤無序可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、細胞外tau蛋白沉積物、tau蛋白聚集體、成對螺旋纖維、神經原纖維病變(包括神經原纖維病變、纏結、線、纖維、軸突球狀體)、高度磷酸化形式的截短tau蛋白和全長tau蛋白、或與AD或另一 tau蛋白病變相關的任何其它形式的tau蛋白。
[0349]“連接”是指某一部分連接于肽、抗體或化合物。所述部分可被偶合或復合或共價或非共價連接。所述部分可以與肽或抗體的融合物形式化學交聯或表達或合成。
[0350]“部分”是指能夠連接于肽、抗體或結合蛋白，但不是所要求保護的肽、抗體或結合蛋白自身的任何化合物、有機物、肽、蛋白質、核酸、載體、佐劑。
[0351]“免疫原性”是指可引發免疫反應的某些性質。免疫反應可由抗體或細胞或兩者介導。
[0352]“佐劑”是指能夠增加、增大或調節對伴隨肽的免疫反應的物質。
[0353]“其它療法”是指主題患者可接受的額外療法。
[0354]“清除”是指降低病理性tau蛋白和/或病理性tau蛋白結構的水平或檢測。清除不必使病理性tau蛋白完全消失，即病理性tau蛋白可為部分消失。
[0355]術語“促進”涵蓋誘導、提高或增加。
[0356]“腦組織”是指例如來自腦、腦干和脊髓的任何神經元組織。
[0357]術語“特異性結合”和“高親和力”分別指抗體結合預定抗原，即以上定義的tau表位。通常，抗體結合的解離常數(KD)是10_6M或更小，且結合預定抗原的KD比其結合除預定抗原以外的非特定抗原(例如BSA、酪蛋白或任何其它指定多肽)的KD小至少2倍。詞語“識別抗原的抗體”和“對抗原具有特異性的抗體”在本文中可與術語“特異性結合抗原的抗體”互換使用。如本文所用，“高度特異性”結合意味抗體對錯誤無序tau蛋白的相對Kd比抗體對其它配體或正常全長tau蛋白的結合Kd小至少4倍。
[0358]術語“原核生物”意欲包括可用用于表達本發明抗體或一個或多個相應免疫球蛋白鏈的DNA或RNA分子轉化或轉染的所有細菌。原核宿主可包括革蘭氏陰性以及革蘭氏陽性細菌，例如像大腸桿菌(E.coli)、鼠沙門氏傷寒桿菌(S.typhimurium)、粘質沙雷氏菌(Serratia marcescens)和枯草芽抱桿菌(Bacillus subtilis)。術語“真核生物”意圖包括酵母、高等植物、昆蟲和例如哺乳動物細胞，主要例如HEK293、NSO和CHO細胞。
[0359]術語“化學衍生物”描述含有通常不是基礎分子的一部分的額外化學部分的分子。所述部分可提高基礎分子的溶解性、半衰期、吸收等。或者，所述部分可減弱基礎分子的不合需要副作用或降低基礎分子的毒性。
[0360]術語“核酸”、“核酸序列”、“聚核苷酸”、“寡核苷酸”、“聚核苷酸序列”和“核苷酸序列”在本說明書中可互換使用，且指修飾或未修飾的準確核苷酸序列，所述序列界定核酸的片段或區域，含有或不含有非天然核苷酸，且是雙鏈DNA、單鏈DNA或所述DNA的轉錄產物。
[0361]如本文所用的術語“分離的聚核苷酸”或“分離的核酸”將意味基因組、cDNA或合成來源或其某一組合的聚核苷酸，所述聚核苷酸根據其來源(I)不與“分離的聚核苷酸”見于自然界中所處的聚核苷酸的全部或一部分締合，(2)可操作地連接于其在自然界中不連接的聚核苷酸，或(3)不作為較大序列的一部分存在于自然界中。
[0362]用于診斷、被動免疫、藥物遞送和AD療法的抗體
[0363]本文描述對一種或多種由病理性形式的tau蛋白顯示的tau表位具有特異性的新型分離的抗體。這些表位位于tau蛋白的首次指定在病理性tau蛋白聚集中具有作用的區域內，即在以下內:267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO: 98)(即I號表位位于屬于tau蛋白的第I重復結構域的267-KHQPGGG-273 內)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99) (2號表位，在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100) (3號表位，在tau蛋白的第3重復結構域內)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101) (4號表位，在tau蛋白的第4重復結構域內)。這些抗體能夠識別人AD腦中以及AD和相關tau蛋白病變的轉基因大鼠模型中的錯序和錯誤無序tau蛋白，所述大鼠模型表達人錯誤無序截短tau Λ (1-150 ;392_441)/3R或tau Λ (1-150 ;392-441)/4R。分離的抗體也能夠干擾促進AD病變的多種tau蛋白介導的活性的一者或數者，所述活性包括:(i)自錯序或自生理性tau蛋白轉變成錯誤無序tau蛋白；(ii)形成“病理性tau蛋白”單體、二聚體、三聚體和其它tau蛋白多聚體；(iii)形成不溶性tau蛋白聚集體；和(iv)促進細胞外tau蛋白清除。
[0364] 本公開的發明是部分基于發現特異性結合tau蛋白的四個先前未鑒定功能區之一的抗體能夠抑制病理性tau蛋白聚集體形成以及檢測各種病理性形式的tau蛋白(其中一些是最早在疾病中形成的形式(例如病理性單體))，所述未鑒定功能區選自267-KHQPGGG-273 (SEQ ID NO: 98)(在tau蛋白的第I重復結構域內)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99)(在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重復結構域內)和361-THVPGGG-367(SEQID NO: 101)(在tau蛋白的第4重復結構域內)。通過免疫組織化學(IHC)與酶聯免疫測定(ELISA)兩者篩選能夠產生對人PHF具有特異性的單克隆抗體的針對在本申請中也稱為tauA (1-150 ;392-441)/4R的人錯誤無序tau蛋白II(151_391/4R)產生的雜交瘤。所得組包括具有IgGl子類的小鼠單克隆抗體(mAb)DC8E8。對DC8E8的表位定位揭示其結合人tau蛋白上的四個先前未鑒定的表位。此外，對DC8E8的進一步功能分析揭示各表位代表tau蛋白內的不同功能區。現在可描述為AD診斷和療法的新型靶標，且因此稱為“治療表位”的這些區域包含在267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO:98)(在tau蛋白的第I重復結構域內)、298-KHVPGGG-304 (SEQ ID NO: 99)(在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100)(在tau蛋白的第3重復結構域內)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101)(在tau蛋白的第4重復結構域內)內。在一些實施方案中，治療表位的一者或多者包含在268-HQPGGG-273(SEQ ID NO:223)(在tau蛋白的第I重復結構域內)、299-HVPGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重復結構域內)、330-HKPGGG-335(SEQ ID NO: 224)(在tau蛋白的第3重復結構域內)和
362-HVPGGG-367(SEQ IDNO: 154)(在tau蛋白的第4重復結構域內)內。在一些實施方案中，至少一個治療表位包含在299-HVPGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重復結構域內)內。在一些實施方案中，治療表位的一者或多者是299-HVPGGG-304(SEQ IDNO:154)。
[0365]實際上，DC8E8能夠區分病理性tau蛋白與正常tau蛋白，表明這四種表位的至少一者是構象表位。換句話說，DC8E8揭示由四種治療表位各自涵蓋的區域的至少一者在病理性tau蛋白中顯示不同于其在固有無序tau蛋白(正常tau蛋白)中采用的形狀的構象。DC8E8能夠感知或檢測變化，因為其結合病理性tau蛋白的親和力高于其結合生理性tau蛋白的親和力。此外，結合tau蛋白的DC8E8能夠抑制導致形成病理性tau蛋白聚集體的tau蛋白-tau蛋白相互作用，如通過DC8E8能夠體外抑制不溶性tau蛋白聚集體形成所衡量。舉例而言，結合正常tau 蛋白的DC8E8能夠防止涵蓋治療表位的區域的一種或多種以上論述的構象/形狀變化。
[0366]此外，DC8E8在這些區域或治療表位的一者或多者處結合正常tau蛋白會在分子中其它地方阻礙為產生病理性tau蛋白所需的某些其它構象變化。在不受任何特定機理束縛下，意圖tau蛋白內由DC8E8識別的這些表位/區域的一者或多者在tau蛋白內充當tau蛋白-tau蛋白聚集的促進劑。舉例而言，這些表位的一者或多者的結構/形狀/構象會影響鄰近區域的結構，以使通過DC8E8與其結合來固定其在tau蛋白分子內的形狀會干擾鄰近區域(例如274-281)形成β折疊的能力或趨勢，其中形成β折疊為tau蛋白-tau蛋白聚集所需。因此，意圖DC8E8與正常tau蛋白內的這四個區域之一結合能夠防止tau蛋白中迄今為止鑒定的一個最早病理性變化:即為促進在tau蛋白內形成β折疊所需或其自身促進或允許在tau蛋白內形成β折疊的變化。此外，也意圖DC8E8與錯誤無序/病理性tau蛋白內的這四個區域之一結合(即在四個區域的一者或多者已變成病理性構象之后)仍然能夠抑制病理性tau蛋白-tau蛋白聚集,至少因為其仍然抑制β折疊形成、阻斷tau蛋白-tau蛋白物理相互作用，或兩者。
[0367]因此，使用DC8E8作為鑒定tau蛋白內的新型靶標或功能區的工具，指定tau蛋白上的四個特定DC8E8結合位點在阿爾茨海默病中具有作用。這是通過認識到這些tau蛋白位點的一者或多者至少因為DC8E8與它們中的一者或多者結合能夠抑制那些過程而涉及于病理性tau蛋白單體和多聚體的形成中來進行。此外，結合這些治療表位的一者或多者的抗體(例如DC8E8)能夠促進病理性tau蛋白自細胞外環境清除，至少因為它們能夠體外介導由小神經膠質細胞對病理性tau蛋白的攝取和降解；體內降低腦中的細胞外和細胞內tau蛋白；或兩者。換句話說，這些抗體能夠幫助降低所述病理性形式的tau蛋白對腦引起的損傷。
[0368]因此，本文描述特異性結合tau蛋白上的一種或多種治療表位的抗體，其中所述治療表位各自分別位于氨基酸殘基267-KHQPGGG-273(SEQ ID NO:98) (I號表位，在tau蛋白的第I重復結構域內)、298-KHVPGGG-304(SEQ ID NO:99) (2號表位，在tau蛋白的第2重復結構域內)、329-HHKPGGG-335(SEQ ID NO: 100) (3號表位，在tau蛋白的第3重復結構域內)和361-THVPGGG-367(SEQ ID NO: 101) (4號表位，在tau蛋白的第4重復結構域內)內。在一些實施方案中，I至4號治療表位包含在268-HQPGGG-273(SEQ ID NO:223)(在tau蛋白的第I重復結構域內)、299-HV PGGG-304(SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第2重復結構域內)、330-HKPGGG-335(SEQ ID NO:224)(在tau蛋白的第3重復結構域內)和
362-HVPGGG-367 (SEQ ID NO: 154)(在tau蛋白的第4重復結構域內)內。抗體可為單克隆或多克隆的。也包括抗原結合抗體部分、抗體片段、抗體變體、工程改造蛋白質和聚合物骨架。這些包括包含免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白質或含肽分子，所述至少一部分如但不限于至少一個重鏈或輕鏈互補決定區(CDR)或其配體結合部分、重鏈或輕鏈可變區、重鏈或輕鏈恒定區、框架區或其任何部分。
[0369]作為一非限制性實例，如由本發明提供的適合抗體、抗體部分、片段或變體可結合至少一種所述治療表位。術語“抗體”也包括抗體消化片段、指定抗體部分及其變體，包括抗體模擬物或模擬抗體或其指定片段或部分的結構和/或功能的抗體的部分，包括單鏈抗體及其片段。功能性片段包括結合一種或多種治療表位的抗原結合片段。舉例而言，能夠結合治療表位的抗體片段包括但不限于由本發明提供的Fab (例如通過木瓜蛋白酶消化獲得)、Fab’ (例如通過胃蛋白酶消化和部分還原獲得)和F(ab’)2(例如通過胃蛋白酶消化獲得)、facb(例如通過血纖維蛋白溶酶消化獲得)、pFc’(例如通過胃蛋白酶或血纖維蛋白溶酶消化獲得)、Fd(例如通過胃蛋白酶消化、部分還原和再聚集獲得)、Fv或scFv (例如通過分子生物學技術獲得)片段。也參見William Ε.Paul (編)Fundamental Immunology,第6版，Lippincott ffilliams&ffilkins, NY, N.Y.(2008)，所述參考書目整體并入本文。某些片段可通過如本領域中常規已知或如本文提供的酶促裂解、合成或重組技術產生。亦可使用已在天然終止位點的上游引入一個或多個終止密碼子的抗體基因以多種截短形式產生抗體。舉例而言，編碼F(ab’)2重鏈部分的組合基因可被設計來包括編碼重鏈的CHl結構域和/或鉸鏈區的DNA序列。抗體的各種部分可通過常規技術以化學方式接合在一起，或可使用常規遺傳工程技術制備成鄰接蛋白質。
[0370]已知基本抗體結構單位包含四聚體。各四聚體主要由兩對相同多肽鏈組成，各對具有一個“輕”鏈(約25kDa)和一個“重”鏈(約50-70kDa)。各鏈的氨基末端部分包括具有約100至110個或更多個氨基酸的主要負責抗原識別的可變區。各鏈的羧基末端部分界定主要負責效應子功能的恒定區。人輕鏈分類為K和λ輕鏈。重鏈分類為μ、δ、Υ、α或ε，且將抗體的同種型分別定義為IgM、IgD、IgA和IgE。在輕鏈和重鏈內，可變區與恒定區是通過具有約12個或更多個氨基酸的“J”區加以接合，其中重鏈也包括具有另外約10個氨基酸的“D”區。大體上參見Fundamental Immunology第7章(Paul, W.編，第2版Raven Press, N.Y.(1989))(出于所有目的以引用的方式整體并入本文)。各輕鏈/重鏈對的可變區形成抗體結合位點。因此，完整抗體具有兩個結合位點。除在雙功能或雙特異性抗體中之外，兩個結合位點相同。所有鏈都展現相對保守的框架區(FR)由三個高變區(也稱為互補決定區或CDR)接合的相同一般性結構。來自各對的兩個鏈的CDR通過框架區對準，從而使得能夠結合特定表位。自N末端至C末端，輕鏈與重鏈兩者均包含結構域FRUCDR1、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3和FR4。對各結構域指定氨基酸是根據MGT的定義。替代性定義也為本領域普通技術人員所知。參見例如Kabat Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest(Nat1nal Institutes of Health, Bethesda, Md.(1987 和 1991))或 Chothia和Lesk J.Mol.B1l.196:901-917(1987) ;Chothia 等 Nature342:878-883(1989)。
[0371]在一些實施方案中，主題抗體包含包括與SEQ ID NO: 141、143、152和153的任一者具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%或至少約99%氨基酸序列同一性的氨基酸序列的輕鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括與SEQ IDNO: 141、143、152和153的任一者僅有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸不同的氨基酸序列的輕鏈。本領域普通技術人員可確定輕鏈可變區中的哪些氨基酸可被改變。舉例而言，通過比較具有相同特異性的抗體的輕鏈可變區的氨基酸序列，本領域技術人員可確定哪些氨基酸可被改變而不改變特異性。對于示例性DC8E8抗體輕鏈的CDR氨基酸序列的比較，參見實施例。此外，可使用抗原結合測定來確定特異性是否改變。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID N0:141、143、152和153的任一者中所述的氨基酸序列的輕鏈。
[0372]在一些實施方案中，主題抗體包含包括與SEQ ID NO: 138、140、147和148的任一者具有至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約98%或至少約99%氨基酸序列同一'I"生的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括與SEQ IDNO: 138、140、147和148的任一者僅有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個氨基酸不同的氨基酸序列的重鏈。本領域普通技術人員可確定重鏈可變區中的哪些氨基酸可被改變。舉例而言，通過比較具有相同特異性的抗體的重鏈可變區的氨基酸序列，本領域技術人員可確定哪些氨基酸可被改變而不改變特異性。對于示例性DC8E8抗體重鏈的CDR氨基酸序列的比較，參見例如圖3E和25B。此外，可使用抗原結合測定來確定特異性是否改變。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 138、140、147和148的任一者中所述的氨基酸序列的重鏈。
[0373] 在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 141中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQID NO: 140中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ IDNO: 143中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 143中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 152中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 147中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO:152中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 138中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 140中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ ID NO: 153中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQID NO: 147中所述的氨基酸序列的重鏈。在一些實施方案中，主題抗體包含包括如SEQ IDNO: 153中所述的氨基酸序列的輕鏈和包括如SEQ ID NO: 148中所述的氨基酸序列的重鏈。
[0374]在一些實施方案中，主題抗體包含包括至少一個、至少兩個、或三個選自SEQ IDN0.117-119的⑶R的輕鏈可變區。在一些實施方案中，主題抗體包含包括至少一個、至少兩個、或三個選自SEQ ID N0.120-122的⑶R的重鏈可變區。也提供這六個⑶R的任一者如實施例14中所述加以改變的實施方案。在一些實施方案中，輕鏈中至少一個改變的CDR選自用于 CDRl 的 SEQ ID NO: 247、用于 CDR2 的 SEQ ID NO: 253、和用于 CDR3 的 SEQ ID NO: 255、257、258、259和260的任一者。在一些實施方案中，重鏈中至少一個改變的⑶R選自用于CDRl 的 SEQ ID NO: 261 或 SEQ ID NO: 262、用于 CDR2 的 SEQ ID NO: 264 或 SEQ ID NO: 265、 和用于 CDR3 的 SEQ ID NO: 266、SEQ ID NO: 267 或 SEQ ID NO: 269。
[0375]雙特異性或雙功能抗體是具有兩對不同重鏈/輕鏈和兩個不同結合位點的人工雜交抗體。可通過包括雜交瘤融合或連接Fab’片段的多種方法產生雙特異性抗體。參見例如 Songsivilai 和 Lachmann Clin.Exp.1mmunol.79:315-321 (1990)、Kostelny 等J.1mmunol.148:1547-1553(1992)。相較于產生常規抗體，產生雙特異性抗體可為一種相對勞動密集型過程，且雙特異性抗體的產率和純度通常較低。雙特異性抗體不以具有單一結合位點的片段(例如Fab、Fab’和Fv)形式存在。
[0376]本發明不涉及呈天然形式的抗體，即它們不取自它們的天然環境而是通過純化自天然來源分離和獲得，或通過遺傳重組或化學合成獲得，且因此它們可攜帶非天然氨基酸。因此，如本文所用，20種常規氨基酸及其縮寫遵循常規用法。參見Immunology-ASynthesis (第 2 版，Ε.S.Golub 和 D.R.Gren 編,Sinauer Associates, Sunderland, Mass.(1991))，其以引用的方式并入本文。20種常規氨基酸的立體異構體(例如D-氨基酸Nle、、0^、0111、!116、0^、此11或他10、非天然氨基酸(如α-，α -雙取代氨基酸、N-烷基氨基酸)、乳酸和其它非常規氨基酸也可為適于本發明多肽的組分。非常規氨基酸的實例包括(即不限于)4_羥脯氨酸、Y-羧基谷氨酸、ε-N，N，N-三甲基賴氨酸、ε-Ν-乙酰賴氨酸、O-磷酸絲氨酸、N-乙酰絲氨酸、N-甲酰甲硫氨酸、3-甲基組氨酸、5-羥基賴氨酸、σ -N-甲基精氨酸和其它類似氨基酸和亞氨基酸(例如4-羥脯氨酸)。在本文使用的多肽記法中，根據標準用法和慣例，左手方向是氨基末端方向且右手方向是羧基末端方向。
[0377]類似地，本公開不涉及在其天然染色體環境中，即呈天然狀態的核苷酸序列。本發明序列已經分離和純化，即它們直接或例如通過拷貝間接被取樣，其中它們的環境已至少部分被改動。也提供例如借助于宿主細胞利用重組遺傳學獲得或通過化學合成獲得的分離的核酸。
[0378]關于本公開，兩個核酸或氨基酸序列之間的“同一性百分比”意味在最優比對之后獲得的在待比較的兩個序列之間相同的核苷酸或氨基酸殘基的百分比，其中這個百分比僅為統計性的且兩個序列之間的差異是沿其長度隨機分布的。傳統上通過在使兩個核酸或氨基酸序列最優對準之后比較序列來進行兩個核酸或氨基酸序列的比較，其中所述比較能夠通過分段或通過使用“比對窗”來進行。除手工比較之外，供比較的序列的最優比對可借助于Smith和Waterman(1981) [Ad.App.Math.2:482]的局部同源性算法、借助于Neddleman和Wunsch(1970) [J.Mol.B1l.48:443]的局部同源性算法、借助于Pearson 和 Lipman (1988) [Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:2444]的類似性搜索法或借助于使用這些算法的電腦軟件(Wisconsin Genetics Software Package (Genetics ComputerGroup, 575Science Dr.,Madison, WI)中的 GAP、BESTFIT、FASTA 和 TFASTA，或通過比較軟件BLAST NR 或 BLAST P)來進行。
[0379]通過比較兩個最優對準序列來確定兩個核酸或氨基酸序列之間的同一性百分比，其中待比較的核酸或氨基酸序列相較于參照序列可具有添加或缺失以達成兩個序列之間的最優比對。通過確定在兩個序列之間，例如在兩個完全序列之間相同的氨基酸或核苷酸殘基所處的位置的數目，用比對窗中的位置的總數目除相同位置的數目且用100乘以結果以獲得兩個序列之間的同一性百分比來計算同一性百分比。
[0380]舉例而言，可在站點http://www.ncb1.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html 獲得的BLAST 程序 “BLAST2sequences”(Tatusova 等，“Blast2sequences_a new tool forcomparing protein and nucleotide sequences，，，FEMS Microb1l., 1999, Lett.174:247-250)可以缺省參數(特別是針對參數“開放空位罰分”:5和“延伸空位罰分”:2;所選矩陣例如是由程序推薦的“BL0SUM62”矩陣)加以使用；待比較的兩個序列之間的同一性百分比由程序直接計算。
[0381]對于展現與參照氨基酸序列至少80%，例如85%、90%、95%和98%同一性的氨基酸序列，優選實例包括含有參照序列、某些修飾(特別是缺失、添加或取代至少一個氨基酸)、截短部分或延伸部分的那些。在取代一個或多個連續或非連續氨基酸的情況下，取代的氨基酸經“等效”氨基酸置換的取代是優選的。此處，表述“等效氨基酸”意圖指示可能取代一個結構氨基酸，然而不改變相應抗體和以下定義的那些特定實例的生物活性的任何氨基酸。
[0382]等效氨基酸可根據其與其所取代的氨基酸的結構同源性或根據在可能產生的各種抗體之間進行的生物活性的比較測試的結果來確定。作為一非限制性實例，下表概述可能進行而不導致顯著改變相應修飾的抗體的生物活性的可能取代；在相同條件下反向取代是天然可能的。
[0383]
【權利要求】
1.一種分離的抗體，其中所述抗體結合一種或多種tau表位且能夠展現兩種或更多種以下性質: a)顯示對病理性tau蛋白的親和力高于對生理性tau蛋白的親和力； b)抑制tau蛋白-tau蛋白聚集；以及 c)介導由小神經膠質細胞對病理性tau蛋白的攝取和降解；且其中各tau表位包含tau蛋白的聚集促進區。
2.如權利要求1所述的分離的抗體，其中所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位: i.相對于tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG(SEQ ID NO:98)； i1.相對于tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG(SEQ ID NO:99) ii1.相對于tau441 的位置 329-335 或殘基 HH KPGGG(SEQ ID NO: 100);和 iv.相對于tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG(SEQ ID NO: 101)。
3.如權利要求2所述的分離的抗體，其中所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位: 1.相對于tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG (SEQ ID NO:223)； i1.相對于tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相對于tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相對于tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
4.如權利要求1至3中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體能夠結合選自以下的一種或多種形式的病理性tau蛋白:人阿爾茨海默病患者的腦活檢中、來自阿爾茨海默病的動物模型的腦樣本中、或兩者中的錯序tau蛋白、錯誤無序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神經原纖維纏結、神經原纖維網線和神經炎斑塊。
5.如權利要求1至4中的一項所述的分離的抗體，其中所述表位的至少一者是構象表位。
6.一種以構象特異性方式結合tau蛋白上的一種或多種表位的分離的抗體，其中: a)所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位: i.相對于tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)； i1.相對于tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99) ii1.相對于tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和 iv.相對于tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)； b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；以及 c)所述表位的一者、兩者、三者或四者是構象表位。
7.一種以構象特異性方式結合tau蛋白上的一種或多種表位的分離的抗體，其中: a)所述一種或多種表位各自獨立地選自以下位置內的表位: i.相對于tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相對于tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相對于tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相對于tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。 b)所述表位的零者、一者、兩者或三者是線性表位；以及C)所述表位的一者、兩者、三者或四者是構象表位。
8.如權利要求1和6中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體是DC8E8，且其中DC8E8是一種由在美國典型培養物保藏中心專利保藏號PTA-11994下保藏的雜交瘤產生的抗體。
9.如權利要求1至7中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體結合tau蛋白上與由DC8E8結合的那些表位相同的表位的一者或多者。
10.如權利要求1至7中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體與單克隆抗體DC8E8競爭結合tau蛋白。
11.一種分離的抗體，所述抗體在其表位結合結構域中包含一種或多種選自以下的互補決定區(CDR)序列:
i.QSLLNSRTRKNY(SEQ ID NO:117)
i1.WAS(SEQ ID NO:118)
ii1.KQSFYLRT(SEQ ID NO:119)
iv.GYIFTDYVIS(SEQID NO:120)
v.1FPRSGST(SEQ ID NO: 121);和
v1.ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122)。
12.如權利要求1至7中的一項所述的分離的抗體，所述抗體在其表位結合結構域中包含一種或多種選自以下的CDR序列:
i.QSLLNSRTRKNY(SEQID NO:117)
i1.WAS(SEQ ID NO:118)
ii1.KQSFYLRT(SEQID NO:119)
iv.GYIFTDYVIS(SEQ ID NO:120)
v.1FPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
v1.ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122)。
13.如權利要求11和12中任一項所述的分離的抗體，其中所述抗體包含: a)抗體輕鏈可變區，所述抗體輕鏈可變區包含:
i.用于CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)或 SEQ ID NO: 247 ；
i1.用于CDR2 的 WAS (SEQ ID NO: 118)或 SEQ ID NO: 253 ;和
ii1.用于CDR3 的 KQSFYLRT(SEQ ID NO: 119)或 SEQ ID NO:255、257、258、259 和 260的任一者；以及 b)抗體重鏈可變區，所述抗體重鏈可變區包含:
i.用于CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)、SEQ ID NO:261 或 SEQ ID NO:262 ；
i1.用于CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)、SEQ ID NO: 264 或 SEQ ID NO: 265;和
ii1.用于CDR3 的 ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO: 122)、SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:267或 SEQ ID NO:269。
14.如權利要求11和12中任一項所述的分離的抗體，其中所述抗體包含: a)抗體輕鏈可變區，所述抗體輕鏈可變區包含:
i.用于CDRl 的 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)；
i1.用于CDR2的WAS(SEQ ID NO: 118);和ii1.用于CDR3 的 KQSFYLRT(SEQ ID NO: 119);以及 b)抗體重鏈可變區，所述抗體重鏈可變區包含:
iv.用于CDRl 的 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)
V.用于 CDR2 的 IFPRSGST (SEQ ID NO: 121);和
v1.用于 CDRl 的 ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO: 122)。
15.如權利要求1至7中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體包含: a)一種或多種來自所述單克隆抗體DC8E8的輕鏈CDR的序列或一種或多種在與這些輕鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%同一性的序列；和 b)一種或多種來自所述單克隆抗體DC8E8的重鏈CDR的序列或一種或多種在與這些重鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%同一性的序列； 且其中: 1.所述輕鏈CDR 包含選自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118)KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119)的序列；以及
i1.所述重鏈CDR 包含選自 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120), IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)和 ARDYYGTSFAMDY (SEQ ID NO: 122)的序列。
16.如權利要求1至7中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體包含: a) 一種或多種來自所述單克隆抗體DC8E8的輕鏈CDR的序列或一種或多種在與這些輕鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%同一性的序列；和 a)一種或多種來自所述單克隆抗體DC8E8的重鏈CDR的序列或一種或多種在與這些重鏈⑶R之一最優比對之后具有至少80%同一性的序列； 且其中: 1.所述輕鏈CDR 包含選自 QSLLNSRTRKNY (SEQ ID NO: 117)、WAS (SEQ ID NO: 118),KQSFYLRT (SEQ ID NO: 119), SEQ ID NO: 247, SEQ ID NO: 253, SEQ ID NO: 255, SEQ IDNO: 257、SEQ ID NO: 258、SEQ ID NO: 259 和 SEQ ID NO: 260 的序列；以及
i1.所述重鏈CDR 包含選自 GYIFTDYVIS(SEQ ID NO: 120)、IFPRSGST (SEQ ID NO: 121)、ARDYYGTSFAMDY(SEQ ID NO:122) ；SEQ ID NO:261、SEQ ID NO:262、SEQ ID NO:264、SEQ IDNO:265, SEQ ID NO:266, SEQ ID NO:267 和 SEQ ID NO:269 的序列。
17.一種分離的抗體，其中所述抗體是: Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc、Fv片段、或任何其它抗原結合片段；或抗原結合抗體部分；且 其中所述抗體具有如權利要求1至7中的一項所述的抗體的一種或多種免疫結合特征。
18.一種分離的抗體，所述抗體與如權利要求1至17中的一項所述的分離的抗體競爭結合tau蛋白。
19.一種分離的抗體，所述抗體與如權利要求6所述的分離的DC8E8抗體競爭結合tau蛋白。
20. 如權利要求1至7和10至19中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體選自: a)單克隆抗體； b)多克隆抗體； c)重組抗體；d)嵌合抗體； e)人源化抗體； f)人抗體；和 g)(a)至(f)的任一者的抗原結合片段或抗原結合部分。
21.如權利要求1至7和9至20中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體是在哺乳動物中產生。
22.如權利要求1至7和9至20中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體是由重組動物或由重組宿主細胞產生。
23.如權利要求1至22中的一項所述的分離的抗體，其中所述抗體用一種或多種標記劑可檢測地標記。
24.如權利要求23所述的分離的抗體，其中至少一種標記劑選自酶、放射性同位素、熒光團、核磁共振標記物和重金屬。
25.如權利要求1至24中的一項所述的抗體，所述抗體進一步包含至少一種連接于所述抗體的藥物。
26.一種分離的核酸，所述核酸至少編碼如權利要求1至7和9至20中的一項所述的抗體的免疫球蛋白鏈的所述結合結構域或可變區。
27.—種分離的載體，所述載體包含如權利要求21所述的核酸。
28.一種分離的宿主細胞，所述宿主細胞包含如權利要求26所述的分離的核酸和/或如權利要求27所述的載體。
29.—種分離的細胞系，所述細胞系表達如權利要求1至7和9至20中的一項所述的分離的抗體。
30.如權利要求29所述的分離的細胞系，其中所述細胞系是雜交瘤。
31.如權利要求30所述的分離的細胞系，其中所述細胞系是自其產生單克隆抗體DC8E8的雜交瘤。
32.如權利要求1至7和9至20中的一項所述的分離的抗體，所述抗體用作藥物或用于制造藥劑以診斷、預防或治療阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變。
33.如權利要求26所述的分離的核酸，所述核酸用作藥物或用于制造藥劑以治療阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變。
34.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含如權利要求1至25中的一項所述的抗體和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑。
35.一種包含抗體和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑的組合的醫藥組合物，其中所述組合包含至少兩種不同抗體，且其中所述抗體各自獨立地選自如權利要求1至25中的一項所述的抗體。
36.一種組合物，所述組合物包含至少一種如權利要求1至25所述的抗體和稀釋劑或載體。
37. 如權利要求36所述的組合物，所述組合物進一步包含至少一種選自以下的化合物或試劑:可檢測標記、匙孔血藍蛋白、破傷風類毒素或源于其它病原細菌的類毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲狀腺球蛋白、卵球蛋白、通用T細胞表位、細胞因子、趨化因子、IL-1 a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- y、GM-CSF, MI Fla、M I F I β 和 RANTES。
38.一種供醫藥或診斷使用的制品，所述制品包括包裝材料和容器，所述容器包括凍干形式的如權利要求1至25中的一項所述的抗體的溶液。
39.如權利要求39所述的制品，其中所述容器是用于向受試者遞送所述抗體的裝置或系統的組成部分。
40.一種包括如權利要求1至25中的一項所述的抗體的醫學裝置，其中所述裝置適于通過至少一種選自以下的模式接觸或施用所述抗體:胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、鞘內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內和經皮。
41.一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體。
42.如權利要求41所述的方法，其中所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
43.一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體。
44.一種針對受試者中存在阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變，或針對確定受試者顯現阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的風險來診斷或篩選受試者的方法，所述方法包括: a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體接觸；以及 b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
45.一種針對受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的存在、進展、消退或穩定化，或針對確定受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的階段來監測受試者的方法，所述方法包括: a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體接觸；以及 b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
46.如權利要求41至45中的一項所述的方法，其中所述抗體是靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鼻內、腦室內、鞘內或以氣霧劑形式施用。
47.如權利要求41至45中的一項所述的方法，其中各抗體的每劑所述有效量是所述受試者的每kg體重對應至少Img。
48.如權利要求41至45中的一項所述的方法，其中各抗體的每劑所述有效量是所述受試者的每kg體重對應至少10mg。
49.如權利要求41至48中的一項所述的方法，其中歷經至少6個月的時期以多次劑量施用所述抗體的至少一者。
50.如權利要求41至49中的一項所述的方法，其中向人受試者外周施用所述抗體以施加其有益作用。
51.如權利要求50所述的方法，其中在向人受試者外周施用時，所述抗體結合可溶性tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白或兩者。
52.如權利要求50所述的方法，其中在向人受試者外周施用時，所述抗體結合tau蛋白，其中tau蛋白呈一種或多種選自以下的病理性形式:人阿爾茨海默病患者的腦活檢中、來自阿爾茨海默病的動物模型的腦樣本中的錯序tau蛋白、錯誤無序tau蛋白、肌氨酰不溶性tau蛋白、神經原纖維纏結、神經原纖維網線和神經炎斑塊。
53.如權利要求50至52中的一項所述的方法，其中在向人受試者外周施用時，所述抗體施加一種或多種效應子功能介導的對所述受試者的有益作用。
54.如權利要求1至25中任 一項所述的抗體或如權利要求26所述的核酸，所述抗體或所述核酸用于治療或診斷選自阿爾茨海默病和相關tau蛋白病變的疾病。
55.—種包含如權利要求1至25中任一項所述的抗體或如權利要求26所述的核酸的組合物，所述組合物用于治療或診斷選自阿爾茨海默病和相關tau蛋白病變的疾病。
56.—種分離的肽，其中: a)所述分離的肽是tau蛋白的長度是至少6個氨基酸殘基、長度是至少7個氨基酸殘基、長度是至少9個氨基酸殘基、長度是至少10個氨基酸殘基、長度是至少12個氨基酸殘基或長度是30個氨基酸殘基的片段；且其中 b)所述分離的肽包含至少一種tau蛋白治療表位。
57.如權利要求56所述的分離的肽，其中所述治療表位包括選自以下位置內的那些的治療表位: 1.相對于tau441 的位置 267-273 或殘基 KHQPGGG (SEQ ID NO: 98)； i1.相對于tau441 的位置 298-304 或殘基 KHVPGGG (SEQ ID NO: 99) ii1.相對于tau441 的位置 329-335 或殘基 HHKPGGG (SEQ ID NO: 100);和 iv.相對于tau441 的位置 361-367 或殘基 THVPGGG (SEQ ID NO: 101)。
58.如權利要求56所述的分離的肽，其中所述治療表位包括選自以下位置內的那些的治療表位: 1.相對于tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相對于tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相對于tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相對于tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
59.如權利要求56至58中的一項所述的分離的肽，其中所述肽氨基酸序列是選自以下的序列:SEQ ID NO: 1-4,SEQ ID N0:9_101、SEQ ID NO: 108-112,SEQ ID NO: 154,SEQ IDNO:223-224、NIKAVPGGGS(SEQ ID NO:200)、NIKHVPGGGS(SEQ ID NO:201)、IKHVPGGGS(SEQID NO: 202), KHVPGGGSV (SEQ ID NO:203), HVPGGGSVQ (SEQ ID NO: 204)、VPGGGSVQ (SEQID NO:205) , GffSIHSPGGGSC(SEQ ID NO:250)、SVFQHLPGGGSC(SEQ ID NO:251)、ANIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 144)、DAIKHVPGGGS (SEQ ID NO: 146)、DNAKHVPGGGS (SEQ IDNO:149),DNIAHVPGGGS(SEQ ID NO:151)、DNIKAVPGGGS(SEQ ID NO:159)、DNIKHAPGGGS(SEQID NO:161)和 DNIKHVPGGGS(SEQ ID NO:171)。
60.如權利要求56至59中的一項所述的分離的肽，其中所述肽在至少一種選自測量所述肽的以下能力的測定的測定中具有活性: a)與tau蛋白競爭結合所述單克隆抗體DC8E8的能力； b)體內降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力； c)體內促進tau蛋白自腦清除的能力； d)體內降低AD的至少一種生物化學標記物的水平的能力； e)體內降低神經原纖維纏結(NFT)載荷的能力； f)體內提高至少一種神經行為參數的能力； g)有益改進受試者的AD的過程的能力； h)降低腦中、腦脊髓液中或兩者中的tau蛋白的水平的能力； i)在制備能夠與單克隆DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體中充當免疫原的能力。
61.一種化合物,所述化合物包含如權利要求56至60中的一項所述的分離的肽和部分。
62.如權利要求61所述的化合物，其中所述部分在所述肽的N末端、C末端或連接于內部氨基酸，且其中所述部分選自以下一者或多者:半胱氨酸殘基、磷酸基團、匙孔血藍蛋白、破傷風類毒素或源于其它病原細菌的類毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲狀腺球蛋白、卵球蛋白、通用T細胞表位、細胞因子、趨化因子、IL-1a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- Y、GM-CSF, ΜΙΡ1α、ΜΙΡ1β 和 RANTES。
63.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含如權利要求56至60中的一項所述的分離的肽和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑。
64.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含如權利要求61至62中的一項所述的化合物和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑。
65.如權利要求63和64中的一項所述的醫藥組合物，所述醫藥組合物適合于提供每劑劑量在Ing與1mg之間的所述肽或所述化合物。
66.如權利要求63和64中的一項所述的醫藥組合物，所述醫藥組合物適合于提供每劑劑量大于10微克的所述肽或所述化合物。
67.一種供醫藥或診斷使用的制品，所述制品包括包裝材料和容器，所述容器包括凍干形式的如權利要求56至60中的一項所述的肽或如權利要求61至62中的一項所述的化合物的溶液。
68.如權利要求67所述的制品，其中所述容器是用于向受試者遞送所述肽或所述化合物的裝置或系統的組成部分。
69.—種包括如權利要求56至60中的一項所述的肽或如權利要求61至62中的一項所述的化合物的醫學裝置，其中所述裝置適于通過至少一種選自以下的模式接觸或施用所述抗體:胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、鞘內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內和經皮。
70. 一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求61至62中的一項所述的化合物。
71.如權利要求70所述的方法，其中所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
72.—種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求61至62中的一項所述的化合物。
73.如權利要求70至72中的一項所述的方法，所述方法包括向人患者施用如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或如權利要求61至62中的一項所述的化合物和/或增大免疫反應的佐劑，所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
74.—種產生能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括用如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或用如 權利要求61至62中的一項所述的化合物免疫受試者。
75.一種分離DC8E8或分離能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗體與如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或與如權利要求61至62中的一項所述的化合物接觸。
76.—種針對受試者中存在阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變，或針對確定受試者顯現阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的風險來診斷或篩選受試者的方法，所述方法包括: a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如權利要求74所述的抗體接觸；以及 b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
77.—種針對受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的存在、進展、消退或穩定化，或針對確定受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的階段來監測受試者的方法，所述方法包括: a)使所述受試者或所述受試者的細胞、組織、器官、流體或任何其它樣本與有效量的至少一種如權利要求74所述的抗體接觸；以及 b)確定包含病理性tau蛋白和所述抗體的復合物的存在，其中存在所述復合物是對與存在病理性tau蛋白相關的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變的診斷。
78.如權利要求76至77中的一項所述的方法，其中所述肽和/或化合物是靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鼻內、腦室內、鞘內或以氣霧劑形式施用。
79.如權利要求76至78中的一項所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是每劑至少I μ g、每劑至少10 μ g、每劑至少100 μ g。
80.如權利要求79所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是在佐劑存在下每劑至少10 V- g，且在不存在佐劑下每劑至少100 V- go
81.如權利要求70至73和76至80中的一項所述的方法，其中歷經至少6個月的時期以多次劑量施用至少一種肽或化合物。
82.—種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求I至25中的一項所述的抗體和/或至少一種如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求61至62中的一項所述的化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
83.如權利要求82所述的方法，其中所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
84.一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體和/或至少一種如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求61至62中的一項所述的化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
85.如權利要求83至84中的一項所述的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向人患者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體、一種如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求61至62中的一項所述的化合物和/或增大免疫反應的佐劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑；其中所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的AD相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
86.如權利要求83至85中的一項所述的方法，其中所述組合藥劑是在施用如權利要求1至25中的一項所述的抗體、如權利要求56至60中的一項所述的肽和/或如權利要求61至62中的一項所述的化合物之前、與之同時、或之后施用。
87.—種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含藥學上可接受的載體和/或稀釋劑；和 a)如權利要求1至25中的一項所述的抗體；和/或 b)如權利要求56至60中的一項所述的肽；和/或 c)如權利要求61至62中的一項所述的化合物； 以及至少一種選自以下的組合藥劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
88.一種分離的肽，其中: a)所述分離的肽是tau蛋白的長度是6個氨基酸殘基的片段且其中 b)所述分離的肽包含至少一種tau蛋白治療表位。
89.如權利要求88所述的分離的肽，其中所述治療表位包括選自以下的治療表位: I.相對于tau441 的位置 268-273 或殘基 HQPGGG(SEQ ID NO: 223)； i1.相對于tau441 的位置 299-304 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154) ii1.相對于tau441 的位置 330-335 或殘基 HKPGGG(SEQ ID NO: 224);和 iv.相對于tau441 的位置 362-367 或殘基 HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
90.如權利要求88至89中的一項所述的分離的肽，其中所述分離的肽選自HQPGGG(SEQID NO:223)、HVPGGG(SEQ ID NO: 154)、HKPGGG(SEQID NO:224)和HVPGGG(SEQ ID NO: 154)。
91.如權利要求88至90中的一項所述的分離的肽，其中所述肽在至少一種選自測量所述肽的以下能力的測定的測定中具有活性: j)與tau蛋白競爭結合所述單克隆抗體DC8E8的能力； k)體內降低肌氨酰不溶性tau蛋白的水平的能力； I)體內促進tau蛋白自腦清除的能力； m)體內降低AD的至少一種生物化學標記物的水平的能力； η)體內降低神經原纖維纏結(NFT)載荷的能力； ο)體內提高至少一種神經行為參數的能力； P)有益改進受試者的AD的過程的能力； q)降低腦中、腦脊髓液中或兩者中的tau蛋白的水平的能力； r)在制備能夠與單克隆DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體中充當免疫原的能力。
92.一種化合物，所述化合物包含如權利要求88至91中的一項所述的分離的肽和部分。
93.如權利要求92所述的化合物，其中所述部分在所述肽的N末端、C末端或連接于內部氨基酸，且其中所述部分選自以下一者或多者:半胱氨酸殘基、磷酸基團、匙孔血藍蛋白、破傷風類毒素或源于其它病原細菌的類毒素、血清白蛋白、牛血清白蛋白、免疫球蛋白分子或其片段、甲狀腺球蛋白、卵球蛋白、通用T細胞表位、細胞因子、趨化因子、IL-1a、IL-1 β、IL-2、IL-10、IFN- Y、GM-CSF, ΜΙΡ1α、ΜΙΡ1β 和 RANTES。
94.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含如權利要求88至91中的一項所述的分離的肽和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑。
95.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含如權利要求92至93中的一項所述的化合物和藥學上可接受的載體和/或稀釋劑和/或佐劑。
96.如權利要求94和95中的一項所述的醫藥組合物，所述醫藥組合物適合于提供每劑劑量在Ing與1mg之間的所述肽或所述化合物。
97.如權利要求94和95中的一項所述的醫藥組合物，所述醫藥組合物適合于提供每劑劑量大于10微克的所述肽或所述化合物。
98.一種供醫藥或診斷使用的制品，所述制品包括包裝材料和容器，所述容器包括凍干形式的如權利要求88至91中的一項所述的肽或如權利要求92至93中的一項所述的化合物的溶液。
99.如權利要求98所述的制品，其中所述容器是用于向受試者遞送所述肽或所述化合物的裝置或系統的組成部分。
100.—種包括如權利要求88至91中的一項所述的肽或如權利要求92至93中的一項所述的化合物的醫學裝置，其中所述裝置適于通過至少一種選自以下的模式接觸或施用所述肽和/或所述化合物:胃腸外、皮下、肌肉內、靜脈內、關節內、支氣管內、腹內、囊內、軟骨內、腔內、體腔內、小腦內、腦室內、鞘內、結腸內、子宮頸內、胃內、肝內、心肌內、骨內、骨盆內、心包內、腹膜內、胸膜內、前列腺內、肺內、直腸內、腎內、視網膜內、脊柱內、滑膜內、胸內、子宮內、膀胱內、病灶內、推注、經陰道、經直腸、經頰、舌下、鼻內和經皮。
101.一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求92至93中的一項所述的化合物。
102.如權利要求101所述的方法，其中所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
103.一種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求92至93中的一項所述的化合物。
104.如權利要求101至103中的一項所述的方法，所述方法包括向人患者施用如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或如權利要求92至93中的一項所述的化合物和/或增大免疫反應的佐劑，所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
105.—種產生能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括用如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或用如權利要求92至93中的一項所述的化合物免疫受試者。
106.—種分離DC8E8或分離能夠與DC8E8競爭結合tau蛋白的抗體的方法，所述方法包括使DC8E8或所述抗體與如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或與如權利要求92至93中的一項所述的化合物接觸。
107.如權利要求101至104中的一項所述的方法，其中所述肽和/或化合物是靜脈內、肌肉內、皮下、腹膜內、鼻內、腦室內、鞘內或以氣霧劑形式施用。
108.如權利要求101至104和107中的一項所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是每劑至少I μ g、每劑至少?ο μ g、每劑至少100 μ g。
109.如權利要求108所述的方法，其中各肽和/或化合物的所述有效量是在佐劑存在下每劑至少10 V- g，且在不存在佐劑下每劑至少100 V- go
110.如權利要求101至104和107至109中的一項所述的方法，其中歷經至少6個月的時期以多次劑量施用至少一種肽或化合物。
111.一種治療受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變或預防其進展的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求I至25中的一項所述的抗體和/或至少一種如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求92至93中的一項所述的化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
112.如權利要求111所述的方法，其中所述方法能夠減輕運動損傷、提高運動功能、減輕認知損傷、提高認知功能或能夠實現其組合效果。
113.—種改善至少一種與受試者的阿爾茨海默病或相關tau蛋白病變相關的癥狀的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向所述受試者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體和/或至少一種如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求92至93中的一項所述的化合物:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
114.如權利要求111至113中的一項所述的方法，所述方法包括與至少一種選自以下的組合藥劑組合向人患者施用有效量的至少一種如權利要求1至25中的一項所述的抗體、一種如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或至少一種如權利要求92至93中的一項所述的化合物和/或增大免疫反應的佐劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑；其中所述方法實現包含針對病理性tau蛋白的抗體的免疫反應，由此治療至少一種與所述人患者的AD相關的癥狀、預防其進展或改善所述至少一種癥狀。
115.如權利要求111至114中的一項所述的方法，其中所述組合藥劑是在施用如權利要求I至25中的一項所述的抗體、如權利要求88至91中的一項所述的肽和/或如權利要求92至93中的一項所述的化合物之前、與之同時、或之后施用。
116.一種醫藥組合物，所述醫藥組合物包含藥學上可接受的載體和/或稀釋劑；和 d)如權利要求1至25中的一項所述的抗體；和/或 e)如權利要求88至91中的一項所述的肽；和/或 f)如權利要求92至93中的一項所述的化合物； 以及至少一種選自以下的組合藥劑:乙酰膽堿酯酶抑制劑、NMDA受體拮抗劑、過渡金屬螯合劑、生長因子、激素、非類固醇消炎藥物(NSAID)、抗氧化劑、脂質降低劑、選擇性磷酸二酯酶抑制劑、tau蛋白聚集抑制劑、蛋白質激酶抑制劑、熱休克蛋白抑制劑、抗淀粉狀蛋白被動和主動免疫試劑、抗淀粉狀蛋白聚集抑制劑和分泌酶抑制劑。
【文檔編號】A61P25/28GK104185640SQ201280056856
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2012年9月14日 優先權日:2011年9月19日
【發明者】M.諾瓦克, E.康特塞科瓦, B.科瓦塞克, N.奇爾卡 申請人:阿克松神經系統科學公司