青蒿琥酯在制備治療嬰幼兒血管瘤藥物中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明公開了青蒿琥酯在制備治療小兒血管瘤藥物中的應用，本發明的藥物針對血管瘤形成的病理機制，從病因上進行根本治療；副作用小，不會引起局部栓塞及正常組織嚴重壞死；此外，由于青蒿琥酯廉價，能夠明顯降低臨床治療費用。
【專利說明】青蒿琥酯在制備治療嬰幼兒血管瘤藥物中的應用
所屬【技術領域】
[0001]本發明屬于醫藥領域，具體而言，涉及青蒿琥酯在制備治療嬰幼兒血管瘤藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]血管瘤是嬰幼兒常見的一種先天性脈管發育異常，嬰幼兒血管瘤發病率10%-12%，發病率高，目前臨床上治療方法多樣。Dan xu等在研究嬰幼兒血管瘤發現增殖期血管瘤比消退期血管瘤細胞中高表達SALL4+、⑶133，證實血管瘤具有干細胞特性。Damian Medici在雷帕霉素治療增殖期血管瘤機制中的研究中發現雷帕霉素通過抑制mTOR通路進而降低HIF-1 a ,VEGF的表達從而抑制血管內皮細胞的增殖。Harvey Chin等在研究普萘洛爾治療嬰幼兒血管瘤機制方面發現普萘洛爾通過下調HIF-1 α，降低其下游VEGF、VEGFRl、VEGFR2及MCP-1的表達，從而抑制血管瘤的增殖，但對MMPs的表達無差異。在血管生成過程中，缺氧誘導因子HIF-1 a ,VEGF,VEGFRs等起重要作用外，P印per MS在血管生成方面研究發現基質金屬蛋白酶(MMPs)起降解基質，為血管生成拓展空間的重要作用。青蒿素(artemisinin)首先是由我國藥學工作者于20世紀70年代初從青蒿中提取的有效抗瘧成分。目前抗腫瘤血管生成成為治療腫瘤的熱點，Hu1-jun Zhou等研究發現二輕青蒿素在白血病細胞株K562動物模型中可下調VEGF的表達，抑制新生血管的形成，并促進腫瘤細胞的凋亡，李敖等研究發現二氫青蒿素可誘導HL-60細胞凋亡，其機制可能是通過對線粒體凋亡通路中Bel,Bax和caspase-3蛋白表達的調控而發揮作用。馬虎等研究發現青蒿琥脂對人肺腺癌A549細胞具有抑制作用，其機制與抑制細胞增殖、誘導凋亡和細胞周期阻滯有關，并且聯合應用能夠增加抗癌藥物進入細胞內的濃度。
[0003]臨床治療小兒血管瘤手段繁多，目前治療血管瘤現狀及不足之處，例如1、激素治療:包括口服和局部注射，能夠達到確切的效果，缺點:①誘發或加重局部感染②物質代謝和水鹽代謝紊亂長期大量應用糖皮質激素可引起物質代謝和水鹽代謝紊亂，出現類腎上腺皮質功能亢進綜合征，③心血管系統并發癥，長期應用糖皮質激素，由于可導致鈉、水潴留和血脂升高，可誘發高血壓和動脈粥樣硬化。④消化系統并發癥，刺激胃酸、胃蛋白酶的分泌并抑制胃粘液分泌，降低胃粘膜的反抗力，故可誘發或加劇消化性潰瘍，糖皮質激素也能掩飾潰瘍的初期癥狀，以致出現突發出血和穿孔等嚴重并發癥，應加以注意。長期使用時可使胃或十二指腸潰瘍加重。2、心得安口服治療其確切作用機制尚不明確。缺點:治療過程中需密切觀察患兒心功能及血糖變化，出現以下幾點需停藥:①心動過緩或心率降至同齡幼兒清醒狀態下心率值70%以下；②低血壓癥狀或者血壓下降值超過同齡幼兒清醒狀下血壓值25%以上；③低血糖癥狀喘息或者呼吸困難。不良反應:應用該品可出現眩暈、神智模糊(尤見于老年人)、精神抑郁、反應遲鈍等中樞神經系統不良反應；頭昏(低血壓所致)；心率過慢(< 50次/分鐘)；較少見的有支氣管痙攣及呼吸困難、充血性心力衰竭；更少見的有發熱和咽痛(粒細胞缺乏)、皮疹(過敏反應)、出血傾向(血小板減小)；不良反應持續存在時，須格外警惕雷諾氏征樣四肢冰冷、腹瀉、倦怠、眼口或皮膚干燥、惡心、指趾麻木、異常疲乏等。禁忌癥:①支氣管哮喘；②心源性休克心臟傳導阻滯(I1-1II度房室傳導阻滯)重度或急性心力衰竭竇性心動過緩
[0004]硬化劑注射治療，缺點:局部注射時疼痛較劇，可能引起較大范圍的組織壞死、潰爛，最終形成疤痕，偶可產生嚴重的過敏反應。頭面部近眼眶的病變，硬化劑栓塞血管可致眼球壞死。4、抗癌藥物注射治療:目前臨床應用有平陽霉素，博來霉素，長春新堿，環磷酰胺，放線菌素D等，以平陽霉素使用最多。其主要缺點:不良反應主要有發熱、胃腸道反應(惡心、嘔吐、食欲不振等)、皮膚反應(色素沉著、角化增厚、皮炎、皮疹等)、脫發，肢端麻痹和口腔炎癥等，肺部肺炎樣病變或肺纖維化等.并且抗癌藥物應用于血管瘤(非真性腫瘤)的治療存在悖論5、激光治療:C02激光及YAG激光治療血管瘤由于光能的穿透深度有限，不能有效控制血管瘤的生長，并且容易留下色素減退瘢痕。6、生物學藥物治療:重組α -干擾素及β -干擾素注射治療嬰幼兒血管瘤由于治療時間長(3-6個月)、易出現高熱、停藥后反跳及神經毒性等副作用，在我國應用極少。7、手術治療:手術不可避免會留下疤痕，切除大的血管瘤可能造成大出血和嚴重的組織損傷，腫瘤切除不完全可復發，尤其是正處于生長期的血管瘤。由于有眾多的非手術方法可供選擇，手術切除治療血管瘤已成越來越少的趨勢。
[0005]在治療方面沒有統一的治療標準，且各種治療方法缺乏一定的理論基礎，有些注射藥物如激素類曲安奈德，抗癌藥物平陽霉素等長期副作用難以評估。青蒿素類藥物用于臨床治療瘧疾已有幾十年歷史，是一種較為成熟的臨床藥物，目前未發現有較重全身和局部不良反應，然而，現有技術沒有將青蒿琥脂應用于小兒血管瘤。青蒿琥脂廉價，世界最大的青蒿素生產基地就在重慶。如果能夠把青蒿琥酯用于血管瘤治療，不僅能夠降低目前臨床治療的副作用，為病人節約醫療成本，節省醫療資源，而且能夠把我國的傳統醫學發揚光大。

【發明內容】

[0006]本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種治療小兒血管瘤的藥物，本發明的藥物針對血管瘤形成的 病理機制，從病因上進行根本治療；副作用小，不會引起局部栓塞及正常組織嚴重壞死；此外，由于青蒿琥酯廉價，能夠明顯降低臨床治療費用。
[0007]本發明一方面涉及青蒿琥酯在制備治療小兒血管瘤藥物中的應用。
[0008]在本發明的一個優選實施方式中，所制備的藥物為注射劑，優選的，所述的注射劑配方包括10重量份青蒿琥酯+500-1500重量份NaHC03+40-80重量份NaCl,優選地,除了上述組分之外僅包括注射用水。
[0009]在本發明的另外一個優選實施方式中，所述的藥物含有或者不含有其它活性成分，優選的，含有或者不含有其它治療小兒血管瘤的活性成分。
【具體實施方式】
[0010]下面通過實施例詳細敘述本發明的技術內容:
[0011]青蒿琥酯注射液配制:IOmg青蒿琥酯+0.6mlNaHC03+5.4ml0.9% NaCl,設對照組、青蒿琥酯終濃度 100ug/ml、200ug/ml、300ug/ml、400ug/ml、500ug/ml 濃度組
[0012]1、細胞實驗:[0013]①MTT法檢測不同濃度組青蒿琥脂對EOMA細胞24小時、48小時、72小時增殖抑制作用；
[0014]②細胞遷移抑制實驗:tranSWell試劑盒檢測不同濃度組青蒿琥酯對EOMA細胞28小時抑制作用；
[0015]③流式細胞技術測不同濃度組青蒿琥脂對EOMA細胞24小時、48小時、72小時細胞周期影響；
[0016]④RT-PCR檢測不同濃度組青蒿琥脂對EOMA細胞基因水平24小時、48小時、72小時 HIF-1 a、VEGF、VEGFRl、VEGFR2 作用影響；
[0017]⑤Western-bolt檢測不同濃度組青蒿琥脂對EOMA細胞蛋白水平24小時、48小時、72 小時 HIF-1 a、VEGF、VEGFRl、VEGFR2 作用影響，實驗結果顯示 HIF-1 a ,VEGF,VEGFRUVEGFR2的表達水平都至少提高了 5%以上。
[0018]3、動物實驗
[0019]①動物模型建立:收集EOMA細胞，用磷酸鹽緩沖液(PBS)調整成IX 105/mL細胞濃度，細胞懸液于裸鼠腰背部皮內注射；分組=IOul組、IOOul和對照組；肉眼可見腫瘤后，隔日觀察腫瘤生長情況，游標卡尺測量腫瘤的長、短徑，計算瘤體體積，并稱重。接種EOMA細胞當天、接種后第7天、14天、21天及30天取實驗組裸鼠外周血行血常規檢查以觀察腫瘤對模型鼠血液系統的影響。處死實驗組裸鼠前，行B超檢查觀察腫瘤情況，各實驗組裸鼠于接種后30天頸椎脫白處死，解剖并取腫瘤和心、肺、肝、腎、骨等重要臟器行常規HE染色和病理學檢查。②裸鼠接種EOMA細胞，待肉眼可見腫瘤后，注射不同濃度組青蒿琥酯，對血管瘤裸鼠模型進行療效觀察，觀察血管瘤大小變化情況，待裸鼠出現嗜睡癥狀后處死裸鼠，檢測血管瘤組織中HIF-1 a、VEGF、VEGFRl、VEGFR2、MMP-9的蛋白表達情況。實驗結果顯示HIF-1a、VEGF、VEGFRl、VEGFR2的表達水平都至少提高了 5%以上。
[0020]以上所述，僅為本發明的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何不經過創造性勞動想到的變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。因此，本發明的保護范圍應該以權利要求書所限定的保護范圍為準。
【權利要求】
1.青蒿琥酯在制備治療小兒血管瘤藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，所制備的藥物為注射劑。
3.根據權利要求1所述的應用，所述的藥物含有或者不含有其它活性成分，優選的，含有或者不含有其它治療小兒血管瘤的活性成分。
4.一種治療小兒血管瘤的注射劑，其特征在于含有活性成分青蒿琥酯。
【文檔編號】A61K9/08GK103462988SQ201310348171
【公開日】2013年12月25日 申請日期:2013年8月9日 優先權日:2013年8月9日
【發明者】金先慶, 趙占波, 王寧, 金鑫, 丁雄輝 申請人:重慶醫科大學附屬兒童醫院