銀杏酚酸納米脂質體在治療婦科病和性病中的應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及銀杏酚酸納米脂質體在制備治療婦科病和性病的外用制劑中的用途。所述銀杏酚酸通過化學分離方法，從銀杏的外種皮部位的提取物中得到。所述銀杏酚酸納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。所述婦科病和性病為感染性、炎癥性生殖器疾病。含有銀杏酚酸納米脂質體的治療婦科病和性病的藥物、消毒劑外用制劑，含銀杏酚酸納米脂質體0.001－80%，以及藥學上常用的外用制劑基質或可接受的載體；所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型。藥理學實驗和臨床試用表明本發明對多種婦科病和性病療效突出，有效率達100%，使用安全無副作用。
【專利說明】銀杏酚酸納米脂質體在治療婦科病和性病中的應用
【技術領域】
[0001]本發明屬于生物醫藥【技術領域】，具體涉及銀杏酚酸納米脂質體在制備治療婦科病和性病的外用制劑中的用途。
【背景技術】
[0002]婦科病和性病是臨床最常見的疾病之一，且在各地有逐年上升的趨勢。由于此類疾病持續時間長，易反復發作，給患者帶來痛苦，嚴重影響患者的身心健康。此類疾病多與生殖器及周圍常駐病原體感染有關，如淋球菌、皰疹病毒、人類乳頭瘤病毒(HPV)、梅毒螺旋體、陰虱等感染，引起多種性病如淋病、生殖器皰疹、尖銳濕疣、梅毒、陰虱等；婦科病如滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛等。目前治療此類疾病多為抗菌藥、抗病毒藥或抗真菌藥，以及皮質類固醇激素和免疫抑制劑，這些藥物雖有一時效果，但見效慢、停藥后易復發；且長期應用會引起諸多副作用。為了避免此類不良現象的發生，市場需要研制開發一種來源于天然、效果顯著、無明顯不良反應的治療婦科病和性病的外用制劑，以減輕患者痛苦。此類疾病種類多且患者眾多，因此開發治療此類疾病的外用制劑產品具有良好的臨床應用前景，對患者是十分有益和必要的。
[0003]銀杏是我國珍貴的藥用植物，銀杏的葉、果和外種皮等皆具有藥用開發價值。據《本草綱目》記載，銀杏性甘、苦、平、澀；有定喘止咳、止帶濁、止痛之功；主治寒嗽痰喘、哮喘、小便頻數、赤白帶下 、手足皸裂等。特別是近幾十年來人們發現銀杏葉中含有多種有效成分，主要有效成分為黃酮類和萜類內酯化合物，具有防治心腦血管疾病的功能。我國民間早有將銀杏外種皮浸泡液作為農藥使用，對蚜蟲、稻螟蟲等害蟲有殺滅作用。
[0004]銀杏酚酸為無色或淡黃色的油狀或粉末狀物質，是主要存在于銀杏外種皮中一類具有重要生理活性的組分。本發明所涉及的銀杏酚酸為烷基或烯基苯酚酸類物質，根據分子中苯環上是否連接有羧基，將其分為銀杏酸和銀杏酚兩大類。銀杏酸是水楊酸分子在苯環C6位上有飽和或不飽和長鏈烷基的系列化合物，按化學結構可分為5種，側鏈R為C13H27' C15H29' C15Ha' C17H31 和 C17H33，對應的分子量分別為 320、346、348、372、374。銀杏酚酸包括白果酸、氫化白果酸、白果新酸、白果亞酸、氫化白果亞酸、漆樹酸、銀杏酚、銀杏二酚、白果醇等。銀杏酚酸(銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚)結構如下。
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[0005]銀杏酚酸的結構
納米脂質體是將藥物包封于類脂質雙分子層所形成的超微球狀載體制劑。近年來脂質體作為一種新型的藥物載體，在皮膚外用制劑研究與應用方面得到了迅速的發展。納米脂質體用作皮膚給藥載體的特點為:兼容性，能增強藥物的透皮作用；皮膚組織靶向性；緩釋性；脂質體包封可提高藥物溶解度和穩定性。納米脂質體外用制劑具有高效、長效、安全、皮膚靶向作用強等優點。開發皮膚外用納米脂質體制劑是改進皮膚用藥的趨勢，已成為外用藥物和化妝品研究開發的方向。
[0006]目前尚未見銀杏酚酸納米脂質體在治療婦科病和性病中的應用的報道。因此，有關銀杏酚酸納米脂質體外用制劑防治婦科病和性病新型藥物、化妝品、消毒劑的研究開發，以及對銀杏資源的充分開發利用，將產生巨大的社會和經濟效益。

【發明內容】

[0007]本發明的目的是提供銀杏酚酸納米脂質體的新用途，即銀杏酚酸納米脂質體在制備防治婦科病和性病的外用制劑中的用途。它具有療效顯著、使用安全的特點。
[0008]本發明的目的是這樣實現的:
提供銀杏酚酸納米脂質體在制備治療婦科病和性病的外用制劑中的用途。
[0009]所述銀杏酚酸包括銀杏酸、銀杏酚、銀杏二酚，可通過化學分離方法，從銀杏的外種皮等部位的提取物中得到；或對銀杏外種皮提取加工產物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學合成的方法獲得。本發明要求保護該類化合物及其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物、結晶形態等物質。
[0010]所述銀杏酚酸納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。
[0011]所述性病為感染性和炎癥性生殖器疾病,如淋病、梅毒、尖銳濕疣、生殖器皰疹、人乳頭瘤病毒(HPV)感染、陰虱等`多種性病。所述婦科病為滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛等。
[0012]還提供含有銀杏酚酸納米脂質體的治療婦科病和性病的藥物、消毒劑外用制劑，含有銀杏酚酸納米脂質體0.001 - 80%,以及藥學上常用的外用制劑基質或外用制劑可接受的載體。
[0013]更進一步的，含有銀杏酚酸納米脂質體0.001 — 30%。
[0014]更進一步的，含有銀杏酚酸納米脂質體0.5 — 20%。
[0015]按上述重量比范圍取主藥銀杏酚酸納米脂質體、藥學上常用的外用制劑基質或可接受的載體制備得到銀杏酚酸納米脂質體外用制劑；以及包含銀杏酚酸納米脂質體和任何物質組合用于治療婦科病和性病的藥物、消毒劑外用制劑。所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型，為液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、膜劑、洗劑、粉劑、氣霧噴霧劑、栓劑、透皮吸收制劑。
[0016]本發明的有益效果是，藥理學試驗研究表明，本發明銀杏酚酸納米脂質體外用制劑對大鼠細菌性陰道炎、真菌性陰道炎、宮頸炎模型具有顯著的治療作用，并可抑制人乳頭瘤病毒(HPV)感染細胞的增殖，還具有殺滅生殖器常駐病原體(如淋球菌、陰道毛滴蟲、皰疹病毒、梅毒螺旋體、陰虱)的顯著作用。更為重要的是，銀杏酚酸納米脂質體作用顯著優于銀杏酚酸對照組。局部刺激性實驗研究表明本發明安全，無皮膚刺激、過敏等不良反應。臨床多種婦科病和性病患者試用結果表明，本發明對此類疾病具有顯著的治療作用，有效率達100%，使用安全無副作用。
【具體實施方式】
[0017]下面結合實施例，對本發明作進一步地描述。
[0018]實施例1:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝如下:將銀杏果外種皮剝離下來，曬干，用粉碎機將其粉碎。準確稱取一定量經粉碎的銀杏外種皮，加入料液比為1:6 (W/V)的80%乙醇，在水浴溫度60°C下，攪拌浸提2次，每次提取時間4小時。浸提結束后，用抽濾器抽濾，收集濾液。經DlOl大孔樹脂吸附純化，IOBV的100%乙醇解吸，再經硅膠柱層析純化，石油醚:乙酸乙酯(90:10，V/V)洗脫，用真空旋轉蒸發儀濃縮洗脫液，條件為溫度55°C，壓強0.008-0.009MPa，減壓濃縮。于60°C真空干燥，得銀杏酚酸浸膏，性狀為:淺褐色浸膏，微臭，溶于醇，不溶于水；稱重，并測定銀杏酚酸含量(mg/g)。
[0019]銀杏酚酸含量測定:采用HPLC法進行測定。銀杏酚酸標準品購于上海源葉生物科技有限公司。銀杏酚酸的標準品溶液在100-1200 μ g/ml之間，相應峰面積與銀杏酚酸質量濃度有顯著的線性關系，制訂了標準曲線。用無水乙醇(色譜純)將銀杏酚酸浸膏溶解，過濾。在柱溫:室溫；流動相:甲醇-水(9:1，v/v);流速lml/min ;進樣量:20μ1 ;檢測波長310nm;分析時間:25min條件下測定浸膏中銀杏酚酸含量。根據標樣的保留時間進行定性，用外標法計算銀杏酚酸的含量。浸膏中銀杏酚酸含量為912.49mg/g。
[0020]銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法為公知公用的方法。
[0021]大豆磷脂無水乙醇溶液、膽固醇無水乙醇溶液，過濾；加入上述銀杏酚酸浸膏、維生素E，振搖均勻，置圓底燒瓶中，30°C水浴恒溫旋轉蒸發，減壓成膜，使膜材在瓶壁上形成均勻的類脂薄膜，加入PBS緩沖液50°C下充分振蕩水化，至壁上薄膜完全脫落，浸入50°C水浴中攪拌，于25°C水浴條件下超聲5min, 200Hz每次5s,間歇5s ,至形成半透明略顯乳光的濁液。高壓均質，100 Mpa壓力下循環3次，過微孔濾膜，即得淺黃色透明膠體狀銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0022]凝膠劑的制備:將卡波普IOg灑在500ml蒸懼水表面,溶脹過夜。稱取甘油60g,丙二醇120ml，分別加入至溶脹好的卡波普中，迅速研磨均勻，得到透明的凝膠基質。取上述銀杏酚酸納米脂質體懸液40ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，緩慢加入至凝膠基質中，攪拌均勻。再緩慢加入三乙醇胺15ml，補蒸餾水至足量1000 g，即得淡黃色銀杏酚酸納米脂質體凝膠1000 g，銀杏酚酸納米脂質體含量為4%。分裝于50支小管中，每支20 g。
[0023]凝膠劑制備工藝為公知公用的方法。
[0024]實施例2:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為924.51mg/g。
[0025]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0026]軟膏劑的制備:取上述銀杏酚酸納米脂質體懸液5ml，溶解于100ml 95%乙醇溶液中，再向其中加入三乙醇胺50ml，加溫至70°C。將石蠟300g、硬脂酸300g、丙二醇100ml分別加入攪拌融化，補蒸餾水至足量1000 g，攪拌均勻至膏狀，即得淡黃色銀杏酚酸納米脂質體軟膏1000 g，銀杏酚酸納米脂質體含量為0.5%。分裝于50支小管中，每支20 g0[0027]軟膏劑制備工藝為公知公用的方法。
[0028]實施例3:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為945.07mg/g。
[0029]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0030]酊劑的制備:取上述銀杏酚酸納米脂質體懸液100ml，溶解于600ml 95%乙醇溶液中，再向其中分別加入三乙醇胺50ml，丙二醇200ml攪拌，補95%乙醇溶液至足量1000ml,即得淡黃色銀杏酚酸納米脂質體酊劑1000 ml，銀杏酚酸納米脂質體懸液含量為10%。分裝于50支小管中，每支20 ml ο
[0031]酊劑制備工藝為公知公用的方法。
[0032]實施例4:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為922.16mg/g。
[0033]按實施例1銀 杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0034]取銀杏酚酸納米脂質體懸液IOml，按實施例1凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體凝膠1000g，銀杏酚酸納米脂質體含量為1%。分裝于50支小管中，每支20 g。
[0035]實施例5:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為940.23mg/g。
[0036]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0037]取銀杏酚酸納米脂質體懸液200ml，按實施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體軟膏1000g，銀杏酚酸納米脂質體含量為20%。分裝于50支小管中，每支20 go
[0038]實施例6:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為909.79mg/g。
[0039]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0040]取銀杏酚酸納米脂質體懸液400ml，按實施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體ET劑1000ml,銀杏酹酸納米脂質體含量為40%。分裝于50支小管中，每支20 ml。
[0041]實施例7:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為923.61mg/g。
[0042]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0043]取銀杏酚酸納米脂質體懸液1ml，按實施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸酊劑1000ml，銀杏酚酸含量為0.1%。分裝于50支小管中，每支20 ml。
[0044]實施例8:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為923.61mg/g。
[0045]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0046]取銀杏酚酸納米脂質體懸液0.1ml，按實施例1凝膠劑制備工藝制備銀杏酚酸凝膠lOOOg，銀杏酚酸含量為0.01%。分裝于50支小管中，每支20 go
[0047]實施例9:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為950.02mg/g。
[0048]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0049]取銀杏酚酸納米脂質體懸液300ml，按實施例3酊劑制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體酊劑1000ml，銀杏酚酸納米脂質體含量為30%。分裝于50支小管中，每支20 ml。
[0050]實施例10:
銀杏果外種皮中銀杏酚酸提取工藝和含量測定方法同實施例1，得銀杏酚酸浸膏，銀杏酚酸含量為913.42mg/g。
[0051]按實施例1銀杏酚酸納米脂質體懸液制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體懸液。
[0052]取銀杏酚酸納米脂質體懸液20ml，按實施例2軟膏劑制備工藝制備銀杏酚酸納米脂質體軟膏1000g， 銀杏酚酸納米脂質體含量為2%。分裝于50支小管中，每支20 go
[0053]用以上方法制成的銀杏酚酸納米脂質體外用制劑，進行相關的藥理藥效學試驗、局部刺激性安全性評價實驗和臨床試用試驗。下面是本發明的實驗數據:
對大鼠細菌性陰道炎的治療作用:體重200-250g的雌性大鼠，從陰道注入金黃色葡萄球菌(3X 105CFU/ml)和大腸桿菌(1.6X106CFU/ml)的混合菌液，菌液注入量為0.05ml/100g體重，隔日再接種I次。第5天及第7天分別取陰道分泌物做鏡檢、細菌培養，并分別分離出金黃色葡萄球菌和大腸桿菌，再分別接種于培養基中，經培養后，做菌株鑒定。鏡檢及菌株鑒定均為陽性者為感染成功的大鼠。取感染成功的大鼠隨機分為4組，模型對照組、銀杏酚酸對照組、本發明銀杏酚酸納米脂質體組、氧氟沙星軟膏組，每組10只。給藥組各只大鼠陰道內分別注入相應藥物，模型對照組各只大鼠陰道內注入生理鹽水，每天I次，連續5天。停藥后第I天和第4天取大鼠陰道分泌物進行鑒定，2次鑒定病原體均為陰性定為轉陰。停藥后第5天將大鼠解剖，取陰道標本進行肉眼觀察；陰道標本按充血、水腫、出血3項指標進行評分:無充血、水腫、出血評O分；陰道粘膜尚平滑有輕度充血，評為I分；陰道粘膜尚平滑中度充血，可見點狀出血點，評為2分；陰道粘膜不平滑，重度充血，可見大量出血點，組織輕度水腫，評為3分。以模型對照組的分值定為100% (炎癥程度)，藥物組與模型對照組比較，可得出藥物組炎癥抑制率。用t檢驗對炎癥評分進行統計，用X2檢驗對轉陰率進行統計。結果表明(見表1)，本發明銀杏酚酸納米脂質體凝膠對大鼠細菌性陰道炎具有顯著的治療作用，且作用顯著優于氧氟沙星和銀杏酚酸外用制劑對照組。
[0054]表1.對大鼠細菌性陰道炎的治療作用
【權利要求】
1.銀杏酚酸納米脂質體在制備防治婦科病和性病的外用制劑中的用途。
2.如權利要求1所述的用途，所述婦科病為滴蟲性陰道炎、真菌性陰道炎、細菌性陰道炎、外陰瘙癢癥、宮頸炎、宮頸糜爛；所述性病為感染性和炎癥性生殖器疾病，如淋病、梅毒、尖銳濕疣、生殖器皰疹、人乳頭瘤病毒(HPV)感染、陰虱多種性病。
3.如權利要求1所述的銀杏酚酸納米脂質體，所述銀杏酚酸通過化學分離方法，從銀杏的外種皮部位的提取物中得到；或對銀杏外種皮提取加工產物在提取加工過程中剩余的廢料中重新回收；或從其它植物含有本類化合物的各部分提取物中獲得；或通過化學合成的方法獲得；以及該類化合物藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物、結晶形態的物質；所述銀杏酚酸納米脂質體，通過采用薄膜超聲-高壓均質法制備。
4.如權利要求1所述的外用制劑，為含有銀杏酚酸納米脂質體的治療婦科病和性病的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑；以及包含銀杏酚酸納米脂質體和任何物質組合用于治療婦科病和性病的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑；其特征是，所述制劑是任何一種藥劑學上所說的外用劑型，為液體制劑、膏霜劑、凝膠劑、粉劑、膜劑、洗劑、氣霧噴霧劑、透皮吸收制劑、皮下注射劑。
5.如權利要求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸納米脂質體 0.0Ol — 80%O
6.如權利要求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸納米脂質體 0.001 — 30%O
7.如權利要求4所述的藥物、化妝品或消毒劑外用制劑，其特征是，含有銀杏酚酸納米脂質體0.5 - 20%ο`
【文檔編號】A61P15/00GK103751105SQ201310408906
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2013年9月11日 優先權日:2013年9月11日
【發明者】雷紅, 王青 申請人:王青