專利名稱：石岐外感茶在制備防治手足口病中藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫用配制品，具體涉含來自植物的未確定結構的藥物制劑。
背景技術：
手足口病(Hand-foot-mouthdisease, HFMD)是由多種腸道病毒引起的常見傳染病，以嬰幼兒發病為主。大多數患者癥狀輕微，以發熱和手、足、口腔等部位的皮疹或皰疹為主要特征。少數患者可并發無菌性腦膜炎、腦炎、急性弛緩性麻痹、呼吸道感染和心肌炎等，個別重癥患者兒病情進展快，已發生死亡。少年兒童和成人感染后多不發病，但能夠傳播病毒。手足口病的癥狀表現為:急性起病，發熱，手掌或腳掌部出現斑丘疹和皰疹，臀部或膝蓋也可出現皮疹。皮疹周圍有炎性紅暈，皰內液體較少；口腔黏膜出現散在的皰疹，疼痛明顯。部分患兒可伴有咳嗽、流涕、食欲不振、惡心、嘔吐和頭疼等癥狀。手足口病是全球性 傳染病，世界大部分地區均有此病流行的報道。1957年在新西蘭首次報道該病，1958年第一次分離出柯薩奇病毒，1959年提出并命名為手足口病。我國于1981年上海首次報道本病，此后，北京、河北、天津、福建、吉林、安徽等10幾個省份均有本病報道。1983年天津發生CoxA16引起的手足口病暴發，5-10月間發生了 7000余病例。1995年武漢病毒研究所從手足口病人中分離出EV71。2008年HFMD疫情在安徽省阜陽市暴發，共發生HFMD病例4496例，死亡22例，其病原體為EV71。2010年全國報告1795336例患者，死亡888例，流行呈逐年增加的趨勢，嚴重威脅著人類的健康和全球經濟的發展。引起手足口病的腸道病毒包括腸道病毒71型(EV71)和A組柯薩奇病毒(CoxA)、埃可病毒(Echo)等某些血清型。EV71病毒顆粒為二十面體對稱的球形結構，無包膜和突起，直徑大約在24 30nm。病毒顆粒的衣殼共包括60個亞單位，分別由4種衣殼蛋白(VP1-VP4)拼裝成五聚體樣結構。4種結構蛋白中，除VP4包埋在病毒顆粒外殼的內側與病毒的核心緊密連接以外，其他3種結構蛋白均暴露在病毒顆粒的表面，因而抗原決定簇基本上位于這三種蛋白上。病毒基因組為712 815kb核苷酸單股正鏈RNA，基因組中僅有一個開放閱讀框，編碼含2194個氨基酸的多聚蛋白，在其兩側為5'和3'非編碼區，在3'非編碼區的末端含有一個長度可變的多聚腺苷酸尾巴(polyA)。該多聚蛋白可進一步被水解成P1、P2、P3 3個前體蛋白。Pl前體蛋白編碼VP1、VP2、VP3、VP4 4個病毒外殼蛋白；P2和P3前體蛋白編碼7個非結構蛋白，包括2A (特異性蛋白水解酶)、2B、2C、3A、VPg (5'蛋白水解酶)、3C (特異性蛋白水解酶)、3D (RNA多聚酶組分)。據推測，5'非編碼區可能與病毒株的致病性有關。目前防治手足口病的最有效手段是接種疫苗，但至今仍未開發出供臨床應用的的手足口病病毒疫苗，從而加大了防治的難度。由于目前尚無特異、高效的抗病毒藥物，對癥處理是臨床的主要治療原則，利用更昔洛韋、病毒唑、干擾素進行抗病毒治療，但最終還需靠人的自身免疫力治愈，且大多數的西藥都可能導致嚴重的副作用。石岐外感茶(國藥準字Z44020183)是一種治療流行性感冒的中藥制劑，其有效成分由以下原料藥制成:崗梅150g，鐵包金150g，蒲桃150g，臭屎茉莉60g，露兜簕150g。該茶劑具有疏風清熱，解暑消食。用于外感引起的發熱頭痛，咳嗽，骨痛，食滯飽脹，喉干舌燥，對于治療流行性感冒有顯著效果，但目前尚未有該石岐外感茶有防治手足口病的報道。

發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供石岐外感茶在制藥中的新用途。石岐外感茶在制藥中的新用途是:石岐外感茶在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應用。所述的石岐外感茶為國家正式批準生產和上市的中成藥，國藥準字號為210970100，所含的有效成分由以下原料制得:崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g。上述石岐外感茶的制備方法由以下步驟組成:稱取崗梅、鐵包金、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過，濃縮至660ml，即得。本發明所涉及的石岐外感茶除了具有治療預防流行性感冒的作用外，還能抑制腸道病毒EV71在RD細胞上復制，減少RD細胞的病變，具有抗腸道病毒EV71的作用，用于防治手足口病的效果顯著。當所述的石岐外感茶用于防治手足口病時，其用法如下:每次66毫升，一日2次，7天一個療程；兒童每次33毫升，一日2次，7天一個療程。為了公眾能更好地理解本發明的有益效果，下面將通過實施例和體外細胞實驗進一步闡明。


圖1為石岐外感茶對RD細胞的細胞毒性示意圖，該圖是不同濃度藥物加入到RD細胞中培養60h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測藥物對細胞生長的影響結果圖。圖2為石岐外感茶抗腸道病毒EV71的作用示意圖，該圖是不同濃度藥物加入腸道病毒EV71侵染的RD細胞中培養60h后，采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測藥物對腸道病毒EV71抑制的影響結果圖。
具體實施例方式I實驗材料與方法1.1細胞、病毒RD細胞購自美國模式菌種收集中心(ATCC)，病毒EV71由廣州市兒童醫院中心實驗室惠贈。藥物受試藥物:石岐外感茶，由中山市恒生藥業有限公司，批號:20120311。所述受試藥物的具體制備方法由以下步驟組成:稱取崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過，濃縮至660ml，即得。對照藥物:利巴韋林注射液，由廣州市白云山天心制藥股份有限公司，批號:120201。
1.2實驗儀器倒置顯微鏡(Nikon，型號:TMS_F)、酶標儀(B10-RAD，型號:iMark)2實驗方法2.1細胞培養370C，5% (體積比，以下相同)CO2加濕培養箱中培養。使用含有10% (體積比，以下相同)FBSU00U/ml的青霉素和鏈霉素的DMEM培養基。細胞至90%匯合度后傳代，傳代比例 1/3-1/4。2.2病毒培養接種EV71病毒200ul/孔于已經長滿90%細胞的24孔板，置37°C，5%C02培養箱中，吸附lh，加入含1%FBS的維持液，次日換液，逐日觀察，待3/4細胞出現病變時，放在_80°C冰箱中凍存20min,自然解凍20min,反復3次，13000rpm, IOmin, 4°C離心,過濾膜，取上清液，每管0.5ml分裝于無菌離心管(1.5ml)中，冷凍保存于_80°C備用。2.3TCID50腸道病毒EV71感染性的測定2.3.1TCID50 的測定選擇經24_48h培養后生長旺盛、成層良好的RD細胞細胞I瓶，傾棄生長液，加入Iml胰酶，37°C消化2-3min，用含10%FBS的DMEM生長液分散細胞，使細胞胞懸液濃度為2X IO4個/孔。用移液器將細胞懸液加入96孔板中，每孔IOOul。將培養板置于37°C，5%C02溫箱中培養12 18小時，待細胞長成單層后備用；將腸道病毒EV71用含1%FBS的維持液作10倍稀釋系列成10個濃度，棄去培養板中的生長液，每孔加入不同稀釋度的病毒液IOOul，每個稀釋度6孔。6個對照孔加入維持液IOOul，37°C吸附lh，然后各孔再加入維持液IOOul，輕輕搖勻，37°C，5%C02培養箱培養3天，逐日觀察記錄各孔細胞病變情況。2.3.2結果統計細胞全部出現CPE判為(++++) ；50%-75%細胞出現CPE為(+++) ;25%_50%細胞出現CPE (++);25%以內細胞出現CPE為( + );無CPE為(一)。并根據Reed和Muench方法對病毒滴度進行計算，最終獲得TCID5(i/100微升；距離比=(高于50%病變率的百分數-50%)/ (高于50%病變率的百分數-低于50%的病變率)LogTCID5tl=距離比*稀釋度對數之間的差+高于50%病變率的稀釋度的對數，結果見表I。表I腸道病毒EV71接種RD細胞的TCID5tl滴度統計
權利要求
1.石岐外感氽在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應用；所述的石岐外感茶所含的有效成分由以下原料制得: 崗梅150g、鐵包金150g、蒲桃150g、臭屎茉莉60g和露兜簕150g。
2.根據權利要求1所述的應用，其中所述的石岐外感茶的制備方法由以下步驟組成: 稱取崗梅、鐵包金 、蒲桃、臭屎茉莉和露兜簕，剪碎，打成粗粉，加8倍量蒸餾水煎煮兩次，每次lh，合并水煎液，濾過，濃縮至660ml，即得。
全文摘要
本發明涉及石岐外感茶在制備防治EV71型腸道病毒感染引起的手足口病中藥中的應用。所述的石岐外感茶為國家正式批準生產和上市的中成藥，其國藥準字號為Z44020183，它的藥物組方為崗梅150g，鐵包金150g，蒲桃150g，臭屎茉莉60g，露兜簕150g。本發明所涉及的石岐外感茶能抑制腸道病毒EV71在RD細胞上復制，減少RD細胞的病變，具有抗腸道病毒EV71的作用，用于防治手足口病的效果顯著。
文檔編號A61K36/88GK103070990SQ20131001424
公開日2013年5月1日 申請日期2013年1月15日 優先權日2013年1月15日
發明者李耿, 賴小平, 許仕杰, 姚海燕 申請人:東莞廣州中醫藥大學中醫藥數理工程研究院