文冠果果殼總皂苷的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，提供了一種文冠果果殼總皂苷的提取方法。該方法是將酶前處理藥材，酶滅活，堿調(diào)pH，加乙醇提取得文冠果殼粗皂苷，有機溶劑萃取，紫外-可見光譜方法測定含量。具體方法為：文冠果果殼粉碎，過40-120目篩，加入酶進(jìn)行酶解，酶滅活后，堿調(diào)pH，加乙醇，使醇達(dá)到50%-90%，提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏經(jīng)水分散，用有機溶劑萃取后得到總皂苷提取物。本方法所制備的文冠果殼總皂苷可以單獨或與其他藥物原料組合應(yīng)用于多種相關(guān)疾病治療。與未加酶處理相比，本發(fā)明制備出文冠果總皂苷提取物的收率為5%以上，總皂苷含量大于65%，且方法簡便、實用，經(jīng)濟(jì)，適合于工廠化生產(chǎn)。
【專利說明】文冠果果殼總皂苷的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及文冠果總皂苷的提取方法，具體涉及纖維素酶在文冠果果殼總皂苷的提取工藝中的具體應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]文冠果果殼CfefliAocera1Ssorbifolia Bunge)為無患子科(Sapindaceae)文冠果屬植物文冠果的果殼。經(jīng)研究，文冠果果殼總皂苷為文冠果果殼中主要成分，文冠果果殼總皂苷不僅具有良好的抗腫瘤活性，而且能顯著改善多種記憶障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)能力，提高大腦的缺氧耐受能力，預(yù)防并治療多發(fā)性栓塞引起的記憶保持障礙，降低谷氨酸造成的PC12細(xì)胞死亡數(shù)量，增強對神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)作用(1.李占林，李銑，李寧，李文，沙沂.文冠果果殼的化學(xué)成分.沈陽藥科大學(xué)學(xué)報2005，22 (4):271-272 ；2.劉新霞，紀(jì)雪飛，陸玲玲，楊柏珍，王力華，鄒莉波，文冠果果殼乙醇提取物對大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的改善作用.中草藥2007，38 (12):1859-1863.)。鑒于傳統(tǒng)的醇提方法提取文冠果果殼總皂苷效率較低的原因，影響了藥材中總皂苷的應(yīng)用，因此有必要開發(fā)一種更好的提取方法，從而提高總皂苷的提取率，進(jìn)而擴大文冠果藥材中總皂苷的利用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是針對傳統(tǒng)的醇提方法提取文冠果果殼總皂苷效率較低的缺陷，開發(fā)一種提取效率更高的提取方法。
[0004]本發(fā)明利用酶破壞細(xì)胞壁提高溶出的作用，對藥材先進(jìn)行酶前處理，在結(jié)合醇提方法來提高文冠果果殼總皂苷的溶出。
[0005]本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的:
將文冠果果殼粉碎，過40-120目篩，加入酶進(jìn)行酶解，酶滅活后，堿調(diào)pH，加乙醇，使醇達(dá)到50%-90%，優(yōu)選60%-80%，更優(yōu)選70%，提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏經(jīng)水分散，用有機溶劑萃取后得到總皂苷提取物。
[0006]將文冠果果殼總皂苷提取物用甲醇定容得供試品溶液。取供試品溶液，進(jìn)行顯色后測定紫外光譜，得總皂苷含量大于65%。
[0007]所述的文冠果果殼來源于無患子科(Sapindaceae)文冠果屬植物文冠果植物的果冗I，包括果柄。
[0008]所述的酶選自纖維素酶、果膠酶、蛋白酶、磷脂酶或其他能水解細(xì)胞壁的酶(包括天然和合成的酶)，質(zhì)量百分比(酶與藥材的質(zhì)量百分比)為0.5%-8%，優(yōu)選1%-5%，更優(yōu)選1%，優(yōu)選纖維素酶。
[0009]所述的酶解過程為文冠果果殼與酶在緩沖溶液中恒溫加熱酶解。
[0010]所述的緩沖溶液為檸檬酸-檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉-枸櫞酸、鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉或其他緩沖溶液，所用體積為4-8ml, pH=3-80
[0011]所用的堿選自NaOH、檸檬酸鈉，pH值為6.5-7.5。[0012]所述的醇提的提取方式包括回流、超聲、浸取、滲漉、溫提中的一種或幾種，優(yōu)選回流提取。
[0013]所述的萃取中的有機溶劑選自乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，甲醇，乙醇，或丙酮、乙醇、甲醇的水溶液中的一種或幾種，萃取溶解次數(shù)為I次或多次。
[0014]酶解過程中溫度范圍:40-50°C，酶解2_5h。
[0015]本發(fā)明能夠提高文冠果果殼中總皂苷的含量，應(yīng)用本方法獲得文冠果果殼總皂苷提取物的收率為5%以上，總皂苷含量大于65%，含量測定方法采用香草醛-濃硫酸法，以人參皂苷Re為參照。
【具體實施方式】
[0016]下面的實施例可進(jìn)一步說明本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。
[0017]實施例1:
文冠果果殼總皂苷提取原工藝:
(1)文冠果果殼的粉碎:將文冠果果殼粉碎，過60目篩，備用。
[0018](2)醇提:精密稱取文冠果果殼粉末2g，加入40ml的50%、70%或90%乙醇，混合均勻；90°C回流提取2h ;過濾，回收乙醇得浸膏，浸膏用8倍量水溶解，離心，取上清液。
[0019](3)萃取:用乙酸乙酯(1:1，V/V)萃取3次除去部分雜質(zhì)，水層繼續(xù)用水飽和正丁醇(1:l，v/v)溶解萃取3次，合并正丁醇層，減壓回收溶劑，浸膏經(jīng)減壓干燥稱重0.09g (收率為4.5% )，用甲醇定容到100ml，得總皂苷供試品溶液。
[0020]實施例2:
文冠果果殼總皂苷的酶-醇提取工藝:
酶種類、酶加入量對文冠果果殼總皂苷含量的影響，結(jié)果如下:
【權(quán)利要求】
1.文冠果果殼總皂苷的提取方法，其特征在于:先將藥材進(jìn)行酶解，然后進(jìn)行醇提取。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述的文冠果果殼來源于無患子科(Sapindaceae)文冠果屬植物文冠果的果殼,包括果柄。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:所述的酶選自纖維素酶、果膠酶、蛋白酶、磷脂酶，加入的質(zhì)量百分比為0.5-8% ;優(yōu)選1-5%。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取方法，其特征在于:所述的酶為纖維素酶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:酶解過程為文冠果果殼與酶在緩沖溶液中恒溫加熱酶解。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于:所述的緩沖溶液選自檸檬酸-檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉-枸櫞酸或鄰苯二甲酸氫鉀-氫氧化鈉，其體積為4-8ml，pH=3-8。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的提取方法，其特征在于:恒溫溫度為:40-50°C，酶解2-5h。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:醇提取方式為回流、超聲、浸取、滲漉、溫提中的一種或幾種，優(yōu)選回流提取；醇為50%-90%乙醇，優(yōu)選70%。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取方法，其特征在于:將文冠果果殼粉碎，過篩，加入酶進(jìn)行酶解，酶滅活后，堿調(diào)PH，加乙醇回流提取，回收乙醇得醇浸膏，醇浸膏經(jīng)水分散，用有機溶劑萃取或溶解后得到浸膏。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的提取方法，其特征在于:所用的堿選自NaOH或檸檬酸鈉，調(diào)節(jié)pH值為6.5-7.5，所述的有機溶劑選自乙酸乙酯，正丁醇，丙酮，甲醇，乙醇，含水的丙酮、乙醇、甲醇中的一種或幾種。
【文檔編號】A61P35/00GK103908513SQ201310001085
【公開日】2014年7月9日 申請日期:2013年1月4日 優(yōu)先權(quán)日:2013年1月4日
【發(fā)明者】王曉波, 高慧媛, 襲榮剛, 吳立軍, 張成濤 申請人:中國人民解放軍第二一O醫(yī)院