一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種白花油麻藤提取物的新用途，該新用途是白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。所述白花油麻藤提取物是按如下方法制備的：將白花油麻藤提取后，通過(guò)兩次大孔吸附樹(shù)脂純化得到。本發(fā)明所提供的白花油麻藤提取物對(duì)制備治療艾滋病藥物具有重要意義。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及一種中藥材提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用，具體是涉及一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]艾滋病是1981年發(fā)現(xiàn)的新病毒性傳染病，中醫(yī)過(guò)去對(duì)其未有記載。中醫(yī)對(duì)艾滋病辨證，認(rèn)為艾滋病屬于疫病范疇。病因?yàn)橐叨緹嵝扒忠u，正氣虛弱而致。病機(jī)主要為衛(wèi)外不固，陽(yáng)氣損傷，臟腑受累，引起肺虛脾虛腎虛，繼發(fā)感染。熱傷脈絡(luò)，氣血凝滯，形成癥積腫塊腫瘤。
[0003]中醫(yī)辨“證”:主要辨別邪正消長(zhǎng)和虛證實(shí)證。艾滋病病毒為邪毒，邪毒入里而傳變，與機(jī)體正氣的邪正抗?fàn)幍膭?dòng)態(tài)變化，為疾病的發(fā)展過(guò)程。感染早期以邪實(shí)為主，中期“因?qū)嵵绿摗保砥凇耙蛱撝聦?shí)”。艾滋病病情復(fù)制多變，艾滋病及其繼發(fā)感染都可形成“病”，且有不同“型”和“期”。中醫(yī)對(duì)艾滋病有辨證辨病，分型分期等不同診治方案。
[0004]艾滋病的中醫(yī)藥治療目前仍屬于研究階段，目前國(guó)內(nèi)外尚未有公認(rèn)療效肯定被批準(zhǔn)生產(chǎn)的抗艾滋病病毒中藥或中藥單體化合物。抗艾滋病病毒植物藥和中藥研究主要分3種途徑，煙具獲得的抗艾滋病病毒中藥植物藥及其成分，有些已在臨床試用。
[0005]自艾滋病病毒發(fā)現(xiàn)以來(lái)，國(guó)際上用艾滋病病毒細(xì)胞培養(yǎng)和逆轉(zhuǎn)錄酶,蛋白酶和整合酶等體外實(shí)驗(yàn)方法，廣泛篩選化合物的同時(shí)，也大量篩選植物和中草藥提取物及其成分，也研究了一些中藥復(fù)方制劑，發(fā)現(xiàn)在體外抑制艾滋病毒的有效藥物，有的可抑制猴免疫缺陷病毒(SIV)感染猴的病毒血癥 。有些已在臨床試用，尚未明確效果。
[0006]我國(guó)自1987年派中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)療隊(duì)去非洲治療艾滋病病人。國(guó)內(nèi)在2002年以前，缺乏特效抗艾滋病病毒藥物，中西醫(yī)在臨床根據(jù)中醫(yī)理論，對(duì)艾滋病病人辨病與辨證相結(jié)合，以清熱解毒，扶正固本，或涼血補(bǔ)腎，活血化瘀等治則，按中藥性能，選擇中藥，處方治療。通過(guò)臨床實(shí)踐，認(rèn)為有些中藥復(fù)方治療艾滋病可改善癥狀，緩解病情。近年來(lái)對(duì)實(shí)驗(yàn)診斷確診的艾滋病病人，采用中藥治療，設(shè)對(duì)照組，在治療期間，定期檢測(cè)血液病毒載量(HIV-RNA)和CD4細(xì)胞水平，評(píng)價(jià)效果。有報(bào)道可改善癥狀，提高免疫力，大多仍在臨床驗(yàn)證中。進(jìn)入臨床的抗HIV單味中藥或植物藥及中藥復(fù)方如下:
甘草甜素:甘草甜素(glycyrrhizin,GL)是中藥甘草(Glycyrrhiza glabra L)提取的甘草皂苷，有廣譜抗病毒作用，體外抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶，在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV細(xì)胞融合，也抗流感病毒和SARS病毒，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明可保護(hù)流感病毒感染小鼠引起的肺炎死亡和肺病變；保護(hù)小鼠的CCl4中毒性肝損傷；誘生Y-干擾素；有類(lèi)激素作用。日本常用其靜脈點(diǎn)滴治療慢性乙型肝炎，也曾試用治療艾滋病病人，可抑制血清HIV-1-P24抗原，升高CD4細(xì)胞。呂維柏教授1988-1992年在非洲坦桑尼亞應(yīng)用甘草甜素口服制劑克艾可治療艾滋病病人可改善癥狀，CD4細(xì)胞略有上升。其效果尚未被驗(yàn)證。
[0007]天花粉蛋白:天花粉蛋白(Trichosanthin, TCS, GLQ223, Q物質(zhì))為中藥括樓(Trichosanthes kiri1wii)屬葫蘆科(Cucurbitaceae),我國(guó)民間用于流產(chǎn)的中藥復(fù)方的主要中藥成分為栝樓，我國(guó)科學(xué)家分離鑒定器抗早孕和引產(chǎn)的有效成分為天花粉蛋白，分子量為27kD，其一、二級(jí)結(jié)構(gòu)和三維結(jié)構(gòu)已完全弄清，為抑制蛋白合成的植物毒蛋白，是單鏈的核糖體失活蛋白(Ribosome Inactivating Protein, RIP)。美國(guó)在篩選抗HIV-1藥物時(shí)，發(fā)現(xiàn)其在淋巴細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV-1細(xì)胞融合，其后發(fā)現(xiàn)在單核巨噬細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)HIV-1的P24抗原和RNA，在3只猴艾滋病病毒(SIV)感染猴靜脈注射可抑制血漿HIV-1。美國(guó)在林場(chǎng)使用靜脈點(diǎn)滴治療艾滋病病人，可抑制外周血HIV-1感染的T淋巴細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞內(nèi)HIV-1-P24抗原，使⑶4/⑶8比例略有升高。由于可引起過(guò)敏性反應(yīng)死亡，神經(jīng)毒性的精神失常和腎毒性反應(yīng)，臨床實(shí)驗(yàn)已中止。近年來(lái)從天花粉中分離出其他蛋白TAP29，分子量在29 kD，也有抑制HIV-1的作用，但毒性較小，未在臨床試用。此外苦瓜(MOmordicacharantia)的苦瓜蛋白和商陸(Phytolacca americana)的商陸蛋白(Pokeweed protein)等都有抑制HIV的作用。
[0008]金絲桃素:植物貫葉金絲桃(St.John Wort, Hypericum perforatum)民間傳統(tǒng)用其提取物治療抑郁癥，從花提出的活性成分是金絲桃素(hypericin)，是芳香族多環(huán)二聚蒽醌類(lèi)化合物，為抗抑郁癥藥物，已全合成。金絲桃素具有多種抗病毒活性，在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV，其作用機(jī)制為阻斷病毒的脫衣，裝配和釋放，有殺病毒作用，可通過(guò)血腦屏障。在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)可抑制鼠白血病病毒繁殖。在體內(nèi)可抑制鼠白血病病毒感染小鼠引起的脾腫大，也可抑制鴨乙型肝炎病毒感染鴨血請(qǐng)病毒DNA，并有廣譜抗細(xì)菌活性。曾在臨床I/II期試用治療艾滋病患者，因有光敏感作用已停止試驗(yàn)。
[0009]右旋胡同素A:右旋胡同素A (+Calanolide A)是1992年報(bào)道從馬來(lái)西亞熱帶雨林植物Calophyllum Ianigerum中分離的天然化合物，鼠香豆素類(lèi)化合物，抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶，但對(duì)HIV-2無(wú)效。屬于非核苷類(lèi)HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)多對(duì)多住臨床分離的AZT敏感和耐藥HIV-1有效，并與AZT，NVP有協(xié)同作用。在HIV空纖維管小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?HIV hollow fiber mouse model)中證明有抗艾滋病病毒作用，與AZT聯(lián)合應(yīng)用可增強(qiáng)藥效。已全合成，進(jìn)行了 1-1I其臨床試驗(yàn)證明有抑制HIV-1感染的治療效果，毒性小，副作用輕，有頭痛和食欲不振等，與AZT聯(lián)合用藥有效。是目前唯一進(jìn)入II期臨床實(shí)驗(yàn)的單一植物成分，正在觀察驗(yàn) 證療效中，尚未批準(zhǔn)生產(chǎn)。
[0010]小柴胡湯:小柴胡湯(柴胡，人參，半夏，黃芩，甘草，生姜，大棗)
是張仲景傷寒論方。日本用其治療乙型肝炎，發(fā)現(xiàn)其在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV。美國(guó)在臨床用于治療數(shù)例艾滋病病人，可降低血清P24抗原。我們證明其有抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶和在細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV-1的作用。分別研究其7種成分中藥的效果，發(fā)現(xiàn)僅黃芩水提物及其成分黃芩苷(baicalin)有抑制HIV-1作用，在體外無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)中抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶，在人T細(xì)胞和外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)抑制HIV-1細(xì)胞病變，病毒熒光抗原和P24抗原，體內(nèi)鼠白血病病毒感染小鼠口服可抑制脾腫大和血白細(xì)胞升高。日本Ono報(bào)道黃芩苷元(baicalien)抑制HIV-1逆轉(zhuǎn)錄酶。
[0011]中研I號(hào):中研I號(hào)(主藥有紫花地丁，天花粉等組成)商品名為:艾
克沖劑，以清熱解毒為治則，由我國(guó)中藥研究院組方1992-1993年在非洲坦桑尼亞對(duì)早中期艾滋病臨床應(yīng)用，認(rèn)為有一定改善癥狀，提高免疫力的效果。實(shí)驗(yàn)室證明該藥體外抑制HIV逆轉(zhuǎn)錄酶活性，體內(nèi)對(duì)猴艾滋病毒感染猴實(shí)驗(yàn)治療結(jié)果表明，能降低血漿病毒滴度，并且能提高⑶4細(xì)胞數(shù)目及⑶4/⑶8比值和T，B淋巴細(xì)胞數(shù)值，誘生干擾素和產(chǎn)生免疫調(diào)節(jié)功能。曾在非洲和我國(guó)臨床試用，尚未批準(zhǔn)臨床驗(yàn)證。
[0012]中研2號(hào):中研2號(hào)(黃芪，人參，當(dāng)歸，枸杞和甘草等)是我國(guó)中醫(yī)
研究院醫(yī)療隊(duì)組方。1992年在非洲坦桑尼亞治療艾滋病病人。1998-1999年在非洲專(zhuān)科門(mén)診對(duì)29例艾滋病病人治療，2/16例HIV病毒載量下降，CD4 8/29例CD4升高。2001-2002年在北京佑安醫(yī)院治療15例艾滋病病人，3/15例病毒載量下降，⑶4 1/15例CD4升高。有改善癥狀的效果。實(shí)驗(yàn)證明該藥在人體內(nèi)對(duì)猴艾滋病毒感染猴實(shí)驗(yàn)治療表明，用藥4-12周能降低血漿病毒滴度，P27抗原，并且能提高CD4細(xì)胞數(shù)目，對(duì)感染猴淋巴細(xì)胞有激活作用。 [0013]白花油麻藤為豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子。秋季采集果實(shí)，取出種子，曬干。收載于《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)藏藥(第一冊(cè))》，標(biāo)準(zhǔn)編號(hào):WS3-BC-0030-95。性平，味甘。具有清脾熱，通絡(luò)，強(qiáng)身之功效。用于肺病，脾病，經(jīng)絡(luò)病，培根病，中毒癥，外敷消腫。種仁滋補(bǔ)，增精液。為我國(guó)藏蒙等少數(shù)民族地區(qū)的常用藥物。但有關(guān)白花油麻藤的基礎(chǔ)研究尚十分有限，使該藥材的后續(xù)推廣和應(yīng)用受到限制。現(xiàn)代研究關(guān)于白花油麻藤的化學(xué)成分及藥理作用鮮有報(bào)道。
[0014]國(guó)內(nèi)專(zhuān)利檢索結(jié)果，未見(jiàn)白花油麻藤相關(guān)專(zhuān)利。
[0015]上述文獻(xiàn)及專(zhuān)利等，尚未見(jiàn)白花油麻藤或白花油麻藤提取物用于制備治療艾滋病藥物的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0016]本發(fā)明的目的在于提供一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明是通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的:
本發(fā)明所用白花油麻藤為豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子。
[0018]本發(fā)明一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用，所述白花油麻藤提取物的制備方法為:
(O白花油麻藤，用濃度50%-95%乙醇作為溶劑，在30°C -60°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-6次，每次提取時(shí)間為2-8小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-30倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.05-1.12，濾過(guò)，得藥液A ；
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ；
(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的6-20倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液B ;
(4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-80%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B;
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B，其中一種或兩種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0019]白花油麻藤提取物的制備方法為:
(O白花油麻藤，用濃度50%-95%乙醇作為溶劑，在30°C -60°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-6次，每次提取時(shí)間為2-8小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-30倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ；
(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的6-20倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液B ; (4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-80%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B;
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0020]優(yōu)選的白花油麻藤提取物的制備方法為:
(1)白花油麻藤，用濃度70%乙醇作為溶劑，在50°C溫浸提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的20倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.10，濾過(guò)，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ；
(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.11，濾過(guò)，得藥液B ;
(4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)DM130大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0021]本發(fā)明的白花油麻藤提取物的制備方法，其特征在于:所采用的非極性大孔吸附樹(shù)脂為AB-8大孔吸附樹(shù)脂、DlOl大孔吸附樹(shù)脂；所采用的極性大孔吸附樹(shù)脂為DM130大孔吸附樹(shù)脂、LSA-40大孔吸附樹(shù)脂。
[0022]本發(fā)明的白花油麻藤提取物用于制備治療艾滋病藥物。
[0023]本發(fā)明的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
[0024]本發(fā)明的白花油麻藤提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療艾滋病藥物。
[0025]本發(fā)明的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療艾滋病藥物。
[0026]本發(fā)明的白花油麻藤提取物，通過(guò)加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
[0027]本發(fā)明首次探索研究以豆科植物白花油麻藤M(fèi)ucuna birdwoodiana Tutcher的干燥種子為原料提取制備治療艾滋病提取物。本實(shí)驗(yàn)研究表明，白花油麻藤各提取物體外對(duì)流感病毒、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、柯薩奇B族病毒4型(CmB4)、腺病毒3型((Ard3)及鼻病毒的細(xì)胞病變較病毒對(duì)照組均有所減輕。體內(nèi)對(duì)小鼠流感性肺炎有明顯抑制作用，對(duì)流感至小鼠死亡有明顯的保護(hù)作用，表明白花油麻藤各提取物有較好的抗病毒作用。臨床觀察試驗(yàn)結(jié)果表明，服用白花油麻藤提取物治療的18例艾滋病患者，明顯改善癥狀、修復(fù)肝腎功能，提高、穩(wěn)定或延CD4下降，抑制病毒復(fù)制等有明顯的療效。
【具體實(shí)施方式】
[0028]下面通過(guò)具體實(shí)驗(yàn)例和實(shí)施例對(duì)一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用做進(jìn)一步說(shuō)明，但不限于本發(fā)明。
[0029]實(shí)施例1:白花油麻藤提取物的制備
(1)白花油麻藤15kg，用濃度70%乙醇作為溶劑，在50°C溫浸提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的20倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.10，濾過(guò)，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ；
(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.11，濾過(guò)，得藥液B ;
(4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)DM130大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集70%濃 度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0030]實(shí)施例2:白花油麻藤提取物的制備
(1)白花油麻藤20kg，用濃度50%乙醇作為溶劑，在60°C溫浸提取，提取次數(shù)為6次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.12，濾過(guò)，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)AB-8非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ;
(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為6小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的20倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.05，濾過(guò)，得藥液B ;
(4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)LSA-40極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%的乙醇溶液洗脫，收集30%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0031]實(shí)施例3:白花油麻藤提取物的制備
(1)白花油麻藤，用濃度95%乙醇作為溶劑，在30°C溫浸提取，提取次數(shù)為2次，每次提取時(shí)間為8小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的30倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.05，濾過(guò)，得藥液A ;
(2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)DlOl非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度95%的乙醇溶液洗脫，收集95%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ；(3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為5次，每次提取時(shí)間為I小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的6倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.12，濾過(guò)，得藥液B ；
(4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)LSA-40極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度80%的乙醇溶液洗脫，收集80%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B ；
(5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
[0032]實(shí)施例4:白花油麻藤提取物片的制備
取實(shí)施例1白花油麻藤提取物322g，加入淀粉70g，混勻，制粒，干燥，過(guò)篩，加微晶纖維素25g，硬脂酸鎂4.5g，混勻，壓制成1000片，即得白花油麻藤提取物片。
[0033]實(shí)施例5:白花油麻藤提取物顆粒的制備
取實(shí)施例2白花油麻藤提取物245g，加入糊精98g，混勻，制粒，干燥，整粒，即得白花油麻藤提取物顆粒。
[0034]實(shí)施例6:白花油麻藤提取物膠囊的制備
取實(shí)施例3白花油麻藤提取物285g，加入淀粉75g，混勻，制粒，干燥，整粒，加入硬脂酸鎂3g，混勻，裝膠囊1000粒，即得白花油麻藤提取物膠囊。
[0035]實(shí)驗(yàn)例1:白 花油麻藤各提取物的抗病毒作用
試驗(yàn)材料:白花油麻藤提取物、白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B (按本發(fā)明實(shí)施例1方法制備得到，批號(hào)分別為:20110808,20110809,20110810);病毒唑(三氮唑核苷)由湖北省醫(yī)藥工業(yè)研究所生產(chǎn)，批號(hào):20110503 ;雙黃連膠囊由北京京海藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)，批號(hào):20110701 ;流感病毒甲3型、柯薩奇B族病4型(CmB4)、副流感病毒I型(HVJ)、呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒3型(Ard3)、鼻病毒14型和流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FM1，分別購(gòu)自中國(guó)預(yù)防醫(yī)學(xué)科學(xué)院病毒學(xué)研究所及兒科研究所；人喉癌傳代細(xì)胞HEP-2株，購(gòu)自衛(wèi)生部藥品生物制品檢定所；含10%小牛血清、0.2911^谷氨酞胺/1111，10(^1青、鏈毒素的Eagle’ MEM ;細(xì)胞維持液,除所含小牛血清為2%外，其他含量均同培養(yǎng)液。昆明種小鼠，由山東省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0036]實(shí)驗(yàn)方法
1.體外抗病毒作用:對(duì)H印-2培養(yǎng)細(xì)胞的毒性試驗(yàn):將藥液用Eagle’ s培養(yǎng)作1:20-1:1280倍比稀釋?zhuān)拥揭验L(zhǎng)成單層的HEP-2細(xì)胞培養(yǎng)板中，100 μ I/孔，每個(gè)稀釋度藥液做3個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)正常細(xì)胞對(duì)照。將培養(yǎng)板置37°C，5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，每日倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，確定細(xì)胞不出現(xiàn)明顯退變的最低釋稀倍數(shù)，實(shí)驗(yàn)時(shí)順延做到最小有效濃度(即最大稀釋倍數(shù))。按Reed-Muench法計(jì)算50%毒性濃度(TC5tl)和最大無(wú)毒濃度(TCtl),結(jié)果見(jiàn)表1。
[0037]表1 對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的 TC。TC50 (mg/ml)。
【權(quán)利要求】
1.一種白花油麻藤提取物在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用，所述白花油麻藤提取物的制備方法為: (O白花油麻藤，用濃度50%-95%乙醇作為溶劑，在30°C -60°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-6次，每次提取時(shí)間為2-8小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-30倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.05-1.12，濾過(guò)，得藥液A ； (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ； (3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的6-20倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液B ; (4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-80%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B; (5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B，其中一種或兩種按一定比例混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述白花油麻藤提取物的制備方法為: (O白花油麻藤，用濃度50%-95%乙醇作為溶劑，在30°C -60°C溫浸提取，提取次數(shù)為2-6次，每次提取時(shí)間為2-8小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10-30倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液A ; (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)非極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%-95%的乙醇溶液洗脫，收·集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ； (3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為2-5次，每次提取時(shí)間為1-6小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的6-20倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=1.05-l.12，濾過(guò)，得藥液B ; (4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)極性大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度30%-80%的乙醇溶液洗脫，收集不同濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B; (5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述白花油麻藤提取物的制備方法為: (1)白花油麻藤，用濃度70%乙醇作為溶劑，在50°C溫浸提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為4小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的20倍，濾過(guò)，得藥渣A和提取液，提取液回收乙醇，濃縮至相對(duì)密度d=l.10，濾過(guò)，得藥液A ; (2)將步驟(1)得到的藥液A，通過(guò)DlOl大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度60%的乙醇溶液洗脫，收集60%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物A ； (3)將步驟(1)得到藥渣A用水為溶劑，回流提取，提取次數(shù)為3次，每次提取時(shí)間為2小時(shí)，每次溶劑用量為白花油麻藤重量的10倍，濾過(guò)，提取液濃縮至相對(duì)密度d=l.11，濾過(guò)，得藥液B ; (4)將步驟(3)得到的藥液B，通過(guò)DM130大孔吸附樹(shù)脂，先用水洗脫，再用濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集70%濃度乙醇洗脫液，濃縮干燥，即得白花油麻藤提取物B ； (5)將上述白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B混勻，即得本發(fā)明的白花油麻藤提取物。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2所述的白花油麻藤提取物的制備方法，其特征在于:所采用的非極性大孔吸附樹(shù)脂為AB-8大孔吸附樹(shù)脂、DlOl大孔吸附樹(shù)脂；所采用的極性大孔吸附樹(shù)脂為DM130大孔吸附樹(shù)脂、LSA-40大孔吸附樹(shù)脂。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療艾滋病藥物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B在制備治療艾滋病藥物中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的白花油麻藤提取物A、白花油麻藤提取物B與化學(xué)藥或中藥或天然藥物組成的治療艾滋病藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求1、權(quán)利要求2、權(quán)利要求3所述的白花油麻藤提取物，通過(guò)加入藥劑學(xué)允許的各種輔料，制成藥劑學(xué)上的片劑、顆粒劑、膠囊等口服劑型。
【文檔編號(hào)】A61P31/18GK103585259SQ201310525328
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2013年10月31日
【發(fā)明者】孔倩倩 申請(qǐng)人:濟(jì)南星懿醫(yī)藥技術(shù)有限公司