專利名稱：一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物、藥物組合物及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物，更具體地說是由白花丹參提取精制而成的一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物(丹參酮混合物)、藥物組合物及其制備方法與應用。
背景技術：
血栓閉塞性脈管炎(Thromboangitis Obliterans, ΤΑ0)是一種以節段性、非動脈粥樣硬化性、無菌性炎癥和血管腔內血栓形成為特征的慢性閉塞性疾病，主要累及四肢遠端的中、小動脈和靜脈，好發于下肢，病程長多呈緩進性并逐漸加重，常致肢體發生缺血或瘀血病損，甚者肢體潰爛脫落，是一種慢性周圍血管疾病。我國各地均有發病，多見于北方寒冷地區，尤其是青壯年男性多見，嚴重危害人們的身體健康。白花丹參(Salvia miltiorrhiza Bunge var alba)是唇形科植物丹參的變型，主產于山東章丘、萊蕪、泰安等丘陵地區，其根入藥，2002年白花丹參被收入《山東省中藥材標準》。《全國中草藥匯編沖記載白花丹參形似丹參，惟花白色，有的可略帶紫暈，產于山東， 亦以根入藥，當地有用白花丹參酒治療血栓閉塞性脈管炎者(全國中草藥匯編[上冊]，人民衛生出版社，1975)。白花丹參根在臨床上用于脈管炎治療，取得了令人滿意的療效。山東省章丘縣醫院從1967年開始應用民間驗方白花丹參治療血栓閉塞性脈管炎，自1971年10月至1975 年12月應用白花丹參治療脈管炎147例，臨床治愈率27. 2%，顯著好轉率45. 6%，總有效率93. 2%，經過治療，患肢血液循環有不同程度的改善，并能減輕疼痛和促進潰瘍愈合，且臨床分組對比觀察，白花丹參的療效高于丹參的，參見中醫雜志，1976，(11) :23-對。據《山東中醫學院學報》和《治療與保健藥酒》記載將白花丹參浸泡于55度的白酒制成的白花丹參酒作為單方或驗方，民間用以治療脈管炎已有80多年的歷史，而且認為白花丹參對脈管炎的療效優于丹參的，參見許青峰，治療與保健藥酒，1988，pll7。藥理實驗研究為應用白花丹參治療脈管炎提供了可靠的理論依據。通過研究白花丹參對小鼠血小板粘附功能及血液流變學的影響，發現白花丹參具有明顯的抗血小板粘附凝集作用，并且具有降低血液粘度的功能，參見韓紀舉等，中藥材，2007，30 (6) :699-701。 白花丹參對H2O2損傷后人臍血內皮祖細胞有顯著保護作用，參見焦鵬等，中國中藥雜志， 2011,36(13) :1830-1832，能有效促進人臍血內皮祖細胞的增值、黏附和釋放NO能力，顯著改善人臍血內皮祖細胞的功能，參見焦鵬等，中華中醫藥雜志，2011J6(11) :2687力689。CN1899371A(CN200610045270. X)提供一種白花丹參在制藥領域中的應用及白花丹參藥物的制備方法。白花丹參的丹參素含量是紫花丹參的兩倍，該物質用于治療心腦血管疾病及其他相關疾病，具有祛淤止痛、活血通經、清心除煩的功效。所述白花丹參藥物的制備方法是a.取白花丹參置入提取罐內，加入4 10倍重量份的水進行水提取，過濾得水提液；或將白花丹參超微粉碎后進行超聲提取，過濾得超微提取粉；b.取a工序的超微提取粉或經濃縮至相對密度為1. 0 1. 4的水提液，加入50% 90%的乙醇進行醇沉淀，過濾后用20 % 40 %的強堿，溶液調pH = 6. 5 8. 5，冷放后過濾，重復醇沉淀，得濾液；c.將 b工序的濾液濃縮至相對密度為1. 0 1. 4，加入0. 5 % 2 %活性炭，加熱煮沸，過濾，滅菌，得液體劑。

發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供了一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物及其制備方法與應用。本發明還提供白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物。術語說明總菲醌，是指白花丹參中的總丹參酮，在天然藥物化學教材中丹參酮稱為丹參醌， 該類化合物從結構母核上屬于菲醌類結構。白花丹參總菲醌提取物，是指從白花丹參中提取的各種丹參酮的混合物。本發明技術方案如下一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，以白花丹參的根為原料，通過溶劑提取、溶劑萃取、層析和純化制備而成；主要含有丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I，其次還含有少量的1，2- 二氫丹參酮I、次丹參酮、15，16- 二氫丹參酮I、1-羰基次丹參酮和小紅參醌B， 其中丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總含量不低于70wt%，丹參酮IIA和隱丹參酮的質量比為0. 45 0. 80。本發明治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，是按以下方法制備的以白花丹參的根為原料，粉碎后，以甲醇、95%乙醇或乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取、超聲提取，所述溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復提取1 3次，除去藥渣， 合并濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35(60°C測定)膏狀物，所得膏狀物以水懸浮，以有機溶劑萃取2 3次，合并萃取液，再以水洗滌萃取液2 3次，將有機溶劑萃取液濃縮，進行硅膠柱層析分離，硅膠柱洗脫溶劑是石油醚-乙酸乙酯，收集石油醚-乙酸乙酯5 3體積比的洗脫部分，蒸去溶劑，合并，進行結晶與重結晶，即得白花丹參總菲醌提取物。優選的，所述的萃取用有機溶劑是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷。本發明治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物制備方法，詳細步驟如下⑴溶劑提取原料白花丹參的根經過粉碎后，以甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取或超聲提取，所用溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復提取1 3次，除去藥渣，合并濾液，所得濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35(60°C測定)膏狀物。優選的，所述加熱提取是用95%乙醇為溶劑進行回流提取，溶劑為原料的10重量倍。(2)萃取將步驟(1)得到的膏狀物以6 12重量倍的蒸餾水懸浮，用與水等體積的有機溶劑萃取，重復2 3次，合并萃取液，減壓濃縮，再用與濃縮物等體積的水萃取洗滌，重復水洗2 3次，棄掉水層，然后分出上層的有機溶劑層，減壓蒸去溶劑，得固體物。(3)柱層析
將步驟( 萃取得到的固體物進行硅膠柱層析分離純化，先以石油醚-乙酸乙酯 100 3，體積比洗脫4 6個保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫8 12個保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，得紅色提取物。(4)純化將上述得到的紅色提取物以95%乙醇溶解，析晶，濾出結晶，再以95%乙醇重結晶，得白花丹參總菲醌提取物。根據本發明優選的，步驟O)中所述的萃取用有機溶劑是乙酸乙酯、氯仿或二氯甲烷，最優選二氯甲烷作為萃取用有機溶劑。根據本發明優選的，步驟( 中所述的萃取與減壓濃縮，當萃取2次時減壓濃縮至萃取液體積量的0. 5倍，當萃取3次時減壓濃縮至萃取液體積量的0. 35倍。本發明方法所得的白花丹參總菲醌中丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總量不低于70%，而其中最主要的兩個成分隱丹參酮和丹參酮IIA的質量比0. 45 0. 80。本發明的治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物與藥用輔料組合制成不同劑型的藥物制劑。一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，本發明的白花丹參總菲醌提取物和一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。優選的，所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、滴丸及軟膠囊劑。可按照藥劑學常規生產工藝制備。所述藥物組合物不同劑型的藥物制劑詳細說明如下1、片劑或膠囊劑的制作，均按白花丹參總菲醌提取物總量的重量百分比取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入2 5重量倍的稀釋劑1，5 IOwt%的濕潤劑，4 15wt %的崩解劑，按常規濕法制粒，干燥后整粒，再加入0. 5 3wt %的潤滑劑，壓片或裝入膠囊殼。上述稀釋劑I選自淀粉、糖粉、糊精或微晶纖維；上述濕潤劑選自水或乙醇；上述崩解劑為羧甲基淀粉鈉；上述潤滑劑為硬脂酸鎂或滑石粉。2、軟膠囊劑的制作取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入稀釋劑II，混勻，再加入抗氧化劑、助懸劑， 攪拌均勻，室溫靜置，即得白花丹參總菲醌提取物軟膠囊內容物的藥液；通過模具將其與事先用明膠、甘油、防腐劑制備的軟膠囊殼材料一起壓制成軟膠囊。上述稀釋劑II選自植物油；上述抗氧化劑選自抗壞血酸鈉、枸櫞酸或焦亞硫酸鈉；上述助懸劑選自蜂蠟、甲殼素甲基纖維素或瓊脂。3、滴丸的制作取所述的白花丹參總菲醌提取物，加入適量無水乙醇，然后加入聚乙二醇4000或聚乙二醇6000熔融液中，60°C水浴恒溫攪拌，直至乙醇揮盡為止；然后將該熔融液轉入滴丸機的貯液筒內，在保溫80 85°C的條件下滴入冷凝液中，收集滴丸。優選的，所述的白花丹參總菲醌提取物與聚乙二醇4000的重量比為1 6。
本發明的用于治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物及其藥物組合物制劑用于治療血栓閉塞性脈管炎，改善肢體缺血所引起的慢性潰瘍、疼痛、發冷及間歇跛行。本發明的治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥效學研究。動物=Wistar雄性大白鼠60只，體重280 300g，由山東大學實驗動物中心提供。藥物將按照實施例1方法制備白花丹參總菲醌提取物研細，過80目篩，用0. 5% 羧甲基纖維素鈉水溶液配制成0. lg/ml、0. 05g/ml和0. 025g/ml的混懸液。以目前臨床上治療血栓閉塞性脈管炎的常用口服藥通塞脈片(江蘇南星藥業有限責任公司產)為陽性對照，將其研細，過80目篩，用0.5%羧甲基纖維素鈉水溶液配制成0. llg/ml的混懸液。造模與分組采用國內外通用的股動脈注射月桂酸法，參照文獻方法苗智如等， 中藥材，2008，31 (6) :880-882，制備血栓閉塞性脈管炎大鼠模型。將60只大鼠隨機為假手術組、模型組、通塞脈片對照組、白花丹參總菲醌提取物高劑量組、中劑量組和低劑量組。給藥采用灌胃法給藥。白花丹參總菲醌提取物高劑量組、中劑量組和低劑量組分別按照0. 6g/kg、0. 3g/kg和0. 15g/kg的給藥劑量給予已配制的高、中、低三種不同濃度白花丹參總菲醌提取物混懸液。陽性對照組按照0. 66g/kg的劑量給予已配制的通塞脈片混懸溶液。各組均于手術后灌胃給藥，每天給藥1次，連續1周。實驗結果大鼠體征指標觀察大體觀察大鼠患肢皮膚顏色、溫度、患肢有無腫脹、有無壞疽及壞疽的程度、跛行狀況。參照王軍等，中國中西醫結合雜志，1996，16(7) :421-423。采用的分級標準分級，I級病變局限于趾甲部；II級病變局限于趾部；III級病變局限于足爪部；IV級病變局限于膝關節以下；V級病變發展到膝關節以上。實驗結果如表1所示， 模型組的病變最嚴重，通塞脈片組與白花丹參總菲醌中、高劑量組的病變最輕，與模型組比較有顯著性差異。表1白花丹參總菲醌對TAO大鼠局部體征變化的影響
權利要求
1.一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物，以白花丹參的根為原料，通過溶劑提取、 溶劑萃取、柱層析和純化制備而成；主要含有丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I、l，2-二氫丹參酮I、次丹參酮、15，16- 二氫丹參酮I、l-羰基次丹參酮和小紅參醌B，其中所含丹參酮 IIA、隱丹參酮和丹參酮I三者的總含量不低于70wt%，丹參酮IIA和隱丹參酮的質量比為 0. 45 0. 80。
2.如權利要求1所述的白花丹參總菲醌提取物，其特征在于是按以下方法制備的以白花丹參的根為原料，粉碎后，以甲醇、95%乙醇或乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取、 超聲提取，所述溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復提取1 3次，除去藥渣，合并濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35膏狀物，60°C測定；所得膏狀物以水懸浮，以有機溶劑萃取2 3次，合并萃取液，再以水洗滌萃取液2 3次，將有機溶劑萃取液濃縮，進行硅膠柱層析分離，硅膠柱洗脫溶劑是石油醚-乙酸乙酯，收集石油醚-乙酸乙酯 5 3體積比的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，所得固體物再以95%乙醇溶解，放置，析晶，濾出結晶，再以95%乙醇重結晶，即得白花丹參總菲醌提取物。
3.權利要求1所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，步驟如下(1)溶劑提取原料白花丹參的根經過粉碎后，以甲醇、95%乙醇、乙酸乙酯為提取溶劑，加熱提取或超聲提取，所用溶劑量與原料的重量比為6 15 1，重復提取1 3次，除去藥渣，合并濾液，所得濾液在常壓或減壓條件下濃縮至比重為1. 20 1. 35膏狀物，60°C測定；(2)萃取將步驟(1)得到的膏狀物以10 12重量倍的水懸浮，用與水等體積的有機溶劑萃取， 重復2 3次，合并萃取液，減壓濃縮，再用與濃縮物等體積的水萃取洗滌，重復水洗2 3 次，棄掉水層，然后分出上層的有機溶劑層，減壓蒸去溶劑，得固體物；(3)柱層析將步驟( 萃取得到的固體物進行硅膠柱層析分離純化，先以洗脫劑石油醚-乙酸乙酯100 3體積比洗脫4 6個保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫8 12個保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分，減壓蒸去溶劑，得紅色提取物。(4)純化將上述得到的紅色提取物以95%乙醇溶解，放置，析晶，濾出結晶，再以95%乙醇重結晶，即得白花丹參總菲醌提取物。
4.如權利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟(1)的加熱提取是用95%乙醇為溶劑進行回流提取，溶劑為原料的10重量倍。
5.如權利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟O)中所述的萃取用有機溶劑是乙酸乙酯或二氯甲烷，優選乙酸乙酯。
6.如權利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟O)中所述的萃取與減壓濃縮，當萃取2次時減壓濃縮至萃取液體積量的0. 5倍，當萃取3次時減壓濃縮至萃取液體積量的0. 35倍。
7.如權利要求3所述的白花丹參總菲醌提取物制備方法，其特征在于步驟(3)中，先以石油醚-乙酸乙酯100 3體積比洗脫5個保留體積，然后以石油醚-乙酸乙酯5 3體積比洗脫10個保留體積，收集石油醚-乙酸乙酯5 3的洗脫部分。
8.一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，包括權利要求1 2所述的白花丹參總菲醌提取物和一種或多種藥學上可接受載體或賦形劑。
9.如權利要求9所述的白花丹參總菲醌提取物的藥物組合物，其特征在于所述藥物組合物為片劑、膠囊劑、滴丸、軟膠囊劑及沖劑。
全文摘要
本發明涉及一種治療脈管炎的白花丹參總菲醌提取物、藥物組合物及制備方法。所述白花丹參總菲醌提取物是從白花丹參根中經溶劑提取、柱層析純化得到的丹參酮的混合物，主要由丹參酮IIA、隱丹參酮和丹參酮I組成，三者總含量不低于70％，其中隱丹參酮與丹參酮IIA的質量比為0.45～0.80。該總菲醌提取物對血栓閉塞性脈管炎具有較好的治療作用，可按照藥劑學常規生產工藝將其加工成各種劑型，如片劑、膠囊劑、軟膠囊、滴丸和沖劑。
文檔編號A61K125/00GK102512496SQ20121000461
公開日2012年6月27日 申請日期2012年1月9日 優先權日2012年1月9日
發明者孫隆儒, 季梅, 張大偉, 曹春泉, 朱海林, 謝婷婷 申請人:山東大學