本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種納米脂質(zhì)體及其制備方法。

背景技術(shù)：

癌癥是當(dāng)前威脅人類健康的重大惡性疾病之一，目前所使用的傳統(tǒng)化療藥物均存在嚴(yán)重的毒副作用，而納米技術(shù)的出現(xiàn)為癌癥的治療提供了新思路。其中，脂質(zhì)體是一種無毒，生物相容性很好，極具前景的納米載藥系統(tǒng)。但是，為了達(dá)到更好的治療效果，常規(guī)的脂質(zhì)體還存在一些缺陷，例如不穩(wěn)定，靶向性差以及藥物釋放的不可控性等。

近年來，各種光熱材料在生物醫(yī)藥領(lǐng)域逐漸得到應(yīng)用。其中，近紅外光響應(yīng)的納米材料研究最為廣泛，例如貴金屬納米材料(金納米材料)，石墨烯，碳納米管以及稀土上轉(zhuǎn)換發(fā)光材料。近紅外光的“生物組織窗口”在650-900nm之間，組織對(duì)其吸收和散射小，進(jìn)而能夠達(dá)到腫瘤組織深處并對(duì)正常組織無毒副作用。這些光熱材料的工作原理是將光能很好的轉(zhuǎn)化為熱能，從而抑制熱敏的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。但是，單純的光熱治療不足以殺死腫瘤細(xì)胞。因此，開發(fā)新型的治療方式以及研究針對(duì)癌癥的高效聯(lián)合治療成為現(xiàn)階段癌癥治療領(lǐng)域亟待解決的問題。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)易控制、重復(fù)性高，制備的納米脂質(zhì)體更易于在腫瘤部位積累、各向異性比較好、更加高效、低毒的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體及其制備方法。

本發(fā)明主要是利用乙醇注入法制備谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；然后將谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體與鈀納米粒子溶液混合，避光孵育后加入氯化金溶液和鹽酸羥胺溶液，得到藥物釋放可控且熱療/化療協(xié)同治療的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體。

本發(fā)明的白樺脂酸脂質(zhì)體是一種在白樺脂酸納米脂質(zhì)體表面形成納米花狀鈀-金合金殼體的納米脂質(zhì)體，其粒徑為80-100nm，近紅外吸收波長(zhǎng)為500-900nm。

上述白樺脂酸脂質(zhì)體的制備方法如下：

1、制備谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體

(1)各原材料的質(zhì)量比為：大豆卵磷脂：膽固醇：白樺脂酸＝12～20:1.3～2.1:1，按每毫升無水乙醇加入上述三種溶質(zhì)質(zhì)量的總和為14.3～23.1mg，加入無水乙醇并超聲，超聲功率為40～80W，超聲時(shí)間為10-20min，使其完全溶解得到脂質(zhì)溶液；

(2)取谷胱甘肽溶解于去離子水中，得到谷胱甘肽溶液，每毫升去離子水中含0.3～1mg谷胱甘肽；以脂質(zhì)溶液與谷胱甘肽溶液的體積比為1:1.5～3.5，磁力攪拌并且溫度控制在38～47℃，將步驟(1)獲得的脂質(zhì)溶液逐滴加入到的谷胱甘肽溶液中，得到脂質(zhì)體懸液；

(3)將步驟(2)得到的脂質(zhì)體懸液在28～35℃，100～130rpm，3～7小時(shí)進(jìn)行磁力攪拌，除去脂質(zhì)體懸液中的無水乙醇，得到谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體。

2、制備納米花狀鈀-金合金包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體

(1)以氯化鈀溶液與抗壞血酸溶液的體積比為100:1～4的比例，將摩爾濃度為50～100mM的抗壞血酸溶液，滴加到摩爾濃度為0.5～1.5mM的氯化鈀溶液中，迅速混合均勻，直至顏色變?yōu)闇\綠色，即得到鈀納米粒子溶液，置于常溫貯存，備用；

(2)將步驟(1)得到的鈀納米粒子溶液與步驟1制得的谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體按1:1～5的體積比混合均勻，置于搖床，25～30℃，85～115rpm，避光孵育8～16小時(shí)，即得到鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

(3)按氯化金溶液與鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體的體積比為1:0.5～1.5的比例，向步驟(2)獲得的鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體中加入摩爾濃度為2～8mM氯化金溶液，充分混勻；隨后向混合液中加入摩爾濃度為50～100mM鹽酸羥胺溶液，充分混合均勻，鹽酸羥胺溶液與氯化金溶液的體積比為1～5：10，將其置于搖床，25～30℃，85～115rpm，孵育6～12小時(shí)，制得納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體。

在常規(guī)藥物脂質(zhì)體的基礎(chǔ)上，制備了谷胱甘肽修飾的白樺脂酸脂質(zhì)體。納米花狀鈀-金合金包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體在500-900nm寬波長(zhǎng)范圍內(nèi)處存在近紅外吸收，從而具有良好的光熱轉(zhuǎn)化性能。通過近紅外光照射升高脂質(zhì)體溫度，進(jìn)而促進(jìn)所包載藥物在靶位點(diǎn)的可控釋放，同時(shí)，能夠利用光熱引起的升溫導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞發(fā)生熱融合和死亡，可見，該載藥系統(tǒng)可將光熱治療與化療相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)癌癥的協(xié)同治療效果，與單一光熱療技術(shù)或單純化療相比更加高效，且對(duì)人體的副作用小。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：

1、在常溫、常壓及溫和條件下完成制備，操作簡(jiǎn)單，反應(yīng)易控制，重復(fù)性高。

2、制備的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體的粒徑更易于在腫瘤部位積累，達(dá)到更好的治療效果。

3、制備的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體與現(xiàn)有的球殼狀藥物載體相比，各向異性比較好，其在500-900nm寬波長(zhǎng)范圍內(nèi)處存在近紅外吸收，具有良好的光熱轉(zhuǎn)化性能，使包載的抗腫瘤藥物白樺脂酸實(shí)現(xiàn)可控釋放。

4、制備的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體在近紅外激光照射下，能夠?qū)⒐鉄嶂委熍c化療結(jié)合協(xié)同治療癌癥，與單一光熱療技術(shù)或單純化療相比更加高效、低毒。

附圖說明

圖1是本發(fā)明實(shí)施例1制得的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體透射電子顯微鏡圖。

圖2是本發(fā)明實(shí)施例2制得的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體粒徑分布圖。

圖3是本發(fā)明實(shí)施例3制得的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體紫外可見光譜圖。

圖4是本發(fā)明實(shí)施例3制得的納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體的光熱轉(zhuǎn)化圖。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

將4mg白樺脂酸(購(gòu)自南京澤朗生物科技有限公司)、5.2mg膽固醇(購(gòu)自天津市大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站)和48mg大豆卵磷脂(購(gòu)自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)，溶解于4mL無水乙醇中并進(jìn)行超聲，超聲功率40W，超聲10min，得到脂質(zhì)溶液；取6mg谷胱甘肽溶解于20mL去離子水中，得到谷胱甘肽溶液；38℃磁力攪拌，將10mL脂質(zhì)溶液逐滴加入到的15mL谷胱甘肽溶液中，得到脂質(zhì)體懸液；隨后將得到的脂質(zhì)體懸液在28℃，100rpm，磁力攪拌3小時(shí)，以除去脂質(zhì)體懸液中的無水乙醇，得到谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

將10μL摩爾濃度為50mM的抗壞血酸溶液滴加到1000μL摩爾濃度為0.5mM的氯化鈀溶液中，迅速混合均勻，直至顏色變?yōu)闇\綠色，即得到鈀納米粒子溶液，置于常溫貯存，備用；將得到的鈀納米粒子溶液與谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體按1:1的體積比混合均勻，置于搖床，25℃，85rpm，避光孵育8小時(shí)，即得到鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體。

取500μL鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體，加入1000μL摩爾濃度為2mM的氯化金溶液，充分混勻，隨后將向混合液中加入100μL摩爾濃度為50mM的鹽酸羥胺溶液，充分混合均勻，將其置于搖床，25℃，85rpm，孵育6小時(shí)，即得到納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體。

應(yīng)用透射電子顯微鏡對(duì)納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體進(jìn)行表征，如圖1所示，可以看出在白樺脂酸納米脂質(zhì)體表面形成花狀鈀-金合金殼體，形貌規(guī)則。

實(shí)施例2

將4mg白樺脂酸(購(gòu)自南京澤朗生物科技有限公司)、6.8mg膽固醇(購(gòu)自天津市大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站)和64mg大豆卵磷脂(購(gòu)自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)，溶解于4mL無水乙醇中并進(jìn)行超聲60W，15min，得到脂質(zhì)溶液。取12mg谷胱甘肽溶解于20mL去離子水中，得到谷胱甘肽溶液；42℃磁力攪拌，將10mL脂質(zhì)溶液逐滴加入到的25mL谷胱甘肽溶液中，得到脂質(zhì)體懸液；隨后將得到的脂質(zhì)體懸液在31℃，115rpm，磁力攪拌5小時(shí)，以除去脂質(zhì)體懸液中的無水乙醇，得到谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

將25μL摩爾濃度為75mM的抗壞血酸溶液滴加到1000μL摩爾濃度為1mM的氯化鈀溶液中，迅速混合均勻，直至顏色變?yōu)闇\綠色，即得到鈀納米粒子溶液，置于常溫貯存，備用；將得到的鈀納米粒子溶液與谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體按1:3的體積比混合均勻，置于搖床，27℃，105rpm，避光孵育12小時(shí)，即得到鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

取1000μL鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體，加入1000μL摩爾濃度為5mM的氯化金溶液，充分混勻。隨后將向混合液中加入300μL摩爾濃度為75mM的鹽酸羥胺溶液，充分混合均勻，將其置于搖床，27℃，105rpm，孵育9小時(shí)，即得到納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體。

采用激光粒度儀對(duì)納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體進(jìn)行表征，如圖2所示，從粒徑分析結(jié)果可知其粒徑約在98nm，更有利于在腫瘤部位的積累，達(dá)到理想的治療效果。

實(shí)施例3

將4mg白樺脂酸(購(gòu)自南京澤朗生物科技有限公司)、8.4mg膽固醇(購(gòu)自天津市大茂化學(xué)儀器供應(yīng)站)和80mg大豆卵磷脂(購(gòu)自上海艾韋特醫(yī)藥科技有限公司)，溶解于4mL無水乙醇中并進(jìn)行超聲80W，20min，得到脂質(zhì)溶液；取20mg谷胱甘肽溶解于20mL去離子水中，得到谷胱甘肽溶液；47℃磁力攪拌，將10mL脂質(zhì)溶液逐滴加入到的35mL谷胱甘肽溶液中，得到脂質(zhì)體懸液。隨后將得到的脂質(zhì)體懸液在35℃，130rpm，磁力攪拌7小時(shí)，以除去脂質(zhì)體懸液中的無水乙醇，得到谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

將40μL摩爾濃度為100mM的抗壞血酸溶液，滴加到1000μL摩爾濃度為1.5mM的氯化鈀溶液中，迅速混合均勻，直至顏色變?yōu)闇\綠色，即得到鈀納米粒子溶液，置于常溫貯存，備用；將得到的鈀納米粒子溶液與谷胱甘肽修飾的白樺脂酸納米脂質(zhì)體按1:5的體積比混合均勻，置于搖床，30℃，115rpm，避光孵育16小時(shí)，即得到鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體；

取1500μL鈀納米粒子包覆的白樺脂酸納米脂質(zhì)體，加入1000μL摩爾濃度為8mM的氯化金溶液，充分混勻；隨后將向混合液中加入500μL摩爾濃度為100mM的鹽酸羥胺溶液，充分混合均勻，將其置于搖床，30℃，115rpm，孵育12小時(shí)，即得到納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體。

采用紫外可見光譜儀對(duì)納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體進(jìn)行表征，如圖3所示，可以看出當(dāng)形成納米花狀鈀-金合金殼體之后，其在500-900nm寬波長(zhǎng)范圍內(nèi)處存在近紅外吸收；同時(shí)，對(duì)納米花狀鈀-金包覆的白樺脂酸脂質(zhì)體光熱轉(zhuǎn)化進(jìn)行檢測(cè)，如圖4所示，在10分鐘時(shí)此納米載藥系統(tǒng)溫度能夠升高到51.3℃，因而具有良好的光熱轉(zhuǎn)化性能。