專利名稱：新型無油佐劑制備方法及用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種新型疫苗佐劑及其應用，屬于生物學領域，特別是獸用生物制品領域。
背景技術：
目前，獸用疫苗生產中廣泛使用礦物油佐劑，即分別在礦物油佐劑和疫苗抗原中分別加入乳化劑，在高剪切力的作用下制成油包水或水包油包水型乳劑疫苗。該類疫苗在免疫應答和免疫持續期方面具有獨特的優勢，受到廣泛認可。但是該疫苗黏度大、不易注射、不易吸收、疫苗副反應大、可不同程度地導致局部產生肉芽腫、無菌性膿腫和炎癥反應，甚至有致癌作用，對動物胴體的損傷和動物源性食品安全影響較大，諸多問題一直未得到有效解決。鋁膠佐劑也是目前常用的一種疫苗佐劑，是目前唯一通過FDA批準的能用于人的佐劑，已經廣泛用于人獸疫苗生產。鋁膠佐劑作用機制是其與抗原形成復合物，注射后在局部形成抗原貯存庫，使抗原緩慢釋放，從而誘導機體持續的免疫反應。但是鋁膠佐劑也存在許多不足之處，鋁佐劑主要促進體液免疫應答而不能很好地誘導細胞介導的免疫。注射后局部反應較大，容易形成局部壞死或肉芽腫，影響動物源性食品品質，而且容易誘導機體的過敏反應。除了油佐劑和鋁膠佐劑，目前報道的疫苗佐劑還有脂質體、免疫刺激復合物佐劑、CpG序列、細胞因子、蜂膠、植物皂甙等。上述的佐劑免疫增強效果也確實存在，但它們也有一些不可避免的缺點，如效果較弱、免疫持續期短、免疫機制不明確或者產品成本高、效果不穩定、難以應用于產業化生產。

發明內容
本發明￠05無油佐劑)目的在于針對目前傳統的礦物油佐劑所存在的一系列問題，提供一種可以完全替代礦物油佐劑的新型無油佐劑，該佐劑可以降低疫苗的黏稠度，提高疫苗穩定性，降低疫苗副反應,并可以使動物機體快速產生免疫保護作用，同時也提高了動物源性肉食品的安全性。本發明的另外一個目的在于提供一種上述佐劑的制備方法，該方法制備簡單，成本低廉，適于規?；a。本發明可應用于畜禽疫苗產品的生產和使用過程中，即可用于病毒或細菌類滅活疫苗作為疫苗佐劑，也可用于病毒或細菌類活疫苗作為疫苗稀釋保護劑。本發明佐劑的原料及其配比為:磷酸氫二鈉2 5g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉3 10g、海藻糖2 10g、黃芪多糖2 10g、谷氨酸鈉I 5g、明膠5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g, 1000ml注射用水。優選磷酸氫二鈉2 4g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉6 10g、海藻糖4 8g、黃芪多糖4 8g、谷氨酸鈉2 4g、明膠9 16g、聚乙二醇30005 8g，葡聚糖2 4g，IOOOml注射用水。進一步優選磷酸氫二鈉3 4g、磷酸二氫鉀0.5 0.Sg、氯化鈉7 9g、海藻糖6 8g、黃苗多糖6 8g、谷氨酸鈉3 4g、明膠12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。最優選磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水本發明佐劑的制備方法為按照配比稱取上述原料，充分溶解后，經高溫高壓滅菌后備用。進一步優選，采用超聲波處理充分溶解后，經121°C，高壓滅菌20min后備用。本發明方法簡單易行，用于疫苗生產中即可提高疫苗產品質量，又可降低疫苗生產成本。用于凍干活疫苗稀釋保護劑可提升疫苗免疫效果，降低免疫失敗機率。
具體實施例方式結合實施對本發明做進一步描述和論證，但并不對本發明做任何限定。實施例1本發明佐劑(605無油佐劑)的配制方法佐劑I組:磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙 二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經121 C，聞壓滅圃20min后備用。佐劑2組:稱取磷酸氫二鈉5g、磷酸二氫鉀0.2g、氯化鈉10g、海藻糖2g、黃芪多糖log、谷氨酸鈉lg、明膠20g、聚乙二醇30003g，葡聚糖5g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經121°C，高壓滅菌20min后備用。佐劑3組:磷酸氫二鈉2g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉3g、海藻糖10g、黃芪多糖2g、谷氨酸鈉5g、明膠5g、聚乙二醇300010g，葡聚糖lg，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經121 C，聞壓滅囷20min后備用。佐劑4組:磷酸氫二鈉4g、磷酸二氫鉀lg、氯化鈉5g、海藻糖9g、黃芪多糖Sg、谷氨酸鈉2g、明膠16g、聚乙二醇30005g，葡聚糖3g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經121 C，聞壓滅囷20min后備用。佐劑5組:磷酸氫二鈉2g、磷酸二氫鉀0.4g、氯化鈉Sg、海藻糖4g、黃芪多糖Sg、谷氨酸鈉4g、明膠6g、聚乙二醇30007g，葡聚糖4g，1000ml注射用水，采用超聲波處理后，經121 C，聞壓滅囷20min后備用。實施例2佐劑用于禽流感滅活疫苗的研究將檢驗合格的禽流感病毒滅活液與本發明佐劑按照4: 6比例進行混合，500 IOOOrpm攪拌30分鐘。然后按照現行《中華人民共和國獸藥典》三部規定的方法分別進行無菌檢驗、物理性狀、穩定性、黏度、安全性和效力檢驗，試驗同時設立注射用白油佐劑疫苗和商品疫苗對照。結果表明采用本發明佐劑與傳統的油佐劑制成的滅活疫苗比較，在穩定性、黏稠度、安全性、疫苗配制工藝方面，均具有顯著的優勢。結果見表I。表1各批次新城疫滅活疫苗檢驗結果
權利要求
1.一種不含有礦物油和/或氫氧化鋁的佐劑復合物。
2.一種佐劑復合物，其特征在于原料及其配比為:磷酸氫二鈉2 5g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉3 10g、海藻糖2 10g、黃苗多糖2 10g、谷氨酸鈉I 5g、明膠5 20g、聚乙二醇30003 IOg,葡聚糖I 5g,注射用水1000ml。
優選磷酸氫二鈉2 4g、磷酸二氫鉀0.2 lg、氯化鈉6 10g、海藻糖4 8g、黃芪多糖4 8g、谷氨酸鈉2 4g、明膠9 16g、聚乙二醇30005 8g,葡聚糖2 4g, 1000ml注射用水。
進一步優選磷酸氫二鈉3 4g、磷酸二氫鉀0.5 0.8g、氯化鈉7 9g、海藻糖6 8g、黃苗多糖6 8g、谷氨酸鈉3 4g、明膠12 15g、聚乙二醇30006 8g,葡聚糖2 3g。
最優選磷酸氫二鈉3.5g、磷酸二氫鉀0.6g、氯化鈉7g、海藻糖7g、黃芪多糖7g、谷氨酸鈉3g、明膠13g、聚乙二醇30007g，葡聚糖3g，1000ml注射用水。
3.根據權利要求1或2所述佐劑復合物的制備方法，其特征在于，按照配比稱取原料后，直接經高壓滅菌后使用。
4.根據權利要求1或2所述佐劑 復合物的應用，其特征在于將其與疫苗滅活抗原按照4:1 1:4的比例直接進行混合攪拌均勻即制成滅活疫苗。
5.根據權利要求4所述的應用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫滅活疫苗、禽流感滅活疫苗、傳染性支氣管炎滅活疫苗、傳染性法氏囊滅活疫苗、口蹄疫滅活疫苗、豬支原體肺炎滅活疫苗、雞傳染性鼻炎滅活疫苗等病毒或細菌滅活疫苗。
6.根據權利要求1或2所述佐劑復合物的應用，其特征在于將其進行5 10倍稀釋后可用作凍干活疫苗的稀釋液和抗原保護劑。
7.根據權利要求6所述的應用，其中所述疫苗包括但不限于新城疫活疫苗、傳染性支氣管炎活疫苗、傳染性喉氣管炎活疫苗、傳染性法氏囊活疫苗、豬痕活疫苗、偽狂犬病活疫苗等病毒或細菌活疫苗。
全文摘要
本發明涉及一種新型無油佐劑(605佐劑)復合物制備方法及其在獸用疫苗中的應用。本發明制備的佐劑用于滅活疫苗生產可完全代替礦物油佐劑和鋁膠佐劑，能被機體在短期內完全吸收，無殘留，副反應小，可提高疫苗的安全性，同時簡化疫苗生產工藝，降低疫苗生產成本。本發明制備的佐劑也可作為活疫苗稀釋保護液，具有保護疫苗抗原生物活性，增強疫苗免疫效果，延長疫苗抗體持續期等特點。
文檔編號A61P31/14GK103083659SQ201310018498
公開日2013年5月8日 申請日期2013年1月18日 優先權日2013年1月18日
發明者趙 卓, 王力, 江厚生 申請人:北京華夏興洋生物科技有限公司