單性血吸蟲(chóng)的用途
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種單性血吸蟲(chóng)的用途，用于制備預(yù)防血吸蟲(chóng)病的疫苗。本發(fā)明還公開(kāi)了單性血吸蟲(chóng)用于制備阻斷血吸蟲(chóng)病傳播的疫苗的用途。本發(fā)明的單性血吸蟲(chóng)在免疫動(dòng)物后，不僅能顯著降低宿主的血吸蟲(chóng)病病理?yè)p傷，而且還能顯著降低蟲(chóng)卵的孵化能力，從而有效阻斷血吸蟲(chóng)病的傳播途徑，適于成為抗血吸蟲(chóng)病的新疫苗，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。
【專利說(shuō)明】單性血吸蟲(chóng)的用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種單性血吸蟲(chóng)的用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 血吸蟲(chóng)病是一種人和動(dòng)物都會(huì)感染的寄生蟲(chóng)病，流行范圍廣，對(duì)人和家畜均產(chǎn)生 嚴(yán)重的危害。雖然我國(guó)在血吸蟲(chóng)病的防治上已經(jīng)取得了巨大成就，但是由于中間宿主釘螺 難以消滅及血吸蟲(chóng)重復(fù)感染現(xiàn)象嚴(yán)重，全面控制血吸蟲(chóng)病傳播的前景仍不容樂(lè)觀。吡喹酮 作為治療血吸蟲(chóng)病的藥物，以其高效、低毒、使用方便、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)在血吸蟲(chóng)病臨床治 療和防治工作中得到廣泛應(yīng)用，但是吡喹酮不能預(yù)防血吸蟲(chóng)的重復(fù)感染，而且，近年來(lái)在曼 氏血吸蟲(chóng)上已經(jīng)有了吡喹酮抗性蟲(chóng)株的報(bào)道，耐藥蟲(chóng)株的出現(xiàn)引起了人們的不安與高度關(guān) 注。因此，迫切需要研制抗血吸蟲(chóng)高效疫苗。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明要解決目前缺乏抗血吸蟲(chóng)高效疫苗的技術(shù)問(wèn)題，提供一種單性血吸蟲(chóng)的用 途，用于制備預(yù)防血吸蟲(chóng)病的疫苗。
[0004] 此外，還需要提供一種單性血吸蟲(chóng)的用途，用于制備阻斷血吸蟲(chóng)病傳播的疫苗。
[0005] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0006] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種單性血吸蟲(chóng)的用途，用于制備預(yù)防血吸蟲(chóng)病的 疫苗。
[0007] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種單性血吸蟲(chóng)的用途，用于制備阻斷血吸蟲(chóng)病 傳播的疫苗。
[0008] 所述單性血吸蟲(chóng)為雌性或雄性血吸蟲(chóng)。優(yōu)選的，所述單性血吸蟲(chóng)為雌性或雄性血 吸蟲(chóng)尾蚴。
[0009] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種抗血吸蟲(chóng)疫苗，包含雌性或雄性血吸蟲(chóng)。優(yōu)選 的，所述抗血吸蟲(chóng)疫苗包含雌性或雄性血吸蟲(chóng)尾蚴。
[0010] 在本發(fā)明的另一方面，還提供了一種上述抗血吸蟲(chóng)疫苗的制備方法，包括以下步 驟：
[0011] 將自然感染釘螺溢出尾蚴，通過(guò)PCR鑒定及感染小鼠確定其溢出尾蚴為單性。
[0012] 小鼠免疫性保護(hù)實(shí)驗(yàn)證明，用本發(fā)明的單性血吸蟲(chóng)免疫小鼠，能使免疫組小鼠的 肝臟蟲(chóng)卵孵化率降低達(dá)到85. 6%以上，且顯著減輕小鼠的肝臟病變，說(shuō)明用本發(fā)明的單性 血吸蟲(chóng)免疫動(dòng)物不僅能顯著減輕宿主病理變化，且能有效阻斷血吸蟲(chóng)的傳播，本發(fā)明的單 性血吸蟲(chóng)具有發(fā)展為抗血吸蟲(chóng)病候選疫苗的潛力，具有很好的應(yīng)用價(jià)值。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0013] 下面結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。
[0014] 圖1是本發(fā)明實(shí)施例1的PCR鑒定結(jié)果圖；
[0015] 圖2是本發(fā)明實(shí)施例2的小鼠肝臟病變圖。

【具體實(shí)施方式】
[0016] 下列實(shí)施例中，未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按常規(guī)條件，如《精編分子生物 學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》(F.M.奧斯伯，R.E.金斯頓，J.G.塞德曼等主編，馬學(xué)軍，舒躍龍的譯.北京： 科學(xué)出版社，2004)中所述的方法進(jìn)行。
[0017] 本發(fā)明通過(guò)對(duì)BalB/C小鼠進(jìn)行血吸蟲(chóng)單性免疫，然后進(jìn)行血吸蟲(chóng)正常感染，發(fā)現(xiàn) 接受血吸蟲(chóng)單性免疫的小鼠肝臟未發(fā)生任何病變，且蟲(chóng)卵孵化能力顯著降低。
[0018] 本發(fā)明中，單性感染的血吸蟲(chóng)在宿主體內(nèi)不能發(fā)育成熟，停留在童蟲(chóng)階段，因此不 會(huì)對(duì)宿主造成病理?yè)p傷。本發(fā)明的單性血吸蟲(chóng)類似于致弱疫苗，能夠在動(dòng)物中誘導(dǎo)出高保 護(hù)力，對(duì)于血吸蟲(chóng)單性帶蟲(chóng)免疫具有十分重要的意義。
[0019] 實(shí)施例1血吸蟲(chóng)尾蚴的性別檢測(cè)
[0020] 將自然感染釘螺溢出尾蚴進(jìn)行PCR鑒定、再感染小鼠確定其溢出尾蚴為單性。具 體步驟如下：
[0021] 每只自然感染釘螺單獨(dú)置于一個(gè)盛滿去氯水的試管中，其他條件與常規(guī)溢尾蚴法 一致(保持光照，溫度控制在25°C?30°C，加鋼絲網(wǎng)罩)。
[0022] 用接種環(huán)挑取尾蚴，將尾蚴放到含有IOul去離子水的I. 5mlEP管中。每個(gè)EP管中 加入l-2ul的20mg/ml蛋白酶K，在恒溫水浴鍋中進(jìn)行孵育，溫度為55°C，時(shí)間為15min。消 化完畢后從EP管中取出5ul，作為蟲(chóng)體模版，用上游引物：5-ACGT TAGA TACT GCTG TTCA-3 (SEQIDN0·1)，下游引物：5-ATATTGTTCCAAGTACGCAT-3(SEQIDN0·2)進(jìn)行PCR擴(kuò) 增。擴(kuò)增程序：94°C預(yù)變性5分鐘；94°C變性1分鐘，52 °C退火30秒，72 °C延伸1分鐘，35 個(gè)循環(huán)；72°C后延伸5min。PCR產(chǎn)物在1. 0%瓊脂糖凝膠中電泳，紫外透射儀下觀察結(jié)果，結(jié) 果如圖1所示，日本血吸蟲(chóng)雌蟲(chóng)樣品會(huì)擴(kuò)增出約150bp的特異性條帶，且擴(kuò)增的條帶清晰， 而雄蟲(chóng)沒(méi)有該擴(kuò)增條帶。圖1中，M:Marker ;1:日本血吸蟲(chóng)雄蟲(chóng)；2 :日本血吸蟲(chóng)雌蟲(chóng)。再進(jìn) 一步將PCR鑒定過(guò)的釘螺逸出尾蚴去感染小鼠，在尾蚴感染25天后剖殺小鼠，確定感染尾 蚴性別，以此來(lái)確定釘螺逸出尾蚴性別。
[0023] 實(shí)施例2動(dòng)物免疫保護(hù)實(shí)驗(yàn)
[0024] 1.方法
[0025] I. 1小鼠進(jìn)行血吸蟲(chóng)單性免疫
[0026] 試驗(yàn)共設(shè)單雌感染組（A組)、單雄感染組（B組)、空白對(duì)照組（C組)。
[0027] A組：3只小鼠，每只感染40條雌性尾蚴；
[0028] B組：6只小鼠，每只感染40條雄性尾蚴；
[0029] C組：6只小鼠，不進(jìn)行感染。
[0030] 1. 2小鼠的攻擊感染和減蟲(chóng)率的計(jì)算
[0031] 單性感染6周后，每只小鼠在腹部用蓋玻片法感染尾蚴40±2條。攻擊尾蚴42天 后，解剖小鼠，肝門(mén)靜脈沖洗法收集成蟲(chóng)計(jì)數(shù)，按下面公式計(jì)算減蟲(chóng)率。
[0032]

【權(quán)利要求】
1. 一種單性血吸蟲(chóng)的用途，其特征在于，用于制備預(yù)防血吸蟲(chóng)病的疫苗。
2. -種單性血吸蟲(chóng)的用途，其特征在于，用于制備阻斷血吸蟲(chóng)病傳播的疫苗。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述單性血吸蟲(chóng)為雌性或雄性血吸 蟲(chóng)。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述單性血吸蟲(chóng)為雌性或雄性血吸蟲(chóng)尾 蚴。
5. -種抗血吸蟲(chóng)疫苗，其特征在于，包含雌性或雄性血吸蟲(chóng)。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的抗血吸蟲(chóng)疫苗，其特征在于，包含雌性或雄性血吸蟲(chóng)尾蚴。
7. 權(quán)利要求5所述抗血吸蟲(chóng)疫苗的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： 將自然感染釘螺溢出尾蚴，通過(guò)PCR鑒定及感染小鼠確定其溢出尾蚴為單性。
【文檔編號(hào)】A61K39/002GK104436179SQ201310472736
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2013年9月16日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月16日
【發(fā)明者】金亞美, 喬洪賓, 曹宇凡, 劉金明, 林矯矯 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院上海獸醫(yī)研究所